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紫草素对 AGS 细胞迁移的影响
目的：观察不同浓度紫草素在不同时间对 AGS 细胞形态及细胞迁移的影响，探索紫草素对 AGS 细胞迁移较佳抑制作用浓度及时间。方法将 AGS 细胞铺于6孔板并培养，待贴壁细胞密度达到70％~80％后，采用划痕法制造细胞迁移模型，分为对照组（DMSO）及实验组（紫草素以 DM-SO 助溶，分别稀释成浓度为2 mM、1.5 mM、1 mM、0.75 mM、0.5 mM 的液体）以1：1000加入孔中，并分别于0、6、12、24 h 观察细胞的形态及细胞的迁移情况，且拍照记录，计算细胞迁移速度及细胞迁移抑制率并进行各组之间的比较。结果高浓度紫草素使 AGS 细胞形态发生改变；紫草素能够抑制AGS 细胞迁移，且终浓度为2μM 时抑制作用明显。同一浓度不同作用时间其对 AGS 细胞迁移的抑制作用差异有统计学意义（P ﹤0.05）；同一时间不同浓度紫草素对 AGS 细胞迁移的抑制作用差异有统计学意义（P ﹤0.05）。结论高浓度紫草素能够使 AGS 细胞形态发生改变并凋亡；紫草素抑制了 AGS 细胞的迁移，且该抑制作用与浓度、时间相关，且在终浓度为2μM 作用于 AGS 细胞12 h 时，其对 AGS 细胞迁移的抑制作用明显。
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小檗碱吴茱萸碱联用对AGS细胞TNF-α和IL-8含量的影响
目的:观察小檗碱吴茱萸碱对胃癌细胞株(AGS)细胞增殖及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素(IL-8)含量的影响.方法:采用MTT(四甲基偶氮唑盐)法测定小檗碱、吴茱萸碱及两药联用对AGS细胞生长的影响；流式细胞技术检测小檗碱、吴茱萸碱及两药联用对AGS细胞细胞周期的影响；ELISA法测定小檗碱、吴茱萸碱及两药联用对AGS细胞TNF-α和IL-8含量的影响.结果:小檗碱15 μmol·L-1和吴茱萸碱45 μmol·L-1联用时对AGS细胞增殖的抑制作用弱于吴茱萸碱单用；小檗碱83 μmol· L-和吴茱萸碱14 μmol·L-1联用时对AGS细胞增殖的抑制作用稍优于两药单用,两药联用阻滞细胞周期于G2/M期的作用较两药单用无显著差异.进一步研究发现,小檗碱83μmol· L-1和吴茱萸碱1.4 μmol· L-1联用增加AGS细胞培养上清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的作用优于两药单用.小檗碱具有降低AGS细胞培养上清IL-8含量的趋势,而吴茱萸碱能够显著增强AGS细胞培养上清IL-8的含量(P＜0.01),两药联用能够显著降低AGS缅胞培养上清中IL-8的含量(P＜0.01).结论:不同剂量的小檗碱吴茱萸碱联用对AGS细胞增殖的影响不同.小檗碱能够抑制吴茱萸碱诱导的AGS细胞IL-8的表达上调.
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七方胃痛颗粒对H.pylori感染的AGS细胞TFF1表达及ERK/NF-κB信号通路的影响
目的:探讨七方胃痛颗粒对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylor1)感染的人胃腺癌AGS细胞三叶因子l(trefoil factor family 1,TFF1)的表达及其细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)/核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路的调控机制.方法:采用实时荧光定量PCR(RFQ-PCR)法检测TFF1 mRNA的表达,Western blot法检测TFF1、磷酸化ERK及NF-κB蛋白的表达水平；同时采用U0126抑制ERK信号通路后,观察AGS细胞TFF1蛋白表达的变化.结果:10％、20％、30％浓度七方胃痛颗粒药物血清作用H.pylori感染的AGS后,TFF1mRNA表达量为271±33、305±23、327±13,显著高于实验对照组的187±30,(P＜0.05)；TFF1、p-ERK及NF-κB蛋白表达量分别为271±22、358±31、428±34; 175±9、141±3、107±15; 116.0±2.6、83±2、53.0±6.6;与实验对组的210±13比较,差异具有统计学意义(均P＜0.05).加入U0126阻断ERK信号通路后,TFF1蛋白表达量为115±6,与实验对照组的210±13比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:七方胃痛颗粒可能通过抑制ERK/NF-κB信号通路参与调控H.pylori诱导的AGS细胞TFF1表达,促进上皮修复,是其防治H.pylori诱发胃癌可能的机制之一.
