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不同端粒酶抑制剂对肝癌细胞株蛋白表达的影响
目的 以表面增强激光解吸及电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测针对人类端粒酶RNA的反义寡核苷酸(hTR-ASODN)、针对hTR的正义寡核苷酸(hTR-SODN)、针对人类端粒酶活性催化亚单位的ASODN(hTERT-ASODN)、针对hTERT的SODN(hTERT-SODN)、没食子酰表没食子儿茶素(EGCG)、3'-叠氮-3'-脱氧胸苷(AZT)、全反式维甲酸(ATRA)和盐酸阿酶素(ADM)8种端粒酶抑制剂分别作用人肝癌细胞SMMC-7721后差异蛋白表达的情况.方法 运用SELDI-TOF-MS技术结合配套的弱阳离子交换型芯片(WCX-2)检测8种端粒酶抑制剂分别作用于SMMC-7721细胞后分泌蛋白和胞浆蛋白表达的变化.对照组为未加任何处理因素的SMMC-7721细胞.结果 WCX-2蛋白芯片检测发现,8种端粒酶抑制剂作用后细胞株的分泌蛋白和胞浆蛋白分别存在不同程度的表达差异及共同低表达或高表达的差异蛋白.所有差异蛋白分子量均小于10000Da.结论 8种端粒酶抑制荆作用后SMMC-7721细胞存在特异性差异蛋白和共性变化的蛋白,这些蛋白可能与端粒酶活性的调控密切相关.
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应用iTRAQ技术筛选卵巢过度刺激综合征差异表达蛋白
目的:筛选卵巢过度刺激综合征的血清生物标记物.方法:选择临床明确诊断的卵巢过度刺激综合征患者(观察组)以及健康妇女(对照组)各20例,利用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术检测其血清差异蛋白,并进行功能注释及生物信息分析,筛选出差异明显的候选蛋白.结果:与对照组相比,观察组获得64种血清差异蛋白.参与的主要生物学过程为炎症反应和免疫应答等,并获得与疾病相关的标志物5个.结论:炎症和免疫功能改变可能在该病证发生发展中发挥着关键性作用,5种蛋白可能作为卵巢过度刺激综合征的血清候选差异蛋白.
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极低剂量氢醌诱导人胚肺成纤维细胞应答反应的研究
我们采用蛋白质组学技术研究了极低浓度氢醌(HQ)刺激人胚肺成纤维细胞蛋白质表达差异,用肽指纹图谱初步鉴定了数个差异蛋白,有助于阐明低剂量化学物刺激诱导细胞应答反应的分子机制,为发展低剂量毒物测试系统,建立正确的环境污染物的危险度评价体系提供理论依据.
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基于iTRAQ技术的寻常型银屑病(血虚证)蛋白组学研究
应用同位素相对标记与绝对定量技术(iTRAQ)对寻常型银屑病(血虚证)患者的血清蛋白进行定量分析,探求其与健康人差异表达蛋白质,从蛋白组学角度揭示血虚证的部分内涵.本实验共鉴定定量了208个蛋白质,血虚证寻常型银屑病患者血清蛋白组与健康组比较,有109个蛋白质差异存在统计学意义(P＜0.05).寻常型银屑病(血虚证)血清中存在与健康人表达差异性蛋白质,如角蛋白类相关蛋白、凝血相关蛋白、脂蛋白类相关蛋白、免疫相关蛋白、肿瘤相关蛋白、甲状腺素结合球相关蛋白、血红蛋白类相关蛋白、细胞外基质类蛋白等.提示这些蛋白可能与寻常型银屑病血虚证有关.
关键词： 寻常型银屑病 血虚证 蛋白组学 同位素相对标记与绝对定量技术 差异蛋白 -
蜈蚣败毒饮对银屑病模型小鼠皮肤损伤蛋白质组学表达的影响
目的 应用蛋白质组学技术筛选与分析蜈蚣败毒饮干预转基因银屑病模型小鼠皮肤损伤的差异蛋白.方法 转基因银屑病小鼠随机分为空白对照组和蜈蚣败毒饮低、中、高剂量组,分别进行药物灌胃、皮肤损伤取材、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、FASP酶解、TMT标记、质谱分析、GO功能注释、KEGG通路注释、富集分析、蛋白质聚类分析等对各组样本蛋白质组学进行分析.通过综合蛋白质定性、定量结果及蛋白质聚类分析,提取蜈蚣败毒饮干预后特异性交叉蛋白.结果 共筛选出蛋白质总数6092个,通过聚类分析筛选出上调蛋白456个,下调蛋白172个,终综合分析出特异性交叉蛋白4个.结论 重组人蝶呤甲醇胺脱水酶1(登录号P61458)、线粒体核糖体蛋白L34(登录号Q99N91)、锌指蛋白488(登录号Q5HZG9)和N-乙酰基化α-酸性二肽酶(登录号G3UWC2)4个蛋白可能通过调控相关细胞的增殖和分化,影响微血管功能,在蜈蚣败毒饮干预银屑病模型小鼠皮肤损伤中发挥重要作用.
