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基于iTRAQ技术的人感染H7N9禽流感病例血浆蛋白质组学特征分析
目的 分析人感染H7N9禽流感病例与正常人之间血浆蛋白质组学差异.方法 收集华北地区首例人感染H7N9禽流感病例发病期和恢复期血浆标本,以及同时期病例父亲(未感染病毒)血浆标本,分离提取血浆蛋白,通过同位素标记相对与绝对定量(isotopically labeled relative and absolute quantification,iTRAQ)技术联合液相色谱串联质谱(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)技术对样本进行蛋白质质谱检测.利用PANTHER平台对差异蛋白质组进行Gene Ontology(GO)注释以及基因路径(pathway)分析.结果 本研究鉴定得到与人感染H7N9禽流感病毒感染相关的差异表达蛋白共250个,其中表达上调蛋白合计159个,表达下调蛋白合计91个.这些差异蛋白共参与了11个生物学过程、共参与了7个分子通路.结论 入感染H7N9禽流感病毒可能导致7个分子通路发生改变.
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iTRAQ在蛋白质组学中的应用进展
相对和绝对定量同位素标记技术以高通量、重复性好、能够处理复杂样本和同时进行定性、定量分析的优点在蛋白质组学研究中得到了广泛的应用.本文对iTRAQ技术近几年的应用进展进行综述.
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应用iTRAQ技术筛选卵巢过度刺激综合征差异表达蛋白
目的:筛选卵巢过度刺激综合征的血清生物标记物.方法:选择临床明确诊断的卵巢过度刺激综合征患者(观察组)以及健康妇女(对照组)各20例,利用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术检测其血清差异蛋白,并进行功能注释及生物信息分析,筛选出差异明显的候选蛋白.结果:与对照组相比,观察组获得64种血清差异蛋白.参与的主要生物学过程为炎症反应和免疫应答等,并获得与疾病相关的标志物5个.结论:炎症和免疫功能改变可能在该病证发生发展中发挥着关键性作用,5种蛋白可能作为卵巢过度刺激综合征的血清候选差异蛋白.
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应用iTRAQ技术筛选乳腺癌白苔和黄苔患者血清差异表达蛋白
目的 应用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术筛选乳腺癌白苔和黄苔患者与正常组之间的血清差异表达蛋白,以寻找乳腺癌早期诊断的生物标记物和探索中医舌苔形成的机制和原理.方法 临床收集乳腺癌患者中具有典型的白厚苔和黄厚苔者各10例,并以正常薄白苔者10例作为对照,采血取血清提取蛋白,然后进行蛋白变性、还原及酶解,后进行iTRAQ标记和ESI-QTOF-QⅡ质谱仪鉴定,得到峰图用DATA ANALYSIS、MASCOTT 2.2搜库和Scaffold软件分析,得到表达量差异结果 .结果 共鉴定出335个蛋白,其中达到严格定量标准的蛋白数59个,与正常组比较,乳腺癌白苔组和黄苔组共筛选出11个血清差异表达蛋白,乳腺癌白苔组和黄苔组之间筛选出6个差异蛋白.结论 iTRAQ结合LC-MS/MS技术能够快速、有效地进行差异蛋白质组学研究,同时发现一些蛋白与乳腺癌的发生以及中医舌苔形成机制密切相关.
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基于iTRAQ技术研究滋阴降火方药知柏地黄丸对阴虚"上火"SD大鼠血清蛋白组的影响
目的:研究知柏地黄丸治疗阴虚"上火"的生物学机制.方法:应用iTRAQ-2DLC-MS/MS蛋白组学技术检测阴虚"上火"大鼠在知柏地黄丸治疗前后的血清蛋白组学表达谱,筛选并鉴定与知柏地黄丸治疗作用相关的蛋白质群,并应用生物信息学对差异表达的蛋白进行功能富集分析,揭示知柏地黄丸对阴虚"上火"治疗作用的生物学机制.结果:与正常大鼠比较,阴虚"上火"对照组大鼠血清中有47个差异蛋白,其中有20个表达上调,27个表达下调.知柏地黄丸治疗后,有19个差异蛋白恢复至正常或接近正常水平.通过生物信息学分析,发现这些蛋白主要集中在免疫反应与物质代谢过程.其中参与免疫反应的蛋白主要有有补体成分4(C4)、凝血因子X(F10)、激酶相关磷蛋白2(Skap2);参与代谢作用的蛋白有L乳酸脱氢酶A链(Ldha)、果糖二磷酸醛缩酶A(Aldoa)、花生四烯酸脂肪氧合酶(Alox12)、GDP分解酶抑制剂1(Arhgdia)、肌球蛋白轻链(Myl6).结论:阴虚"上火"主要表现为机体免疫反应与物质代谢发生紊乱,知柏地黄丸可以通过调节免疫与物质代谢反应治疗阴虚"上火".
