首页 > 文献资料
-
芩连合剂对实验性胃溃疡大鼠胃黏膜保护作用的机制研究
目的:探讨芩连合剂(QLHJ)对急性胃溃疡大鼠胃黏膜的保护作用及其作用机制.方法:采用无水乙醇灌胃法复制大鼠急性胃溃疡模型,测定胃黏膜细胞内丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的表达、谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)活力及钙离子浓度.结果:模型组大鼠胃黏膜细胞内钙离子浓度较其他各组明显升高,与芩连合剂组和正常组比较有非常显著性差异(P＜0.01);SOD、GSH-Px的表达较其他各组明显降低,MDA表达较其他各组明显升高,与芩连合剂组、地尔硫组和正常组比较有显著性差异(P＜0.05,P＜0.01).结论:QLHJ通过降低胃黏膜细胞内钙离子浓度的水平,降低胃黏膜细胞内MDA的表达和提高胃黏膜细胞内SOD和GSH-Px的表达,从而发挥其保护胃溃疡大鼠胃黏膜细胞的作用.
-
羚蝎胶囊对实验性脑出血大鼠脑细胞的保护作用
目的:探讨羚蝎胶囊对实验性脑出血大鼠脑细胞的保护作用.方法:采用胶原酶与肝素复合法制造大鼠脑出血模型,通过Fura-2双波长荧光法、化学法、高效液相色谱法,观察羚蝎胶囊对脑出血模型大鼠的脑细胞内Ca2+浓度、脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量以及海马组织中兴奋性氨基酸(EAA)含量的影响.结果:羚蝎胶囊可以降低细胞内Ca2+的浓度,提高SOD的活力,减少MDA的生成,并且抑制海马组织中EAA的神经毒作用(P<0.05).结论:羚蝎胶囊对脑出血大鼠脑细胞具有保护作用.
-
细胞内Ca2+在轮状病毒感染对Caco-2细胞NHE3蛋白调控中的作用
目的 研究轮状病毒(rotavirus,RV)感染对Caco-2细胞表面钠-氢(Na+-H+)交换蛋白3(NHE3)水平和生物活性的影响及其调控机制.方法 构建表达NHE3的Caco-2细胞模型,分为对照组(CTL组)、RV组、细胞内Ca2+络合剂BAPTA-AM组和BAPTA-AM+RV组,用BCECF-AM法和细胞表面NHE3生物素化法测定Na+-H+交换蛋白活性和细胞表面NHE3蛋白水平,Western blot测定细胞Cdc42蛋白水平.结果 与CTL组相比,RV感染可引起细胞Na+-H+交换蛋白活性以及细胞表面NHE3蛋白水平明显降低,此抑制作用可被BAPTA-AM拮抗,此外RV感染可引起Cdc42蛋白水平升高,这一作用也可被BATPA-AM拮抗.结论 RV感染对NHE3蛋白水平及生物活性的调控可能与细胞内Ca2+介导的Cdc42依赖性内吞途径有关.
-
环维黄杨星D对分离大鼠心室肌细胞内Ca2+和L型钙电流的影响
目的研究环维黄杨星D(CD)对大鼠心室肌细胞内Ca2+动员和L型钙电流(ICa-L)的影响.方法采用全细胞膜片钳和激光扫描共聚焦显微术研究CD对心肌细胞ICa-L以及氯化钾、咖啡因诱发心肌细胞内Ca2+动员的影响.结果 CD浓度依赖性抑制ICa-L.指令电压为10 mV时,1和10μmol·L-1CD分别使ICa-L电流密度从(-9.9±1.8)pA/pF降至(-6.4±1.4)pA/pF和(-4.2±0.6)pA/pF.共聚焦实验显示1和10μmol·L-1CD不影响静息心肌细胞[Ca2+];,对氯化钾诱发[Ca2+]i升高水平无明显抑制作用;咖啡因引起的细胞内Ca2+动员可被CD进一步增强.结论 CD浓度依赖性抑制大鼠心室肌细胞Ica-L,并有促进咖啡因诱发心肌细胞内Ca2+释放的作用.