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肾阴虚、肾阳虚模型大鼠股骨皮质骨差异蛋白质表达的分析
目的 研究肾阴虚、肾阳虚模型大鼠股骨皮质骨差异表达的蛋白质,从功能蛋白质组角度探讨肾阴虚、肾阳虚证的实质.方法 将90只大鼠按随机数字表法分为正常组、肾阴虚组和肾阳虚组,每组30只,获取造模成功且表现稳定大鼠的股骨皮质骨,分别进行皮质骨总蛋白的提取制备、双向电泳(2-DE)、凝胶图谱的获取与分析、差异蛋白的质谱分析及相关功能的生物信息学检索.结果 3组大鼠股骨皮质骨总蛋白2-DE凝胶图谱可辨识蛋白点数目均为470个,与正常组比较,肾阴虚、肾阳虚组各有12个差异蛋白,其中有6个是肾阴虚、肾阳虚组共有的差异蛋白,4个表达趋势一致,分别为表达上调的载脂蛋白A-1、α烯醇化酶,表达下调的GDP解离抑制因子β、原肌球蛋白异构体2α-3链;有2个蛋白表达趋势相反,Ⅰ型胶原α-1链在肾阴虚组中表达上调,在肾阳虚组中表达下调;线粒体热休克蛋白60在肾阴虚组中表达下调,在肾阳虚组中表达上调;肾阴虚、肾阳虚组各有6个独自的差异蛋白,其中肾阴虚组有3个蛋白表达上调,3个蛋白表达下调;肾阳虚组6个蛋白表达均下调.结论 大鼠股骨皮质骨中,4个共同且表达趋势一致的差异蛋白可以视为肾阴虚、肾阳虚证的共性功能蛋白质组;2个表达趋势相反及12个肾阴虚、肾阳虚组独自的差异蛋白可归为相应证型的差异功能蛋白质组.
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质谱技术分析多发性骨髓瘤患者血清差异蛋白
目的 应用双向电泳(2-DE)和质谱技术分析多发性骨髓瘤(MM)患者血清中的差异表达蛋白,寻找MM特异性蛋白标记物.方法 收集MM患者5例、其他血液系统恶性肿瘤患者及正常对照者血清各10例,三组样本等体积混合,去除高丰度白蛋白和IgG,应用2-DE分离3组血清样本,凝胶经银染显色和图像数据分析识别差异蛋白质点,以基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对差异蛋白质点进行鉴定.结果 通过凝胶软件分析MM与疾病对照组及正常对照组血清2-DE图谱,共得到51个三倍以上差异蛋白点,对上述差异蛋白进行MALDI-TOF-MS质谱分析,共鉴定出22种阳性蛋白,其中13种蛋白表达上调,包括高表达蛋白如丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶RIO1亚型2、Rab相关蛋白Rab37亚型2、HP蛋白、锌指结构α2糖蛋白等；9种蛋白表达下调,包括α2-HS-糖蛋白、转铁蛋白、多聚素-1等.结论 MM组与疾病对照组和正常对照组间存在差异表达的蛋白质,这些差异蛋白有助于MM早期诊断和鉴别诊断,并为MM发病机制的进一步研究提供线索.
