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土槿乙酸诱导前列腺癌DU-145细胞周期阻滞的机制研究
目的:探讨土槿乙酸(pseudolaric acid B,PLAB)对人前列腺癌细胞株DU-145细胞增殖和细胞周期的影响.方法:MTT法检测PLAB对细胞生长抑制作用；Hoechst 33342荧光染色分析细胞死亡特征；流式细胞术检测细胞周期；Real-time PCR和Western blot检测周期相关基因cyclin B1,CDK1和cyclin D1的表达变化.结果:PLAB明显抑制DU-145细胞生长,且抑制作用呈浓度-作用时间依赖性(P＜0.05),其24,48,72 h的IC50分别为4.53,2.39,2.08 μmol·L-1.5μmol·L-1PLAB处理细胞24 h,细胞出现核染色质凝集、凋亡小体等典型凋亡特征,随着PLAB浓度升高,G2/M期细胞比例明显增大并表现出时间依赖性(P＜0.05),同时伴有cyclin B1和CDK1呈高表达状态(P＜0.05),cyclin D1呈低表达状态(P＜0.05).结论:PLAB可抑制DU-145细胞生长,引起细胞G2/M期阻滞,伴随cyclin B1和CDK1呈高表达状态,可能与其调控周期相关蛋白降解有关.
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土槿乙酸抑制体外人胃癌细胞的生长
目的 探讨土槿乙酸(PLAB)对人胃癌细胞生长的影响及机制.方法 RT-PCR法检测MGC803细胞中PPARγ mRNA的表达;MTT法检测细胞的生长;Hoechst333342/PI双染色法和DNA凝胶电泳检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期.结果 PLAB(0.1～10 μmol/L)作用MGC803细胞72 h显著抑制细胞增殖.PLAB(10 μmol/L)作用后,G2期细胞随着作用时间的延长而增加,呈明显的G2期阻滞.作用72 h后,细胞出现核染色质凝集,DNA片断化等凋亡特征.在MGC803细胞中过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)表达较弱,经PLAB(10 μmol/L)作用48 h表达水平显著增加(P<0.01).结论 PLAB能在体外明显诱导MGC803细胞G2期阻滞和凋亡,该作用可能与PPARγ激活有关.
关键词： 过氧化物酶增殖物激活受体γ 胃癌 细胞周期 凋亡 土槿乙酸 -
关键词：
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土槿乙酸联合9-顺式维甲酸促进白血病细胞凋亡的机制研究
目的 观察过氧化物酶体激活物活化受体γ(PPARγ)的配体土槿乙酸(PLAB)联合维甲类X受体α(RXRα)的配体9-顺式维甲酸(9-cis RA)促进白血病细胞凋亡的作用,探讨其作用机制.方法 应用透射电子显微镜、琼脂精凝胶电泳分析HL-60细胞凋亡,RT-PCR检测HL-60细胞Cyclin D1和CDK4 mRNA表达.结果 HL-60细胞经配体联合作用后,电镜下可见明显细胞凋亡的形态学变化,琼脂糖凝胶电泳出现DNA Ladder,Cyc-lin D1及CDK4 mRNA的表达均降低,且联合用药组下降程度明显较单独作用组大(P<0.05).结论 PLAB联合9-cis RA抑制HL-60细胞生长,其机制与凋亡诱导效应相关.
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土槿乙酸体外诱导K562细胞凋亡的研究
目的研究土槿乙酸体外对人白血病细胞(K562)凋亡的诱导作用,探讨其抗癌作用机制.方法以不同浓度土槿乙酸分别处理K562细胞,用琼脂糖凝胶电泳、荧光显微镜和倒置光显微镜、MTT法观察K562细胞DNA带型、形态和抑制率的变化.结果1×10-5mol/L土槿乙酸作用30 h能有效诱导K562细胞凋亡,凋亡细胞有典型的形态学改变及DNA梯形带形成.MTT法测定不同浓度土槿乙酸明显抑制K562细胞系的生长,其IC50值为2×10-6mol/L.结论土槿乙酸能成功诱导K562细胞凋亡,此种诱导作用呈药物作用浓度及时间依赖性.
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土槿乙酸对人黑素瘤细胞增殖抑制作用研究
目的研究土槿乙酸(PAB)对人黑素瘤细胞(LiBr)生长的抑制效应,并探讨其作用机制.方法用不同浓度的PAB加入体外培养LiBr细胞中,观察加药后细胞生长数量及其形态的变化;用MTT法检测PAB的细胞毒作用;用Hoechest 33342和PI双荧光染色法检测细胞凋亡.用免疫细胞化学方法,观察LiBr细胞基因表达的变化.结果PAB明显抑制LiBr细胞生长;IC50值为2.5×10-5mol/L;其抑制率与药物浓度呈剂量依赖关系;凋亡细胞的比例与药物浓度及作用时间呈正相关.免疫细胞化学检测显示p21wAF1表达增强.结论PAB能有效抑制LiBr细胞的增殖.