关键词： 七方胃痛颗粒 AGS细胞 幽门螺杆菌 三叶因子1 ERK/NF-κB信号通路 -
联合抑制环氧合酶-2与5-脂氧合酶对胃癌细胞增殖凋亡的影响
目的:通过单独及联合应用选择性COX-2抑制剂尼美舒利和5-LOX抑制剂AA861处理胃癌细胞系AGS,比较各实验组的增殖凋亡率,探讨联合抑制COX-2和5-LOX两条通路对胃癌细胞系AGS增殖凋亡的影响.方法:AGS细胞在含100 mL/L小牛血清+100kU/L青、链霉素的RPMI1640培养基中培养,取对数生长期细胞做为实验组.以相差显微镜观察药物处理前后的细胞形态改变;设立AA861(25,50,100 μmol/L)组,尼美舒利(50,100,200 μmol/L)组,及AA861联合尼美舒利处理组(50 μmol/L AA861+100 μmol/L尼美舒利),用四氮唑蓝(MTT)法在24,48,72 h测量细胞吸光度,以此检测单用及联用AA861与尼美舒利对细胞生长增殖的影响;实验通过脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)和吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色法检测细胞凋亡率,以DNA-LADDER法观察凋亡.结果:相差显微镜观察,药物处理组细胞与对照组相比,形态发生明显改变.MTT显示,除尼美舒利200μmol/L的24,48 h处理组及AA861 25 μmol/L的24 h处理组外,尼美舒利和AA861基本呈时间、剂量依赖性抑制AGS细胞增殖.TUNEL染色法表明,尼美舒利或AA861处理组的细胞凋亡率随着剂量的增加而升高.药物处理48 h后,MTT法表明,细胞增殖在AA861组和尼美舒利组与两药联用组间相比差异显著(0.240±0.002 vs 0.207±0.001,P＜0.01;0.211±0.002 vs 0.207±0.001,P＜0.05);TUNEL染色法表明,单药组与两药联用组细胞凋亡率相比差异明显(AA861组:1 8.67%±0.03%,尼美舒利组:20.94%±0.48%vs两药联用组:23.76%±0.92%,P＜0.01);AO/EB染色法也同时表明,细胞凋亡单药组与两药联用组相比差异明显(AA861组:18.17%±0.28%、尼美舒利组:19.35%±0.74% vs两药联用组:23.78%±0.04%,P＜0.01).DNA琼脂糖凝胶电泳法显示,两药联合处理AGS细胞组与单药处理组比较,癌细胞增殖被抑制,凋亡明显增加.结论:COX-2抑制剂尼美舒利和5-LOX抑制剂AA861对胃癌AGS细胞的增殖抑制以及促凋亡作用基本呈时间浓度依赖性.联用尼美舒利和AA861抑制COX-2与5-LOX两条通路,与单独抑制其中一条通路比较,能更有效抑制胃癌细胞增殖,促进凋亡.
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siRNA沉默USP22基因对胃癌胞增殖的抑制作用
目的:探讨小干扰RNA(siRNA)沉默泛素特异性肽酶22(ubiquitin specific peptidase 22,USP22)对胃癌细胞增殖的影响.方法:针对USP22基因设计3条siRNA及阴性siRNA,用脂质体Lipofectamine 2000转染胃癌AGS细胞,通过实时定量PCR和Western blot检测转染后AGS细胞USP22基因中mRNA和蛋白表达水平的变化情况,流式细胞术检测细胞周期分布变化情况,CCK8法检测细胞增殖率及抑制率.结果:转染48 h后,3条siRNA均能显著抑制USP22 mRNA和蛋白的表达.其中,以转染USP22 siRNA3后效果明显,mRNA和蛋白表达分别下降80.47％±2.99％和79.40％±3.58％.细胞增殖明显受到抑制,USP22 siR-NA3组细胞增殖抑制率为27.33％±3.49％.细胞周期中G0/G1期细胞增多,S期细胞减少.结论:采用RNA干扰技术能够有效地沉默USP22基因的表达,并显著抑制胃癌细胞的增殖.