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不同侵袭潜能卵巢癌细胞系蛋白质谱的比较
目的探讨与卵巢癌侵袭潜能相关的蛋白质.方法将卵巢癌细胞系SKOV-3在裸鼠体内多次传代,体外培养建系,结合体外黏附、侵袭、移动实验,筛选不同侵袭潜能的细胞亚系,用表面增强激光解吸电离-飞行时间-质谱技术检测其蛋白质谱.结果SKOV-3F3细胞亚系较其母系SKOV-3侵袭潜能更高.有6个差异蛋白质峰(质荷比M/Z分别为6249、14675、15425、15717、17123和17660)仅在SKOV-3中表达,3个差异蛋白质峰(M/Z分别为4355、4823和5763)仅在SKOV-3F3中表达,2个差异蛋白质峰(M/Z分别为1842和3145)可在SKOV-3的3代亚系中捕获.此外,5个差异蛋白质峰(M/Z分别为1242、5465、6899、6568和14027)和1组蛋白质谱峰簇在SKOV-3和其3代亚系中均可表达,但强度不同.结论体内传代结合体外实验可筛选出不同侵袭潜能的卵巢癌细胞,它们之间的差异蛋白与侵袭潜能密切相关.
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体外培养的不同亚型肝癌细胞差异蛋白的初步筛查
目的分析体外培养的不同亚型肝癌细胞株蛋白质表达差异,筛选肝癌的标志蛋白.方法采用表面增强激光解吸离子化(SELDI)蛋白质芯片技术检测了两种肝癌细胞株(肝细胞癌,SMMC-7721和肝内胆管细胞癌,IHCCC-9810)以及正常肝细胞(L102)的蛋白质谱.选用阴离子交换柱处理上述细胞总蛋白,用6种不同pH的洗脱液洗脱柱床,通过改变洗脱液的pH值将总蛋白分成不同pI范围的6组.每个组分用WCX2和IMAC3两种芯片检测.采用PBSII-C型蛋白质芯片阅读机读取数据,获得的数据采用Ciphergen公司的Proteinchip Software3.0.2软件分析.结果与L02细胞相比,有12个蛋白质在两种肝癌细胞株中均出现明显的变化,其中4个差异蛋白在肝癌细胞中高表达,8个差异蛋白在肝癌细胞中低表达.在对两种肝癌细胞株的蛋白质谱比较时发现,不同亚型的肝癌细胞有其各自的标志蛋白,其中11个蛋白分子在SMMC-7721细胞中高表达;在IHCCC-9810细胞中7个蛋白分子高表达,10个蛋白分子低表达.结论不同亚型肝癌细胞与正常肝细胞蛋白质谱比较时有共同的差异蛋白,同时不同亚型肝癌细胞之间的蛋白质谱表达也有差别.
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体外培养的不同亚型上皮性卵巢癌细胞系差异蛋白的分析
目的分析体外培养的不同亚型上皮性卵巢癌细胞系蛋白质表达差异,筛选卵巢癌的肿瘤标志物.方法提取体外培养的不同亚型上皮性卵巢癌细胞系(OVCAR-3、SKOV-3、3AO和TOV-112D)与原代培养的正常卵巢生发上皮细胞(OGE)的总蛋白,采用表面增强激光解吸离子化(SELDI)蛋白质芯片技术的H4和SAX2两种蛋白芯片检测其蛋白质谱,后利用蛋白芯片阅读机(PBS-Ⅱ型)读取数据,获得的数据采用Ciphergen Proteinchip 3.0.2版本的软件分析.结果4种亚型的上皮性卵巢癌细胞系与正常卵巢生发上皮细胞比较,有16个蛋白发生明显改变,其中7个蛋白表达降低,9个蛋白表达升高.此外,不同亚型的上皮性卵巢癌细胞之间也有很多差异蛋白,尤其是OVCAR-3、SKOV-3和3AO三者与TOV-112D之间有18个蛋白仅在前3种癌细胞中表达,16个蛋白仅在后者表达.结论不同亚型上皮性卵巢癌细胞与正常卵巢生发上皮细胞的蛋白质谱相比较有共同的差异蛋白,同时不同亚型的上皮性卵巢癌细胞之间的蛋白质谱表达也有差别.
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结核分枝杆菌差异蛋白ESAT-6基因克隆及表达产物刺激人淋巴细胞产生干扰素的研究
结核病目前仍是我国主要公共卫生问题之一,用结核菌素反应诊断难以区分结核病人与BCG免疫人群的差别.因为目前结核菌素试验所用的纯化蛋白衍生物(PPD)为结核分枝杆菌毒株与减毒株所共有,所以PPD作为结核病诊断试剂有一定的局限性.结核分枝杆菌差异蛋白ESAT-6仅存在于毒株中,而不存在于BCG中.
