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淫羊藿次苷Ⅰ及其代谢产物淫羊藿次苷Ⅱ通过AP-1/NFATc1信号通路调控破骨细胞生成
目的:观察淫羊藿次苷Ⅰ及其代谢产物淫羊藿次苷Ⅱ在体外对破骨细胞(OCs)分化形成的影响,并探索其通过AP-1/NFATc1信号通路的调控机制.方法:首先采用AP-1和NFAT核转录因子报告基因进行体外活性筛选,再通过体外RAW264.7细胞诱导OCs评价药物对OCs生成的影响,后通过AP-1/NFATc1信号通路相关基因表达,探索其可能的作用机制和靶点.结果:淫羊藿次苷Ⅰ及淫羊藿次苷Ⅱ均能抑制AP-1和NFAT报告基因表达,且在48h内对前体细胞RAW264.7细胞无明显生存抑制作用.淫羊藿次苷Ⅰ及淫羊藿次苷Ⅱ均能抑制体外诱导OCs生成,且淫羊藿次苷Ⅱ明显强于淫羊藿次苷Ⅰ(P＜0.05).淫羊藿次苷Ⅰ能显著抑制AP-1/NFATc1信号通路中c-Fos和Era-1基因表达(P＜0.05),而淫羊藿次苷Ⅱ对c-Fos、Fra-1、Fra-2和NFATc1基因表达均有显著抑制作用(P＜0.05).结论:淫羊藿次苷Ⅰ及其代谢产物淫羊藿次苷Ⅱ在体外均能通过AP-1/NFATc1信号通路抑制OCs生成,且淫羊藿次苷Ⅱ作用较淫羊藿次苷Ⅰ更优,提示淫羊藿可能在体内通过生物转化进一步增强其骨保护作用.
关键词： 淫羊藿次苷Ⅰ 淫羊藿次苷Ⅱ 破骨细胞 激活蛋白1 激活T细胞C1核因子 -
阻断MEK1上调支气管上皮细胞谷氨酰半胱氨酸合成酶的表达
目的 探讨MEK1信号通路与支气管上皮细胞(16-HBE)谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)表达的关系.方法 应用MEK1抑制剂PD98059 50μmol/L分别孵育16-HBE 2、8、16及24 h.用Western印迹方法和荧光定量PCR检测细胞γ-GCS重链蛋白和mRNA的表达.用显色方法检测细胞内谷胱甘肽(GSH)的含量.用Western印迹方法检测细胞c-jun的水平.结果 经PD98059孵育4、8、16及24 h后,γ-GCS重链蛋白和mRNA的表达和细胞内GSH的含量较对照组均增加.各时间段c-jun表达较各对照组减少.结论 在支气管上皮细胞中MEK1抑制剂PD98059对16-HBE的γ-GCS和GSH有明显的上调作用.阻断激活蛋白-1(AP-1)途径不能减少γ-GCS和GSH的合成.
关键词： γ谷氨酰半胱氨酸合成酶 谷胱甘肽 信号传导 激活蛋白1 -
双歧杆菌的完整肽聚糖对实验性大肠癌MAPK和AP-1的影响
目的探索双歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)的完整肽聚糖(WPG)的抑瘤机制. 方法以激光共聚焦显微镜检测大肠癌裸鼠移植瘤丝裂原活化的蛋白激酶家系中的ERK1/2、JNK和p38以及激活蛋白1的主要组分c-fos和c-jun的含量. 结果 WPG注射组大肠癌组织的ERK1/2和c-jun的平均荧光强度均明显低于肿瘤对照组(P＜0.01);而JNK、p38和c-fos的平均荧光强度在两组间差异则无显著性 (P＞0.05). 结论双歧双歧杆菌的WPG体内能降低大肠癌ERK1/2的活性以及c-jun的表达,这可能是其抑瘤途径之一.