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IL-17在幽门螺杆菌不同亚型菌株感染AGS细胞中的表达
目的：探讨人白介素-17(IL-17)在幽门螺杆菌(HP)不同亚型菌株感染AGS细胞中的表达情况，并探讨可能的作用机制。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)法检测IL-17的表达，并分析其与HP不同亚型间的关系。结果HP I型与II型分别感染AGS细胞24 h、48 h后较空白对照组差异具有统计学意义(P<0.05)， HP I型与II型感染AGS细胞24 h后比较差异具有统计学意义(P<0.05)， HP I型与II型感染AGS细胞48 h后比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论HP不同亚型均可诱导IL-17的表达，且HP I型更易诱导IL-17的表达。
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番荔枝内酯体外抑制人胃癌细胞活性研究
目的 探究番荔枝内酯对人胃癌细胞体外活性的影响.方法 分别采用MTT实验、黏附实验和划痕实验考察番荔枝内酯对4种人胃癌细胞AGS、MKN45、BGC823和SGC7901生长活性、黏附能力和迁移能力的影响.结果 番荔枝内酯抑制人胃癌细胞AGS、MKN45、BGC823和SGC7901的生长并呈剂量依赖性,其IC50值分别为5.32、6.25、5.46、4.43 μg/mL;抑制人胃癌细胞黏附能力并呈剂量依赖性;抑制人胃癌细胞的迁移能力并呈剂量依赖性.结论 番荔枝内酯体外可以有效抑制人胃癌细胞的活性,有望被开发成治疗胃癌的候选药物.
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miR-26a下调COX-2的表达抑制胃癌AGS细胞增殖和侵袭
目的 探讨miR-26a在胃癌组织和胃癌AGS细胞中表达量的改变及其对胃癌AGS细胞增殖和侵袭的影响.方法 采用Real-timePCR法检测18例患者胃癌组织及对应的癌旁组织中miR-26a的表达.胃癌AGS细胞分别转染miR-NC和miR-26a,采用Western blot法检测转染前后细胞中COX-2的表达水平,同时采用CCK-8和克隆形成实验检测转染后AGS细胞的增殖和侵袭情况.结果 miR-26a在胃癌组织中的表达明显低于癌旁组织(P＜0.01);COX-2在乳腺癌组织和细胞中的表达明显高于癌旁组织(P＜0.01).转染miR-26a后,胃癌AGS细胞内COX-2的表达量显著下调.CCK-8和克隆形成实验结果显示,过表达miR-26a能明显抑制胃癌AGS细胞的增殖和侵袭(P＜0.01).结论 miR-26a抑制胃癌AGS细胞的增殖和侵袭可能与下调COX-2的表达相关.
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microRNA-31对胃癌细胞系AGS迁移的影响
目的 探讨胃癌组织中microRNA(miR)-31的表达情况及miR-31对胃癌细胞系AGS迁移的影响.方法 收集27例胃癌患者的胃癌组织和对应的正常组织,采用实时定量(qRT)-PCR检测miR-31的表达水平.筛选胃癌细胞系AGS细胞作为研究载体,通过转染miR-31mimics(实验组)使胃癌细胞系AGS细胞内miR-31的表达升高.采用划痕愈合实验和Transwell小室实验观察miR-31对胃癌AGS细胞迁移能力的影响.结果 胃癌组织miR-31的表达明显低于对应的正常组织(P<0.05);与对照组相比,实验组miR-31的表达水平升高(P<0.05).划痕实验结果显示实验组迁移距离明显小于对照组(P<0.05),Transwell小室实验结果显示转染miR-31mimics后,胃癌AGS细胞的迁移能力下降.结论 miR-31在胃癌组织中呈低表达,过表达的miR-31能够抑制AGS细胞的迁移.
关键词： microRNA-31 AGS细胞 迁移 胃癌 -
胃祺饮全方挥发油对AGS细胞增殖活性的影响
目的:胃祺饮是对慢性萎缩性胃炎具有良好临床疗效的中药复方.本实验研究胃祺饮挥发油的主要成分及其对AGS细胞增殖的抑制作用.方法:采用气相色谱-质谱联用法测定胃祺饮全方挥发油的化学成分,采用四甲基偶氮唑蓝法测定细胞活性,流式细胞分析检测细胞周期分布,使用Hoechst 33342和碘化丙啶双染法测定细胞凋亡和坏死.结果:化学分析显示胃祺饮挥发油的主要成分是冰片烯和3-正丁基苯酞.当归的有效成分藁本内酯在胃祺饮挥发油中没有检测到.胃祺饮挥发油能呈剂量和时间依赖性地抑制胃癌细胞的增殖,阻滞细胞周期于G2/M期,并能够诱导细胞的凋亡和坏死.结论:胃祺饮挥发油含有多种对于慢性萎缩性胃炎和功能性消化不良具有良好疗效的化学成分,具有显著的抗AGS细胞增殖的作用,其作用通过细胞周期阻滞和诱导细胞凋亡实现.因此在胃祺饮的煎煮过程中,应尽量避免挥发油的损失.