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体外培养的肝癌细胞株与正常肝细胞株蛋白质的差异表达
目的:运用SELDI蛋白质芯片技术分析体外培养的肝癌细胞株(HepG2)与正常肝细胞株(L02)蛋白质表达差异.方法:在体外培养HepG2和L02细胞株,收获细胞,将细胞用细胞裂解液裂解后,采用SELDI蛋白质芯片技术用IMAC3及WCX2芯片检测HepG2、L02的蛋白质谱.结果:体外培养的肝癌细胞株与正常肝细胞株的蛋白质存在差异表达,IMAC3芯片共捕获61个蛋白,发现差异峰7个,与L02细胞相比,其中3个差异蛋白在肝癌细胞中高表达,4个差异蛋白在肝癌细胞中低表达.WCX2芯片共捕获91个蛋白,发现差异峰14个,其中3个差异蛋白在肝癌细胞中高表达,11个差异蛋白在肝癌细胞中低表达.结论:SELDI蛋白芯片技术检测肝癌细胞株与正常肝细胞株蛋白质的差异表达方法简便,敏感性高,重复性好.
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肝内胆管癌细胞系ICC-9810与肝细胞系L02蛋白质组学的差异分析
目的:分析肝内胆管癌细胞系ICC-9810与正常肝细胞系L02的蛋白质表达差异,筛选肝内胆管癌的潜在分子标志物.方法:应用表面增强激光解吸离子化(surface enhanced laser desorption/ionization,SELDI)蛋白质芯片技术检测肝内胆管癌及正常肝细胞系的蛋白质谱.用PBSII-C型蛋白质芯片阅读机读取数据,采用Proteinchip Software 3.0.2软件分析数据.结果:IMAC3、WCX2两种蛋白芯片共捕获376个蛋白峰,发现27个差异蛋白.与正常肝细胞系L02蛋白谱相比,9个蛋白在肝内胆管癌细胞系ICC-981O中高表达,18个蛋白在肝内胆管癌细胞系ICC-9810中低表达.其中3767、7999、10555、12163、22066和26794 Da6个差异蛋白可被WCX2和IMAC3芯片共同捕获.结论:肝内胆管癌与正常肝细胞存在差异蛋白表达,这些差异蛋白为寻找肝肿瘤标志物,了解肝内胆管癌的发病机制提供了重要线索.
关键词： 肝内胆管癌 肝细胞 差异蛋白 表面增强激光解吸离子化 -
人内脏与皮下脂肪细胞蛋白表达谱的差异分析
目的 比较人内脏与皮下脂肪细胞蛋白表达的差异. 方法 采用双向凝胶电泳及质谱技术筛选差异蛋白. 结果 两组蛋白点的匹配率为r＝0.71.灰度值有显著性差异的有82个点(P＜0.05).选择差异相差5倍以上的10个点用于质谱分析,确认了6个差异表达的蛋白质,分别与胰岛素信号转导、细胞分化及脂代谢关系密切. 结论 差异蛋白可能在腹型肥胖相关疾病中发挥一定作用,为进一步明确内脏脂肪的危害性提供了研究思路.
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先天性心脏病相关性肺动脉高压肺组织蛋白质组学研究
目的：肺动脉高压（PAH）是先天性体-肺分流性心脏病常见的并发症。本研究应用iTRAQ 多重化学标记-串联质谱技术，观察分析先心病术后肺动脉高压可逆的患者与肺动脉高压不可逆的患者肺组织中的差异蛋白，在蛋白质组学水平探讨先心病术后 PAH 可逆的分子学机制。
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iTRAQ 结合 M ALDI-TOF/MS 检测涂阴肺结核患者血清差异蛋白
目的 利用差异蛋白质组学方法检测涂阳和涂阴肺结核患者血清差异表达蛋白 ,以发现涂阴肺结核相关的潜在标志物 ,为临床治疗提供参考依据.方法 分析2011年医院的住院患者39例临床资料 ,采用iTRAQ标记结合MALDI-TOF/MS筛选30例痰涂片阴性和9例痰涂片阳性的肺结核患者血清的差异表达蛋白 ,并进行生物信息学分析 ,数据采用SPSS 17 .0软件进行统计分析.结果 3次独立重复试验一共筛选和鉴定到344种蛋白质 ,其中置信度在>95 .0% 有271种蛋白质 ;与涂阳肺结核患者血清蛋白多肽图谱相比 ,涂阴肺结核患者血清中11种蛋白表达水平显著增高 ,7种蛋白表达降低( P<0 .05 );生物信息学分析发现差异蛋白主要定位在细胞外 ,参与酶抑制剂活性和应激反应过程.结论 涂阴和涂阳肺结核患者血清蛋白多肽图谱存在明显差异 ;处于关键节点上的6个蛋白可能与涂阴结核病的发生发展有密切联系.