关键词： 双歧杆菌 完整肽聚糖 大肠癌 丝裂原活化的蛋白激酶 激活蛋白1 -
结合转录因子激活蛋白1的诱杀性寡聚脱氧核苷酸能抑制血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心肌成纤维细胞胶原表达
目的 探讨结合转录因子激活蛋白1的诱杀性寡聚脱氧核苷酸(AP-1 decoy ODNs)对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的心肌成纤维细胞Ⅰ型及Ⅲ型胶原的影响,为高血压心肌纤维化的防治提供理论依据.方法 采用羟脯氨酸比色法测定SD大鼠心肌成纤维细胞(CFs)上清胶原合成,分别观察不同浓度的AP-1 decoy ODNs对AngⅡ诱导的CFs胶原的合成、Ⅰ型及Ⅲ型mRNA的影响.结果 ①10-7mol/L Ang Ⅱ刺激24 h后能够显著增加CFs胶原合成,decoy ODNs在10～200 nmol/L范围内量-效相关地抑制CFs胶原合成,但突变的decoy ODNs对CFs的增殖、胶原合成没有明显的影响.②10-7mol/L Ang Ⅱ作用24 h后能够显著使CFs Ⅲ型(1.04±0.07比1.63±0.07,n=3,P<0.05)和Ⅰ型(1.09±0.09比0.20±0.10,n=3,P<0.05)基因表达上调,而100 nmol/L(Ⅰ型0.45±0.05和Ⅲ型0.84±0.04)、200 nmol/L(Ⅰ型0.22±0.06和Ⅲ型0.61±0.07)的AP-1 decoy ODNs(P<0.05)能够抑制这种作用.突变的AP-1 decoy ODNs没有此作用.结论 AP-1 decoy ODNs通过抑制Ang Ⅱ诱导的CFs Ⅰ型、Ⅲ型胶原的表达,从而抑制胶原的合成.
关键词： 心肌成纤维细胞 激活蛋白1 decoy寡聚脱氧核苷酸 血管紧张素Ⅱ 胶原 -
氧化应激、激活蛋白1与老年高血压患者动脉弹性改变的关系及奥美沙坦干预的影响
目的 观察老年原发性高血压(EH)患者氧化应激、激活蛋白1(AP-1)的变化与动脉弹性改变,并探讨三者之间关系以及奥美沙坦干预的影响.方法 选择符合入选标准的老年EH患者178例和老年健康体检者136人,分别作为EH组和对照组.两组患者分别检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛、AP-1、空腹血糖、血尿酸、血脂和臂踝动脉脉搏波传导速度(baPWV).随机选取122例老年EH患者给予奥美沙坦治疗1 2周(奥美沙坦组),剩余56例作为EH对照组,观察治疗前后血压、SOD、丙二醛、AP-1和baPWV的变化.结果 与对照组相比,老年EH患者的SOD降低,丙二醛、AP-1和baPWV升高[分别为(66.5±10.5)比(78.8±13.4) kU/L,(5.6±1.3)比(4.5±1.3)μmol/L,(1.6±0.1)比(0.8±0.1),(1833±175)比(1721±181)cm/s(左baPWV),(1848±182)比(1743±176)cm/s(右baPWV);均P＜0.01].多元线性回归分析分别显示,收缩压、舒张压、年龄和空腹血糖是AP-1的独立影响因素.与治疗前相比,奥美沙坦升高SOD活性,降低血压、丙二醛和AP-1水平,并改善动脉弹性[AP-1:(1.2±0.3)比(1.7±0.4);左baPWV:(1691±179)比(1842±182)cm/s;右baPWV:(1697±170)比(1877±169)cm/s,均P＜0.01].结论 老年高血压患者存在氧化应激和AP-1水平的升高,并与动脉弹性改变相关;奥美沙坦能升高SOD活性,降低丙二醛和AP-1水平,并改善动脉弹性.
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支气管哮喘中激活蛋白1治疗靶点
转录因子可能在慢性气道疾病的病理生理中扮演重要角色,并可能是一类新颖的抗炎治疗靶点.激活蛋白1(activator protein-1,AP-1)调节Th2细胞因子白介素5(interleukin-5,IL-5)、IL-4和IL-13表达.AP-1活化失调导致临床糖皮质激素抵抗型支气管哮喘(简称哮喘).AP-1靶点的药理抑制剂和基因沉默均已初显平喘端倪.AP-1某亚单位可能是未来更迷人的哮喘治疗靶点.
