体外培养乳腺癌细胞线粒体差异蛋白的筛选

目的 比较体外培养的乳腺癌细胞与正常乳腺细胞线粒体蛋白指纹图谱,筛选差异蛋白,为乳腺癌亚细胞蛋白标志物的研究奠定基础.方法 提取乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MCF-7及正常乳腺细胞株HBL-100线粒体蛋白,表面增强激光解析蛋白飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)检测蛋白表达,Biomarker Wizard Software分析软件统计结果,筛选差异蛋白,并探讨溶剂及长期冻存对结果分析的影响.结果 在相对分子质量2 000～100 000范围内检测到近200个蛋白峰,HBL-100与MDA-MB-231和MCF-7细胞相比,差异蛋白峰分别为45个和36个(P＜0.05),其中相对分子质量9 200、13 800、14 000和22 500的蛋白在2株癌细胞中表达均下降,相对分子质量10 000和11 600的蛋白在2株癌细胞中表达均升高.4‰的TritonX-114及冻存3～6个月对结果分析无影响.结论 SELDI-TOF-MS能够快速、灵敏地检测分析乳腺癌线粒体差异表达蛋白,为亚细胞水平乳腺癌标志物的研究提供了新的思路.

应用seldi-TOF MS技术分析高低转移肺腺癌细胞株差异表达蛋白

目的分析体外培养的高低转移肺癌细胞株蛋白质表达差异.方法采用表面增强激光解吸离子化(SELDI)蛋白质芯片技术检测了两种肺癌细胞株(肺腺癌细胞高转移株Anip973和肺腺癌细胞低转移株AGZY)的蛋白质谱.分析不同细胞株之间的蛋白质表达差异.每种细胞用WCX2和IMAC3两种芯片检测.采用PBSⅡC型蛋白质芯片阅读机读取数据,获得的数据采用Ciphergen公司的Proteinchip Software 3.2.1软件分析.结果获得WCX2和IMAC3两种蛋白芯片上Anip973和AGZY细胞株蛋白质谱图谱;在对两种肺癌细胞株的蛋白质谱比较时发现,有14个蛋白质在两种肺癌细胞株中出现明显的变化,其中9个差异蛋白在Anip973细胞中高表达,5个差异蛋白在Anip973细胞中低表达.结论高低转移肺腺癌细胞之间蛋白质谱表达比较时有差异蛋向.

双向电泳分析水蛭酒炙前后差异蛋白表达

目的 采用双向电泳分析水蛭(Hirudo)酒炙前后差异蛋白表达.方法 分别采用饱和硫酸铵沉淀法、三氯乙酸/丙酮沉淀法、直接裂解液法提取生水蛭和酒炙水蛭蛋白,十二烷基硫酸钠-丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对这3种方法进行筛选,建立双向电泳体系.分析水蛭酒炙前后蛋白表达谱,寻找相关差异蛋白.结果 直接裂解液法所得条带数量多,分布连贯清晰.水蛭酒炙前后蛋白含有量有显著性差异(P＜0.01),共发现19个差异蛋白点,其中下调蛋白8个,上调蛋白11个.结论 双向电泳所得差异蛋白可作为蛋白标志物以规范水蛭炮制工艺,并确保其稳定性.

TMT定量蛋白组学方法筛选乳腺癌腋窝淋巴结转移患者血清差异蛋白

目的:分析有腋窝淋巴结转移和无腋窝淋巴结转移的乳腺浸润性导管癌患者血清中的差异蛋白,筛选与乳腺癌转移相关的生物标志物和治疗靶点.方法:本研究采用定量蛋白质组学串联质谱标签(tandem mass tag,TMT)标记技术分别对14例有腋窝淋巴结转移及14例无腋窝淋巴结转移的乳腺癌患者血清蛋白进行检测,并对蛋白质进行定量分析,筛选出发生显著变化的差异蛋白,再搜索Uniprot数据库和用Proteome Discoverer软件分析,进一步进行生物信息学分析.结果:有腋窝淋巴结转移组中共筛选出差异蛋白119个,其中6个表达上调,113个表达下调.基因本体(gene ontology,GO)注释分析和功能聚类分析表明,这些差异蛋白质主要定位于细胞外区,与肿瘤的生物合成、细胞增殖、血管生成相关.Western boltting和qRT-PCR验证了K1C19(下调0.11倍)和PSME2(上调2.02倍)的表达.结论:TMT定量蛋白组学方法能有效筛选有腋窝淋巴结转移的和无腋窝淋巴结转移的乳腺癌患者血清中的差异蛋白.其中,K1C19和PSME2是值得进一步研究的乳腺癌淋巴结转移的候选血清标志物.

