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离体大鼠肠道菌群对淫羊藿苷的代谢研究
目的:考察大鼠肠道茵群对淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ的代谢情况,为研究淫羊藿苷的口服吸收机理打下基础.方法:将待测药物与新配制的大鼠肠内容物混悬液在37℃孵化,采用高效液相色谱法同时测定孵化前后溶液中淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ的浓度.结果:淫羊藿苷被肠道菌群迅速代谢成淫羊藿次苷Ⅱ,而淫羊藿次苷Ⅱ不被代谢.结论:研究淫羊藿次苷Ⅱ的吸收和代谢机理对于研究淫羊藿苷的口服吸收机理非常有必要.
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大孔树脂同时分离纯化淫羊藿中淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ的工艺优选
目的:建立大孔树脂同时分离纯化淫羊藿中淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ的工艺条件.方法:以淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ的吸附容量、洗脱率为评价指标,通过静态吸附-洗脱试验筛选大孔树脂型号,采用单因素试验优选淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ的吸附和洗脱条件.结果:选用DM301型大孔吸附树脂,佳吸附条件为上样液质量浓度7.45 g·L-1,上样液流速3BV·h-1;淫羊藿苷洗脱条件为加45％乙醇4 BV以1.5 BV·h-1的流速进行洗脱;淫羊藿次苷Ⅱ洗脱条件为加60％乙醇5 BV以1.5 BV·h-1的流速进行洗脱;淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅱ纯度分别达56.23％,67.41％.结论:建立的工艺条件可同时分离纯化淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ,且稳定性好、收率较高、生产成本低,适宜于规模化生产推广.
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肠外翻囊法研究淫羊藿肠吸收成分及其吸收特征
目的:研究淫羊藿肠吸收成分及其吸收特性.方法:采用大鼠外翻肠囊模型,收集高、中、低质量浓度淫羊藿提取物给药后不同时间的肠囊液,采用HPLC检测肠吸收液样品中5种黄酮类成分的含量,计算累计吸收量和吸收速率常数,比较淫羊藿提取物与肠吸收液中指标成分的比例变化情况.结果:提取物中主要黄酮类成分均可在肠吸收液中检测到,针对其中5种主要成分朝藿定A,朝藿定B,朝藿定C,淫羊藿苷与淫羊藿次苷Ⅱ成功建立了定量分析方法.提取液中、低质量浓度时,这5种成分分别在空肠前、中段的累积吸收量大,而高质量浓度则后移至回肠段;3种给药质量浓度下,5种成分的肠吸收均为线性吸收(R2＞0.9),符合零级吸收速率;吸收速率常数随着给药浓度的增加而增大,提示各成分的体外肠吸收为被动运输;不同质量浓度淫羊藿肠吸收液的成分间比例与原提取物中各成分间比例存在差异.结论:淫羊藿中朝藿定A,朝藿定B,朝藿定C,淫羊藿次苷Ⅱ与淫羊藿苷5种成分均可被小肠吸收,外翻肠囊法可有效地评价各成分的吸收特征.
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淫羊藿次苷Ⅰ及其代谢产物淫羊藿次苷Ⅱ通过AP-1/NFATc1信号通路调控破骨细胞生成
目的:观察淫羊藿次苷Ⅰ及其代谢产物淫羊藿次苷Ⅱ在体外对破骨细胞(OCs)分化形成的影响,并探索其通过AP-1/NFATc1信号通路的调控机制.方法:首先采用AP-1和NFAT核转录因子报告基因进行体外活性筛选,再通过体外RAW264.7细胞诱导OCs评价药物对OCs生成的影响,后通过AP-1/NFATc1信号通路相关基因表达,探索其可能的作用机制和靶点.结果:淫羊藿次苷Ⅰ及淫羊藿次苷Ⅱ均能抑制AP-1和NFAT报告基因表达,且在48h内对前体细胞RAW264.7细胞无明显生存抑制作用.淫羊藿次苷Ⅰ及淫羊藿次苷Ⅱ均能抑制体外诱导OCs生成,且淫羊藿次苷Ⅱ明显强于淫羊藿次苷Ⅰ(P＜0.05).淫羊藿次苷Ⅰ能显著抑制AP-1/NFATc1信号通路中c-Fos和Era-1基因表达(P＜0.05),而淫羊藿次苷Ⅱ对c-Fos、Fra-1、Fra-2和NFATc1基因表达均有显著抑制作用(P＜0.05).结论:淫羊藿次苷Ⅰ及其代谢产物淫羊藿次苷Ⅱ在体外均能通过AP-1/NFATc1信号通路抑制OCs生成,且淫羊藿次苷Ⅱ作用较淫羊藿次苷Ⅰ更优,提示淫羊藿可能在体内通过生物转化进一步增强其骨保护作用.