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EGCG干预LMP1激活的AP-1信号转导通路
目的探讨EGCG对鼻咽癌细胞激活蛋白1(AP-1)信号转导通路的干预作用,阐明在鼻咽癌细胞中茶多酚干预EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)活化的AP-1信号转导通路中靶分子的机制.方法采用EB病毒阴性及阳性的鼻咽癌细胞系CNE1和CNE1-LMP1细胞.利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察EGCG对CNE1和CNE1-LMP1细胞的生存率的影响.采用瞬间转染及报道基因法观察EGCG对AP-1活性的作用.利用间接免疫荧光法观察EGCG对JNK核移位的影响,再分别提取CNE1和CNE1-LMP1的胞浆及胞核蛋白,Western blot分析EGCG抑制JNK的核移位后,胞浆及胞核蛋白中JNK的变化.采用Western blot分析EGCG对c-Jun的磷酸化水平的影响.采用瞬间转染及报道基因法观察EGCG对cyclinD1启动子活性的影响,并用Western blot分析EGCG对cyclinD1蛋白表达的作用.结果 EGCG对鼻咽癌细胞的抑制作用有剂量依赖性,并可抑制AP-1的活性.EGCG能抑制JNK的核移位,并抑制c-Jun的磷酸化.EGCG对AP-1信号通路下游的靶基因cyclinD1的启动子活性及其蛋白表达都有抑制作用.结论 EGCG对信号转导通路上的AP-1、JNK、c-Jun、cyclinD1多个靶点分子具有干预作用.LMP1是EB病毒这种编码的蛋白,因此,EGCG抑制与病毒相联系的信号转导通路,可能是EGCG抑制与病毒相关的肿瘤的分子机制之一.
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支气管哮喘中激活蛋白1治疗靶点
转录因子可能在慢性气道疾病的病理生理中扮演重要角色,并可能是一类新颖的抗炎治疗靶点.激活蛋白1(activator protein-1,AP-1)调节Th2细胞因子白介素5(interleukin-5,IL-5)、IL-4和IL-13表达.AP-1活化失调导致f临床糖皮质激素抵抗型支气管哮喘(简称哮喘).AP-1靶点的药理抑制剂和基因沉默均已初显平喘端倪.AP-1某亚单位可能是未来更迷人的哮喘治疗靶点.
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激活蛋白1和肿瘤坏死因子α在早期被动吸烟小鼠肺部表达增加
目的 观察早期被动吸烟小鼠肺功能及肺组织的病理变化,核转录因子κB(NF-κB)和激活蛋白-1(AP-1)的活性变化以及炎症因子IL-8、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达变化,探讨转录因子与炎症介质的关系,为慢性阻塞性肺疾病发病机制的研究提供参考.方法 将C57/BL6雄性小鼠随机分为被动吸烟组(10只)和健康对照组(10只),被动吸烟2 h,2次/d(间隔时间至少6 h),连续30 d.用小动物呼吸机连接PowerLab压力传导器测定各组肺功能,HE染色法比较各组肺组织的病理变化,凝胶迁移检测(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)观察肺组织中NF-κB和AP-1的活性,用酶链免疫吸附试验(ELISA)测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-8、IL-6和TNF-α的浓度.结果 健康组小鼠肺功能和吸烟组相比未见显著性差异,[吸气峰流速度(PIF)分别为(1.8244±0.4907) ml/s和(1.8675±0.4187) ml/s(P=0.6244),呼气峰流速度(PEF)分别为(6.1369±0.5753) ml/s和(6.1689±0.7669) ml/s(P=0.3598)],肺组织病理观察可见终末细支气管和血管周围有大量淋巴细胞浸润,肺泡中有大量巨噬细胞聚集.肺组织EMSA结果显示NF-κB活性变化不明显,吸烟组AP-1活性明显增强.ELISA结果表明BALF中吸烟组较健康组TNF-α显著性增高[分别为(241.44±239.47) pg/mg和(106.58±64.229) pg/mg,P=0.0243],IL-8和IL-6无明显改变[IL-8分别为(20.404±24.204) pg/mg和(13.018±11.289) pg/mg,P=0.4392;IL-6分别为(75.612±89.278) pg/mg和(43.863±35.899) pg/mg,P=0.1206].结论 小鼠早期被动吸烟可以引起终末细支气管和血管旁淋巴细胞浸润,巨噬细胞肺泡腔内聚集.气道内TNF-α表达增加.肺组织AP-1活性增加,可能参与了吸烟引起的早期炎症变化.