乙醛脱氢酶2基因多态性与长寿的相关性研究\老年大鼠心肌线粒体的蛋白质组学研究及差异蛋白的功能分析

男女新生儿脐带血血清蛋白质组的比较

为发现不同性别新生儿之间蛋白质表达谱的差异,利用胰蛋白酶对上述血清蛋白分别进行酶解,并通过反相高效液相色谱法(RP-HPLC)对肽段混合物进行了分离,进一步通过电喷射离子化串联质谱法(ESI-MS/MS)鉴定了分离的肽段.本研究中共鉴定出837种非冗余蛋白质,其中不同类型血清中共有的蛋白质有282种,另有239种和213种分别属于男性新生儿和女性新生儿特有蛋白质.对其中53种差异蛋白质进行了分析,初步探讨了它们在胎儿生长发育以及性别分化过程中的作用.

双向电泳质谱法研究女性肺腺癌转移淋巴结的蛋白表达

目的:分析肺腺癌转移淋巴结与正常淋巴结组织蛋白质表达差异.方法:运用蛋白质组技术,对肺腺癌转移淋巴结与正常淋巴结组织蛋白质进行分离和比较分析,并在蛋白质和mRNA水平进行进一步验证.结果:获得了背景清晰、分辨率和重复性较好的双向凝胶电泳图谱,比较分析显示与正常淋巴结蛋白质表达水平相比,肺腺癌转移淋巴结有23个蛋白点的表达量存在明显差异.其中新增蛋白点4个,缺失1个,14个蛋白点表达水平明显上调,4个蛋白点表达水平明显下调.共鉴定了11个肺癌转移相关蛋白,其中,候选蛋白膜联蛋白1(ANX1)、细胞骨架蛋白(CK18)、Rho-GDP解离抑制剂1(GDIR)、原肌球蛋白3(TPMF)、蛋白谷氨酰胺γ-谷氨酰转移酶(TGLC)和白介素18(IL-18)在肺腺癌转移淋巴结显著低表达,而候选蛋白核氯离子通道蛋白1(CLI1)、蛋白质二硫键异构酶(ER60)、肌酸激酶、硫氧还蛋白过氧化物酶1(PDX1)和热休克蛋白60(CH60)在肺腺癌转移淋巴结表达水平比正常淋巴结明显提高.结论:肺腺癌转移淋巴结与正常淋巴结蛋白质表达存在明显差异,这11种蛋白质可能与肺腺癌淋巴结转移机制有关.

卵巢癌组织的差异蛋白质研究

目的 分析卵巢癌患者癌组织、癌旁组织及正常卵巢黏膜组织双向凝胶电泳的蛋白质表达图谱,寻找差异表达的蛋白质.方法 采用固相pH梯度双向凝胶电泳分离卵巢癌患者配对癌组织、癌旁组织及正常卵巢黏膜组织的总蛋白,银染显色,PD Quest 2DE软件分析差异表达的蛋白质点;凝胶经银染显色后,Bio-Rad凝胶扫描仪扫描,Imagemaster图像软件分析,差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离-两级飞行时间串联质谱法进行鉴定.结果 获得了重复性较好的双向凝胶电泳银染图谱.3组胶的平均匹配率分别为:癌组织83.4%、癌旁组织81.2%、正常卵巢黏膜组织88.1%.斑点位置偏差等电聚焦方向上为(1.21±0.27)mm,SDS-PAGE方向上为(1.03±0.28)mm.差异分析共获得164个差异表达的蛋白质点;有差异性表达的8种蛋白质中有4种为结合珠蛋白的亚型.结论 双向凝胶电泳-质谱技术能分离卵巢癌组织的总蛋白,并获得重复性较好的结果;结合珠蛋白能为诊断卵巢癌提供诊断手段.

