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HPLC法同时测定淫羊藿总黄酮胶囊中5种黄酮类成分＊
目的：建立同时测定淫羊藿总黄酮胶囊中朝霍定A、朝霍定B、朝霍定C、淫羊藿苷、宝霍苷I等5种成分含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法：所采用的色谱条件为：色谱柱：Eclipse Plus C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：乙腈-水，梯度洗脱；体积流量：1.0 mL·min-1；检测波长：270 nm；柱温：25℃。结果：朝霍定A、朝霍定B、朝霍定C、淫羊藿苷、宝霍苷I分别在3.10-62.00、5.70-114.00、9.14-182.80、15.20-304.00、1.56-31.20μg·mL-1范围内呈良好的线性关系，相关系数r均大于0.9993；平均加样回收率分别为101.06%（RSD=1.05%，n=6）、100.78%（RSD=1.08%，n=6）、99.17%（RSD=1.14%，n=6）、100.23%（RSD=0.68%，n=6）、99.09%（RSD=1.30%，n=6），该方法的精密度、重复性和稳定性良好。结论：该方法简便、准确，为淫羊藿总黄酮胶囊多成分含量测定提供一定的参考价值。
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肠外翻囊法研究淫羊藿肠吸收成分及其吸收特征
目的:研究淫羊藿肠吸收成分及其吸收特性.方法:采用大鼠外翻肠囊模型,收集高、中、低质量浓度淫羊藿提取物给药后不同时间的肠囊液,采用HPLC检测肠吸收液样品中5种黄酮类成分的含量,计算累计吸收量和吸收速率常数,比较淫羊藿提取物与肠吸收液中指标成分的比例变化情况.结果:提取物中主要黄酮类成分均可在肠吸收液中检测到,针对其中5种主要成分朝藿定A,朝藿定B,朝藿定C,淫羊藿苷与淫羊藿次苷Ⅱ成功建立了定量分析方法.提取液中、低质量浓度时,这5种成分分别在空肠前、中段的累积吸收量大,而高质量浓度则后移至回肠段;3种给药质量浓度下,5种成分的肠吸收均为线性吸收(R2＞0.9),符合零级吸收速率;吸收速率常数随着给药浓度的增加而增大,提示各成分的体外肠吸收为被动运输;不同质量浓度淫羊藿肠吸收液的成分间比例与原提取物中各成分间比例存在差异.结论:淫羊藿中朝藿定A,朝藿定B,朝藿定C,淫羊藿次苷Ⅱ与淫羊藿苷5种成分均可被小肠吸收,外翻肠囊法可有效地评价各成分的吸收特征.
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二维斑马鱼模型联合色谱技术评价朝藿定A及其代谢物宝藿苷Ⅰ抗骨质疏松活性
以二维斑马鱼模型联合色谱技术筛选朝藿定A及其代谢物宝藿苷Ⅰ的抗骨质疏松活性,建立高效筛选中药抗骨质疏松活性成分新方法.用斑马鱼成鱼对朝藿定A的0.5％ DMSO溶液进行代谢,代谢液浓缩后用LC-MS分析、HPLC捕获代谢产物宝藿苷Ⅰ,用斑马鱼骨质疏松模型评价朝藿定A和宝藿苷Ⅰ的活性.结果表明朝藿定A和宝藿苷Ⅰ均能防止泼尼松龙诱导斑马鱼骨质疏松.该方法使朝藿定A的量微代谢产物得到富集、分离分析,通过在体斑马鱼抗骨质疏松模型简单、高效的筛选朝藿定A及代谢产物宝藿苷Ⅰ的抗骨质疏松活性,为早期、快速发现中药量微成分及其代谢物的抗骨质疏松活性提供新思路与方法.
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高效液相色谱法测定淫羊藿药材及饮片中朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C和淫羊藿苷的含量
目的:采用高效液相色谱法,建立测定淫羊藿药材及饮片中朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C和淫羊藿苷含量的方法.方法:采用Agilent ZORBAX SB-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.01％磷酸水(V:V=24:76),流速为1.0 ml/min,柱温为30℃,检测波长为270 nm.结果:朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C和淫羊藿苷分别在0.068～0.408、0.316～1.896、0.280～2.240和0.434～2.604μg范围内线性关系良好,其平均加样回收率分别为103.49％、98.80％、96.75％和102.10％.结论:该方法快捷、准确,能够更好地实现对淫羊藿药材和饮片的质量控制.