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人胃腺癌细胞发生未折叠蛋白质反应时相关基因和蛋白质表达的研究
目的:探讨胃癌AGS细胞在无营养培养条件下发生内质网应激时的未折叠蛋白质反应(UPR)相关基因和蛋白质的表达.方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白印迹,检测胃癌AGS细胞在无营养条件培养下发生UPR时相关基因和蛋白质的表达.结果:实时荧光聚合酶链反应检测胃癌AGS细胞在无营养条件下培养1 h、3 h、24 h、48 h的情况,发现其中ATF4、CHOP的mRNA表达均明显高于正常培养的胃癌AGS细胞(对照)(P<0.05);而培养1 h、3 h、24 h时的ATF6、Bip、PERK的mRNA表达量明显高于对照(P<0.05);培养3 h、24 h时胃癌AGS细胞中的IRE-1 mRNA表达量明显高于对照(P<0.05).并发现无营养培养下,胃癌AGS细胞的CHOP、Bip蛋白随着时间的延长,表达量逐渐增高:而PERK的蛋白表达主要在1 h、3 h时增高明显.结论:内质网应激不利于细胞生存,但又激活了UPR,当内质网应激作用时间过长或强度过重时,则会诱导凋亡的发生.
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不同疾病来源的幽门螺杆菌菌株对AGS细胞动力学的影响
背景:体内外研究发现,幽门螺杆菌(H.pylori)感染可促进胃黏膜上皮细胞增殖或触发细胞凋亡,从而引起细胞动力学改变,而菌株的差异可导致不同的结果.目的:通过体外实验观察不同疾病来源的H.pylori菌株对人胃癌细胞株AGS的细胞活力、细胞凋亡和细胞周期的影响,以确定不同疾病来源H.pylori菌株的细胞毒性是否存在差异.方法:采用聚合酶链反应(PCR)鉴定分离自胃癌和胃炎患者的H.pylori菌株的毒力基因和相关亚型.将AGS细胞分别与H.pylori菌株共培养,采用四唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期.结果:cagA、vacA、iceA和babA2基因和相关亚型在胃癌和胃炎H.pylori菌株中呈均匀分布.不同菌株抑制AGS细胞活力和促进细胞凋亡的能力虽有强弱差别,但胃癌菌株与胃炎菌株之间不存在整体上的差别.多数H.pylori菌株能抑制AGS细胞周期的G1/S期转换.结论:不同H.pylori菌株对共培养的AGS细胞动力学的影响存在差异,但胃癌菌株与胃炎菌株的细胞毒性无整体上的差别.
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幽门螺杆菌对AGS细胞DNA错配修复基因表达的影响
目的体外观察幽门螺杆菌对AGS细胞DNA错配修复(mismatch repair,MMR)基因蛋白和mRNA表达的影响,以确定不同疾病来源幽门螺杆菌对MMR基因表达的影响是否存在差异.方法 AGS细胞分别与5株分离自胃癌和5株分离自胃炎患者的幽门螺杆菌共培养.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法检测hMSH2和hMLH1基因mRNA和蛋白表达,同时以肠道致病性大肠杆菌作为细菌对照.结果胃炎菌株和大肠杆菌基本不影响hMLH1和hMSH2基因mRNA和蛋白表达,而所有胃癌菌株都能下调hMLH1和hMSH2基因mRNA和蛋白表达.结论胃癌菌株与胃炎菌株对胃癌细胞MMR的影响存在差异,提示部分幽门螺杆菌菌株可能通过损害细胞MMR功能促进胃黏膜上皮细胞内DNA突变累积,增加幽门螺杆菌长期感染时胃癌发生的危险性.
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幽门螺杆菌对胃腺癌AGS细胞动力学的影响及其机制探讨
正常胃黏膜的结构和功能依赖于胃上皮细胞动力学的稳定.幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是胃黏膜组织重要的致病菌,被认为与胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤等密切相关,并被世界卫生组织列为Ⅰ类致癌原[1],但其致病机制仍未明确.因此,研究Hp对人胃上皮细胞生长动力学的影响具有重要意义,能够为明确Hp的致病机制提供更多的证据.