关键词： 淫羊藿次苷Ⅰ 淫羊藿次苷Ⅱ 破骨细胞 激活蛋白1 激活T细胞C1核因子 -
淫羊藿次苷Ⅱ对大鼠坐骨神经损伤后功能恢复和神经再生的影响
目的 观察淫羊藿次苷Ⅱ(Ics Ⅱ)对大鼠坐骨神经钳夹损伤后功能恢复和神经再生的影响.方法 将64只雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组和IcsⅡ治疗组,每组16只,观察时间点为4、8周,每个时间点8只.取右侧臀部斜切口、距梨状肌5 mm处钳夹5 min损伤坐骨神经,损伤宽度为3 mm.Ics Ⅱ治疗组在建模后即日起予以Ics Ⅱ 4 mg/(kg·d)连续灌胃.采用坐骨神经指数(SFI)观察坐骨神经功能恢复情况,苏木精-伊红(HE)染色观察腓肠肌形态学变化,Masson染色观察坐骨神经组织学变化,免疫组织化学法检测坐骨神经生长相关蛋白(GAP-43)表达.结果 在4周和8周时:①神经功能:Ics Ⅱ治疗组大鼠神经功能恢复更快,SFI指数(分)均高于模型组[(-56.77±3.42)比(-79.07±14.44),(-19.52±17.85)比(-75.37±7.23)](P＜ 0.05);②腓肠肌形态学:Ics Ⅱ治疗组腓肠肌肌纤维截面积(μm2)明显高于模型组[(5201.11±453.44)比(2618.81±514.26),(10 784.99±978.20)比(3222.21±400.01)](P＜ 0.05),腓肠肌湿质量残存率(％)高于模型组[(53.86±7.76)比(39.88±9.07),(71.67±15.18)比(48.86±6.71)](P＜0.05);③坐骨神经组织学:IcsⅡ治疗组坐骨神经轴突数目(个)高于模型组[(394.50±12.02)比(160.50±9.19),(474.50±33.24)比(289.50±6.36)](P＜0.05),平均光密度高于模型组[(0.462±0.036)比(0.455±0.004),(0.484±0.011)比(0.462±0.016)](P＜ 0.05);④免疫组织化学法:Ics Ⅱ治疗组坐骨神经GAP-43蛋白平均光密度值比模型组高[(0.175±0.012)比(0.166±0.006),(0.196±0.010)比(0.169±0.006)](P＜ 0.05).以上各项指标,模型组和治疗组均低于正常组和假手术组(P＜0.05),正常组和假手术组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Ics Ⅱ能促进坐骨神经钳夹损伤后的功能恢复,促进神经再生.