-
龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡的线粒体通路研究
目的 观察龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡与线粒体通路的关系.方法 MTT法测定龙葵碱对HepG2细胞的细胞毒作用;AO/EB双染,激光共聚焦扫描显微镜观察龙葵碱对HepG2细胞形态学的影响;TMRE和Fluo-3/AM双染,激光共聚焦扫描显微镜同时观察细胞线粒体膜电位和细胞内[Ca2+];的变化.结果 龙葵碱对HepG2细胞有细胞毒作用;龙葵碱诱导HepG2细胞形态出现凋亡形态时TMRE和Fluo-3/AM双染观察表明,龙葵碱在降低线粒体膜电位的同时能够升高细胞内[Ca2+];浓度.结论 龙葵碱降低膜电位,开放细胞膜PT通道,使细胞内Ca2+顺浓度梯度转运,从而升高细胞内Ca2+浓度启动细胞凋亡机制.
关键词： 龙葵碱 HepG2人肝癌 细胞内Ca2+ 膜电位 激光共聚焦扫描显微术 -
谷氨酸致脑缺血再灌注损伤中钙超载的信号转导机制
目的 观察谷氨酸所致脑缺血再灌注的钙超载损伤,探究谷氨酸参与调控钙超载的分子机制.方法 建立大鼠脑缺血再灌注模型以及体外培养小鼠的小脑颗粒神经元,随机分组:对照组(5只)、二甲基亚砜溶剂组(3只)、谷氨酸组(5只)、硝苯地平组(4只)、谷氨酸+硝苯地平组(4只)、TRPC1中和性抗体组(5只)、谷氨酸+TRPC1中和性抗体组(5只).采用干湿重法测定大鼠脑水肿程度,采用激光共聚焦显微镜fura-2探针检测神经元细胞内Ca2+水平.结果 在大鼠MCAO模型中,谷氨酸明显增加脑水肿(P＜0.05),硝苯地平显著抑制由谷氨酸引起的脑水肿(P＞0.05),而TRPC1中和性抗体无此效应(P＜0.05).在体外神经元培养中,谷氨酸显著增加细胞内Ca2+水平,而硝苯地平能降低由谷氨酸引起的神经元内Ca2+升高,差异有统计学意义(P＜0.05);TRPC1中和性抗体只能部分降低谷氨酸引起的神经元内Ca2+升高,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 谷氨酸在脑缺血再灌注中所致钙超载,主要通过L-型钙通道钙内流后激活钙库释放,终导致脑水肿.钙库调控的TRPC1通道不参与谷氨酸所致的钙超载.
-
D-氨基葡萄糖盐酸盐体外对人淋巴细胞的增殖和细胞内钙浓度的影响
目的:研究D-氨基葡萄糖盐酸盐对淋巴细胞增殖作用和细胞内钙的浓度影响.方法:采用人外周血淋巴细胞为实验材料,通过MTT法,流式细胞仪法研究了D-氨基葡萄糖盐酸盐对人外周血淋巴细胞增殖和细胞周期分布的影响.同时采用荧光探针Furo-3/AM对细胞内的Ca2+进行标记,激光共聚焦扫描显微镜扫描细胞的荧光强度.结果:D-氨基葡萄糖盐酸盐能够诱导淋巴细胞增殖,促使淋巴细胞由G0/G1进入S期,并且可以使淋巴细胞内的钙离子浓度升高.结论:D-氨基葡萄糖盐酸盐能够通过Ca2+信号通路激活人外周血淋巴细胞,促使淋巴细胞增殖.