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土槿乙酸抗白色念珠菌的敏感性及作用机理的电镜研究
目的:测定土槿乙酸(pseudolaric acid B,PLAB)对白色念珠菌(caudida albicans)标准菌株C1a的低抑菌浓度(MIC),并在透射电镜下观察经PLAB作用后,白色念珠菌超微结构的改变,探讨其作用机制,从而为抗白色念珠菌的中药开发提供理论依据.方法:用液体稀释法检测PLAB对白色念珠菌C1a的MIC,透射电镜下观察经不同浓度PLAB作用前后白色念珠菌C1a超微结构的改变,两性霉素B(AmB)为阳性对照药物.结果:PLAB对白色念珠菌C1a的MIC为32 μg/ml.透射电镜观察发现,AmB处理组白色念珠菌C1a形态基本正常,但细胞壁结构疏松,有裂口,细胞膜缺失较严重.胞浆内容物漏出.经PLAB处理组白色念珠菌C1a细胞变形,结构模糊,细胞壁疏松,有裂口,细胞膜连续性破坏,进而破碎成碎片互相融合,细胞器肿胀乃至坏死溶解,甚至胞浆内容物全部漏出呈"空壳"状.结论:PLAB有抗白色念珠菌作用.可能通过破坏白色念珠菌的细胞壁、细胞膜、细胞核的结构而达到抗真菌作用.
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土槿乙酸的氢化还原及活性中心的初步探讨
目的:确定土槿乙酸的活性中心.方法:经钯碳催化氢化还原,用MTT法筛选活性.结果:经还原得到了浅黄色的7,8,13,14,15,16-六氢化土槿乙酸,溶点124～125℃,产率98%.对KB瘤株的抑制率IC50＞10-4mol/L.结论:土槿乙酸的共轭双键和双键是其抗肿瘤作用的活性基团.
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土槿乙酸衍生物的合成及其抗肿瘤活性
目的:研究土槿乙酸抗肿瘤作用的构效关系.方法:以土槿乙酸为原料,合成8个土槿乙酸衍生物,其结构经1H-NMR,MS证实.经MTT法筛选了衍生物的抗肿瘤活性.结果:8个化合物均为新化合物,除Ⅱc所有化合物均具有抗肿瘤活性,其中Ⅱf,Ⅱg的抗肿瘤活性显著高于土槿乙酸.结论:某些土槿乙酸酯和酰胺可提高抗肿瘤活性.
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土槿乙酸对人HT1080细胞系增殖抑制的体外研究
目的:研究土槿乙酸(PAB)对人成纤维肉瘤(HT1080)细胞系生长的抑制效应,并探讨其作用机制.方法:用不同浓度的PAB加入体外培养HT1080细胞中,观察加药后细胞生长数量及其形态的变化;用MTT法检测PAB的细胞毒作用;用Hoechest 33342和PI双荧光染色法检测细胞凋亡.结果:PAB明显抑制HT1080细胞生长,IC 50值为5μmol/L,其抑制率与药物浓度呈剂量依赖关系,凋亡细胞的比例与药物浓度及作用时间呈正相关.结论:PAB能有效抑制HT1080细胞的增殖.
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土槿皮的研究进展
土槿皮,又名土荆皮、金钱松、水松皮、荆树皮.来源于松科植物金钱松pseudolarix amabilis(Nelson)Regd.[p.kaempferi Gord]的根皮和近根树皮.早见于清代赵学敏所著<本草纲目拾遗>,性辛、温、有毒、止痒杀虫,用于治疗癣症.经研究发现,其含有二萜类、三萜类、三萜内酯及甾醇类等成份.现代药理实验表明,其具有抗真菌、抗肿瘤、抗生育、使胆囊自截等作用.本文综述了土槿皮的化学成分和药理作用.
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土槿乙酸C-18醇酯衍生物的合成及其体外免疫抑制活性研究
目的:将土瑾乙酸C-18位进行结构改造,筛选出具有高效、低毒、水溶性好等优点的新型免疫抑制化合物.方法:将C-18位还原为醇羟基,通过缩合酰化反应引入苯环、呋喃环、吡啶环羧酸,得到土槿乙酸C-18醇酯衍生物.经MTT法对小鼠T、B淋巴细胞的免疫抑制活性和对小鼠正常脾细胞毒性体外细胞实验筛选.结果:合成得到10个未见文献报道的土瑾乙酸C-18醇酯衍生物B1-B10,所合成的目标化合物均经1H-NMR,13C-NMR,HR-ESI进行结构确定,并测定了其体外免疫抑制活性,结果显示其中衍生物B2、B6、B7对T淋巴细胞增殖抑制活性强于土槿乙酸,衍生物B6、B7对B淋巴细胞抑制活性明显强于土槿乙酸.尤其是大多数化合物对正常细胞作用很弱,远低于阳性对照药,呈现高效低毒特性.结论:土槿乙酸C-18醇酯衍生物,引入呋喃环,抑制T、B淋巴细胞增殖活性明显增加,引入具有共轭体系的呋喃环时活性更佳,并且毒性降低.
