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热休克蛋白gp96-肽复合物肿瘤疫苗的应用前景与挑战
肿瘤组织来源的热休克蛋白gp96-肽复合物（heat shock protein 96-peptide complex，HSPPC-96）结合有肿瘤特异性抗原多肽，能够诱导特异性抗肿瘤免疫。自体HSPPC-96疫苗在延缓肿瘤复发和提高患者总体生存率等方面彰显优势，应用前景广阔。然而作为自体来源的个体化疫苗，HSPPC-96疫苗的实施和推广也面临着巨大的挑战，如肿瘤组织来源限制、对晚期肿瘤疗效不明确等问题。本文综合分析了HSPPC-96疫苗免疫治疗的临床进展、应用前景及其面临的挑战。
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肿瘤源性热休克蛋白gp96诱导淋巴细胞反应及其抗肿瘤效应
目的:研究肿瘤细胞来源的热休克蛋白gp96-多肽复合物在体外诱导脾淋巴细胞的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应.方法:利用蛋白纯化技术、SDS-PAGE凝胶电泳及Western blot法分离纯化、鉴定gp96-多肽;通过流式细胞术、免疫荧光技术、CCK-8法等检测经gp96多肽诱导的CD8+T细胞及其抗肿瘤效应.结果:经鉴定获得纯化的热休克蛋白;流式细胞仪检测表明,经gp96-肽复合物诱导后的CD8+T细胞比例达到近70%,远远高于对照组的35%、26%;该活化的CTL细胞在效靶比为50:1时的肿瘤杀伤率达72%,与对照组相比具有统计学意义;激光共聚焦显微镜观察证实实验诱导组的培养上清能诱导H22肿瘤细胞凋亡的形态学改变.结论:肿瘤来源的热休克蛋白gp96-肽复合物能诱导小鼠脾淋巴细胞的CTL反应,该活化的CTL具有特异性抗H22肿瘤细胞的免疫作用,并能分泌免疫活性物质诱导H22肿瘤细胞凋亡.
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gp96-肽复合物体外诱导脾淋巴细胞及其抗肿瘤效应
目的 研究H22肿瘤细胞来源的热休克蛋白gp96-多肽复合物在体外诱导小鼠脾淋巴细胞的特异性的细胞毒性T细胞(CTL)的产生及其抗肿瘤效应.方法 利用蛋白提取纯化技术、细胞培养技术、流式细胞术、CCK-8法、免疫荧光技术等.结果 经鉴定获得纯化的热休克蛋白;流式细胞仪检测表明,经gp96-肽复合物诱导后的CD8T细胞比例达到近70%,远远高于对照组的35%、26%;该活化的CTL细胞在效靶比为50:1时的肿瘤杀伤率达72%与对照组相比具有统计学意义;激光共聚焦显微镜观察证实实验诱导组的培养上清能诱导H22肿瘤细胞凋亡的形态学改变.结论 肿瘤来源的热休克蛋白gp96-肽复合物能诱导小鼠脾淋巴细胞的CTL反应,该活化的CTL具有特异性抗H22肿瘤细胞的免疫保护作用并能分泌免疫活性物质诱导H22肿瘤细胞凋亡.
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gp96-肽复合物体外诱导CTL反应及其抗肿瘤效应研究
目的研究小鼠肝癌腹水瘤H22细胞来源的gp96-肽复合物体外诱导小鼠脾淋巴细胞特异性细胞毒T细胞的产生及其抗肿瘤效应.方法利用蛋白提取纯化技术、Western-blot法、细胞培养技术、流式细胞术、CCK-8法、RT-PCR法等研究gp96-肽复合物体外诱导扩增CTL及其抗肿瘤效应.结果流式细胞仪检测表明,经gp96-肽复合物诱导后的CD8+T细胞比例达到近70%,远远高于对照组的35%、26%.该活化的CTL细胞在效靶比为50:1时的肿瘤杀伤率达72%与对照组相比具有统计学意义;将活化的CTL细胞回输小鼠体内能产生对该肿瘤细胞良好的过继性免疫保护,延长荷瘤小鼠的生存时间;RT-PCR法检测该活化的脾细胞较正常脾淋巴细胞高表达IFN-γ mRNA.结论肿瘤来源的热休克蛋白gp96-肽复合物能诱导小鼠脾淋巴细胞的CTL反应,并增强脾细胞 IFN-γ mRNA的表达,该CTL具有特异性抗H22肿瘤细胞的免疫保护作用.
