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肿瘤坏死因子α诱导ATF6、IRE1介导的未折叠蛋白反应
目的 研究肿瘤坏死因子α(TNFα)对小鼠纤维母细胞(L929)中葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein78,GRP78)、X盒结合蛋白1(X box binding protein 1,XBP-1)表达的影响,探讨TNFα信号传导通路与内质网应激的相关性.方法 体外培养L929细胞,分别用TNFα、Tunlcamycin作用0、2、4、6、8和10 h,以Western Blot、Northern Blot检测内质网应激的标志分子:GRP78蛋白的表达,以及非折叠蛋白反应中的关键分子:XBP-1蛋白及mRNA水平表达;用RT-PCR结合Pst1酶切法检测XBP-1 mRNA的剪接作用.结果 TNFα作用于L929细胞即可以引起GRP78蛋白、XBP-1蛋白及XBP-1mBNA表达的升高,又可以诱导XBP-1mRNA的剪接作用;且这些分子表达的升高及mRNA的剪接作用均发生在TNFα作用的早期(开始于TNFα作用的2 h,4 h达到高峰,6 h后逐渐减弱).结论 TNFα作用于L929细胞可以诱导内质网应激,由此引起的活化转录因子6(activating transcription factor6,ATF6)、ER转膜蛋白激酶1(inositol-requiring enzyme 1,IBE1)介导的未折叠蛋白反应对细胞具有促生存作用.
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X盒结合蛋白1反应产物在局灶性脑缺血后内源性神经干细胞增殖过程中的作用
背景:细胞核转录因子X盒结合蛋白1在中枢神经系统发育中表达,对神经元的增殖都有很重要的作用.目的:检测细胞核转录因子X盒结合蛋白1在大鼠脑缺血再灌注海马组织神经干细胞中的表达及碱性成纤维细胞生长因子的干预作用.方法:采用大脑中动脉栓塞制作大鼠脑缺血再灌注模型.大鼠随机分为对照组、缺血再灌注组、碱性成纤维细胞生长因子组,免疫组织化学法检测海马神经干细胞BrdU、X盒结合蛋白1的表达及碱性成纤维细胞生长因子的干预作用.结果与结论:脑缺血再灌注第3天缺血海马神经元BrdU阳性细胞明显增多,第7天达高峰.X盒结合蛋白1反应产物第3天较对照组增多,随缺血再灌注时间的延长逐渐增多,第7天达高峰,以后表达逐渐减少.说明碱性成纤维细胞生长因子促进神经干细胞的增殖及缺血脑组织X盒结合蛋白1的表达,其促进神经干细胞增殖作用可能由X盒结合蛋白1信号介导.
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大鼠局灶性脑缺血预处理后XBP-1表达的变化
目的 观察缺血预处理对大鼠脑缺血再灌注后X盒结合蛋白1(XBP-1)mRNA及其蛋白表达的影响.方法 SD大鼠60只,随机分为假手术组(SO)、脑缺血再灌注组(MCAO)、脑缺血预处理组(BIP)3组,每组按照再缺血后12h、1d、2d、3d4个时间点分为4个亚组.采用二次线栓法制备大鼠局灶性脑缺血预处理模型,用实时荧光定量PCR和Western blot法观察再缺血后各个时间点XBP-1 mRNA及其蛋白的表达变化.结果 MCAO组XBP-1 mRNA及其蛋白表达均于缺血再灌注后12h开始明显上升,24h达高峰(P＜0.01),随再灌注时间延长其表达逐渐下降,但仍保持较高表达水平(P ＜0.01)；BIP组较MCAO组XBP-1 mRNA及其蛋白表达明显升高(P＜0.05,P＜0.01).结论 脑缺血预处理可能通过诱导XBP-1表达发挥其神经保护作用.
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XBP －1在肿瘤发生发展中的研究进展
X－盒结合蛋白1（X－box binding protein 1，XBP－l）是一种新近发现的与蛋白质折叠和内质网构建相关的蛋白质，研究发现其在多种肿瘤细胞中均有广泛表达，与肿瘤发生、发展的关系密切。本文对XBP－1参与肿瘤发生、发展过程的免疫逃避、血管生成、缺氧、侵袭转移等方面的研究进展做一综述。
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匹诺塞林对脑缺血再灌注内质网应激凋亡相关基因mRNA表达的影响
目的:观察匹诺塞林对大鼠脑缺血再灌注急性期损伤内质网应激凋亡途径相关基因的调控作用.方法:雄性SD大鼠50只,阻塞大脑中动脉建立脑缺血再灌注模型,随机分为假手术组、模型组、匹诺塞林1 mg/kg组、3 mg/kg组和10 mg/kg组,其中模型组及匹诺塞林各给药组,分别于大脑中动脉阻塞2h后再灌注同时给药,6h后取血并断头取脑,取缺血半暗带组织,实时荧光定量PCR(RT-PCR)法测定GRP78、CHOP、ATF4、XBP-1的mRNA变化.结果:匹诺塞林能增加急性局灶性脑缺血再灌注GRP78 mRNA水平,其中匹诺塞林3 mg/kg、10 mg/组与模型组比较,差异有统计学意义(P ＜0.05或P＜0.01);匹诺塞林能降低内质网应激凋亡相关蛋白CHOP、ATF4,XBP-1mRNA水平,与模型组相比,差异有统计学意义(P ＜0.05或P＜0.01).结论:匹诺塞林能抗脑缺血再灌注损伤,其机制可能与保护内质网功能,减少GRP78、CHOP、ATF4及XBP-1相关基因表达有关.