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土槿乙酸衍生物抗真菌活性研究
[目的]对14种土槿乙酸衍生物进行体外抗真菌试验,测定其低抑菌浓度(MIC80)值.[方法]采用微量液基稀释法进行药敏试验.[结果]除衍生物PB-9外,其余13种衍生物抗真菌活性均优于或相当于土槿乙酸.衍生物PB-3抗真菌作用强,对5株真菌的MIC80在8～64 μg/ml之间,其对絮状表皮癣菌抑制作用与二性霉素B相同.[结论]某些土槿乙酸衍生物具有更强的抗真菌活性,有进一步开发价值.
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土槿乙酸对LPS诱导的RAW264.7源性巨噬细胞表型偏移的影响
[目的]观察中药有效成分土槿乙酸(pseudolaric acid B,PB)对脂多糖(lipopolysaccharudes,LPS)诱导的RAW264.7源性巨噬细胞表型偏移的影响,初步探讨其可能的作用机制.[方法]LPS诱导小鼠RAW264.7源性巨噬细胞建立体外细胞模型,实时定量PCR法检测PB处理前后RAW264.7源性巨噬细胞表型偏移的变化,划痕实验和流式细胞术分别检测细胞迁移能力及细胞周期.[结果]PB能够降低LPS诱导的RAW264.7源性巨噬细胞M1表型标志物IL-1β、iNOS、TNF-α的mRNA表达水平,提高M2表型标志物Arg1、Mrc1的mRNA表达水平,使其细胞迁移能力降低、细胞阻滞在G0和G2期.[结论]PB可抑制LPS诱导的RAW264.7源性巨噬细胞向M1型偏移,对巨噬细胞中介的相关疾病可能具有潜在的免疫调节作用.
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土槿乙酸对人肝癌细胞中血管内皮生长因子表达的影响
目的：探讨土槿乙酸（PAB）对人肝癌细胞BEL-7402中血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法以0（对照组）、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0μmol/L PAB处理人肝癌细胞BEL-7402，培养6 h，0.4%台盼蓝染色，在显微镜下观察并计算细胞活率。采用WST-8法检测细胞增殖，RT-PCR法检测人肝癌细胞BEL-7402中VEGF mRNA表达， Western Blot检测VEGF蛋白表达。结果不同剂量PAB处理的人肝癌细胞BEL-7402的细胞增殖率与对照组比较差异无统计学意义。随着PAB浓度的增加，VEGF mRNA表达与对照组（2.53±0.07）相比分别降低至1.90±0.02、1.31±0.03、0.86±0.04、0.60±0.03、0.34±0.02，差异有统计学意义（P＜0.01），VEGF蛋白表达与对照组（3.06±0.15）相比分别降低至2.60±0.09、2.42±0.07、1.85±0.05、0.92±0.05、0.60±0.04，差异有统计学意义（P＜0.01）。结论 PAB可抑制人肝癌细胞BEL-7402中VEGF mRNA和蛋白的表达。
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土槿乙酸诱导人胃癌AGS细胞凋亡机制的研究
目的:研究土槿乙酸诱导人胃癌AGS细胞凋亡的作用机制.方法:采用Hoechst33342/PI核荧光双染色法, DNA片段化分析技术检测细胞凋亡的变化;FCM分析细胞周期的变化; Western 印迹法和RT-PCR法检测与细胞凋亡和细胞周期相关的蛋白及mRNA的表达.结果:土槿乙酸明显诱导人胃癌AGS细胞的凋亡,细胞周期被阻滞在G2/M期;10 μmol/L土槿乙酸作用AGS细胞12 h后p53表达增加,在36 h时达到峰值,24 h后可见p21WAF1/CIP1表达明显增加.土槿乙酸作用于AGS细胞后,增加了Fas/APO-1蛋白表达和促凋亡蛋白Bax mRNA的表达,降低了抑凋亡蛋白Bcl-2 mRNA表达,提高了caspase-3活性. 结论:土槿乙酸可通过p53激活Bcl-2介导的线粒体途径和Fas/APO-1介导的死亡受体途径诱导人胃癌AGS细胞凋亡.