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淫羊藿次苷Ⅱ抗慢性脑低灌注诱导的大鼠学习记忆减退及机制研究
目的:观察淫羊藿次苷Ⅱ(IcarisidⅡ,ICSⅡ)对慢性脑低灌注诱导的大鼠学习记忆减退模型的作用,并探索其可能的作用机制.方法:成年雄性Sprague Dawley(SD)大鼠随机分为6组:假手术组、假手术给ICS II高剂量组、模型组、ICSⅡ低剂量组、ICSⅡ中剂量组、ICSⅡ高剂量组,每组13只.模型组大鼠经双侧颈总动脉结扎诱导慢性脑低灌注,制备大鼠学习记忆减退模型,假手术组同法操作,但不结扎双侧颈总动脉.手术后第十天开始给药,ICSⅡ低、中、高剂量组每日分别灌胃ICSⅡ4、8、16 mg·kg-1,假手术组和模型组灌胃等体积生理盐水,连续给药28 d.制模后第33 d Morris水迷宫检测大鼠学习记忆功能,连续5 d.水迷宫检测结束后,取材,HE、Nissl染色观察海马神经元的形态及存活情况;ELISA检测海马磷酸二酯酶抑制剂4(phosphodiesteras 4,PDEG4)、PDE 5蛋白水平;Western blot检测海马Aβ1-40、Aβ1-42蛋白水平,APP、BACE1、ADAM10、IDE、TGF-β1、PPAR-α、PPAR-β、PPAR-γ、BDNF、TrkB蛋白表达,Smad2、Akt、CREB磷酸化水平.结果:模型组较假手术组大鼠的平均逃避潜伏期明显延长,目标象限停留时间百分比和目标象距离百分比明显降低;海马区神经元排列紊乱,细胞变性,尼氏体数量明显减少;海马PDE 4、PDE 5、Aβ1-40、Aβ1-42蛋白水平及APP、BACE1、TGF-β1蛋白表达明显增高,ADAM10、IDE、PPAR-α、PPAR-γ、BDNF、TrkB蛋白表达明显降低,PPAR-β无明显变化,Smad2磷酸化水平明显增加,Akt、CREB磷酸化水平明显减少.然而,ICSⅡ中、高剂量组较模型组大鼠的平均逃避潜伏期明显缩短,目标象限停留时间百分比和目标象距离百分比明显增高;海马神经元排列较整齐,细胞少有变性,尼氏体数量增加;海马PDE 4、PDE 5、Aβ1-40、Aβ1-42蛋白水平及APP、BACE1、TGF-β1蛋白表达明显降低,ADAM10、IDE、PPAR-α、PPAR-γ、BDNF、TrkB蛋白表达明显增高,PPAR-β无明显变化,Smad2磷酸化水平明显减少,Akt、CREB磷酸化水平明显增加.假手术给ICSⅡ高剂量组较假手术组大鼠上述指标没有明显差异.结论:ICSⅡ明显减轻慢性脑低灌注大鼠模型的空间学习记忆减退及海马神经元的形态学损伤,其机制可能与下调APP、BACE1的蛋白表达和上调ADAM10、IDE的蛋白表达从而抑制Aβ产生和促进Aβ代谢,阻遏TGF-β1的过度表达和Smad2磷酸化,激活PPAR-α和PPAR-γ,上调BDNF、TrkB蛋白表达和抑制Akt、CREB磷酸化有关.
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淫羊藿次苷Ⅱ对小鼠脾淋巴细胞体外增殖的影响及其机制研究
目的:研究淫羊藿次苷Ⅱ对正常小鼠脾淋巴细胞体外增殖的影响,并初步探讨其机制.方法:不同浓度的淫羊藿次苷Ⅱ与刀豆素A(Concanavalin A,ConA)体外处理小鼠脾淋巴细胞,观察淫羊藿次苷Ⅱ对细胞增殖的影响,初步确定其发挥作用的佳浓度;然后以佳浓度淫羊藿次苷Ⅱ在不同时间点与ConA协同处理细胞,采用细胞增殖-毒性检测试剂盒检测增殖能力;运用流式细胞仪检测细胞周期分布;用荧光定量分析仪检测细胞内游离Ca2+浓度的变化.结果:淫羊藿次苷Ⅱ在10-12~10-9mol/L的浓度范围作用48小时,对细胞增殖有一定的促进作用,呈浓度依赖性.在10-7~10-4mol/L范围出现抑制作用.以10-9mol/L的淫羊藿次苷Ⅱ处理细胞,发现其与ConA在不同时间点促进细胞增殖作用显著优于ConA单独应用;并且促进细胞由G0/G1期进入S与G2/M期,并以第24小时效果更明显;促进细胞内Ca2+浓度升高,效果以第12小时明显.结论:不同浓度的淫羊藿次苷Ⅱ对小鼠脾淋巴细胞增殖具有促进作用,有浓度、时间依赖性,这种促增殖作用的机制可能与升高细胞内Ca2+浓度,进而加快细胞由G0/G1期进入S与G2/M期有关.