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茶多酚对人肝癌细胞激活蛋白1及细胞周期影响
目的观察茶多酚对人肝癌细胞激活蛋白1(AP-1)及细胞周期的影响.方法构建AP-1报告质粒测量AP-1活性,免疫组化测量细胞周期素D1和细胞周期素依赖激酶4表达变化,流式细胞仪分析细胞周期.结果茶多酚抑制AP-1活性,细胞周期素D1和细胞周期素依赖激酶4表达降低,细胞阻滞在G1期.结论茶多酚可能通过下调AP-1活性使细胞周期素D1表达降低;而茶多酚使细胞周期素依赖激酶4表达降低,可能与AP-1的活性无关.
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激活蛋白1在双歧杆菌预防大肠癌生长中的作用
目的:探索青春型双歧杆菌体内预防大肠癌的机制.方法:首先建立大肠癌裸鼠移植瘤动物模型,将实验动物分为双歧杆菌预防组和肿瘤对照组,以激光共聚焦显微镜定量检测了大肠癌组织激活蛋白1(AP-1)中的c-fos和c-jun的含量.结果:双歧杆菌预防组大肠癌移植瘤c-jun和c-fos的含量均明显低于肿瘤对照组(P＜0.01).结论:青春型双歧杆菌可通过降低大肠癌移植瘤组织AP-1中的c-jun和c-fos的表达这一途径来预防大肠癌的生长.
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双歧杆菌的完整肽聚糖对巨噬细胞AP-1的影响
目的 探索信号途径ERK→AP-1在双歧杆菌的完整肽聚糖(WPG)激活巨噬细胞中的作用.方法 以WPG刺激SD大鼠腹腔巨噬细胞,采用凝胶电泳迁移分析技术检测巨噬细胞AP-1的活性.结果 WPG刺激组巨噬细胞AP-1的活性明显高于对照组(P＜0.01);巨噬细胞经ERK抑制剂PD98059预孵后,其AP-1的活性显著低于WPG刺激组(P＜0.01).结论 双歧杆菌的WPG可通过ERK→AP-1这一信号途径来活化巨噬细胞.
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强心饮对肿瘤坏死因子α诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成以及激活蛋白1 mRNA表达的影响
目的:研究激活蛋白1(activator protein-1,AP-1)在肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导新生大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖、胶原合成中的作用,探讨强心饮抑制心肌纤维化的作用机制.方法:胰酶消化法分离培养乳鼠CFs,建立TNFα诱导新生大鼠CFs纤维化模型.将CFs按培养方式不同分为正常对照组、模型组和强心饮5%含药血清组、10%含药血清组和20%含药血清组.治疗24 h后,采用荧光实时定量聚和酶链式方法检测不同浓度强心饮对CFs AP-1 mRNA表达的影响,甲基噻唑基四唑法检测强心饮对CFs增殖的影响;羟脯氨酸法检测对CFs胶原合成量的影响.结果:TNF-α作用CFs 24 h后,与空白对照组相比,AP-1 mRNA表达明显增加(P＜0.05),细胞增殖和胶原合成增加(P＜0.05);强心饮干预后,CFs增殖和胶原合成减少(P＜0.05),AP-1 mRNA表达下调(P＜0.05).结论:强心饮能够抑制TNF-α诱导的CFs增殖和胶原合成增加,具有抗心肌纤维化作用,其机制可能与下调AP-1 mRNA表达有关.