关键词： D-氨基葡萄糖盐酸盐 淋巴细胞增殖 细胞周期 细胞内Ca2+ -
羚蝎胶囊对脑出血后迟发性脑损害干预作用的临床与实验研究
目的:观察羚蝎胶囊治疗脑出血的临床疗效并探讨其作用机制.方法:实验部分:采用胶原酶与肝素制造大鼠脑出血模型.通过Fura2荧光法测定脑细胞内Ca2+浓度,化学法测定脑组织内超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量,HPLC法测定海马组织中兴奋性氨基酸(EAA)含量.临床部分:纳入观察范围的患者共有60例,随机分成羚蝎胶囊组、清开灵注射液组(各30例).通过神经功能缺损积分、中风病中医积分、血肿吸收率,观察羚蝎胶囊对急性脑出血的临床疗效.结果:动物实验发现:羚蝎胶囊可以降低细胞内Ca2+浓度,提高SOD的活力,减少MDA的生成,并能抑制海马组织中EAA含量,经统计学处理,均有显著差异(P均<0.05).临床研究发现:羚蝎胶囊组有效率80.0%,清开灵组76.7%,二者间差异无显著性(P>0.05);羚蝎胶囊组血肿吸收率为96.0%,高于清开灵组89.0%(P<0.05);但在改善神经功能缺损方面清开灵组优于羚蝎胶囊组(P<0.05).结论:羚蝎胶囊可促进急性脑出血患者脑内血肿的吸收,明显减轻患者神经功能缺损程度.其部分作用机制可能是减轻了Ca2+超载和自由基损害,抑制了EAA的神经毒作用.
-
五环三萜类单体诱导人乳腺癌细胞凋亡的研究
目的:探讨熊果酸、齐墩果酸和18β-甘草次酸对人乳腺癌细胞(MCF-7)诱导凋亡的作用,并探讨凋亡发生与细胞内Ca2+浓度变化的关系.方法:选用不同浓度梯度的熊果酸、齐墩果酸和18β-甘草次酸分别处理MCF-7细胞24h,用MTT比色法测定细胞增殖能力,用末端脱氧核苷酸转移酶介导dUTP末端标记法和annexin V流式细胞仪法检测细胞凋亡率,用Fura-2荧光负载方法测定细胞内Ca2+浓度.结果:熊果酸、齐墩果酸和18β-甘草次酸的半增殖抑制浓度(IC50)分别为36.18、88.36和234.33μmol/L;20μmol/L和30μmol/L熊果酸、75μmol/L和100μmol/L齐墩果酸及100μmol/L和150μmol/L18β-甘草次酸使细胞凋亡率显著升高(P<0.01和P<0.05);20μmol/L熊果酸、75μmol/L齐墩果酸和150μmol/L18β-甘草次酸处理组的细胞内Ca2+浓度明显高于对照组(P<0.05).结论:熊果酸、齐墩果酸和18β-甘草次酸均具有诱导MCF-7细胞凋亡而抑制其增殖的作用;其诱导凋亡可能依赖于细胞内Ca2+水平上调.
-
流式细胞仪实时监测细胞内Ca2+浓度变化
背景:多种信号转导途径可影响细胞内Ca2+浓度的变化,因而对细胞内钙离子变化的检测,有助于了解细胞功能的启动、加强或抑制.目的:利用流式细胞术实时监测细胞内钙离子浓度的动态变化.方法:选取健康人新鲜全血,用淋巴细胞分离液分离淋巴细胞,使用Ca2+荧光指示剂Fluo-3/AM负载淋巴细胞,加入CD3单克隆抗体和CD28单克隆抗体刺激淋巴细胞活化,以流式细胞仪动态监测活化淋巴细胞内Ca2+的浓度变化.结果与结论:T淋巴细胞在静息状态时,钙离子的荧光值平稳,显示为基线;加入抗CD3单克隆抗体和抗CD28单克隆抗体后,T淋巴细胞被活化,钙离子的浓度迅速升高,持续大约两三分钟后下降,逐渐趋向平缓.结果提示采用钙离子指示剂Fluo-3负载细胞与流式细胞术分析可以跟踪细胞内钙离子的动态变化,成为钙离子动态变化监测的有效方法.