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淫羊藿中不同部位及单体化合物对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞损伤的影响
目的 通过比较淫羊藿Epimedium brevicormon不同洗脱部位及其单体化合物对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用,筛选淫羊藿活性部位和活性成分.方法 淫羊藿提取物经大孔树脂柱、硅胶柱、Sephadex LH-20及制备液相的分离纯化,得到不同洗脱部位和单体化合物.运用Aβ25-35体外诱导的神经细胞损伤模型,采用Hoechst33342和PI双染法,对淫羊藿的不同洗脱部位和成分进行活性筛选.结果 与模型组比较,除淫羊藿95％乙醇部位外,所有洗脱部位及其中的单体化合物山柰酚-3-O-[α-L-鼠李糖基(1 →6)-β-D-半乳糖苷]-7-O-α-L-鼠李糖苷、淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B均对Aβ25-35所致SH-SY5Y细胞损伤有显著保护作用.结论 淫羊藿对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有保护作用,其二氯甲烷-甲醇(5∶1)部位作用强,其次是30％乙醇部位、50％乙醇部位.
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一测多评法测定淫羊藿中淫羊藿苷和朝藿定A、B、C
目的 建立一测多评(QAMS)法测定淫羊藿中的黄酮类成分,以提高淫羊藿药材的质量控制水平.方法 采用HPLC法,检测波长为270 nm,在一定的线性范围内,测定淫羊藿苷与朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C的相对校正因子,并考察不同色潜柱、不同仪器测定各成分相对校正因子的重现性,以淫羊藿苷为对照品,用所建立的相对校正因子计算淫羊藿药材中朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C的量;同时采用外标法测定100批淫羊藿药材中4种成分的量,以验证QAMS法的准确性和科学性.结果 所建立各成分的相对校正因子重现性良好,分别为1.352、1.384、1.340,其RSD值均小于5％,采用该校正因子计算的朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C的量与外标法实测值之间没有显著性差异.结论 该方法准确可靠,简便可行,且节约对照品及检测成本,该方法可以作为淫羊藿药材多指标成分测定质量控制方法.
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淫羊藿总黄酮仿生酶解肠溶胶囊的制备及评价
目的 以淫羊藿总黄酮为模型药物,蜗牛酶为水解酶,加入制剂辅料制备可实时酶解、实时吸收的淫羊藿总黄酮仿生酶解肠溶胶囊,对其处方工艺进行优化和评价.方法 以淫羊藿总黄酮释放度为评价指标,采用UV法和单因素实验筛选制备淫羊藿总黄酮仿生酶解肠溶胶囊所需的填充剂种类、用量,崩解剂种类、用量及润湿剂种类等关键因素,并采用响应面法优化其制剂处方,同时采用HPLC法对肠溶胶囊中4种主要黄酮苷(淫羊藿苷及朝藿定A、B、C)的酶解过程进行考察.结果 淫羊藿总黄酮仿生酶解肠溶胶囊的优处方为淫羊藿总黄酮提取物100 mg,蜗牛酶68 mg,α-乳糖65 mg,低取代羟丙纤维素11.7 mg,该制剂在人工肠液中45 min内的总黄酮累积释放率可达85.43％,同时能够在肠道排空时间内(3～6h)酶解完全.结论 所制备的淫羊藿总黄酮仿生酶解肠溶胶囊有利于促进淫羊藿总黄酮在体内的水解转化,为研发高效的淫羊藿总黄酮新制剂提供研究基础.
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淫羊藿中活性成分的代谢产物研究进展
淫羊藿为我国传统中药,具有补肾阳、强筋骨、祛风湿的功效.淫羊藿中主要活性成分是以淫羊藿苷为代表的黄酮苷类化合物.近年来研究发现淫羊藿给药后发挥功效的物质基础主要为其活性成分的代谢产物.综述近年来国内外对淫羊藿中活性成分的代谢产物的研究方法及代谢产物研究进展,对进一步阐明淫羊藿药材的作用机制、研制新药具有直接指导意义.