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GRP78在肿瘤治疗和预后中的应用
内质网(ER)是膜蛋白及分泌蛋白合成及组装的核周细胞器,可合成大约1/3的细胞蛋白质.当蛋白负载超出ER的组装能力时,会激发细胞的未折叠蛋白反应(UPR),激活PERK、IRE1/X-box结合蛋白-1(XBP-1),并且激活转录因子-6信号途径,这些保护措施可以导致广泛的翻译停滞,上调分子伴侣和折叠酶表达,增强内质相关的错误折叠蛋门降解[1,2].
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清热化瘀颗粒对脑缺血预处理大鼠XBP-1表达的影响
目的 观察清热化瘀颗粒对脑缺血预处理大鼠缺血再灌注后XBP-1 mRNA及其蛋白表达的影响.方法 SD大鼠80只,随机分为假手术组(SO)、脑缺血再灌注组(MCAO)、脑缺血预处理组(BIP)、清热化瘀颗粒组(QRHY),每组按照再缺血后12h、1d、2d、3d4个时间点分为4个亚组.采用二次线栓法制备大鼠局灶性脑缺血预处理模型,用实时荧光定量PCR和Western blot法观察再缺血后各个时间点XBP-1 mRNA及其蛋白的表达变化.结果 MCAO组XBP-1 mRNA及其蛋白表达均于缺血再灌注后12 h开始明显上升,24 h达高峰(P＜0.01),随再灌注时间延长其表达逐渐下降,但仍保持较高表达水平(P＜0.01)；BIP组较MCAO组XBP-1 mRNA及其蛋白表达明显升高(P＜0.05或P＜0.01),QRHY组较BIP组进一步升高其表达(P＜0.05).结论 脑缺血预处理可能通过诱导XBP-1表达发挥其神经保护作用,清热化瘀颗粒可促进其作用.
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关于XBP-1的研究新进展
X-盒-结合蛋白-1(XBP-1)是内质网应激反应的一种重要下游信号因子,进食状态下它通过激活内质网折叠能力增加胰岛素敏感度,调控葡萄糖稳态.近研究表明XBP-1能通过阻碍糖异生增加肥胖和糖尿病小鼠的糖耐量,并且XBP-1产生此作用不依赖其对胰岛素敏感度的效应,对2型糖尿病的治疗开辟了新途径.
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牛磺熊去氧胆酸对急性胰腺炎大鼠内质网应激蛋白的影响
目的 观察牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)对蛙皮素诱导的急性胰腺炎大鼠内质网应激相关蛋白GRP78/BIP、sXBP-1、pJNK及Caspase-12表达的影响,探讨其对急性胰腺炎保护作用的机制.方法 3月龄SD大鼠96只,随机分为NaCl对照组、TUDCA对照组、CER组、TUDCA治疗组,每组24只.于造模成功后的第0.5、1、2、4h取胰腺组织,采用常规HE染色法观察各组大鼠胰腺组织学改变;应用免疫蛋白印迹法检测GRP78/BIP、sXBP-1、pJNK及Caspase-12蛋白的表达情况.结果 CER组、TUDCA治疗组均出现炎症反应及凋亡形态学改变,而TUDCA治疗组反应较轻.诱导后各时间点CER组GRP78/BIP呈上升趋势;TUDCA治疗组较比CER组表达降低(P＜0.05),但仍高于NaCl对照组.CER组sXBP-1在诱导后1h、2h表达增加,与TUDCA治疗组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).CER组、TUDCA治疗组pJNK的表达于0.5h达到峰值,其后呈下降趋势,但仍显著高于NaCl对照组、TUDCA对照组(P＜0.05),TUDCA治疗组pJNK水平较CER组降低,在时间点2h、4h的表达差异有统计学意义(P＜0.05).CER组Caspase ～ 12的表达增加,于2h达到峰值.TUDCA治疗组与CER组比较,Caspase-12的表达降低,在时间点0.5h、1h、2h差异有统计学意义(P＜0.05).结论 TUDCA通过下调GRP78/BIP、sXBP-1,抑制pJNK、Caspase-12表达,发挥其对大鼠急性胰腺炎的细胞保护潜能.
