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极低剂量氢醌诱导人胚肺成纤维细胞应答反应的研究
我们采用蛋白质组学技术研究了极低浓度氢醌(HQ)刺激人胚肺成纤维细胞蛋白质表达差异,用肽指纹图谱初步鉴定了数个差异蛋白,有助于阐明低剂量化学物刺激诱导细胞应答反应的分子机制,为发展低剂量毒物测试系统,建立正确的环境污染物的危险度评价体系提供理论依据.
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脊柱终板软骨组织蛋白质提取技术
软骨组织由少量软骨细胞和大量细胞外基质组成,绝大部分细胞外基质由胶原和糖蛋白构成,功能性蛋白含量较低,在对软骨组织进行蛋白质分析时,这些问题的存在会严重影响蛋白质电泳的进行.在以往的研究中,对于软骨组织蛋白质的提取通常采用细胞培养的方法,即通过细胞的传代、繁殖获取软骨细胞样本,然后提取细胞蛋白质.
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幽门螺杆菌对人肝细胞系HepG2细胞蛋白质组的影响
目的:初步观察Hpylori对人肝细胞系HepG2蛋白质的差异表达,为进一步探讨Hpylori对肝细胞的病理作用机制奠定基础.方法:将Hpylori与HepG2共同培养6 h,采用双向电泳技术,对Hpylori处理和未处理HepG2细胞蛋白质进行分离和比较分析.结果:图像分析探测到Hpylori处理前后HepG2 2-DE图谱的平均蛋白质点数分别为988±94个、996±68个,蛋白质点的匹配率为86.4%.发现对照和H pylori处理HepG2蛋白表达有明显差异,主要是蛋白表达量的增加和减少,其中在Hpylori处理后有10种蛋白(Mr/pI:91 326/6.21,90 640/6.68,87 833/5.65,81 139/6.55,63 805/6.24,60 445/7.38,47 592/5.28,46 293/7.21,43 415/7.64,21 704/5.66)表达增强,8种蛋白(Mr/pI:70 839/7.02,56 403/6.58,44 076/6.86,43 744/7.21,42 497/6.64,37 567/7.17,22 342/7.49,21 112/5.63)表达降低.结论:Hpylori处理前后HepG2的蛋白质组具有差异,这些差异表达的蛋白质可能参与了Hpylori对肝细胞的病理作用过程,这种蛋白质组的差异分析有助于进一步研究Hpylori与人类肝脏疾病的关系.
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蛋白质组学及其在泌尿系统肿瘤防治研究中的应用
人类基因组计划(human genomic project,HGP)的完成,极大推动了功能基因组研究的发展和后基因组时代的到来.蛋白质是生命活动的直接执行者,各种遗传信息终要靠在不同时空、受严格调控并具有自身规律的蛋白质表达来体现.人类虽在基因水平已发现一些癌基因和抑癌基因等肿瘤相关基因,但由于转录后剪切、翻译后修饰等使基因与蛋白质的关系绝非一一对应.蛋白质不仅种类数量多,而且处在动态的新陈代谢中,其修饰构象的变化与生命活动密切有关,相互作用也更为复杂.因此,如何应用蛋白质组学从整体水平探讨肿瘤组织或细胞蛋白质的结构功能关系及蛋白质间的相互作用,为肿瘤发病机理的阐明和攻克提供理论依据,则显得尤为突出.
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肝移植的蛋白质组学研究探讨
20世纪90年代中期,在人类基因组计划研究的基础上,诞生了一门在整体水平上研究细胞蛋白质组成及其活动规律的新兴学科-- 蛋白质组学(Proteomics),它以蛋白质组(Proteome)为研究对象."蛋白质组"是由Wilkins和Williams提出的[1],发表在1995 年的Electrophoresis 杂志上,它被认为是生命科学领域后基因组时代研究的核心内容之一.
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人皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞蛋白质表达差异的初步测定
增生性瘢痕的防治是临床医学的难题之一,增生性瘢痕成纤维细胞的生物学行为一直是国内外学者研究的重点[1],我们选择成纤维细胞作为研究对象,通过对正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞蛋白质表达差异的初步检测,为增生性瘢痕的防治提供理论依据.
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人卵巢癌细胞系A2780及顺铂耐药系蛋白质双向电泳图谱的差异分析
近年来,生命科学研究领域的热点,蛋白质组学理论和技术的迅速发展和完善,可望从组织或细胞蛋白质整体水平这一全新角度,探讨卵巢癌顺铂耐药的机理[1].本研究应用固相pH梯度双向凝胶电泳技术,分离人卵巢癌细胞系A2780及顺铂(DDP)耐药系(A2780-DDP)的总蛋白,建立双向凝胶电泳(2-DE)图谱,再应用基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术,及数据库鉴定部分差异蛋白质,希望发现与顺铂耐药有关的特异性蛋白质.