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HPLC梯度洗脱联合波长切换法测定龟鹿补肾胶囊中7种成分的含量
目的 建立HPLC法同时测定龟鹿补肾胶囊中的7种成分.方法 采用Alltima C18色谱柱;以乙腈-体积分数0.2％磷酸溶液为流动相,梯度洗脱;切换波长检测,检测波长分别为330 nm(麦角甾苷、吉奥诺苷B1)和270 nm(朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ);流速:0.8 mL·min-1;柱温:30℃.结果 7种成分的质量浓度与峰面积在测定范围内均呈良好的线性关系(r ＞0.999);平均加样回收率及相应的RSD分别为98.7％(1.6％)、97.9％(1.3％)、99.6％(0.8％)、97.7％(0.5％)、99.3％(1.4％)、96.9％(0.8％)和100.3％(0.6％).结论 本文作者建立的HPLC波长切换法同时测定龟鹿补肾胶囊中麦角甾苷、吉奥诺苷B1、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ,为龟鹿补肾胶囊质量的全面评价提供了科学依据.
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固定化蜗牛酶同时生物转化淫羊藿中4种黄酮苷
目的 采用固定化蜗牛酶同时生物转化淫羊藿Epimedii Folium中4种黄酮苷,并对工艺进行优化.方法 交联-包埋法制备固定化蜗牛酶,单因素试验优化生物转化工艺,HPLC法测定转化率,LC-MS/MS法鉴定转化产物.结果 在佳条件(pH值5,温度50℃,蜗牛酶与底物比例1∶1,底物质量浓度1.0 mg/mL,转化时间2h)下,朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷可分别转化为箭藿苷A、箭藿苷B、鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ,以及宝藿苷Ⅰ和淫羊藿苷元(两者均为淫羊藿苷转化产物),平均转化率分别为73.69％、74.01％、73.46％、75.52％.结论 该工艺稳定简单,重复性好,可用于淫羊藿中4种黄酮苷的高效转化.
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HPLC法同时测定淫羊藿药材中的5个黄酮类成分
目的:建立同时测定淫羊藿药材中5种成分的HPLC方法.方法:采用Diamonsil-C18柱(4.6 mm×250mm,5 μm);流动相:乙腈和甲酸水(pH=3.0),梯度洗脱;流速:0.9 mL/min;DAD检测,检测波长:270 nm.结果:淫羊藿药材中5个主要黄酮类成分朝藿定A、朝藿定C、淫羊藿苷、箭藿苷A、宝藿苷1分别在0.780 0～83.20μg/mL、2.081～222.0 μg/mL、3.288～350.7 μg/mL、0.8311～88.65 μg/mL、0.351 8～37.52μg/mL的浓度范围内呈良好的线性关系,低检测限分别为0.50、0.75、0.87、0.32、0.12μg/mL.重复性、稳定性实验结果的RSD<3%;各成分平均回收率均小于107%,RSD<6%.结论:该方法快速简便、准确可靠,各主要化学成分均能达到基线分离,适用于淫羊藿药材的质量控制.
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不同产地淫羊藿中4种活性成分含量的高效液相色谱法测定
目的 用HPLC法同时测定淫羊藿中朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C及淫羊藿苷的含量,对不同产地淫羊藿进行品质评价.方法 采用Dikma C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相以乙腈(A)-水(B)梯度洗脱(0～ 35 min,15 ％A～27 ％A;35～55 min,27％A～35 ％A),流速:1.0 ml·min-1,检测波长:270 nm,柱温:30 cC.结果 4种成分均能达到基线分离,线性良好.不同产地淫羊藿中4种成分含量差异较大,其中产自甘肃的淫羊藿品质较好.结论 该方法操作简便,重现性好,可作为淫羊藿的品质评价方法.
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液质联用同时测定喘可治注射液中4种黄酮苷含量
目的：建立同时测定喘可治注射液中朝藿定 A， B， C 和淫羊藿苷的高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）方法。方法采用Agilent Eclipse XDB-C18柱（150 mm×2.1 mm，5.0μm），以乙腈-0.1%甲酸水溶液（35∶65）为流动相进行色谱分离，流速0.22 mL·min-1，柱温40℃；在负离子检测模式下采用多反应监控（MRM），以柚皮苷为内标测定朝藿定A，B，C和淫羊藿苷。结果朝藿定A，B，C和淫羊藿苷4种成分在API 3000液质联用系统仪上的定量限均为0.04 ng·mL-1、检测限均为0.05 ng·mL-1。4种黄酮成分在1.0～1000.0 ng·mL-1呈现良好的线性关系（r>0.9950），加样回收率在90.11%～100.3%之间，RSD<2.89%（n=6），方法重复性及精密度良好；4种黄酮苷在15批喘可治注射液中的含量比较稳定，且符合国家药品标准要求。结论所建立的液质联用定量方法灵敏、准确、稳定，适用于喘可治注射液4种主要黄酮苷的快速测定，可用于喘可治注射液的质量控制。
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朝藿定A在大鼠不同组织中含量测定方法的建立及其组织分布研究
目的 建立朝藿定A在大鼠不同组织生物样品中的LC-MS/MS含量检测方法及其在组织分布研究中的应用.方法 采用Agilent Eclipse XDB-C18柱(150 mm×2.1 mm,5μm);流动相:乙腈-0.1％乙酸水(32∶68);流速:0.3mL·min-1;柱温:40℃;质谱采用多反应离子监测(MRM)方式负离子检测,用于定量分析的离子对为m/z 897.6→675.5.结果 朝藿定A在1～500 ng·mL-1线性范围内具有良好的线性关系,日内、日间精密度及稳定性良好,能满足生物样品检测的方法学要求.大鼠单次灌胃给予淫羊藿提取物后,朝藿定A主要分布在肝、肺和雌性生殖器官中,且体内组织分布存在明显的性别差异.结论 该分析方法专属、灵敏、准确,适用于不同组织生物样品中朝藿定A浓度的测定,可应用于朝藿定A的组织分布研究.