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基于iTRAQ技术的中医实热"上火"血清蛋白质组学特征分析
目的:筛选实热"上火"血清差异表达蛋白,为实热"上火"机制的深入研究提供科学依据.方法:采用相对和绝对定量同位素标记(iTRAQ)对血清蛋白质进行检测,结合生物信息学分析(GO、STRING)筛选实热"上火"与正常非"上火"人群差异显著的蛋白质.结果:与正常对照组比较,实热上火组血清筛选出49个差异蛋白质,其中上调的22个,下调的27个.载脂蛋白C3(Apo C3)、乳酸脱氢酶(LDH)和维生素K依赖蛋白S(PROS1)等显著上调,而载脂蛋白A4(Apo A4)、超氧化物歧化酶3(SOD3)和纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)等显著下调.结论:观察组脂质代谢、糖酵解异常与氧化应激、炎性反应的发生密切相关,且凝血功能下降,易造成出血,筛选的差异蛋白可为实热"上火"的生物学基础研究提供依据.
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基于蛋白质组学法分析大黄素对慢性压迫性损伤大鼠DRG蛋白表达的影响
目的:观察中药单体大黄素在慢性压迫性损伤(CCI)模型中的镇痛作用及其相关机制.方法:将54只SD大鼠随机分为假手术组、模型组及大黄素组,并于术前及术后第3、7、11、15天等不同时间进行机械缩足反射阈值(MWT)及热痛觉阈值(TWL)检测.给药15d后取术侧背根神经节(DRG)并运用iTRAQ标记和LCMS/ MS的方法来分析损伤侧DRG内的蛋白表达情况.结果:术后第15天大黄素组MWT及TWL值较模型组显著上调(P＜0.05);且运用蛋白质组学技术共鉴定出假手术组与模型组139个差异蛋白,大黄素组与模型组间鉴定出274个差异蛋白,这些差异蛋白是重要的装订蛋白、结构蛋白,参与体内脂类细胞代谢及单胺能代谢等信号通路.结论:本研究发现大黄素可明显改善CCI模型机械痛觉过敏及热痛觉过敏,并运用iTRAQ技术分析其可能通过单甘油脂肪酶(MGL)、单胺氧化酶(MAO)、组蛋白(H2A)和轴周蛋白等多个差异蛋白及其参与的信号通路如内源性大麻素信号通路、5-羟色胺突触信号通路发挥作用.
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琼玉膏延缓衰老作用的候选靶蛋白分析
采用iTRAQ技术研究琼玉膏干预衰老大鼠模型的下丘脑蛋白,寻找候选靶蛋白,探索琼玉膏延缓衰老的作用机制.结果表明,琼玉膏可以提高大鼠血清GSH-Px及肝脏SOD活力.iTRAQ技术鉴定到的总蛋白为3 522个,FDR＜ 1％.通过数据分析,鉴定出琼玉膏组与模型组比较,具有295种差异蛋白;模型组与空白组比较,具有20种差异蛋白;其中与空白组相比,模型组中下调而琼玉膏组中上调的蛋白有14种.在琼玉膏组和模型组的295种差异蛋白中,差异倍数≥1.30的差异蛋白有40种,高为1.47.查阅文献及基因功能检索,筛选出琼玉膏延缓衰老的候选靶蛋白12种:ST18,Ptprc,PSMB8,INPP4B,Shc3,Pik3r1,PIP5 K1C,Nampt,Rasgrp2,Asah2,Pdpk1,Map2k7.Western blot法检测下丘脑炎症通路NF-κB蛋白,模型组(0.96)相对空白组(0.85)表达量升高;而琼玉膏组(0.89)相对模型组则下降.Q-PCR检测PIP5K1C,Ptprc等与炎症相关的候选靶蛋白,与空白组相比,模型组中mRNA相对表达量显著下降(P＜0.01),而琼玉膏组中则显著升高(P＜0.01),与蛋白质组学数据分析一致.琼玉膏可能通过调节下丘脑炎性反应而延缓衰老的发生.