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三氧化二砷治疗多药耐药的神经母细胞瘤的研究进展
神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)是儿童常见的颅外实体肿瘤,起源于原始神经嵴细胞,可发生于交感神经系统的任何部位,约占小儿恶性肿瘤的10%,小儿肿瘤相关死亡的15%[1]。NB早期转移,恶性程度高,约40%的病例属于高危(5年无事件生存率<50%)[2],虽然近年来采用化疗,放疗及造血干细胞移植等综合措施,但治愈率仍低;即使起病初期高危NB对强化疗反应较好,但仍有超过60%的患儿终因复发而死亡[3]。寻找新的有效治疗方法十分必要,本文就目前NB治疗的难点、NB 形成多药耐药性(multidrug resistance,MDR)机制、及潜在的治疗药物三氧化二砷(arsenic trioxide, As2 O3)治疗NB的机制的新研究进展作一综述。1神经母细胞瘤治疗的难点在治疗初期,绝大部分NB可获得完全缓解,但在化疗后期,部分患儿因NB细胞出现MDR而复发;获得性的MDR是目前化疗药物杀伤肿瘤细胞的主要阻碍[4],也是NB 治愈率不能得到提高的主要原因。MDR是指对多种不同结构及药理作用的抗肿瘤药物交叉耐受,可以是对首次化疗即产生的天然性耐药,亦可是在化疗过程中产生的获得性耐药[5],一旦肿瘤对化疗表现为MDR,患者的生存率将明显降低[4]。尽管针对该问题采取了许多创新性的研究,如使用大剂量维甲酸诱导NB分化等,但近十年来高危NB患儿的预后并没有实质性的提高。一般传统的化疗药物主要通过干扰肿瘤细胞DNA或RNA的复制,影响肿瘤细胞蛋白质的合成,激活P53基因的表达等机制发挥抗肿瘤的作用;但化疗药物也可增加基因突变,影响体内抑癌基因表达。在一些恶性程度较高的肿瘤细胞中,因化疗所继发的凋亡机制受损,如P53基因的突变,含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)失效等,导致传统化疗药物的毒性作用受限。虽然加大化疗剂量在一定程度上可以逆转肿瘤细胞的耐药,但是大剂量化疗可引起多种严重的器官毒副作用,如心脏、肝脏、肾脏功能和听力的损害,使部分患儿无法耐受而放弃治疗。
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粉刺霜中盐酸林可霉素的电化学测定法
盐酸林可霉素,为抗生素类药,对革兰氏阳性球菌有较好抑制作用,特别对厌氧菌、金黄色葡萄球菌、肺炎球菌有高效.其作用机理属抑菌剂,主要抑制细菌细胞蛋白质的合成,作用部位在核糖核蛋白体50s亚基上.盐酸林可霉素在治疗各种感染时得到了广泛的应用,因此建立一种有效的测定盐酸林可霉素的方法就显得尤为重要.
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蛋白质组学在风湿免疫病中的应用
蛋白质组学作为后基因组学时代研究的一个重要内容,已广泛深入到生命科学的各个领域,其理论和技术的发展完善为风湿免疫病研究带来了新的思维方式和研究领域,它不仅可以从组织或细胞蛋白质整体水平这一全新角度来研究风湿免疫病发病机制,而且能寻找用于风湿免疫病诊断和防治的生物标志物.
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女性生殖系统激素受体的分布及特征
激素受体是一种特殊性细胞蛋白质,它能把内分泌刺激传递到细胞内,激素对靶细胞作用的强弱,虽然主要取决于血中激素的浓度,同时,也取决于激素受体的特异性、亲和力及其含量。而女性生殖器官的某些病理改变及功能障碍又与其组织内所含激素受体的质与量有密切关系。因此,研究激素受体变化及其对内分泌的影响,有助于临床医生从新的角度诊治疾病。
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外科细胞分子生物学基础(2)
2.真核细胞的基本结构和功能真核细胞的基本结构可以从两个层面来看,即细胞的超微水平和分子水平.超微结构包括人们通过显微镜对细胞的核、质、膜的认识.分子结构是指人们通过生化或分子生物学的手段对细胞蛋白质及核酸的了解.这些结构在细胞的生与死,增殖与分化等生命活动中发生复杂的生理和病理变化.
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HaCaT细胞蛋白质组双向凝胶电泳技术的初步建立
皮肤是人体大的器官,蛋白质组学研究能够动态、整体、定量地考察皮肤各种生理、病理发生过程中蛋白质种类、数量的改变,有助于研究者探讨皮肤病发病机理,寻找皮肤病诊断和预后的特异性标志,以及药物治疗的靶标.目前蛋白质组学技术在皮肤领域的应用尚处于起始阶段.