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KLK7 siRNA对胃癌AGS细胞的抑制作用
目的:体外合成4条靶向人组织激肽释放酶7(kallikrein-related peptidase 7,KLK7)基因的片段,并筛选有效siRNA片段,观察沉默KLK7表达对胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响.方法:设计4条靶向KLK7的siRNA片段(KLK7-siRNA-416、KLK7-siRNA-596、KLK7-siRNA-474、KLK7-siRNA-795),瞬时转染AGS细胞,qRT-PCR检测各干扰组KLK7 mRNA表达的变化,Western blotting检测AGS细胞中HK7蛋白(由KLK7基因编码)的表达,MTT法检测转染后AGS细胞的增殖,流式细胞术检测AGS细胞的细胞周期及凋亡.结果:4条KLK7-siRNA片段中以KLK7-siRNA-416的干扰效率高,KLK7-siRNA-416组KLK7 mRNA表达率显著低于NC组[(0.32±0.049)％vs(0.93 ±0.071)％,P＜0.01],KLK7-siRNA-416组转染48 h后AGS细胞HK7蛋白的表达水平显著降低[(1.18 ±0.198) vs(0.52±0.096),P＜0.01].KLK7-siRNA-416转染72 h后对AGS细胞增殖的抑制率达(37.70±0.12)％(P＜0.05),该转染阻滞AGS细胞于G0/G1期但不影响AGS细胞的凋亡.结论:KLK7-siRNA沉默KLK7的表达可抑制AGS细胞的增殖,可阻滞细胞于G0/G1期,对细胞凋亡的作用不明显.
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FMN2在胃腺癌组织中的表达及其临床意义
目的:检测成蛋白2(formin-2,FMN2)在胃腺癌组织中的表达水平,探讨FMN2的表达与胃癌患者临床特征之间的关系及其对胃腺癌AGS细胞增殖的影响.方法:收集2015年9月至2017年9月空军军医大学第一附属医院消化病医院胃肠外科手术切除的胃腺癌组织及相应的癌旁组织标本84例.采用免疫组织化学染色和肿瘤数据库检索检测分析胃腺癌组织中FMN2的表达水平,并探讨FMN2蛋白表达与胃腺癌患者临床病理特征之间的相关性;MTT法检测FMN2对胃腺癌AGS细胞增殖活性的影响,Western blotting法检测FMN2对胃腺癌AGS细胞凋亡蛋白Caspase-3表达的影响.结果:胃腺癌组织中FMN2表达水平明显低于癌旁组织(P＜0.05或P＜0.05),其低表达与胃腺癌患者的TNM分期及肿瘤分化程度相关(均P＜0.05);与AGS细胞对照比较,AGS/FMN2稳转株的增殖率明显降低、凋亡相关蛋白Caspase-3表达明显增加(均P＜0.05).结论:FMN2在胃腺癌组织中表达明显下调,且与患者的肿瘤分化程度和TNM分期相关;过表达FMN2的胃腺癌细胞其增殖率明显降低;FMN2是胃癌预后的独立危险因素,可为胃腺癌的治疗提供新的思路.
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土槿乙酸诱导人胃癌AGS细胞凋亡机制的研究
目的:研究土槿乙酸诱导人胃癌AGS细胞凋亡的作用机制.方法:采用Hoechst33342/PI核荧光双染色法, DNA片段化分析技术检测细胞凋亡的变化;FCM分析细胞周期的变化; Western 印迹法和RT-PCR法检测与细胞凋亡和细胞周期相关的蛋白及mRNA的表达.结果:土槿乙酸明显诱导人胃癌AGS细胞的凋亡,细胞周期被阻滞在G2/M期;10 μmol/L土槿乙酸作用AGS细胞12 h后p53表达增加,在36 h时达到峰值,24 h后可见p21WAF1/CIP1表达明显增加.土槿乙酸作用于AGS细胞后,增加了Fas/APO-1蛋白表达和促凋亡蛋白Bax mRNA的表达,降低了抑凋亡蛋白Bcl-2 mRNA表达,提高了caspase-3活性. 结论:土槿乙酸可通过p53激活Bcl-2介导的线粒体途径和Fas/APO-1介导的死亡受体途径诱导人胃癌AGS细胞凋亡.