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氧化低密度脂蛋白诱导Zucker肥胖大鼠肾小球系膜细胞AP-1活性的变化
目的:研究氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,Ox-LDL)对体外培养的Zucker大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)中核转录因子激活蛋白1(activator protein-1,AP-1)活化的影响,以及观察Ox-LDL诱导的AP-1活性的变化与Zucker大鼠鼠龄以及基因型的相关性.方法:①采用Zucker肥胖大鼠(3月龄和10月龄)及Zucker瘦型大鼠(3月龄和10月龄)的4种GMC株(O3m,O10m,L3m,L10m)进行传代培养.②利用凝胶迁移率实验(EMSA)和超迁移率实验检测不同浓度及不同时相Ox-LDL对Zucker大鼠GMC AP-1活性的影响,以及AP-1二聚体中c-jun和c-fos成分的变化.结果:①经Ox-LDL诱导后,4个组GMC内AP-1活性均较对照组明显增强(F=177.84,P＜0.01);②随着Ox-LDL刺激浓度增加和时间的延长,GMC内AP-1活性相应增强,50 mg/L的Ox-LDL刺激8h时,AP-1活性强度达高峰;③Ox-LDL主要激活AP-1二聚体成分中的c-jun;④O10m组AP-1的活性显著高于O3m组(P＜0.01),L10m组AP-1的活性显著高于L3m组(P＜0.01),O10m组显著高于L10m组(P＜0.01),O3m组显著高于L3m组(P＜0.01).结论:Ox-LDL可诱导Zucker大鼠GMC内AP-1活化,其活化方式呈时间和剂量依赖;活化强度与大鼠的基因型及鼠龄密切相关;Ox-LDL对肥胖型、老龄大鼠GMC中AP-1的激活作用更为明显.
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AP-1的研究进展
激活蛋白1(activator protein-1,AP-1)是机体内一类重要的核转录因子,是由Jun、Fos、ATF和MAF蛋白家族组成的同源二聚体或异源二聚体.主要通过其高度保守的碱性亮氨酸拉链(basic leucine zipper,bZIP)与DNA结合,参与多种生长因子和细胞因子的基因转录,从而调控细胞增殖、分化、转化及凋亡等过程.AP-1可调节多种刺激物的基因表达,同时也受多种细胞外物质的刺激而活化.活化的AP-1可参与多器官、多系统疾病的发生发展,如多种恶性肿瘤及免疫相关疾病等.本文旨在概述其近年来的研究进展.
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c-Jun/AP-1在因子Ⅶa促进SW620细胞增殖和迁移中的激活及其调控作用
目的 探讨c-Jun/激活蛋白1(AP1)在活化的凝血因子Ⅶa促进SW620细胞增殖、迁移过程中的作用及其调控机制.方法 Western blot检测人结肠癌SW620细胞中Ⅶa、组织因子(TF)、蛋白酶激活受体2 (PAR2)、细胞外调节蛋白激酶1/2 (ERK1/2)抑制剂U0126、p38抑制剂SB203580处理后cJun、磷酸化c-Jun(p-c-Jun)的蛋白水平变化；MTT和Transwell法分别检测AP-1 抑制剂姜黄素对细胞增殖和细胞迁移能力的影响.结果 单克隆抗TF和PAR2抗体、U0126均能抑制Ⅶa促进SW620细胞中c-Jun/AP-1活化的过程(P＜0.05).姜黄素降低Ⅶa诱导的SW620细胞增殖和细胞迁移能力(P＜0.05).结论 TF/Ⅶa复合物通过激活PAR2促进SW620细胞增殖和迁移,c-Jun/AP-1在此过程中被激活并发挥重要作用,ERK1/2为c-Jun/AP-1上游分子具有调控效应.