-
淫羊藿次苷Ⅱ对小鼠脾淋巴细胞体外增殖的影响及其机制研究
目的:研究淫羊藿次苷Ⅱ对正常小鼠脾淋巴细胞体外增殖的影响,并初步探讨其机制.方法:不同浓度的淫羊藿次苷Ⅱ与刀豆素A(Concanavalin A,ConA)体外处理小鼠脾淋巴细胞,观察淫羊藿次苷Ⅱ对细胞增殖的影响,初步确定其发挥作用的佳浓度;然后以佳浓度淫羊藿次苷Ⅱ在不同时间点与ConA协同处理细胞,采用细胞增殖-毒性检测试剂盒检测增殖能力;运用流式细胞仪检测细胞周期分布;用荧光定量分析仪检测细胞内游离Ca2+浓度的变化.结果:淫羊藿次苷Ⅱ在10-12~10-9mol/L的浓度范围作用48小时,对细胞增殖有一定的促进作用,呈浓度依赖性.在10-7~10-4mol/L范围出现抑制作用.以10-9mol/L的淫羊藿次苷Ⅱ处理细胞,发现其与ConA在不同时间点促进细胞增殖作用显著优于ConA单独应用;并且促进细胞由G0/G1期进入S与G2/M期,并以第24小时效果更明显;促进细胞内Ca2+浓度升高,效果以第12小时明显.结论:不同浓度的淫羊藿次苷Ⅱ对小鼠脾淋巴细胞增殖具有促进作用,有浓度、时间依赖性,这种促增殖作用的机制可能与升高细胞内Ca2+浓度,进而加快细胞由G0/G1期进入S与G2/M期有关.
-
硫化氢与神经胶质细胞功能的研究进展
长期以来被人们熟知的硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)是具有异味的剧毒气体.直到20世纪80年代末期,科学家们才相继在大鼠、牛和人类等脑中发现含量较高的内源性H2S,且具有重要的生理功能.
-
莪芪抗瘤方剂对白血病HL-60细胞凋亡的作用及机理研究
目的:研究中药复方莪芪抗瘤方剂在体外对白血病HL-60细胞凋亡影响,并探讨凋亡发生的可能机制.方法:通过血清药理学方法,选择10%浓度的含药血清与白血病HL-60细胞共同培育24、48、72、96 h后,应用荧光显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测凋亡峰(亚二倍体峰),用Fura-2荧光负载方法测定细胞内Ca2+浓度的变化;比色法检测凋亡相关基因Caspase-3活性变化.结果:10%浓度的含药血清处理组细胞体积缩小,细胞核固缩,膜起泡,核断裂及形成凋亡小体等,以72h为明显;可见DNA含量低于G1期的凋亡细胞群,这群细胞的凋亡百分率随时间的递增而增加.10%浓度的含药血清处理组的细胞内Ca2+浓度也明显高于对照组(P＜0.01),Caspase-3基因活性明显高于对照组相(P＜0.01,P＜0.05).结论:莪芪抗瘤方剂含药血清诱导白血病HL-60细胞发生凋亡,这种变化可能与细胞内Ca2+水平上调,Caspase-3活性增强有关.
-
18β-甘草次酸诱导人乳腺癌细胞凋亡及其细胞内Ca2+水平的变化
背景与目的:18 -甘草次酸是甘草的重要成分,近年来的研究发现18 -甘草次酸具有抑制人淋巴细胞性白血病、肝癌和肺癌的细胞增殖.本研究探讨18 -甘草次酸对人乳腺癌MCF-7细胞诱导凋亡的作用.目前研究已证实细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)的动态变化在诱发细胞凋亡过程的多个环节中起重要作用,因此本研究也探讨由18-甘草次酸诱导的MCF-7细胞凋亡发生与[Ca2+]i变化的关系.方法:用50～250 μmol/L浓度梯度的18β-甘草次酸处理MCF-7细胞24h,用MTT比色法测定细胞增殖能力.100 μmol/L和150 μmol/L 18β-甘草次酸处理细胞24 h,用末端脱氧核苷酸转移酶介导dUTP末端标记法、Annexin V流式细胞仪法和单细胞凝胶电泳法检测凋亡细胞.150 μmol/L 18β-甘草次酸处理细胞24 h,用Fura-2荧光负载方法测定[Ca2+]i的变化.分别用100 μmol/L BAPTA-AM 和0.5 mmol/L EGTA与150 μmol/L 18β-甘草次酸联合处理MCF-7细胞24 h,用单细胞凝胶电泳法检测凋亡细胞.结果:从100 μmol/L 18β-甘草次酸浓度起对MCF-7细胞的增殖抑制率显著升高(P<0.01和 P<0.05),呈剂量依赖性,半增殖抑制浓度(IC 50)为234.33 μmol/L.100 μmol/L和150 μmol/L 18β-甘草次酸使细胞凋亡率显著升高(P<0.01和P<0.05);18β-甘草次酸处理组的[Ca2+]i也明显高于对照组(P<0.05).18β-甘草次酸与BAPTA-AM联合处理组和 18β-甘草次酸与EGTA联合处理组的凋亡率均明显低于单纯的150 μmol/L 18β-甘草次酸处理组(P<0.05和P<0.01).结论:18 -甘草次酸具有抑制MCF-7细胞增殖和诱导其凋亡的作用,而18 -甘草次酸诱导MCF-7细胞凋亡的作用在抑制该细胞增殖方面起主要作用.18 -甘草次酸诱导MCF-7细胞凋亡依赖于细胞内Ca2+水平上调,而细胞外Ca2+内流是导致细胞内Ca2+水平上调的原因之一.