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吡咯喹啉醌对γ射线照射后AGS细胞抗氧化力的影响
目的: 探讨吡咯喹啉醌(pyrroloquinoline quinone,PQQ)对60Coγ射线照射细胞清除自由基能力.方法: 培养AGS细胞至对数期,实验分为6组:正常培养未照射组、单纯照射组、PQQ培养12 h未照射组、PQQ培养4 h未照射组、PQQ培养12 h后照射组、PQQ培养4 h后照射组.60Coγ照射,剂量8Gy.照射后6,12,24 h测定细胞总抗氧化力(T-AOC),SOD,MDA含量.结果: 与正常未照组比较,照射后6,12,24 h单纯照射组SOD,T-AOC显著降低(P<0.05),MDA显著升高(P<0.01);与单纯照射组比较:PQQ培养的照射组SOD,T-AOC显著升高(P<0.01),除照射后6 h外MDA显著降低(P<0.05).结论: PQQ可通过增强细胞抗氧化能力,降低氧化水平,从而对辐射细胞起保护作用.
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新疆家蚕抗菌肽诱导人胃癌细胞AGS凋亡的研究
目的：探讨新疆家蚕抗菌肽( cecropinXJ)是否通过诱导人胃癌细胞 AGS凋亡产生抗肿瘤的作用。方法选择0．01~1000 mg·L-1浓度范围内的 cecropinXJ与人胃癌细胞AGS和人正常胃上皮细胞GES-1共培养24 h,采用MTT法检测cecropinXJ对AGS细胞和GES-1细胞增殖的影响；透射电镜观察细胞超微结构变化；Hoechst染色观察细胞凋亡情况；流式细胞术检测细胞内活性氧和线粒体膜电位的变化；实时荧光定量PCR ( qRT-PCR)和Western blot检测Bax、Bcl-2、caspase-3以及细胞色素C mRNA和蛋白水平的表达变化。结果 CecropinXJ在体外能明显抑制胃癌AGS细胞的增殖(P<0．05),并具有浓度依赖性,IC50值为61．19 mg· L-1,但对GES-1细胞无明显的抑制增殖作用。经cecropinXJ处理24 h后,AGS细胞核固缩,呈现典型细胞凋亡特征,同时细胞内活性氧增加,线粒体膜电位下降。 qRT-PCR 和Western blot结果表明,cecropinXJ 能够引起Bcl-2表达下调, Bax表达上调,促进细胞色素 C 的释放并活化 caspase-3。CecropinXJ促进caspase-3活性呈剂量依赖,经 caspase-3和caspase-9特异性抑制剂处理后可降低 cecropinXJ 介导的AGS细胞死亡率。结论 CecropinXJ 可通过下调 Bcl-2表达,上调Bax表达和活化caspase-3诱导AGS细胞凋亡,是其抗肿瘤机制之一。
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雷酚萜甲醚抑制人胃癌细胞AGS增殖及诱导凋亡作用研究
目的：研究雷酚萜甲醚( TME )在体外对人胃癌AGS细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法采用 MTT法观察TME对人胃癌AGS细胞、正常人胃黏膜上皮细胞GES-1的增殖抑制作用；克隆形成实验观察细胞克隆的形成；光镜下及AO / EB染色观察细胞形态；流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期；JC-1染色和DCFH-DA荧光探针分别检测TME对AGS细胞线粒体膜电位的改变和活性氧产生的影响；West-ern blot检测凋亡蛋白caspase-3、caspase-8和Bcl-2、Bax表达情况,以及 caspase 广谱抑制剂 z-VAD-fmk 对 caspase-3、caspase-8蛋白表达的影响。结果 TME可明显抑制人胃癌AGS细胞的增殖,并诱导其凋亡,作用48 h时IC50为23.85μmol·L-1,而对正常人胃黏膜上皮细胞GES-1的抑制作用明显低于AGS。 TME能够抑制AGS细胞克隆形成,并使细胞出现明显的凋亡形态改变。 Annexin V-FITC / PI双染实验表明,随TME剂量的增加,细胞凋亡百分数也增加。 JC-1和DCFH-DA结果显示, TME使细胞内线粒体膜电位降低、细胞内活性氧水平增加。 Western blot结果显示, TME增加了Bax / Bcl-2的比例,激活caspase-8和caspase-3,并且加入z-VAD-fmk后, caspase-3、caspase-8蛋白的表达降低。 TME可使AGS细胞周期阻滞于G0/G1期。结论 TME能抑制人胃癌AGS细胞增殖和诱导凋亡,抗肿瘤作用机制与激活凋亡通路、影响细胞周期及Bcl-2蛋白家族相关。
