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极低剂量氢醌诱导人胚肺成纤维细胞应答反应的研究
我们采用蛋白质组学技术研究了极低浓度氢醌(HQ)刺激人胚肺成纤维细胞蛋白质表达差异,用肽指纹图谱初步鉴定了数个差异蛋白,有助于阐明低剂量化学物刺激诱导细胞应答反应的分子机制,为发展低剂量毒物测试系统,建立正确的环境污染物的危险度评价体系提供理论依据.
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HPLC-ESI-MS联用法分析血燕与白燕水解多肽研究
目的:应用高效液相色谱-电喷雾质谱联用技术,对血燕与白燕的水解多肽进行测定,比较不同种类燕窝水解多肽一级结构的异同.方法:运用SDS-PAGE、毛细管高效液相色谱、ESI质谱法对样品进行纯度检查和肽图谱测定,通过Mascot 2.2软件进行数据库检索.结果:质谱分析Basepeak图显示,血燕与白燕的水解多肽具有较好的一致性.利用Mascot 2.2软件数据库对下载于Uniprot的禽类数据库进行检索,鉴定白燕中73种蛋白,鉴定血燕中51种蛋白,发现血燕和白燕有30种相同蛋白.结论:血燕与白燕水解肽谱有较高的相似度,血燕与白燕的共有蛋白可作为燕窝产品的质量控制特征.
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前列腺增生的尿液蛋白质组学分析
目的 在临床前列腺特异性抗原(prostate-specific antigen,PSA)升高的情况下,特别是前列腺特异性抗原在4 μg/L至10 μg/L时,前列腺增生和前列腺癌的鉴别诊断很难,本实验对前列腺增生患者、前列腺癌患者和健康对照的尿液蛋白质双向凝胶电泳图谱进行对比分析,旨在较全面的分析其成分,为临床鉴别诊断提供依据.方法 用丙酮沉淀蛋白的方法 对前列腺增生患者、前列腺癌患者和健康对照尿液中的蛋白质进行浓缩,再用双向凝胶电泳技术分离蛋白质样品,CANON G9照相获取图像,PDQuest2D分析软件对图像进行背景消减、斑点检测、匹配、斑点位置重复性的系统分析,寻找差异表达蛋白质.在此基础上用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALIDI-TOF)进行肽指纹图谱鉴定,并进行生物信息学分析.结果 通过前列腺增生、前列腺癌和健康对照尿液双向凝胶电泳图的对比分析,获得前列腺增生差异蛋白质点,选取其中20个做质谱和生物信息学分析,终分离鉴定出血清白蛋白、视黄醇结合蛋白前体等17种有效蛋白.结论 通过实验条件的优化,应用蛋白质组学方法 分析前列腺增生患者尿液蛋白质的组成成分是可行的,为研究前列腺增生患者尿液检测特异标志物提供了基础资料,为今后鉴别前列腺增生和前列腺癌提供了有益的依据,同时也为解决临床误诊难题提供了思路.
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重症肌无力骨骼肌减少的25 000蛋白分子鉴定
目的:解析重症肌无力(MG)骨骼肌特异减少的相对分子质量约25 000的蛋白分子结构.方法:用双向电泳分离纯化骨骼肌25 000蛋白,电喷射离子化质谱和Edman降解法分别测定其精确分子质量和N-端部分氨基酸序列,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱测定其肽指纹图谱,在上述基础上,用Immuno-Western blot分析骨骼肌蛋白与25 000蛋白抗体及碳酸酐酶Ⅲ(CAⅢ)抗体的结合.结果:质谱和N-端部分氨基酸序列的测定表明,电泳显示的表观相对分子质量为25 000的蛋白其精确分子质量为29 632.05,该蛋白的N-端氨基酸可能是酰基化的;肽指纹图谱解析和蛋白资料库查询结果,结合对25 000蛋白生化和生物学特征的了解,发现25 000蛋白与CAⅢ的分子是非常相似的.结论:MG骨骼肌特异减少的相对分子质量约25 000的蛋白分子很可能是已知的蛋白质CAⅢ,该活性物质与MG发病的关系值得进一步研究.