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淫羊藿提取物中淫羊藿苷及其代谢产物在骨质疏松模型大鼠肾脏中的分布研究
目的:骨质疏松模型大鼠灌胃给予淫羊藿提取物后,利用HPLC法对其肾脏中的淫羊藿苷及其代谢产物(淫羊藿次苷Ⅰ、淫羊藿素、淫羊藿次苷Ⅱ)进行测定,以考察淫羊藿苷及其代谢产物在肾脏中的分布情况.方法:按118mg/kg(相当于淫羊藿苷)灌胃给予骨质疏松模型大鼠淫羊藿提取物后,于40min、1.5h、8h、24h取组织,经生物样品预处理后,利用HPLC法测定肾脏中各成分的浓度.色谱柱:Agilent Eclipse XDB-C18(4.6mm×250mm,5μm);柱温为40℃;流动相:A(0.4％ HAC水)-B(甲醇);流速为1.0mL/min进行梯度洗脱;检测波长为270nm.结果:淫羊藿提取物给药40min后在肾脏中即有分布且能被检测,1.5h浓度较高,其后逐渐消除或代谢为其代谢产物;其代谢产物淫羊藿次苷Ⅰ、淫羊藿素、淫羊藿次苷Ⅱ在肾中均被检测;给药8h后,淫羊藿苷在肾脏中浓度较低,其代谢产物仍维持一定浓度;给药24h后各成分逐渐消除.结论:淫羊藿苷在大鼠肾脏中有一定程度的蓄积,并且与其代谢产物共存于肾脏组织中,并能维持一定的时间,与中医学认为淫羊藿归肾经补肝肾强腰膝的理论相符.
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淫羊藿次苷Ⅱ葡萄糖醛酸代谢产物的制备与表征
目的:鉴定淫羊藿次苷Ⅱ葡萄糖醛酸代谢产物,并进行制备与结构表征.方法:应用人肝微粒体孵育体系对淫羊藿次苷Ⅱ葡糖醛酸结合代谢途径进行鉴定,并应用重组UGT1 A1高效制备葡萄糖醛酸代谢产物,后经NMR对该产物结构进行表征.结果:淫羊藿次苷Ⅱ在人肝微粒体中的主要代谢产物为淫羊藿次苷Ⅱ-7-O-葡萄糖醛酸代谢产物.结论:采用体外孵育方法可以高效特异地制备淫羊藿次苷Ⅱ的葡萄糖醛酸代谢产物.
