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microRNA-31对胃癌细胞系AGS迁移的影响
目的 探讨胃癌组织中microRNA(miR)-31的表达情况及miR-31对胃癌细胞系AGS迁移的影响.方法 收集27例胃癌患者的胃癌组织和对应的正常组织,采用实时定量(qRT)-PCR检测miR-31的表达水平.筛选胃癌细胞系AGS细胞作为研究载体,通过转染miR-31mimics(实验组)使胃癌细胞系AGS细胞内miR-31的表达升高.采用划痕愈合实验和Transwell小室实验观察miR-31对胃癌AGS细胞迁移能力的影响.结果 胃癌组织miR-31的表达明显低于对应的正常组织(P<0.05);与对照组相比,实验组miR-31的表达水平升高(P<0.05).划痕实验结果显示实验组迁移距离明显小于对照组(P<0.05),Transwell小室实验结果显示转染miR-31mimics后,胃癌AGS细胞的迁移能力下降.结论 miR-31在胃癌组织中呈低表达,过表达的miR-31能够抑制AGS细胞的迁移.
关键词： microRNA-31 AGS细胞 迁移 胃癌 -
小鼠microRNA-31反转录病毒载体重组质粒的构建及鉴定
目的:以pMSCV-puro载体(MGP)为骨架,构建带有绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的小鼠microRNA-31(miR-31)反转录病毒载体MGP-31.方法:PCR扩增带有NotⅠ以及XhoⅠ酶切位点的miR31的前体(premiR-31)序列,然后克隆至MGP载体上,测序鉴定.将构建的MGP-31质粒转染HEK-293T细胞,通过荧光显微镜观察GFP的表达情况,实时定量PCR检测miR-31转录水平以评估MGP-31质粒的转染效率.结果:基因序列分析显示pre-miR-31基因序列正确,并成功插入MGP载体,转染HEK-293T细胞可表达GFP,实时定量PCR结果表明转染MGP-31质粒的HEK-293T细胞可高表达miR-31.结论:MGP-31反转录病毒载体构建成功.
关键词： microRNA-31 反转录病毒载体 重组质粒 -
MicroRNA-31在肝癌中的表达和作用
目的:探讨MicroRNA-31在肝癌中的作用功能.方法:利用realtime PCR检测不同来源的肝细胞和临床来源肝组织样本中MicroRNA-31表达,MTT检测MicroRNA-31对肝癌细胞生长活性的影响.结果:发现MicroRNA-31在肝癌细胞显著低于正常来源的肝细胞,对不同的临床来源肝组织样本检测发现在肝癌组织的MicroRNA-31表达量显著低于正常对照和癌旁组织,MTT分析发现MicroRNA-31可抑制肝癌细胞的生长.结论:本研究提示MicroRNA-31在肝癌中具有肿瘤抑制作用,在临床进展中可能扮演着重要的作用.
关键词： microRNA-31 肝癌 表达 生长 -
原发性肺癌患者外周血中 microRNA-31的表达及意义
目的：探讨microRNA-31（ miRNA-31）在原发性肺癌患者外周血中的表达情况及其临床意义。方法：采用实时荧光定量PCR技术检测100例原发性肺癌患者和100例正常人外周血miRNA-31表达水平。绘制ROC曲线，评价外周血miRNA-31表达水平对原发性肺癌的诊断价值。以肺癌患者外周血miRNA-31表达水平的平均值为界值，将100例肺癌患者分为外周血miRNA-31低表达组和高表达组，采用Kaplan-Meier法对两组绘制生存曲线，评价外周血miRNA-31表达水平对原发性肺癌预后判断的价值。结果：肺癌患者外周血miRNA-31表达水平为（1．93±0．88），与正常人的（0．67±0．31）比较，明显升高（t＝13．505，P＜0．001）。根据外周血miRNA-31表达水平绘制ROC曲线，曲线下面积为0．775（95％CI＝0．681～0．868），临界值取1．126时，用外周血miRNA-31表达水平诊断原发性肺癌的灵敏度和特异度分别为0．778和0．736。肺癌患者中外周血miRNA-31低表达44例，高表达56例，高表达和低表达患者的生存曲线差异有统计学意义（χ2＝5．710， P＝0．017），低表达组中位生存期为37．32个月，长于高表达组的27．11个月。结论：miRNA-31可作为原发性肺癌诊断和预后判断的分子标志物。
关键词： microRNA-31 原发性肺癌 诊断 预后 -
microRNA-31和LAST2蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达
目的 探讨microRNA-31和LATS2蛋白在非小细胞肺癌患者肿瘤组织中的表达.方法 采用Westemblot、荧光定量PCR检测22例非小细胞肺癌患者的肿瘤组织及癌旁正常组织中microRNA-31及LATS2蛋白的表达情况,并分析其表达水平的差异.结果 与癌旁正常组织相比较,miRNA-31在肺癌患者肿瘤组织中的表达明显增高,LAST2蛋白表达则明显降低(P＜0.05).结论 microRNA-31在非小细胞肺癌患者肿瘤组织中的表达上调,并可能通过负调控LATS2蛋白水平,从而影响肿瘤的发生和发展.