-
白介素-2对心肌细胞[Ca2+]i 的作用及其信号转导途径
为研究白介素-2 (interleukin-2, IL-2)对心肌细胞内钙浓度([Ca2+]i) 的影响及其信号转导途径, 实验采用酶解法分离成年大鼠心室肌细胞, 以Fura-2/AM为钙探针, 用细胞内双波长钙荧光系统检测细胞[Ca2+]i的变化.结果发现: (1) IL-2 (0.5～200 U/ml)浓度依赖性地降低单个心室肌细胞内钙瞬态, IL-2 (200 U/ml) 对咖啡因诱导的肌浆网内储钙的释放无影响; (2) 纳洛酮(naloxone, Nal) (10-8 mol/L) 和nor-binaltorphimine (nor-BNI, 10-8 mol/L)可阻断IL-2对心肌细胞钙瞬态的作用, 而纳曲吲哚(naltrindole, NTI) (10-6 mol/L) 不能阻断此作用; (3) κ阿片受体激动剂U50488H (10-6 mol/L)降低心肌细胞钙瞬态, nor-BNI (10-8 mol/L)可阻断此作用; (4) 5 mg/L百日咳毒素(PTX)预处理可取消IL-2降低心肌细胞钙瞬态的作用, 而酪氨酸激酶抑制剂genistein (10-4 mol/L) 不能取消IL-2的作用; (5) U73122预处理可阻断IL-2的作用.研究结果表明, IL-2降低心肌细胞钙瞬态的作用, 是通过心肌细胞上κ阿片受体介导的, 其下游途径包括PTX敏感的G蛋白和磷脂酶C.
-
gp96肽复合物免疫脾巨噬细胞对细胞内钙离子动态变化及形态学观察
目的:通过研究gp96-肽复合物免疫小鼠脾巨噬细胞细胞内Ca2+的变化及其形态学的改变,进一步探讨肿瘤细胞中提纯的热休克蛋白gp96-肽复合物的抗肿瘤免疫作用和机制.方法:以gp96-肽复合物免疫的小鼠脾巨噬细胞作为研究对象,用Fluo-3/AM负载细胞,激光扫描共聚焦显微镜检测其细胞内的Ca2+浓度及观察Con A刺激对细胞内Ca2+影响;扫描电镜观察细胞的形态学变化.结果:与对照组相比,经gp96-肽复合物致敏的小鼠脾巨噬细胞内的Ca2+浓度显著增加;其细胞内的Ca2+变化对Con A刺激更加敏感;免疫后的小鼠脾巨噬细胞呈典型的激活状态.结论:gp96-肽复合物可在体内激活脾巨噬细胞; 活化的脾巨噬细胞在Con A刺激时Ca2+浓度的变化敏感.gp96-肽复合物的抗肿瘤免疫过程中促进小鼠脾巨噬细胞活化起着重要的作用.