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应用iTRAQ定量蛋白质组学方法筛选乳腺癌患者血清差异表达蛋白
目的 筛选乳腺癌患者血清特异性表达蛋白,以寻找乳腺癌早期诊断的生物标志物.方法 采集血清,提取蛋白,iTRAQ标记和ESI-QTOF-QⅡ质谱检测,再搜库和Scaffold软件分析,得到各组间血清差异表达蛋白.进一步采用Western blot验证差异蛋白.结果 血清中共鉴定出335个蛋白,达到严格定量标准的蛋白151个;乳腺癌与对照组间共筛选出23个差异表达蛋白;乳腺癌与乳腺纤维瘤组间筛选出8个差异蛋白.Western blot验证Serotran-sferrin,Vitronectin,soform 1 of Gelsolin 3个蛋白在各组中的表达结果与iTRAQ检测结果一致.结论 本研究证实iTRAQ-LC-MS/MS技术能够快速、有效地进行差异蛋白质组学研究,并筛选到多个与乳腺癌发病相关的血清蛋白,有可能作为乳腺癌早期诊断的生物标志.
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基于iTRAQ结合2D-LC-MS/MS筛选胃癌血清差异表达蛋白
目的:筛选胃癌血清差异表达蛋白,寻找胃癌血清标志物.方法:采集胃癌患者血清和正常对照人群血清各45例,所有血清样本去除高丰度血清蛋白质后,采用相对和绝对定量同位素标志(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)技术联合二维液相色谱-串联质谱(two-dimensional liquid chromatography/tandem mass spectrometry,2D-LC-MS/MS)分析和鉴定两组间的差异表达蛋白;采用生物信息学对差异蛋白进行分析;用Western blot对蛋白组中的代表性血清差异表达蛋白进行表达验证.结果:iTRAQ标记联合2D-LC-MS/MS分析一共鉴定出10540条独特肽段,对应199个非冗余蛋白,其中符合条件的差异蛋白17个,其中12个蛋白在胃癌患者中表达上调,5个蛋白在胃癌患者中表达下调.17种差异表达蛋白参与10种生物学过程、9种分子作用和2种细胞组分,涉及的5个生物代谢途径.Western blot结果显示,与正常对照人群相比,代表性差异表达蛋白ITIH4在胃癌患者血清中表达量上调,差异具有统计学意义(1.7517±0.247 vs 1±0,P＜0.05).结论:ITIH4可能是诊断胃癌新的潜在生物标志物.
关键词： 胃癌 iTRAQ Western blot 标志物 ITIH4 -
iTRAQ串联质谱筛选尾吊小鼠感染空间诱变大肠杆菌后脾脏差异表达蛋白
目的 应用同重同位素标记相对与绝对定量技术(iTRAQ),联合液相色谱串联质谱(LC-MS/MS),检测经空间诱变大肠杆菌(T1-13)感染尾吊模拟失重小鼠后,其脾脏组织中的差异蛋白,并探讨其生物学意义.方法 C57BL/6小鼠尾吊模拟失重后以空间诱变大肠杆菌灌胃建立感染模型,采用iTRAQ结合LC-MS/MS技术筛选脾脏组织差异表达蛋白,并对差异蛋白进行GO、pathway富集分析和STRING蛋白互作分析.结果 共鉴定出2589个蛋白,尾吊组与对照组相比筛选出378个差异表达蛋白.尾吊染茵后与对照组相比,共筛选出452个差异表达蛋白,STRING蛋白互作网络中有286个差异蛋白间存在相互作用,这些差异蛋白经KEGG分析共得到32条存在显著性的通路,主要为氧化磷酸化通路,代谢通路、蛋白消化和吸收通路、蛋白酶体通路.结论 成功筛选出了模拟失重后空间诱变大肠杆菌感染脾脏组织差异表达蛋白,这些差异蛋白可能通过调控代谢通路、不同环境下微生物代谢、颉氨酸/亮氨酸/异亮氨酸降解、溶酶体、碳代谢、吞噬体、丙酸代谢、蛋白酶体参与失重条件下免疫和炎症反应的发生.
