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HepG2细胞中与戊型肝炎病毒衣壳蛋白相互作用蛋白的初步研究
利用重组戊型肝炎病毒(HEV)衣壳蛋白片段p239(368～606 aa)形成的类病毒颗粒作为亲和层析诱饵蛋白,HepG2 为细胞模型,筛选与p239类病毒颗粒特异性相互作用蛋白.经过二维电泳分离, MALDI-TOF-MS分析鉴定得到GRP78/Bip,HSP90,alpha-tubulin及P43四个与p239有相互作用的候选蛋白.GRP78/Bip为热休克蛋白家族成员,体外免疫共沉淀实验结果证实,其与p239有特异性的结合. 此研究结果为深入研究HEV的感染过程如吸附、入胞,以及HEV的致病机理提供了有益线索.
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谷氨酰胺对产生内质网应激反应的A549细胞JNK,pJNK,CHOP,GRP78表达水平的影响
[目的]探讨谷氨酰胺对产生内质网应激反应的A549细胞的保护作用.[方法]取A549细胞进行培养,分为5个组,其中空白对照组培养液中只有A549细胞,衣霉素组培养液中加入A549细胞和衣霉素1 mg/L,GLN4组培养液中加入A549细胞、衣霉素1 mg/L和4 mmol/L谷氨酰胺,GLN8组培养液中加入A549细胞、衣霉素1 mg/L和8 mmol/L谷氨酰胺,GLN12组培养液中加入A549细胞、衣霉素1 mg/L和12 mmol/L谷氨酰胺.利用Western blot方法检测各组细胞培养12 h后的JNK,pJNK,CHOP及GRP78表达水平.[结果]与空白对照组比较,衣霉素组pJNK,CHOP及GRP78表达水平均明显升高(P＜0.001),而JNK表达水平未见明显改变(P＞0.05),提示衣霉素诱导A549细胞产生了内质网应激.与衣霉素组比较,GLN4,GLN8及GLN12组pJNK,CHOP,GRP78表达水平均明显降低(P＜0.05).[结论]谷氨酰胺对产生内质网应激的A549细胞具有保护作用.
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参芎注射液对脑缺血再灌注大鼠的神经元保护作用
目的:观察参芎注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及内质网应激相关因子葡萄糖调节蛋白/免疫球蛋白结合蛋白(GRP78/Bip)表达的影响.方法:100只雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、脑缺血再灌注组、参芎治疗组;后两组根据再灌注时间不同各分为6、12、24、72 h四个亚组;采用大鼠大脑中动脉线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型.TUNEL法观察细胞凋亡情况;免疫组化和RT-PCR法检测各实验组中缺血周围区GRP78/Bip的表达.结果:TUNEL法表明参芎治疗组大鼠大脑神经细胞凋亡程度较缺血再灌注组明显减轻.免疫组化和RT-PCR检测均发现各时间点缺血再灌注组大鼠GRP78/Bip表达高于假手术组及正常组;脑缺血再灌注组及参芎治疗组GRP78/Bip的表达于缺血后12 h高,72 h恢复至正常水平,且均呈现先升高后降低的趋势;各时间点缺血再灌注组GRP78/Bip表达均高于参芎治疗组.结论:再灌注损伤后12 h内出现GRP78/Bip表达升高.参芎注射液可以下调其表达,从而可能通过减轻内质网应激而减轻缺血再灌注损伤起到神经元保护的作用.
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Grp78/Bip介导戊型肝炎病毒衣壳蛋白对宿主细胞的吸附
目的 探讨Grp78/Bip在戊型肝炎病毒(HEV)衣壳蛋白进入宿主细胞过程中的作用.方法 采用pull-down和免疫共沉淀技术进一步验证p239与Grp78/Bip的相互作用;采用激光共聚焦显微镜技术检测p239与细胞膜表面Grp78/Bip共定位情况;采用原核表达纯化的Grp78/Bip蛋白封闭p239的Grp78/Bip结合位点,检测其阻断p239吸附细胞的效果.结果 p239与Grp78/Bip可以直接结合,而且这种结合是可逆的生理性结合;p239与Grp78/Bip在细胞膜上存在部分共定位;Grp78/Bip能部分阻断p239对肝细胞的吸附.结论 Grp78/Bip参与并介导HEV衣壳蛋白对宿主细胞的吸附.
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牛磺熊去氧胆酸对急性胰腺炎大鼠内质网应激蛋白的影响
目的 观察牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)对蛙皮素诱导的急性胰腺炎大鼠内质网应激相关蛋白GRP78/BIP、sXBP-1、pJNK及Caspase-12表达的影响,探讨其对急性胰腺炎保护作用的机制.方法 3月龄SD大鼠96只,随机分为NaCl对照组、TUDCA对照组、CER组、TUDCA治疗组,每组24只.于造模成功后的第0.5、1、2、4h取胰腺组织,采用常规HE染色法观察各组大鼠胰腺组织学改变;应用免疫蛋白印迹法检测GRP78/BIP、sXBP-1、pJNK及Caspase-12蛋白的表达情况.结果 CER组、TUDCA治疗组均出现炎症反应及凋亡形态学改变,而TUDCA治疗组反应较轻.诱导后各时间点CER组GRP78/BIP呈上升趋势;TUDCA治疗组较比CER组表达降低(P＜0.05),但仍高于NaCl对照组.CER组sXBP-1在诱导后1h、2h表达增加,与TUDCA治疗组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).CER组、TUDCA治疗组pJNK的表达于0.5h达到峰值,其后呈下降趋势,但仍显著高于NaCl对照组、TUDCA对照组(P＜0.05),TUDCA治疗组pJNK水平较CER组降低,在时间点2h、4h的表达差异有统计学意义(P＜0.05).CER组Caspase ～ 12的表达增加,于2h达到峰值.TUDCA治疗组与CER组比较,Caspase-12的表达降低,在时间点0.5h、1h、2h差异有统计学意义(P＜0.05).结论 TUDCA通过下调GRP78/BIP、sXBP-1,抑制pJNK、Caspase-12表达,发挥其对大鼠急性胰腺炎的细胞保护潜能.
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谷氨酰胺对A549细胞内质网应激反应的保护作用
目的 探讨谷氨酰胺对内质网应激反应的细胞保护作用.方法 利用衣霉素制备细胞内质网应激模型:培养人肺腺癌细胞株A549细胞,用MTT法检测不同浓度(0.1 ug/ml,1 ug/ml,10ug/ml)衣霉素对A549细胞作用不同时间(6,12,24,48h)的细胞增值抑制率以选择衣霉素作用的合适时间及浓度.结果 衣霉素处理细胞A549浓度为1ug/ml,作用时间为12小时时细胞增殖抑制率为51.3％,接近50％,故选择衣霉素作用浓度为1 ug/ml,作用时间为12h.结论 谷氨酰胺对产生内质网应激的A549细胞有保护作用.