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不同厂家炙朝鲜淫羊藿饮片主成分含量比较
目的:对不同厂家炙朝鲜淫羊藿饮片主成分进行比较.方法:以反相高效液相色谱(PR-HPLC)法同时测定炙朝鲜淫羊藿饮片中5种主要黄酮类成分朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷和宝藿苷I的含量.结果:朝藿定A以亳州千草药业有限公司的炙朝鲜淫羊藿饮片含量高;朝藿定B、朝藿定C以药都集团茗都中药饮片有限公司的炙朝鲜淫羊藿饮片含量高;淫羊藿苷、宝藿苷I以安徽滕王药业有限公司的炙朝鲜淫羊藿饮片含量高.结论:建立多种成分的含量测定方法可全面控制炙朝鲜淫羊藿饮片质量.
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RP-HPLC法同时测定不同品种淫羊藿药材中5种主要黄酮类成分的含量
目的:建立以反相高效液相色谱法测定不同品种淫羊藿药材中5种主要黄酮类成分含量的方法.方法:色谱柱为Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(梯度洗脱),检测波长为270 nm,柱温为30℃,同时测定淫羊藿药材中淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、宝藿苷I的含量.结果:5种成分均能达到基线分离,线性良好.不同品种淫羊藿药材中5种主要黄酮类成分的含量差别较大.结论:建议在考察淫羊藿药材的质量时,不能只考察淫羊藿苷,应建立多种黄酮类成分测定指标,以全面控制淫羊藿药材的质量.
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淫羊藿总黄酮提取物的HPLC指纹图谱建立及其中8种成分的含量测定
目的:建立淫羊藿总黄酮提取物的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,并建立同时测定其中8种成分含量的方法.方法:采用HPLC法.色谱柱为ZORBAX Eclispse SB-C18,流动相为乙腈-水(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,检测波长为270 nm,进样量为5μL.以淫羊藿苷峰为参照峰,绘制5批样品的HPLC指纹图谱,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004 A版)》进行相似度评价,确定共有峰.结果:5批样品的HPLC图谱中有22个共有峰,相似度均大于0.99,并指认淫羊藿属苷A、朝藿定A1、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ、宝藿苷Ⅰ等8个共有峰.上述8种成分进样量线性范围分别为0.0195～0.2925μg(r=0.9999)、0.0282～0.4230μg(r=0.9996)、0.0505～0.7575μg(r=0.9999)、0.0669～1.0035μg(r=0.9999)、0.0896～1.3440μg(r=0.9999)、0.16～2.40μg(r=0.9999)、0.0268～0.4020μg(r=0.9998)、0.02724～0.40860μg(r=0.9998);定量限分别为390.00、564.00、506.00、535.20、448.00、426.68、643.20、544.80 ng/mL,检测限分别为97.50、141.00、126.25、133.80、112.00、106.67、160.80、136.20 ng/mL;精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于3％;加样回收率分别为97.64％～103.79％(RSD=2.00％,n=6)、96.41％～99.10％(RSD=1.12％,n=6)、96.56％～103.56％(RSD=2.67％,n=6)、96.10％～99.57％(RSD=1.20％,n=6)、99.34％～104.18％(RSD=1.70％,n=6)、100.35％～105.37％(RSD=1.93％,n=6)、98.76％～102.83％(RSD=1.60％,n=6)、96.30％～101.10％(RSD=1.80％,n=6).结论:所建HPLC指纹图谱可为淫羊藿总黄酮提取物的质量控制提供参考;所建含量测定方法简便、准确、重复性好,可用于同时测定淫羊藿总黄酮提取物中8种成分的含量.