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野生型与栽培型太子参的iTRAQ定量蛋白质组学研究
采用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术对野生型与栽培型太子参进行定量蛋白质组学研究,探讨两种生态型太子参蛋白质组表达水平的差异.所提取的太子参蛋白质样品经FASP酶解、iTRAQ试剂标记、高pH-RPLC分离、RPLC-MS分离分析,获取的串联质谱数据通过Protein Pilot 5.0软件搜库进行蛋白质鉴定,通过蛋白质相对定量的比较寻找差异表达蛋白;再对差异蛋白质进行GO (gene ontology)、KEGG代谢通路和STRING网络通路分析.共鉴定到3 775个蛋白质,其中3676个蛋白质具有定量信息,与野生型相比,栽培型太子参上调差异蛋白质127个,下调差异蛋白质205个;生物信息学分析得到71个目标差异蛋白,主要分成9类:热休克蛋白、转移酶、氧化还原酶、裂解酶、异构酶、连接酶、水解酶、微管蛋白和移位酶.结果显示:野生型太子参的碳水化合物和氨基酸代谢功能较栽培型太子参强,而抗应激能力较栽培型太子参弱;GWD1、PHS1、GBE1、PGM和BAM1可能是调节不同生态型太子参中蔗糖变化的5种关键蛋白,metE和CYS可能是导致不同生态型太子参氨基酸差异的2种关键蛋白.本研究为解析不同生态型太子参次生代谢物差异的成因及其药材品质形成的蛋白质机制提供基础资料.
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以iTRAQ技术分析金雀异黄酮作用大鼠肝星状细胞差异表达的蛋白
目的:分析金雀异黄酮作用大鼠肝星状细胞(HSC-T6)后差异表达的蛋白质,以探讨金雀异黄酮抗肝纤维化的作用机制.方法:以金雀异黄酮作用HSC-T6细胞后,提取细胞总蛋白,采用同位素标记的iTRAQ技术结合高效液相色谱-电喷雾串联质谱(LC-ESI-MS/MS)的定量蛋白质组学方法,分析和鉴定差异表达的蛋白质,运用生物信息学分析差异表达的蛋白质功能.结果:质谱共分析鉴定到685种蛋白质.3次实验鉴定到的差异蛋白质数量分别为79,88,75个,在3次重复实验均鉴定到的差异蛋白为44个,其中上调蛋白19个,下调蛋白25个.对这些差异蛋白进行功能分析,发现参与翻译后修饰、转录、重组和信号传导等过程.结论:iTRAQ联合LC-ESI-MS/MS技术能高通量筛选金雀异黄酮抗纤维化作用的蛋白质.金雀异黄酮的抗纤维化作用,可能是通过对蛋白质调控表达来实现.
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益胃汤对初老雌性大鼠下丘脑作用的差异蛋白分析
[目的]研究益胃汤对初老雌性大鼠下丘脑产生调节作用的相关蛋白质,在分子水平上探索益胃汤的作用机制. [方法]将20只4~6月龄雌性大鼠随机分成正常组、去势组,每组10只,10只10~12月龄雌性大鼠作为初老组.给药结束后,取3组大鼠下丘脑组织,运用同位素标记相对和绝对定量技术(iTRAQ)分离、分析、鉴定大鼠下丘脑差异蛋白.[结果]分析比较初老组、去势组、正常组3组大鼠下丘脑蛋白质,通过多组数据韦恩图分析发现初老组与去势组有17种共同表达的差异蛋白.通过火山图(Volcano Plot)过滤,确定显著差异蛋白[差异倍数(FC)＞1.5或＜2/3, P＜0.05];筛选出了7种与衰老相关的显著差异蛋白及其相关KEGG通路,它们分别为:plasminogen、α-crystallin B chain、Hsp70 binding protein 1、serum transferrin、unconventional myosin-Id、myelin oligodendrocyte glycoprotein、protein Fbxo44.[结论]益胃汤对这7种显著差异蛋白起到上调或下调的作用,为研究益胃汤延缓衰老作用的靶蛋白奠定了基础.