切割海马伞大鼠海马自然凝胶电泳差异蛋白条带诱导神经干细胞迁移的作用/非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法分析切割海马伞大鼠海马组织蛋白/人神经干细胞向多巴胺神经元的定向分化

人肺腺癌及癌旁组织的差异蛋白质组学分析

目的 通过分析人低分化腺癌、中分化腺癌及癌旁远端正常组织的差异蛋白,寻找与肺腺癌发病相关的蛋白.方法 利用双向凝胶电泳的方法分离肺腺癌及癌旁组织的蛋白质,通过图像扫描寻找差异蛋白点,进而应用基质辅助激光电离飞行时间质谱得到肽质量指纹图谱,对比数据库确定差异蛋白.结果人中分化腺癌及癌旁远端正常组织、低分化腺癌及癌旁远端正常组织的平均蛋白点数分别为1810±167、1704±53、2066±144、1549±33.选取差异2倍以上蛋白点进一步分析,发现与肺腺癌相关的蛋白质共14个.结论 双向凝胶电泳技术结合基质辅助激光电离飞行时间质谱可鉴定肺腺癌及癌旁远端正常组织的差异蛋白,为早期诊断肺癌,判断预后奠定基础.

人乳腺癌细胞株MCF-7及其紫杉醇耐药株中紫杉醇结合的差异蛋白质分析

目的 分析人乳腺癌细胞株MCF-7及其紫杉醇耐药株MCF-7/Taxol中的紫杉醇结合的差异蛋白质,探索抗肿瘤药物新靶点.方法 合成生物素化紫杉醇,HPLC-MS联用法检测合成产物.SRB法检测生物素化紫杉醇的生物活性,免疫磁珠偶联后与MCF-7及其MCF-7/Taxol的全细胞蛋白液反应,获得紫杉醇结合蛋白,SDS-PAGE电泳获得差异蛋白条带,LC-MS/MS分析,Western blot鉴定差异结合蛋白.结果 成功合成生物素化紫杉醇,生物素化紫杉醇的生物活性和紫杉醇相当.经过蛋白电泳分析,MCF-7/Taxol的紫杉醇结合蛋白较MCF-7多一差异条带,LC-MS/MS分析提示数个目标蛋白,经过Western blot验证差异条带中有Heat shock protein HSP 90、Dermcidin Precursor、Actinin.结论 成功获得了MCF-7和MCF-7/Taxol之间的紫杉醇细胞差异结合蛋白,对这些蛋白作用机制的的深入探索,可能为抗肿瘤药物的研究寻找到新的靶点蛋白,发现新的肿瘤耐药机制.

基于蛋白芯片技术探讨丁氏溃结灌肠液对结肠炎大鼠肠道组织差异蛋白表达的影响

目的 基于蛋白芯片技术探讨丁氏溃结灌肠液对结肠炎大鼠肠道组织相关靶点的影响,阐释丁氏溃结灌肠液改善肠道炎症反应及肠纤维化的可能机制.方法 大鼠随机分为阳性药组、模型组、正常组、丁氏溃结灌肠液组,5只/组.除正常组之外,其他3组均给予3.5％硫酸葡聚糖钠(dextran sulfate sodium, DSS)喂养,结肠炎造模成功后,阳性药组使用美沙拉秦灌肠,丁氏溃结灌肠液组使用丁氏溃结灌肠液灌肠,每天1次,连续4周,停药1 d后,取大鼠结肠黏膜组织,采用GSR-CAA-67抗体蛋白芯片技术检测各组大鼠肠道组织炎症反应及肠纤维化相关蛋白的变化,筛选出各组差异性表达的蛋白.结果 通过蛋白芯片检测,发现共有8种有意义的差异蛋白,其中模型组和空白组对照组对比筛选出的8种蛋白包括IFN-γ、促红细胞生成素(erythropoietin, EPO)、TIMP-2、TIM-1、 IL-6、TIMP-1、TNF-α、IL-22,差异均有统计学意义(P<0.05).另一方面,丁氏溃结灌肠液与美沙拉秦均对IL-6、TIMP-1有明显的抑制作用(P<0.05),丁氏溃结灌肠液对TNF-α、IL-22有抑制作用(P<0.05),美沙拉秦组则没有相同作用(P>0.05).结论 丁氏溃结灌肠液具有多靶点的作用,可能通过改善肠道炎症反应及肠纤维化达到治疗溃疡性结肠炎的目的.