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淫羊藿次苷Ⅱ对大鼠阴茎海绵体压力、平均动脉血压的影响及其作用机制的研究
目的 淫羊藿次苷Ⅱ是淫羊藿中提取分离的单体,为了解淫羊藿次苷Ⅱ对阴茎性功能障碍(ED)的疗效,通过体内试验观察其对阴茎海绵体压力和平均动脉血压的影响及作用机制.方法 麻醉下游离大鼠左侧颈总动脉和左侧阴茎海绵体,允别插管与电生理仪连接;游离左侧海绵体神经(CN),采用电生理仪刺激器连接双极电极刺激;检测不同浓度的淫羊藿次苷Ⅱ在刺激CN后对阴茎海绵体压力(ICP)和平均动脉血压(MAP)影响,淫羊藿苷、西地那非、罂粟碱作为对照组.同时观察可溶性环鸟苷酸(sGC)抑制剂H-[1,2,4]噁二唑[4,3.A]喹喔啉(ODQ)、一氧化氮合酶(NOS)抑制剂N~ω硝基-L-精氨酸(LNNA)及一氧化氮生成抑制剂亚甲蓝(methylene blue,MB)对淫羊藿次苷Ⅱ(10~(-4)mol/L)诱发ICP/MAP变化的影响.结果 4组药物均剂量依赖性显著提高ICP(P<0.01),淫羊藿次苷Ⅱ、淫羊藿苷和西地那非对MAP无显著影响(P>0.05),而罂粟碱浓度达10~(-4)mol/L后,即可显著降低MAP(P<0.01).在受试浓度下,LNNA、MB和ODQ可显著抑制淫羊藿次苷Ⅱ诱发的ICP变化(P<0.01),对两地那非诱发的ICP变化无影响(P>0.05).结论 淫羊藿次苷Ⅱ和淫羊藿苷呈剂量依赖性地提高大鼠阴茎勃起功能(ICP),淫羊藿次苷Ⅱ效价强度为淫羊藿苷的2.44倍,对平均动脉血压没有显著影响,其机制可能与增强阴茎海绵体NO-cGMP通路的活性有关.
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淫羊藿次苷Ⅱ通过诱导自噬改善链脲佐菌素所致的大鼠学习记忆减退
目的 探索淫羊藿次苷Ⅱ(ICSⅡ)对链脲佐菌素(STZ)所致大鼠学习记忆减退的作用及机制.方法 雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,ICSⅡ低、高剂量组(均n=10).模型组和ICSⅡ组大鼠在第1日和第3日双侧侧脑室注射STZ 5μL(1.5 mg·kg-1)模拟散发性老年性痴呆,假手术组注入等体积柠檬酸缓冲液.第二次手术后开始给药,ICSⅡ低、高剂量组每日灌胃ICSⅡ3、10 mg·kg-1,假手术组和模型组给予等体积双蒸水,连续给药21 d.给药后第16日开始进行为期6d的Morris水迷宫实验检测大鼠行为学功能.水迷宫实验结束后,通过Western blot实验技术检测大鼠海马组织中自噬基因Beclin 1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅰ和LC3Ⅱ的蛋白表达以及β-淀粉样蛋白(Aβ1-42)的含量.结果 水迷宫实验中模型组较假手术组大鼠的平均逃避潜伏期明显延长,穿越目标象限次数显著减少(P＜0.05);海马组织中Aβ1-42的含量显著增加(P＜0.05),Beclin 1表达明显减少(P＜0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值降低(P＜0.05).与模型组相比,ICSⅡ高剂量组大鼠逃避潜伏期缩短(P＜0.05),穿越原平台象限次数增加(P＜0.05);Aβ1-42的蛋白含量明显降低(P＜0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值及Beclin 1蛋白表达显著增加(P＜0.05).结论 自噬途径参与了STZ诱导的大鼠学习记忆减退;ICSⅡ具有抗侧脑室注射STZ诱导的认知功能损伤作用,其机制可能与诱导细胞自噬有关.
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淫羊藿次苷Ⅱ对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用
目的 探讨淫羊藿次苷Ⅱ(ICSⅡ)对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用.方法 采用中动脉栓塞法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,实验分为假手术组、假手术+ ICSⅡ高剂量组(16 mg·kg-1)、模型组和ICSⅡ高、中、低剂量组(4、8、16 mg·kg-1) (n=6).通过氯化三苯基四氮唑染色法检测脑梗死体积,干湿重法检测脑含水量,酶联免疫吸附测定方法检测脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)与丙二醛(MDA)含量的变化.采用蛋白免疫印迹方法检测脑组织中核因子E2相关因子2(Nrf2)与醌氧化还原酶1(NQO-1)蛋白的表达.结果 ICSⅡ中、高剂量明显改善神经功能评分,并减少脑含水量和脑梗死体积(P＜0.05);提高SOD的活性,降低MDA含量(P＜0.05);上调Nrf2和NQO-1蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01).结论 ICSⅡ能够通过提高机体抗氧化能力发挥抗大鼠脑缺血再灌注损伤作用,其作用可能与调控Nrf2蛋白表达相关.