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维胺酯对皮肤鳞癌细胞系SCL-1增殖的影响
目的 探讨维胺酯对皮肤鳞癌细胞系SCL-1增殖的影响及可能机制.方法 MTT法检测不同浓度维胺酯(5、10、20、40、80 μmol/L)作用SCL-1细胞24、72 h后细胞增殖率.维胺酯10 μmol/L作用 SCL-1细胞24 h,流式细胞术检测细胞周期分布,实时荧光定量PCR检测维A酸受体(RAR)α、RAARβ、RARγ、维A酸X受体(RXR)α和他扎罗汀诱导基因1(TIG1)、细胞色素P450家族成员26A1 (CYP26A1) mRNA的表达；荧光素酶报告基因检测维胺酯10 μmol/L作用SCL-1细胞24 h激活蛋白1(AP-1)转录活性的变化.结果 5-80μmol/L的维胺酯呈时间和浓度依赖住地抑制SCL-1细胞.维胺酯10 μmol/L作用24 h后,SCL-1细胞的G1期百分比上升,而S期、G2期百分比下降.维胺酯10 μmol/L不诱导RARα、RARβ、RARγ、RXRα、TIG1和CYP26A1 mRNA的表达,但能在24 h内抑制AP-1的转录激活.结论 维胺酯抑制SCL-1细胞增殖涉及G1期细胞阻滞；其作用机制不依赖于经典的维A酸受体通路,而与抑制AP-1的转录活性有关.
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宫颈癌中激活蛋白1通路的活化及临床意义
目的：探讨激活蛋白1（AP-1）信号通路的重要组分c-jun和c-fos在宫颈癌中的表达及临床意义。方法免疫组织化学（ SP）法检测c-jun和c-fos在70例宫颈鳞状细胞癌、30例宫颈上皮内瘤变及20例慢性宫颈炎中的表达情况，同时分析其与宫颈癌临床病理特征和预后的关系。结果70例宫颈癌中c-jun和c-fos的阳性表达率分别为57.1％（40/70）、60.0％（42/70），在30例宫颈上皮内瘤变的表达阳性率分别为53.3％（16/30）、63.3％（19/30），而在20例慢性宫颈炎的表达阳性率均为0；宫颈癌组与宫颈炎组相比差异有统计学意义（P＜0.01），宫颈癌组与宫颈上皮瘤病变组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。 c-jun和c-fos表达与宫颈癌的临床分期、组织学分级、淋巴结转移等分组中差异具有统计学意义（P＜0.05），但与患者年龄及肿瘤的大小等分组中的表达差异无统计学意义（P＞0.05）。 c-jun和c-fos在宫颈癌的表达呈正相关（r＝0.67，P＜0.05）。结论 AP-1信号通路活化可能与宫颈鳞状细胞癌发生发展相关，c-jun和c-fos在致瘤过程中可能起协同作用。
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激活蛋白1与自身免疫性疾病的研究进展
转录因子( transcription factors,TFs)是一类具有RNA聚合酶活性的蛋白质因子,在免疫细胞功能凋节中起重要作用.作为细胞核内重要的转录调控因子,激活蛋白1 (activator protein-1,AP-1)在生长发育、细胞凋亡和免疫调节中具有重要作用.近年来相关研究显示,AP-1与自身免疫性疾病的发生有关.本文就近年来有关AP-1与自身免疫性疾病的新研究进展做一综述.
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八肽胆囊收缩素抑制LPS诱导的RAW264.7细胞AP-1活性及IL-6表达
目的 研究八肽胆囊收缩素(CCK-8)对LPS诱导RAW264.7细胞IL-6表达的影响及相关机制.方法 用ELISA及RT-PCR法检测RAW264.7细胞 IL-6蛋白及mRNA表达;用EMSA方法 检测 RAW264.7细胞AP-1 DNA结合活性.结果 ① LPS可时间依赖性的诱导RAW264.7细胞IL-6 蛋白及mRNA表达;② 10-10 mol·L-1 CCK-8对LPS诱导的RAW264.7细胞IL-6表达无明显影响;10-8、10-6 mol·L-1 CCK-8浓度依赖性地抑制了LPS诱导的RAW264.7细胞IL-6表达;③ 10-10 mol·L-1 CCK-8未影响LPS诱导的AP-1活性,10-8、10-6 mol·L-1 CCK-8浓度依赖性地抑制了LPS诱导的AP-1活性.结论 CCK-8通过抑制AP-1 DNA结合活性而抑制了LPS诱导的RAW264.7细胞IL-6表达,这可能是CCK-8发挥抗炎作用的信号转导机制之一.