应用SELDI-TOF-MS技术分析食管鳞癌手术前后血清蛋白的差异

目的 探讨食管癌手术前后血清蛋白质谱的变化.方法 应用SELDI-TOF-MS技术结合铜离子蛋白芯片获得38例术前食管癌和22例术后食管癌患者的血清蛋白质谱.将获得的蛋白质谱采用Ciphergen公司的Biomarker Wizard和Biomarker Pattem软件分析.结果 在捕获的33个差异蛋白中,有29个术后含量高于术前;以其中3个蛋白(质荷比分别为9368.63、5342.59、5254.43)组成了分类树模型.在学习模式下分组正确率达到100%,在测试模式下分组正确率分别为94.7%(36/38)和90.9%(20/22).结论 该分类树模型对于食管癌的诊断尤其食管癌术后复发的监测有一定的参考价值.

我国利什曼原虫伽师株有毒力和无毒力前鞭毛体定量蛋白质组学比较分析

目的 应用定量蛋白质组学方法比较我国利什曼原虫伽师株有毒力和无毒力前鞭毛体蛋白表达的差异.方法 将分离于我国新疆伽师县黑热病患者婴儿利什曼原虫JS5有毒力株前鞭毛体和无毒力株前鞭毛体经酶解后进行液相色谱串联质谱(Liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)的非标记(Label-free)定量分析,利用MaxQuant软件查库,进行Label-free非标定量(LFQ)分析;每个样品重复3次质谱分析,只有1次有LFQ值的蛋白舍弃.结果 本研究共鉴定蛋白3 994个,有毒力和无毒力株间差异蛋白为298个(差异倍数＞1.2或差异倍数＜0.83,P＜0.05),其中利什曼原虫有毒力株前鞭毛体特有表达蛋白15个,无毒力株前鞭毛体特有表达蛋白23个,二者间表达丰度有显著差异蛋白260个,其中有毒力前鞭毛体表达上调蛋白(高表达)78个,表达下调蛋白(低表达)182个.这些差异表达蛋白中已鉴定功能的蛋白分别涉及糖与脂质代谢、核酸代谢、压力反应、细胞骨架形成、细胞周期与增殖等生物功能.结论 利什曼原虫伽师株有毒力株和无毒力株前鞭毛体蛋白质组的表达存在差异,为筛选和鉴定与利什曼原虫感染相关关键分子奠定了基础.

不同乙肝病毒携带者血清蛋白差异分析

目的：对比转氨酶水平正常的乙肝病毒携带者（AsC）与乙肝患者的血清蛋白表达差异。方法各收集15例 AsC（对照组）与乙肝患者（实验组）血清，利用双向电泳技术分离2组的血清蛋白，并对其血清蛋白样品的双向电泳图谱进行比较。结果2组血清蛋白样品中共找到6个明显的差异点：其中实验组血清中表达量上调有4个点，表达量下调有1个点，新出现1个点。结论 AsC与乙肝患者的血清蛋白的双向电泳图谱有一些差异，这些差异点可能为乙肝患者的诊治提供新的靶点。

iTRAQ 技术检测鼻息肉和正常鼻黏膜组织间差异表达蛋白质

目的：通过分析鼻息肉蛋白质表达谱的变化探索鼻息肉的发病机制。方法采集正常成年人中鼻道鼻腔黏膜以及鼻息肉患者的息肉组织（各4例），用同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）技术分析标本中的蛋白表达谱，筛选差异表达蛋白质。结果共筛选出差异表达蛋白311个。上调蛋白88个，主要包括 CLC、PLEK HA7等，其中上调2倍以上的蛋白18个；下调蛋白223个，主要包括 S100A1等，其中下调50％以上的蛋白65个。结论鼻息肉组织蛋白表达谱与正常中鼻道鼻腔黏膜相比有较大差异，差异蛋白可能在鼻息肉的发生发展过程中发挥重要作用，其中 CLC 可能参与鼻黏膜的炎症及免疫反应，PLEK HA7与鼻腔黏膜损伤修复有关。

幽门螺杆菌对胃黏膜上皮细胞作用后的差异蛋白鉴定

目的:鉴定幽门螺杆菌(Hp)与宿主细胞(AGS)作用后的差异蛋白.方法:应用双向电泳分离TN2株与AGS细胞相互作用前后的蛋白,应用ImageMaster 2Dv3.1软件对蛋白图谱进行比较,对目的蛋白进行基质辅助激光解析及电离飞行时间质谱分析,应用Mascot软件进行蛋白搜库.结果:共监测到2个差异蛋白斑点,经质谱分析鉴定为2种蛋白,分别是热休克蛋白60和烷基过氧化还原酶.结论:对热休克蛋白60深入研究表明,热休克蛋白60可能进入AGS细胞或结合于AGS细胞膜上,相关幽门螺杆菌感染宿主细胞后续致病过程尚待进一步研究.