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淫羊藿次苷Ⅱ的药理作用及机制研究进展
淫羊藿次苷Ⅱ是我国传统中药淫羊藿的主要活性成分之一.本文结合国内外研究报道,综述了淫羊藿次苷Ⅱ抗勃起功能障碍、抗肿瘤、防治骨质疏松症及神经保护等的药理作用及可能的作用机制.
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基于液质连用分析法分析补肾活血方中黄酮类化学成分
目的 建立补肾活血方中黄酮类化学成分的分析方法测定淫羊藿次苷Ⅱ含量.方法 化学成分定性分析采用UPLC-ESI-Q-TOF-MS技术,C18色谱柱(4.6mm×250 mm,5μm),梯度洗脱(流动相:甲醇-0.1％甲酸溶液);质谱使用ESI离子源,正离子与负离子模式下采集数据.含量测定采用ACQUITY UPLC BEH C18 (2.1 mm×100 mm ID,1.7μm,Waters,Milford,USA)色谱柱,乙腈-0.1％甲酸溶液为流动相梯度洗脱;经ESI离子源负离子化后,通过Waters-Xevo TQ三重四级杆串联质谱仪,采用多反应离子监测(MRM)对淫羊藿次苷Ⅱ进行含量测定.结果 鉴定出补肾活血方中14个黄酮类化学成分.补肾活血方中淫羊藿次苷Ⅱ含量为0.092 80 mg/g,单味药淫羊藿中淫羊藿次苷Ⅱ含量为0.010 08 mg/g.结论 采用液质连用分析法鉴定复方化学成分和测定含量,该方法快速简便、结果可靠,对于研究补肾活血方配伍前后物质变化具有积极意义.
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淫羊藿次苷Ⅱ通过改善内质网应激和caspase-12 信号改善SHR大鼠左心室功能
目的 基于内质网应激与caspase-12信号,探索淫羊藿次苷Ⅱ(icarisideⅡ,ICSⅡ)改善自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHRs)左心室功能的机制.方法 30只14周龄♂SHRs分为模型组、ICSⅡ低、中、高剂量(4、8、16 mg·kg-1)组及阳性药氯沙坦(20 mg·kg-1)组(n=6);同时,WKY作为空白对照组(n=6).在第26周给药结束后,麻醉大鼠,用小动物超声检测大鼠左心室功能;RT-PCR检测左心室GRP78 mRNA水平;Western blot检测左心室GRP78、cleaved-caspase-12/9/3蛋白水平.结果 与WKY组相比,SHR组大鼠左心室舒张末期的内径和后壁厚度增加,射血分数和短轴缩短率降低;GRP78 mRNA和蛋白水平上调,cleaved-caspase-12/9/3蛋白水平增加(P<0.05).与SHR组相比,ICSⅡ中、高剂量组及阳性药组左心室舒张末期的内径和后壁厚度降低(P<0.05),射血分数和短轴缩短率增加(P<0.05);GRP78 mRNA和蛋白水平下调,cleaved-caspase-12/9/3蛋白水平降低(P<0.05).结论ICSⅡ可改善SHRs左心室功能,其作用机制可能与改善内质网应激、下调升高的caspase-12信号有关.