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LC-MS/MS法同时测定复方鹿角颗粒中13种成分的含量
目的:建立液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS法)同时测定复方鹿角颗粒中13种主要成分(补骨脂素、异补骨脂素、马钱苷、淫羊藿苷、柚皮苷、橙皮苷、朝藿定C、宝藿苷Ⅰ、朝藿定A、朝藿定B、红景天苷、特女贞苷、淫羊藿次苷Ⅱ)的含量.方法:采用Phenomenex Luna-C18色谱柱(2.0 mm×100 mm,5μm),流动相A为0.1％甲酸水溶液,流动相B为90％乙腈水溶液,洗针液为50％甲醇水溶液,梯度洗脱(0～6 min,10％B→40％B;6～9 min,40％ B→80％B;9～10 min,80％B →90％B;10～12 min,90％ B;12 ～ 12.01 min,90％ B→10％B;12.01 ～ 13 min,10％ B),流速0.8 mL·min-,柱温40℃;采用电喷雾离子源(ESI),多反应监测(MRM),结合正负离子扫描切换,其中补骨脂素、异补骨脂素、马钱苷、淫羊藿苷、柚皮苷、橙皮苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、宝藿苷Ⅰ采用正离子模式检测,红景天苷、特女贞苷、淫羊藿次苷Ⅱ采用负离子模式检测.结果:复方鹿角颗粒中13种有效成分在13 min内达到基线分离,补骨脂素、异补骨脂素、马钱苷、淫羊藿苷、柚皮苷、橙皮苷、朝藿定C、宝藿苷Ⅰ、朝藿定A、朝藿定B、红景天苷、特女贞苷、淫羊藿次苷Ⅱ的线性范围分别为5.00～ 250、10.0 ～ 300、10.0 ～300、50.0 ～500、1.00 ～ 150、50.0 ～ 500、50.0 ～ 500、1.00～ 150、10.0 ～300、5.00 ～ 250、10.0～ 300、20.0 ～ 400、1.00～150 ng· mL-1,相应的线性范围内呈良好的线性关系(r＞0.99);检出限分别为1.20、2.25、1.15、11.5、0.250、12.5、11.7、0.250、1.00、1.25、2.15、4.50、0.200 ng·mL-;日内和日间精密度RSD均小于5％,平均加样回收率均在86.6％～ 105.6％范围内,RSD均小于4.8％.11批样品中上述13种成分的含量依次为1.75～2.02、2.13 ～2.59、3.78 ～4.19、14.0～15.5、0.756 ～0.800、13.6～15.2、13.3～14.6、0.376 ～0.412、3.73 ～4.09、1.83 ～2.04、3.85 ～4.35、6.73 ～7.65、0.550～0.629 mg·g-1.结论:经方法学验证,本方法简单、快速、灵敏,重复性好,可以用于复方鹿角颗粒中13个成分的含量测定.通过对11个批次的复方鹿角颗粒进行分析测定,结果显示各个批次含量无明显差别,可为该复方颗粒的质量控制提供依据.
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HPLC同时测定补肾益寿片中朝藿定A、B、C和淫羊藿苷的含量
目的:建立高效液相色谱法同时测定补肾益寿片中朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C和淫羊藿苷的含量.方法:采用Elite Kromasil C18(4.6 mm×250mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈(A)-水(B),梯度洗脱(0～24 min,25％ A→27％A;24 ～ 30 min,27％ A→100％A),流速1 mL· min-1,检测波长270 nm,柱温20℃.结果:朝藿定A进样量在0.096 ～0.768 μg,朝藿定B在0.200 ～ 1.60 μg,朝藿定C在0.276 ～2.21 μg,淫羊藿苷在0.416～3.33 μg范围内呈良好线性关系;相关系数分别为0.9991,0.9986,1.0000,0.9997.朝藿定A、朝藿定B、朝藿定℃和淫羊藿苷的平均回收率(n=5)分别为97.8％,99.5％,99.2％,100.2％;RSD分别为2.4％,3.9％,3.1％,3.5％.结论:本文方法可作为补肾益寿片中多指标成分检测的方法,为补肾益寿片的质量控制提供依据.