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gp96肽复合物免疫脾巨噬细胞对细胞内钙离子动态变化及形态学观察
目的:通过研究gp96-肽复合物免疫小鼠脾巨噬细胞细胞内Ca2+的变化及其形态学的改变,进一步探讨肿瘤细胞中提纯的热休克蛋白gp96-肽复合物的抗肿瘤免疫作用和机制.方法:以gp96-肽复合物免疫的小鼠脾巨噬细胞作为研究对象,用Fluo-3/AM负载细胞,激光扫描共聚焦显微镜检测其细胞内的Ca2+浓度及观察Con A刺激对细胞内Ca2+影响;扫描电镜观察细胞的形态学变化.结果:与对照组相比,经gp96-肽复合物致敏的小鼠脾巨噬细胞内的Ca2+浓度显著增加;其细胞内的Ca2+变化对Con A刺激更加敏感;免疫后的小鼠脾巨噬细胞呈典型的激活状态.结论:gp96-肽复合物可在体内激活脾巨噬细胞; 活化的脾巨噬细胞在Con A刺激时Ca2+浓度的变化敏感.gp96-肽复合物的抗肿瘤免疫过程中促进小鼠脾巨噬细胞活化起着重要的作用.
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热休克蛋白gp96-肽复合物体外对人肝癌细胞的抗肿瘤效应
目的 研究热休克蛋白gp96-肽复合物修饰树突状细胞(DC)后对人肝癌细胞的体外特异抗肿瘤效应.方法 从人原发性肝癌组织中提取gp96-肽复合物,用其修饰DC细胞后与T淋巴细胞共同培养,以MTT法检测该复合物介导的细胞毒性T细胞(CTL)对不同来源人肝癌细胞的抗肿瘤效应,并与粗提抗原修饰DC细胞组相比较.结果 gp96-肽复合物诱导的CTL对原代肝癌细胞杀伤效率为74.3%,明显高于粗提抗原组(42.5%)和未加抗原组(14.4%)(P<0.01),粗提抗原组对肝癌细胞杀伤效率高于未加抗原组(P<0.01).且该复合物的抗肿瘤效应具有一定的组织特异性.结论 gp96-肽复合物修饰的DC细胞,在体外能刺激产生特异的抗肿瘤细胞毒性T细胞,因而热休克蛋白gp96在肿瘤免疫治疗中具有重要的实用价值.
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热休克蛋白gp96-肽复合物诱导的抗肿瘤免疫
目的: 用不同种类肿瘤提取的热休克蛋白(HSP)gp96-肽复合物纯化后免疫动物,观察其诱导抗肿瘤免疫的效应,并初步探讨其机制.方法: 从肿瘤细胞中制备HSP gp96-肽复合物, 观察其免疫诱导作用.用不同剂量及不同来源的gp96-肽复合物免疫6组小鼠后, 用H22癌细胞攻击, 观察各组小鼠的肿瘤发生率、 瘤重及瘤组织的形态学变化并与对照组相比较.观察gp96-肽复合物对小鼠腹腔巨噬细胞分泌一氧化氮(NO)和杀瘤活性的影响.结果: 获得的纯化HSP gp96-肽复合物的Mr为96 000.gp96-肽复合物的免疫效果与其剂量有关, 以 18 μg/只的效果明显.交叉免疫实验证明, 免疫小鼠能抵抗同种肿瘤细胞的攻击, 而对异种肿瘤细胞的则无免疫保护作用.gp96-肽复合物可刺激小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO同时杀瘤活性增高.结论: 从肿瘤细胞中分离纯化的HSP gp96-肽复合物免疫小鼠后, 可获得特异性的抗肿瘤作用; 其对肿瘤细胞的杀伤作用与 gp96-肽复合物能增强小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO增多有关.