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淫羊藿次苷Ⅱ通过调节MMP-2、MMP-9和TIMP-1的表达抗自发性高血压大鼠心肌纤维化
目的 观察淫羊藿次苷Ⅱ(icarisid Ⅱ,ICS Ⅱ) 对自发性高血压大鼠( spontaneously hypertensive rat, SHR)心肌纤维化的干预作用,并探讨其对基质金属蛋白酶-2 ( matrix metalloproteinase,MMP-2)、MMP-9 及质金属蛋白酶抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinases,TIMPs)的影响.方法将20只♂SHR大鼠随机分为模型( SHR)组、ICS Ⅱ低、中、高剂量组(ICS Ⅱ-L、ICS Ⅱ-M、ICS Ⅱ-H),♂WKY大鼠为阴性对照(WKY)组. ICS Ⅱ各剂量处理组持续灌胃12周后,检测大鼠收缩血压,处死大鼠分离左心室计算左心质量指数,Masson染色观察心肌胶原含量变化;real time PCR检测左心室组织中MMP-2、MMP-9、TIMP-1 mRNA的表达;West-ern blot检测左心室组织中MMP-2、MMP-9、TIMP-1、CollagenⅠ、Collagen Ⅲ蛋白的表达.结果 ICS Ⅱ(8、16 mg·kg-1)处理组胶原蛋白沉积明显减轻,收缩压和左心质量指数明显下降(P<0.05),左心室组织中MMP-2、MMP-9、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ表达量明显减少(P<0.05),TIMP-1的表达量明显增加( P<0.05).结论 ICS Ⅱ可改善SHR大鼠心肌纤维化,其机制可能与降低血压,下调MMP-2、MMP-9,上调TIMP-1的表达有关.
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淫羊藿次苷Ⅱ对野百合碱所致肺动脉重构大鼠凋亡相关蛋白的影响
目的 研究淫羊藿次苷Ⅱ(ICSⅡ)对野百合碱(MCT)所致大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响,并初步探讨其机制.方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组、ICSⅡ低、中、高剂量组(4、8、16 mg·kg-1).模型组和ICSⅡ组大鼠经皮下注射MCT诱导肺动脉重构模型,ICSⅡ组于MCT注射后d 1开始给药至d 28结束,模型组和对照组给予等量溶媒.HE染色观察肺小动脉形态学变化;TUNEL染色观察肺动脉平滑肌细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法检测肺组织Bax、Bcl-2和活化的caspase-3蛋白的表达.结果 与对照组比,模型组肺小动脉中膜明显增厚;肺动脉平滑肌细胞发生凋亡,TUNEL阳性细胞比率升高(P<0.05);肺组织Bax、Bcl-2、活化的caspase-3的表达上调(P<0.05).与模型组比,ICSⅡ中、高剂量组肺小动脉中膜变薄;细胞凋亡数均明显增加,TUNEL阳性细胞比率升高(P<0.05);肺组织Bcl-2的表达明显下调(P<0.05),Bax、活化的caspase-3的表达均上调(P<0.05).结论 ICSⅡ具有促进MCT所致大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的作用,其机制可能与下调Bcl-2,上调Bax和活化的caspase-3的表达有关.
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淫羊藿次苷Ⅱ改善自发性高血压大鼠左心室心肌细胞凋亡
目的 观察淫羊藿次苷Ⅱ(icarisideⅡ,ICSⅡ)对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)心肌细胞凋亡的干预作用,并探讨其可能的机制.方法 30只13周龄♂SHR随机分为模型组、ICSⅡ低、中、高剂量组及阳性药组(n=6);同时,同源♂京都大鼠(WKY)作为对照组(n=6).所有大鼠适应性饲养1周后,ICSⅡ低、中、高剂量组分别给予ICSⅡ4、8、16 mg·kg-1(ig,qd),阳性药组给予氯沙坦20 mg·kg-1至26周龄,WKY和SHR组给予等体积双蒸水.给药12周后,测量大鼠血压,处死大鼠并分离左心室,计算左心质量指数;HE染色观察左心室病理变化;TUNEL染色观察左心室心肌细胞凋亡情况;real time RT-PCR检测左心室Bcl-2、Bax mRNA水平;Western blot检测左心室Bcl-2、Bax和cleaved-caspase-3蛋白表达.结果 相较于WKY组,SHR组大鼠血压升高,左心质量指数增加(P<0.05);心肌细胞排列紊乱、细胞肥大明显并伴有肌丝断裂;左室心肌细胞凋亡明显,Bax mRNA水平和蛋白表达上调,Bcl-2 mRNA水平和蛋白表达下调,Bax/Bcl-2比值升高,cleaved-caspase-3蛋白表达上调(P<0.05).与SHR组相比,ICSⅡ中、高剂量组和阳性药组血压和左心质量指数下降(P<0.05);心肌细胞排列趋于整齐、细胞肥大及心肌细胞凋亡情况均得以改善;Bax mRNA水平和蛋白表达下调,而Bcl-2 mRNA水平和蛋白表达上调,Bax/Bcl-2比值降低,cleaved-caspase-3蛋白下调(P<0.05).结论 ICSⅡ可减轻SHR左心室心肌细胞凋亡,其机制与其降低血压和抑制线粒体凋亡途径相关.