关键词： 原发性肺癌 microRNA-31 LATS2蛋白 -
哮喘小鼠CD4+T细胞中microRNA-31和FOXP3mRNA的表达及相互关系的研究
目的 初步探讨哮喘CD4+T细胞中microRNA-31和FOXP3的表达水平、两者的相关性及激素对它们的影响.方法 以卵蛋白(OVA)致敏激发建立哮喘小鼠模型.将15只BALB/c小鼠分为正常对照组、OVA组和地塞米松组,EHSA检测小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4和IFN-γ水平；实时荧光定量PCR检测小鼠脾脏CD4+T细胞的microRNA-31和FOXP3 mRNA的水平,并分析二者之间的相关性.结果 OVA组BALF中IL-4水平高于正常对照组[( 228.29±66.18) pg/ml vs(66.63±17.33) pg/ml,P＜0.05],地塞米松组BALF中IL-4水平与正常对照组或OVA组相比,无统计学差异.各组间IFN-γ无统计学差异.OVA组CD4+T细胞中FOXP3 mRNA为正常对照组的0.10倍(P＜0.05)；地塞米松组CD4+T细胞中FOXP3 mRNA为OVA组的3.75倍(P＜0.05)；正常对照组与地塞米松组之间FOXP3mRNA无统计学差异.OVA组的microRNA-31为正常对照组4.79倍(P＜0.05)；地塞米松组的microRNA-31为正常对照组4.85倍(P＜0.05)；OVA组microRNA-31水平和地塞米松组相比无统计学差异.microRNA-31和FOXP3 mRNA的Pearson相关系数为-0.609(P ＜0.05).结论 哮喘中microRNA-31和FOXP3 mRNA具有相关性.microRNA-31与地塞米松可能通过不同的途径调节CD4+T细胞中FOXP3 mRNA的表达.
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microRNA-31对AGS人胃癌细胞增殖、迁移及其LRH-1表达的影响
目的 探索microRNA-31 (miR-31)的高表达对AGS人胃癌细胞生物学行为及其成纤维细胞核受体(LRH-1)蛋白表达的影响,并探索miR-31调控胃癌发生和发展的机理.方法 将AGS细胞分为3组,分别给予转染miR-31 (MT组)、转染miR-31阴性对照序列即空脂质体(NC组)及滴加PBS溶液(BC组)处理.分别采用细胞增殖和细胞毒性试剂盒(CCK-8试剂盒)、流式细胞仪和Transwell实验检测3组细胞的增殖、凋亡、细胞周期和细胞迁移情况.采用Western blot法检测3组细胞中LRH-1蛋白的表达水平;采用双荧光素酶报告系统检测miR-31的作用位点.结果 CCK-8实验结果显示,转染4d后,MT组、NC组及BC组细胞A450值的均值分别为1.31、2.26和2.14,MT组较低(P＜0.01);流式细胞仪检测结果表明,MT组、NC组及BC组细胞凋亡率的均值分别为39.5％、9.3％和 10.0％,G1+S 期细胞比例分别为92.54％、73.23％及74.58％,MT组的该2个指标均较高(P＜0.05);Transwell实验结果表明,MT组的迁移细胞数低于NC组及BC组(P＜0.05).Western blot结果表明,MT组细胞LRH-1蛋白的表达较BC组和NC组下调(P＜0.01).结论 上调miR-31的表达对AGS细胞的增殖具有明显的抑制作用,且可促进其凋亡并降低细胞的迁移能力;miR-31可使LRH-1蛋白的表达下调,推测LRH-1基因可能是miR-31参与胃癌发生和发展的靶标之一.
关键词： microRNA-31 胃癌 迁移 增殖 成纤维细胞核受体