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中草药对系膜细胞增殖作用的研究
中西医结合治疗肾脏疾病以来,对系膜细胞的研究也越来越多,也越来越深入。中草药对系膜细胞的增殖有抑制作用,尤其是大黄、雷公藤、黄芪有较明显的作用。1 大黄的研究 大黄可降低血BUN,减少蛋白尿,在临床治疗慢性肾衰具有一定疗效。研究表明,大黄蒽醌和大黄酸蒽酮葡萄糖甙加入培养液中,直接抑制系膜细胞生长,含大黄衍生物的血清也明显抑制系膜细胞蛋白质和DNA的合成,并且不受促肾因子的影响[1]。大黄蒽醌类在体内代谢后可转化为大黄素,大黄素能抑制细菌脂多糖(LPS)诱导的系膜细胞c-myc原癌基因mRNA的高表达,并能使在S期中系膜细胞的增殖细胞核抗原(PCNA)的基因表达明显降低,从而抑制系膜细胞的细胞增殖[2,3]。 各种研究表明,许多因素(细胞因子、生长因子、基质成分等)参与系膜细胞增殖的调节,同时彼此之间还相互影响,互相制约。如白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF)及LPS均能刺激系膜细胞增殖,而TNF和LPS又能刺激肾系膜细胞分泌IL-6[4]。大黄是否对细胞因子有作用呢?有人采用3H-TdR掺入技术,发现复方大黄注射液能抑制内毒素诱导系膜细胞分泌作用于肾组织细胞的细胞因子(IL-1、IL-6、TNFα),而起到抑制肾小球系膜细胞增生,减轻与延缓肾小球硬化的作用[5]。继而有人选用传代4-8代的人肾小球系膜细胞,加入不同浓度的IL-6、TNF及LPS,以3H-TdR掺入为指标,观察到上述三种细胞因子刺激系膜细胞DNA合成的作用完全被大黄素血清所抑制,而且大黄素抑制LPS刺激系膜细胞引起的IL-6过多产生。可以看出,大黄素对系膜细胞生长的抑制作用可能是双重性的,既可以直接拮抗IL-6对系膜细胞的刺激作用,也可以通过减少系膜细胞自身IL-6的分泌而起作用,所以在肾小球系膜增生病变的发展中起重要作用[4]。
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蛋白质组学在药物研究中的应用
蛋白质组是指基因组表达的所有相应的蛋白质,是指细胞或组织或机体全部蛋白质的存在及其活动方式.蛋白质组具有多样性和可变性,同一机体的不同细胞中,蛋白质的种类和数量是各不相同的,即使是同一种细胞,在不同时期、不同生理条件下,其蛋白质组都是在不断变化之中,在病理过程或药物作用下,细胞蛋白质的组成及其变化,与正常生理过程也是不同的.
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蛋白质组学在动脉粥样硬化研究中的进展
动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是心血管系统中常见的严重危害人类健康的一类疾病.该病主要侵犯大、中动脉,导致心、脑等重要器官的供血不足或中断而产生致命性创伤.利用蛋白质组学技术和方法研究AS的组织细胞蛋白质组与正常组织细胞蛋白质组的差异表达及药物预防与治疗过程中蛋白质组整体表达的动态分析,对从分子水平上理解AS的发病机制,发现疾病标志分子,寻找防治药物,具有深远的理论与实际意义.现将蛋白质组学在AS中的应用综述如下.
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GRP78在肿瘤治疗和预后中的应用
内质网(ER)是膜蛋白及分泌蛋白合成及组装的核周细胞器,可合成大约1/3的细胞蛋白质.当蛋白负载超出ER的组装能力时,会激发细胞的未折叠蛋白反应(UPR),激活PERK、IRE1/X-box结合蛋白-1(XBP-1),并且激活转录因子-6信号途径,这些保护措施可以导致广泛的翻译停滞,上调分子伴侣和折叠酶表达,增强内质相关的错误折叠蛋门降解[1,2].
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HPLC法测定高三尖杉酯碱氯化钠注射液的含量
高三尖杉酯碱系从粗榧属植物的总生物碱中分离出的一种生物碱,是我国研制成功的高效抗肿瘤药.能抑制真核细胞蛋白质的合成,使多聚核糖体解聚,是干扰蛋白核体糖功能的抗癌药物.对细胞内DNA的合成亦有抑制作用;能抑制慢粒慢性期白血病细胞生长,高浓度的高三尖杉酯碱还能促使产生更多的慢粒凋亡细胞.与阿糖胞苷、巯嘌呤等无交叉耐药性;与阿糖胞苷、干扰素-α联合在体外显示对抑制慢粒慢性期的白血病细胞生长有协同作用.本文建立了HPLC法测定高三尖杉酯碱的含量,为其质量控制提供了有效的手段.
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药害伤肺莫商量
伴随医药事业的迅速发展,新药特药不断面世,对疾病治疗无疑产生了新的希望.但药物副作用也在危害人类健康甚至生命.近研究证明,药物及其代谢产物所形成的半抗原和损伤的细胞蛋白质,形成复合物,刺激机体免疫系统产生抗体;此抗体进一步引起肺组织细胞损伤.
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用极谱法测定水发食品中的甲醛
甲醛俗称福尔马林,是有刺激气味的无色液体,为基本有机原料,用于防腐剂、消毒剂、交联剂、粘结剂,广泛用于医药、染料、纺织、皮革、造纸、塑料等.同时,它是一种破坏生物细胞蛋白质的原生质毒物,生物体组织接触甲醛会发生强烈刺激,并使其组织硬化,毒性极大.