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应用iTRAQ结合质谱技术筛选冷应激大鼠血浆差异表达蛋白
目的:应用同重同位素相对与绝对定量(iTRAQ)结合质谱技术筛选冷应激大鼠血浆差异表达蛋白.方法:将30只健康SPF级雄性Wistar大鼠随机分为冷应激组A和常温饲养组B,将A、B两组分别随机分为3组,即A1、A2、A3组和B1、B2、B3组(n=5).常温饲养温度为(24.0±0.1)℃,冷应激温度为(4.0±0.1)℃.两组实验大鼠经不同温度处理12 h后,用肝素钠抗凝负压管腹主动脉采血,分离血浆,提取血浆蛋白、定量、酶解、iTRAQ标记、强阳离子交换色谱(SCX分离)和质谱分析.结果:共鉴定出1 085个蛋白,筛出39个差异表达蛋白,其中29个表达上调蛋白,10个表达下调蛋白.经生物信息学分析,筛出3个与动物冷应激相关的重要差异表达蛋白,分别为:组织相容性蛋白HA-1、Ras相关蛋白Rap1b、整合蛋白β-1.结论:本实验成功筛出冷应激大鼠血浆差异表达蛋白,iTRAQ技术为筛选大鼠冷应激蛋白诊断标志物提供了一个良好的平台,为深入研究动物冷应激发生机制奠定了良好基础.
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应用同位素标记相对和绝对定量蛋白质组学方法筛选骨关节炎患者关节液差异蛋白
目的 应用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)联合液相串联质谱技术分析骨关节炎患者关节液中差异蛋白,寻找潜在的骨关节炎生物标记物.方法 30例患者依据K-L评分分为对照组(K-L评分0级),早期OA患者(K-L评分Ⅱ级)、晚期OA患者(K-L评分Ⅳ级),每组10例.收集3组患者的膝关节液,经去除高丰度蛋白处理后行iTRAQ标记联合液相串联质谱技术检测,对检测结果进行Gene ontology、Pathway等分析,寻找3组之间明显差异蛋白.2组间比较采用t检验.结果 本研究从关节液中共检测出1283种蛋白,其中有268种蛋白为首次在关节液中发现.早期OA患者与对照组关节液中差异蛋白相比上调72种,下调249种;晚期OA患者与对照组关节液中差异蛋白相比上调128种,下调141种;晚期OA患者与早期OA患者关节液中差异蛋白相比上调128种,下调141种.3组之间明显差异且上调的蛋白共有8种.结论 应用iTRAQ技术可以从关节液中检测出大量蛋白;通过对这些蛋白的深入分析,有助于了解OA的发病机制及发现新的OA生物标记物.
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基于蛋白质组学方法研究水蛭干预IgA肾病大鼠的作用机制
目的:基于蛋白质组学方法检测水蛭对IgA肾病大鼠蛋白指纹图谱影响,阐述水蛭对血瘀证IgAN的作用机理.方法:选用6周龄的Wistar雄性大鼠140只,运用脂多糖牛血清白蛋白+脂多糖+四氯化碳方法建立实验性IgAN模型(空白对照组除外),造模成功后,随机分为(1)空白对照组、(2)模型组、(3)生理盐水对照组、(4)水蛭高剂量治疗组、(5)水蛭中剂量治疗组、(6)水蛭低剂量治疗组、(7)强的松治疗对照组,共7组,每组20只;血液样本经过SDS-PAGE电泳后,进行iTRAQ标记,离线二维液相色谱分离与点靶以及质谱分析及数据库检索对各组样本进行相对定量分析,并利用生物信息学软件进行分析.结果:以p-value<0.05且fold change<0.83或fold change>1.2为差异蛋白筛选标准,血液样本筛选出的21个差异蛋白,血液标本IgAN血瘀证大鼠模型组和空白相比上调,水蛭治疗后下调的蛋白5个,IgAN血瘀证模型组和空白相比下调,水蛭治疗后下调的蛋白16个.结论:应用iTRAQ技术筛选出水蛭治疗后IgAN血瘀证大鼠血液标本中差异表达蛋白,为深入研究IgAN血瘀证的病理机制及水蛭治疗IgA肾病的分子机制奠定了基础.