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晕船易感大鼠与不晕大鼠脑干蛋白质双向电泳图谱的鉴定与分析
目的:利用蛋白组学技术,建立晕船易感及不晕大鼠脑干总蛋白的双向电泳图谱,分析并鉴定差异表达蛋白质.方法:据模拟晕船刺激后异嗜高岭土量的增减将大鼠分为晕船易感组和不晕组,应用固相pH梯度(immobilized pH gradient,IPG)双向电泳(two-dimensionaI electrophoresis,2-DE)技术,分离2组大鼠脑干总蛋白,分析并用肽指纹图谱(peptide massfingerprint,pMF)鉴定差异蛋白质.结果:鉴定5个晕船易感相关蛋白质,上调酪氨酸3-单加氧酶/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白、铁效应元件结合蛋白1,下调硫氧还蛋自过氧化物酶Ⅰ、磷酸甘油酸变位酶B、线粒体电压依赖型阴离子通道1.结论:成功建立分辨率和重复性高的晕船易感和不晕组大鼠2-DE图谱,研究表明差异蛋白质与神经递质合成、氧化损伤、能量代谢、细胞凋亡及铁代谢有关.
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正常人尿蛋白质组学研究
目的 初步建立正常人尿液蛋白质双向电泳图谱,分析正常尿蛋白基本组成,为疾病下尿液蛋白差异研究作参考.方法用丙酮沉淀法对4例正常人尿液中蛋白质进行浓缩,用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离蛋白样品,凝胶考马斯亮蓝染色,GS-800 Calibrated Densitometer凝胶成像系统获取图像,PDQuest2D分析软件对图像进行背景消减、斑点检测、匹配、斑点位置重复性的系统分析,寻找表达蛋白.应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALIDI-TOF)得到相应的肽指纹图谱,搜索相关数据库对蛋白质点进行鉴定.结果 对染色明显且独立的30个蛋白斑点进行鉴定,并对结果进行数据库检索,共有28个点获得有效匹配,包括各种血清白蛋白、免疫分子以及补体分子、载脂与转运蛋白、肽酶S1家族、细胞结构蛋白、蛋白酶抑制因子等,鉴定出的蛋白质大部分PI在4～7之间.结论 应用蛋白质组学方法分析正常人尿液蛋白质组成成分可行,初步建立了正常人尿液28个蛋白质图谱,为分析疾病状态下尿液蛋白质成分的改变提供了基础资料.
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人肺腺癌细胞系A549细胞双向电泳-飞行时间质谱研究
目的 初步分析人肺腺癌细胞系A549细胞蛋白质表达情况,从蛋白组水平探讨肺腺癌发病的分子机制.方法 应用2-DE技术对人肺腺癌细胞系A549细胞总蛋白进行分离,获得蛋白质表达谱;应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)结合生物信息学进行蛋白质鉴定.结果 3块胶平均蛋白斑点数为1 138±49,平均匹配点数为986±32,匹配率为85.8%.随机选取背景清晰、分辨清楚、蛋白含量较高的20个斑点进行MALDI-TOF-MS分析,共获得了18个肽质量指纹图谱(PMF).将PMFs质量数据通过Aldente软件查询SWISS-PROT数据库,根据匹配片段及氨基酸序列覆盖率等,初步鉴定出15种蛋白质.根据功能,这些蛋白质可分为:①基本代谢相关的酶类:果糖2-磷酸醛缩酶、视网醛脱氢酶1(RALDH1)、吡多醛激酶;②细胞骨架类:蛋白细胞角蛋白8(CK8)、β-2链微管蛋白;③应激相关蛋白:蛋白二硫化物异构酶A3(PDIA3);④ 信号转导分子:膜联蛋白1(ANX1)、膜联蛋白4(ANX4);⑤分子伴侣:热休克蛋白60(HSP60)、热休克蛋白β-1、抑制素(PHB);⑥转录及翻译相关蛋白:不均一性核糖核蛋白H(hnRNP H);⑦杂类:Rgr protein、NPM、PCBP1.结论 应用2-DE/MALDI-MS方法获得了较为理想的人肺腺癌细胞系A549细胞2-DE蛋白质表达谱,初步鉴定了15种蛋白质.