大黄蒽醌抗猴免疫缺陷病毒作用靶点与转导信号通路研究

目的:探索大黄蒽醌化合物抗猴免疫缺陷病毒可能的作用靶点与转导信号通路.方法:大黄蒽醌化合物干预48 h后,提取两组细胞的总蛋白,利用iTRAQ技术对表达差异的蛋白进行筛选后,使用GO数据库、KEGG数据库进行分析,确定差异蛋白涉及的生物学过程、细胞组件及分子功能,分析目标蛋白质参与的主要疾病和信号转导途径.结果:两组共筛选出235个差异蛋白,其中可能与艾滋病相关的差异蛋白18个,7个蛋白表达上调,11个蛋白表达下调.差异蛋白主要涉及免疫反应、白细胞介素-1的合成与应答、病毒感染等8种生物学过程;参与蛋白结合、DNA结合、RNA结合等11个方面的细胞功能;涉及胞外区、细胞质、质膜、细胞核等11个方面的细胞组件;并主要参与系统性红斑狼疮、金黄色葡萄球菌感染、吞噬作用等9条信号转导通路.结论:利用iTRAQ技术筛选、鉴定差异蛋白表达,诠释大黄蒽醌化合物抗猴免疫缺陷病毒可能的作用靶点与转导信号通路,为临床治疗提供新的研究思路.

基于iTRAQ技术的经开心散治疗抑郁大鼠海马组织中的差异蛋白分析

目的 分析抑郁大鼠经开心散治疗后差异表达的蛋白质,探讨开心散抗抑郁的作用机制.方法 实验分为对照组,抑郁模型组,开心散组,分别提取大鼠脑内海马组织蛋白,采用同位素标记的iTRAQ技术结合质谱定量蛋白质组方法,分析和鉴定三组之间差异表达的蛋白质,运用生物信息学分子差异表达的蛋白质功能.结果 统计得到抑郁模型组与对照组相比上调,开心散组与模型组相比下调的蛋白7个,抑郁模型组与对照组相比下调,开心散组与抑郁模型组相比上调的蛋白26个.结论 应用iTRAQ技术筛选出开心散治疗后抑郁大鼠海马中差异表达蛋白,为深入研究开心散抗抑郁机制奠定了基础.

琼玉膏对衰老大鼠作用的差异蛋白分析

目的 研究琼玉膏对衰老大鼠产生调节作用的相关蛋白质,在分子水平上探索琼玉膏的作用机制.方法 将42只6月龄SD雄性大鼠随机平均分为3组,分别标记为琼玉膏组、空白组和模型组.给药结束后,取三组大鼠下丘脑全蛋白,运用同位素相对标记与绝对定量(iTRAQ)技术,分离、分析、鉴定大鼠下丘脑差异蛋白质.结果 成功建立衰老大鼠模型,分析比较三组大鼠下丘脑蛋白质,发现14种显著差异蛋白质.结论 14种显著差异蛋白分别为,细胞色素C氧化酶多肽Ⅵc-2、中性神经酰胺酶、植烷酸-辅酶A羟化酶相互作用类蛋白、尼克酰胺磷酸核糖转移酶、尾锚定蛋白插入受体WRB、O-甘露糖β-1,4-N-乙酰葡糖胺基转移酶、信号转导子和转录激活子5b、脂酰CoA合成酶、特定微管伴侣蛋白E、3-磷酸肌醇依赖的蛋白激酶1、双特异性作用蛋白激酶7、RAS脒基释放蛋白2、SHC转运蛋白和泛酸酯激酶4,琼玉膏对这些蛋白均起到下调的作用,该研究为琼玉膏延缓衰老作用的靶蛋白研究奠定基础.