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基于iTRAQ技术的脾虚高脂血症大鼠肝脏蛋白质组学特征分析
目的:通过iTRAQ技术分析脾虚高脂血症大鼠肝脏蛋白质组学差异,进一步探讨脾虚高脂血症的病理机制.方法:20只健康雄性SD大鼠随机分为空白对照组和脾虚高脂血症组,空白对照组给予普通饲料,脾虚高脂血症组通过高脂饲料结合劳倦过度加饮食不节造模.8周后检测大鼠血脂水平、肝脏形态学变化,并分离提取肝脏总蛋白,通过iTRAQ技术对脾虚高脂血症大鼠肝脏进行蛋白质组质谱检测.结果:脾虚高脂血症大鼠出现血脂代谢异常和肝脏形态学改变,并且蛋白质组结果分析得到305个上调蛋白和263个下调蛋白,共计568个差异蛋白.作者从中挑选出与脂类代谢相关的7个蛋白加以分析.结论:脾虚高脂血症时出现血脂紊乱以及肝脏形态学发生变化可能与7-脱氢胆固醇还原酶和固醇载体蛋白2上调和载脂蛋白AI、载脂蛋白AⅡ和载脂蛋白AV下调有关,与一些糖类代谢相关蛋白也有关.
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基于iTRAQ标记技术研究肝癌脾虚证和肾阴虚证的唾液差异表达蛋白
目的:本研究基于iTRAQ标记技术筛选原发性肝癌脾虚证和肾阴虚证的唾液差异表达蛋白.方法:纳入原发性肝癌脾虚证和肾阴虚证各4例以及正常对照者4例,采集唾液样本,提取唾液蛋白并酶解和iTRAQ标记,采用LC-MS/MS鉴定蛋白,软件Proteome Discoverer1.3处理数据,并进一步进行生物信息学分析,运用DAVID软件从生物过程、细胞成分、分子功能注释对蛋白进行分类,选择KEGG数据库对蛋白所涉及的通路进行分类和富集分析.结果:本研究共鉴定出肽段12 480个,蛋白1608个.肝癌脾虚证与正常组之间差异蛋白有283个,其中上调的156个,下调的127个;肝癌肾阴虚证与正常组之间差异蛋白有357个,其中上调的蛋白有204个,下调的蛋白有153个;在脾虚证中特异性的蛋白有161个,其中上调86个,下调75个;肾阴虚证中特异性表达的蛋白235个,其中上调134个,下调101个.结论:本研究发现多个与肝癌脾虚证和肾阴虚证相关的特异性表达的唾液蛋白和通路,肝癌脾虚证差异蛋白主要参与细胞黏附,过氧化氢分解代谢,损伤反应,多细胞生物代谢过程,细胞活性氧反应和细胞骨架组织,肌动蛋白微丝,肌动蛋白结合,细胞运动等过程;肝癌肾阴虚证差异蛋白主要参与损伤、防御反应,免疫应答、补体经典途径的激活等免疫功能以及葡萄糖分解代谢、DNA的组装、包装、核小体组装和细胞氧化还原稳态等生物学过程.
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膝骨性关节炎差异表达蛋白血清标记物筛选：iTRAQ技术的重要性
背景：在临床上对于早期膝关节骨性关节炎尚缺乏有效的诊断方式。蛋白质组学是从整体的角度分析细胞的所有蛋白质组成、表达水平及修饰状态的学科，可以了解蛋白与蛋白间的相互作用及联系，从而揭示蛋白功能与细胞生命活动的规律。
目的：通过对骨性关节炎K/L分级的各阶段的血清样本进行ITRAQ定量蛋白组学分析检测，以发现骨性关节炎各个时期的的潜在分子标志物。
方法：收集膝关节骨性关节炎患者60例，参照Kel gren-Lawrence(K-L)分级标准，分为K-L 0、Ⅱ、Ⅳ级的亚组，每个亚组随机选取10例男性与10例女性。去除血清高丰度蛋白，进行稳定同位素116、117、118的iTRAQ标记、反相色谱柱分离、质谱检测及Swissport数据库检索；再利用生物信息学软件进行分析。结果与结论：通过对不同样品的iTRAQ肽段实验标记、Q-star质谱鉴定和MASCOT搜库，共筛选出有意义差异蛋白169个，K-L 0级与K-L Ⅳ级差异蛋白153个；K-L 0级与K-L Ⅱ级差异蛋白153个；K-L Ⅱ级与K-L Ⅳ级差异蛋白145个。结果表明应用iTRAQ技术可筛选出与骨性关节炎发生发展的多个差异蛋白，提示iTRAQ技术对于骨性关节炎蛋白质组学血清生物标记物的研究有重要意义。