-
脱氢表雄酮及其衍生物对谷氨酸致海马神经细胞损伤的保护作用
目的观察脱氢表雄酮(DHEA)及其衍生物7-羰基-脱氢表雄酮(7-oxo-DHEA)对谷氨酸诱导的海马神经损伤的保护作用.方法原代培养的SD大鼠海马神经细胞,MTT比色法检测细胞存活率;激光扫描共聚焦显微镜检测细胞内Ca2+及自由基随时间变化曲线;比色法测定细胞内谷胱甘肽(GSH)水平.结果 DHEA(0.1 μmol·L-1)及7-oxo-DHEA(0.1 μmol·L-1)预保护后的谷氨酸损伤海马神经细胞胞内Ca2+及自由基变化曲线均明显低于无预保护组,GSH水平明显高于无预保护组(P＜0.01).结论 DHEA及7-oxo-DHEA对谷氨酸诱导海马神经细胞损伤有保护作用.
关键词： DHEA 7-oxo-DHEA 海马神经细胞 谷氨酸 细胞内Ca2+ -
细胞内高钙对小鼠小脑浦肯野细胞动作电位编码的影响
目的:通过向细胞内微量注射IP3受体激动剂诱发细胞内高钙,探讨细胞内高钙对小鼠小脑浦肯野细胞内在电生理特性变化的影响.方法:取小鼠小脑蚓部做矢状切片(400 μm).采用Axoclamp-2B放大器全细胞记录模式,记录细胞内Ca2+浓度升高前后浦肯野细胞动作电位的阈电位和绝对不应期;电信号输入pClamp9.2软件获取和分析群集发放的动作电位峰间距和动作电位峰时程标准差,进行数据采集和分析,观察细胞内Ca2+浓度升高早期浦肯野细胞内在电生理特性的变化.结果:细胞内Ca2+浓度升高后的短时间内,与高钙前相比,小脑浦肯野细胞群集发放动作电位的不应期缩短和激发动作电位的阈电位降低(P<0.001).结论:细胞内高钙改变动作电位的不应期和阈电位,使浦肯野细胞兴奋增加,动作电位的编码能力降低.
-
甘草酸对人乳腺癌细胞增殖抑制和诱导凋亡作用的研究
目的探讨甘草酸对人乳腺癌细胞(MCF-7)增殖抑制和诱导凋亡的作用,并探讨凋亡发生与细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)变化的关系.方法 2.5～12.5 mmol/L甘草酸处理MCF-7细胞24 h,采用MTT比色法测定细胞增殖能力.5.0 mmol/L、7.5 mmol/L和10.0 mmol/L甘草酸处理MCF-7细胞24 h,用末端脱氧核苷转移酶介导dUTP末端标记法和Annexin V流式细胞仪法检测凋亡细胞.7.5 mmol/L甘草酸处理MCF-7细胞24 h,采用Fura-2荧光负载方法测定[Ca2+]i的变化.结果甘草酸从5.0 mmol/L浓度起对MCF-7细胞的增殖抑制率显著升高(P<0.01),呈剂量依赖性;半增殖抑制浓度(IC50)为15.8 mmol/L.7.5 mmol/L和10.0 mmol/L甘草酸使细胞凋亡率显著升高(P<0.05和P<0.01).甘草酸处理组的[Ca2+]i明显低于对照组(P<0.05).结论甘草酸具有抑制MCF-7细胞增殖和诱导凋亡的作用;其诱导细胞凋亡可能与细胞内Ca2+水平下调有关.
-
芩连合剂对实验性胃溃疡大鼠胃黏膜细胞内钙及氧自由基的影响
[目的]探讨芩连合剂对胃溃疡(GU)的保护作用及其作用机制.[方法]采用无水乙醇灌胃法复制大鼠急性GU模型,测定胃黏膜细胞内丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力及钙离子(Ca2+)浓度.[结果]模型组大鼠胃黏膜细胞内Ca2+浓度及MDA表达较其他各组明显升高,SOD、GSH-Px的表达明显降低,差异均有统计学意义(均P＜0.01).[结论]芩连合剂通过降低胃黏膜细胞内Ca2+浓度及MDA的表达,提高SOD和GSH-Px的表达,起到保护胃黏膜的作用,从而发挥其抗GU的作用.