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淫羊藿次苷Ⅱ通过激活雌激素信号通路促进骨髓间充质干细胞的成骨性分化
目的 研究淫羊藿次苷Ⅱ( icariside Ⅱ,ICS Ⅱ )对大鼠体外培养骨髓间充质干细胞(rat bone marrow stromal cells,rBMSCs)成骨性分化过程中雌激素信号通路的影响.方法 贴壁筛选法体外培养rBMSCs,采用1×10-5 mol·L-1的ICS Ⅱ进行药物干预,比较ICS Ⅱ组、ICI组(ICI 182 78)、ICS Ⅱ+ICI组、Estrogen组、Esreogen+ICI组和不加药的对照组之间雌激素通路相关因子(包括ERα、PR和PS-2)的表达量,同时对比各组之间的成骨性指标,包括碱性磷酸酶活性、骨钙素和Ⅰ型胶原分泌量及钙盐沉积量.提取Total RNA,Real Time RT-PCR检测Runx-2、Osterix(OSX)、ERα、PR、及PS-2 mRNA的表达情况,同时提取总蛋白,Western blot法检测Ⅰ型胶原蛋白、ERα、PR和PS-2的分泌量.结果 ICS Ⅱ可明显增强碱性磷酸酶(ALP)活性,促进骨钙素、Ⅰ型胶原蛋白的分泌和钙盐沉积,与成骨性分化相关的因子OSX和Runx-2的基因表达量也升高,但这些效应均可被雌激素通路的特异性阻断剂ICI 182.780所抑制.结论 ICS Ⅱ可促进rBMSCs的成骨性分化,但采用ICI 182.780阻断雌激素信号通路后,成骨性分化的指标随之降低,提示ICS Ⅱ是通过激活雌激素信号通路来促进rBMSCs成骨性分化的.
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淫羊藿次苷II通过p38 MAPK调控成骨细胞护骨素表达的体外研究
目的：观察淫羊藿次苷Ⅱ( ICA Ⅱ)对大鼠成骨细胞( OBs )护骨素( OPG )和 p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)表达水平的影响,探讨ICA Ⅱ治疗骨质疏松症的相关机制。方法原代培养OBs,分为对照组、ICA II组、混合组(ICA Ⅱ+p38MAPK特异性抑制剂SB203580)、抑制剂组( SB203580)组。 PNPP 法检测各组 OBs 碱性磷酸酶(ALP)活性,Western blot 法检测 p38MAPK 蛋白、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)、OPG蛋白水平,RT-PCR法检测各组OPG mRNA水平。结果与对照组比较, ICA Ⅱ组 ALP活性显著上调(P<0．01),混合组ALP活性较ICAⅡ组下降(P<0．05)；ICA Ⅱ组 p-p38MAPK水平较对照组显著升高(P<0．01),混合组p-p38MAPK水平较ICA Ⅱ组明显降低(P<0．01)；各组间总p38MAPK表达量无明显差异；ICA Ⅱ组OPG分泌水平较对照组明显上调( P <0．01),混合组OPG蛋白分泌与ICA Ⅱ组相比明显受抑制( P<0．01)；ICAⅡ组OPG mRNA水平较对照组明显升高(P<0．01),混合组OPG mRNA水平较 ICA Ⅱ组下降( P<0．05)。结论 ICAⅡ可促进成骨细胞分化和上调成骨细胞 OPG 表达, p38MAPK信号通路可能参与这一过程。