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土槿乙酸抑制接触性超敏反应的药效学研究及机制探讨
目的：观察中药土槿皮主要活性成分土槿乙酸(pseudolaric acid B,PB)免疫调节作用的药效学,初步探究其可能的分子机制。方法以二硝基氟苯(2,4-dinitrofluoro-benzene,DNFB)诱导小鼠接触性超敏反应( contact hypersen-sitivity,CHS)模型,口服不同剂量PB进行干预,检测小鼠耳肿胀度,计算脾脏指数,并以苏木精-伊红染色观察小鼠耳部皮肤炎性细胞浸润情况,综合评价PB免疫抑制作用的药效学。随后,进一步以Western blot方法检测PB对CHS小鼠Akt磷酸化活性及对PPARγ蛋白表达的影响,通过荧光素酶报告基因分析PPARγ的转录激活。结果结果显示,不同剂量PB能够明显抑制 CHS小鼠耳肿胀,降低脾脏指数,减轻耳部皮肤炎症程度,其免疫抑制作用机制可能与促进PPARγ表达及其转录激活、下调Akt信号通路有关。结论 PB可能通过调节PPARγ相关的Akt信号通路发挥免疫调节作用,为研制用于炎症免疫性疾病的新型免疫调节剂奠定了基础。
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土槿乙酸调节特异性免疫应答的初步研究
目的 探讨土槿乙酸(pseudolaric acid B,PB)对T细胞介导特异性免疫应答的调节作用及分子机制.方法 以二硝基氟苯(2,4-Dinitrofluorobenzene,DNFB)诱导小鼠迟发型超敏反应(delayed-type hypersensitivity,DTH),局部外涂PB进行干预后检测耳肿胀度,并进一步观察PB体外作用对DTH小鼠淋巴细胞及抗原特异性T细胞增殖水平的影响,流式细胞术分析DTH小鼠CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞数量,Western blot方法检测p38MAPK的磷酸化活性表达水平.结果 PB能够明显减轻DTH小鼠耳片厚度和重量的增加,体外作用亦能有效抑制DTH小鼠淋巴细胞以及抗原特异性T淋巴细胞增殖,其免疫抑制作用机制可能与促进Treg产生、上调p38MAPK信号通路有关.结论 PB体内外均具良好的免疫抑制活性,可通过增加Treg细胞、抑制效应细胞增殖等途径发挥作用,有望研发成为新型抗炎免疫调节剂.
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土槿乙酸抑制人卵巢癌SKOV3细胞增殖并诱导G2/M期阻滞
目的 探讨土槿乙酸(pseudolaric acid B,PLAB)对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和细胞周期的影响.方法 MTT法检测PLAB对细胞生长抑制作用；Hoechst 33342荧光染色分析细胞死亡特征；流式细胞术检测细胞周期；Real time-PCR 和Western blot检测周期相关基因Cyclin B1、CDK1和Cyclin D1的表达变化.结果 PLAB明显抑制SKOV3细胞生长,且抑制作用呈浓度-作用时间依赖性(P＜0.05),其24、48和72 h的IC50值分别为2.44、1.60、2.94 μmol·L-1.5μmol·L-1 PLAB处理细胞24 h,细胞出现核染色质凝集、凋亡小体等典型凋亡特征,随着PLAB浓度升高,G2/M期细胞比例明显增大并表现出时间依赖性(P＜0.05),同时伴有Cyclin B1和CDK1呈高表达状态(P＜0.05),Cychn D1呈低表达状态(P＜0.05).结论 PLAB可抑制SKOV3细胞生长,引起细胞G2/M期阻滞,伴随Cyclin B1和CDK1呈高表达状态,可能与其调控周期相关蛋白降解有关.
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土槿乙酸衍生物PB-LY体外抗肿瘤作用及其机制研究
目的 通过研究土槿乙酸衍生物PB-LY对肿瘤细胞的影响,探讨PB-LY的抗肿瘤活性及其作用机制.方法 采用MTT法和绘制细胞生长曲线等方法检测PB-LY对多种肿瘤细胞的抑制作用;采用荧光染色、DNA ladder和流式细胞术等方法检测PB-LY诱导肿瘤细胞凋亡的作用;采用RT-PCR法检测PB-LY对肿瘤细胞相关凋亡基因Caspase-3、Bcl-2和 Bax的mRNA表达的影响.结果 PB-LY作用于多种肿瘤细胞的IC50在1.35 μmol·L-1~3.68 μmol·L-1之间,且有明显的量效关系,能够诱发肿瘤细胞产生凋亡小体、DNA ladder和细胞凋亡峰,上调相关促凋亡基因Caspase-3和Bax的表达,同时协同下调抑凋亡基因Bcl-2的表达.结论 PB-LY能抑制肿瘤细胞的生长,同时影响肿瘤细胞内相关促凋亡和抑凋亡基因的表达,从而诱导肿瘤细胞发生凋亡.