关键词： 肺结核 MALDI-TOF/MS 差异蛋白 -
不同侵袭转移潜能浆液性卵巢癌细胞株3AO生物活性及蛋白质质谱研究
目的 筛选与卵巢癌侵袭转移特性相关的蛋白质.方法 将人类浆液性卵巢癌细胞株3AO在裸鼠体内多次传代,体外培养建系,结合细胞黏附、侵袭及移动实验筛选高、低侵袭潜能细胞亚系.采用表面增强激光解吸电离-飞行时间-质谱( SELDI-TOF-MS)技术检测二者的细胞裂解液,比较其蛋白质指纹图谱.结果 通过体内、外实验筛选出细胞亚系3AO 3代(F3)、3AO F4,与其母系3AO相比具有高侵袭潜能.三者蛋白质指纹图谱比较结果发现9个差异蛋白质峰[质荷比(m/z)分别为3494、3831、8121、8293、9123、9332、10 184、15 436和17 134]仅在母系3AO细胞株中表达.有1个差异蛋白质峰(m/z为4360)仅在3AOF3、F4中表达,有2个差异蛋白质峰(m/z分别为1842、3145)在3AO F2～F4中表达.6个差异蛋白质峰(m/z分别为1236、5476、5649、6575、6897和7016)和1组蛋白质谱峰簇在母系3AO细胞株和3AO F1 ～ F4细胞中均可表达,但强度不同.结论 通过比较同一遗传背景的高、低侵袭潜能卵巢癌细胞的蛋白质指纹图谱,发现一组与侵袭转移潜能密切相关的差异蛋白质峰.
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大鼠面神经钳夹损伤后蛋白质组学研究
目的:通过蛋白质组学研究,检测面神经钳夹损伤后的大鼠面神经与正常大鼠面神经的差异蛋白.方法:分别取正常大鼠面神经和钳夹损伤30秒后的大鼠面神经,分别作为对照组和实验组.提取两组大鼠面神经蛋白后,质谱分析并鉴定筛选出2组大鼠面神经组织差异表达的蛋白.采用SPSS15.0软件包对数据进行统计学分析.结果:经蛋白质组学研究,成功鉴定出19个2组间显著性差异蛋白,其中4个蛋白点差异倍数在20倍以上.4个蛋白主要涉及代谢、信息储存以及信号转导3大功能.结论:面神经钳夹损伤后与正常大鼠面神经组织间存在差异蛋白,有助于探讨面神经损伤后的蛋白调控机制.
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子痫前期蜕膜组比较蛋白组织学探讨及筛选
目的 分析子痫前期患者蜕膜组织差异蛋白表达,探讨差异蛋白与子痫前期发生的可能关系.方法 双向电泳技术对总蛋白进行分离,考马斯亮兰显色,获得蛋白质图谱.用PDQuest软件进行图像分析,寻找差异蛋白.结果 获得了正常妊娠及子痫前期重度患者蜕膜组织双向电泳凝胶蛋白质图谱,蛋白质点子痫前期组(410±10)个,正常妊娠组(398±12)个,图像分析结果 显示表达丰度相差2倍发上的差异蛋白质点有12个,它们在子痫前期中均表现下调.结论 子痫前期患者蜕膜组织中存在差异蛋白表达.这些蛋白质在子痫前期的发病过程可能起重要作用.
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应用差异凝胶电泳对卵巢癌顺铂化疗耐药的蛋白组学研究
卵巢癌的死亡率高居妇科恶性肿瘤之首,其主要原因为早期诊断较为困难,确诊时临床期别较晚及化学治疗(化疗)耐药等,以顺铂为主的联合化疗仍是卵巢癌术后的主要辅助治疗手段,如何克服或预防耐药成为肿瘤治疗研究的热点.随着后基因组时代的到来及蛋白质组学理论及技术的迅速发展及完善,从蛋白质这一全新的角度探讨卵巢癌的顺铂耐药机制已成为可能.本研究采用差异凝胶电泳(DIGE)技术比较分析了卵巢癌顺铂敏感株(C0C1)及耐药株(C0C1/DDP)的差异蛋白,期待找到与顺铂耐药相关的关键分子.
