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卡波姆对淫羊藿总黄酮酶解效果的影响
目的:考察生物黏附剂卡波姆对淫羊藿总黄酮酶解效果的影响.方法:将淫羊藿总黄酮与卡波姆混合,加入蜗牛酶酶解,采用HPLC测定酶解液中朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C和淫羊藿苷等主要黄酮成分及箭藿苷A、箭藿苷B、鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ、宝藿苷Ⅰ和淫羊藿苷元等主要酶解产物的含量变化,并与未加入卡波姆时淫羊藿总黄酮的酶解过程比较.结果:在37℃,含1％卡波姆的缓冲溶液中,淫羊藿总黄酮中朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C和淫羊藿苷的酶解速率变慢,约需4h才能完全酶解转化成次级苷,所需时间为无卡波姆时的2倍;酶解液中宝藿苷Ⅰ质量浓度始终高于未加卡波姆时的,高量48.43 mg·L-,6h时趋于稳定时12.99 mg·L-1,高量和稳定量分别为未加卡波姆酶解时的2.2,7.2倍;2～6 h内箭藿苷A和鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ质量浓度都略高于未加卡波姆时的;之后次级苷被继续水解生成苷元,且苷元生成速率基本相同,约7.60mg·L-1·h-1.结论:卡波姆会减缓淫羊藿总黄酮的酶解速率,促进次级苷的生成,对苷元的生成基本无影响.
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蜗牛酶转化人参皂苷Rb1制备人参稀有皂苷Compound K的研究
目的:确定蜗牛酶转化人参皂苷Rb1制备人参稀有皂苷Compound K(CK)的主要因素,并优选出转化效率高、稳定、适合工业化生产的工艺条件.方法:采用蜗牛酶水解人参皂苷Rb1制备人参稀有皂苷CK,以转化率为指标,通过单因素考察pH值、温度、底物浓度、酶用量、反应时间对转化率的影响,并通过响应面法试验优化制备工艺;采用MS,1H-NMR,13C-NMR鉴定酶解产物.结果:酶解反应的优条件为温度55℃、pH值5.5醋酸-醋酸钠缓冲液,底物浓度1.0mg/mL,酶与底物质量比1:1,反应时间36h,在此条件下的转化率为86.91％;经核磁图谱证实产物为人参稀有皂苷CK.结论:蜗牛酶水解人参皂苷Rb1制备人参稀有皂苷CK反应条件温和,工艺简单可靠,适合工业化生产.
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酶解法转化人参皂苷Rh_1及其含量测定
目的:采用酶解法水解原人参皂苷三醇组获得次级皂苷20(S)-Rh_1,为大量制备稀有皂苷20(S)-Rh_1提供理论依据.方法:采用AB-8大孔树脂法分离人参茎叶总皂苷提取物,得到原人参皂苷三醇组总皂苷(主要含Rg_1和Re).利用蜗牛酶水解原人参皂苷三醇组,得到次级人参皂苷20(S)-Rh_1.建立高效液相色谱分析方法对其进行转化率测定.色谱条件:YMC C_(18)柱(4.6 mm×150 mm,5μm);柱温25℃;检测波长203 nm;流速1 mL·min~(-1);流动相乙腈(A)-水(B)梯度洗脱,0～29 min,19%～26%A;29～30 min,26%～30%A;30～55min,30%～38%A;55～60 min,38%～400%A.结果:采用AB-8大孔树脂可以获得高纯度的原人参皂苷三醇组.酶解平均转化率为36.7%,高效液相色谱法可靠、稳定.结论:本方法可以高效率的获得次级皂苷20(S)-Rh_1.进而拓展了稀有皂苷20(S)-Rh_1的制备来源.
关键词： 人参皂苷 蜗牛酶 人参皂苷20(S)-Rh_1 高效液相色谱 -
淫羊藿总黄酮的生物转化过程分析
该文旨在研究淫羊藿总黄酮在体外水解酶作用下的生物转化过程.主要采用蜗牛酶水解淫羊藿总黄酮,用HPLC测定总黄酮中主要黄酮的转化.数据结果显示已知主要黄酮成分淫羊藿苷,朝藿定A,朝藿定B,朝藿定C都在1～2h内分别完全转化为宝藿苷Ⅰ,箭藿苷A,箭藿苷B和鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ,随着水解时间的延长,各转化产物被继续水解.因此可得出结论,蜗牛酶在37℃,pH 6.0的Hank's平衡盐溶液中,2h内能将淫羊藿主要总黄酮转化为次级苷或苷元,且其酶解产物与肠道代谢产物相一致.
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蜗牛酶转化淫羊藿苷制备淫羊藿苷元的研究
目的:研究淫羊藿苷元(IT)的制备工艺.方法:采用蜗牛酶水解淫羊藿苷制备IT,以转化率为指标,通过单因素考察pH、温度、底物的浓度、酶用量、反应时间及金属离子对转化率的影响,正交试验优化制备工艺;采用MS,~1H-NMR,~(13)CNMR鉴定水解产物.结果:酶解反应的适条件为温度37℃、反应介质pH 6.0醋酸-醋酸钠缓冲液,底物质量浓度为10 g·L~(-1),酶与底物比为1:1,反应时间48 h,Na~+,Ca~(2+),Mg~(2+)和Zn~(2+)对酶解反应无显著影响,Fe~(2+)对酶解反应有抑制作用(P<0.01);反应产物相对分子质量为368,核磁图谱证实产物为IT.结论:蜗牛酶水解淫羊藿苷制备IT反应条件温和,工艺简单可靠,适合工业化生产.
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响应面法优化纳米二氧化硅固体分散技术辅助酶解制备染料木素
本研究旨在使用纳米二氧化硅固体分散技术,提高酶解制各染料木素的效率.首先采用溶剂法制备染料木苷-纳米二氧化硅固体分散体,利用差示扫描量热法和扫描电镜对固体分散体进行验证,再利用蜗牛酶将其水解从而制备染料木素.以染料木素转化率为指标,通过单因素试验分别考察染料木苷及其固体分散体在酶解过程中不同的影响因素,再利用响应面法优化染料木苷固体分散体酶解制备染料木素的工艺.染料木苷-纳米二氧化硅固体分散体酶解反应佳条件:反应介质pH 7.1、温度为52.2℃、加酶量5.0 mg·mL-1、反应时间为7h.在此条件下,转化率为(93.47±2.40)％,比未经形成固体分散体的染料木苷转化速率提高了2.62倍.对水解产物进行纯化得到单体染料木素.采用蜗牛酶水解染料木苷-纳米二氧化硅固体分散体制备染料木索,方法简单,酶解时间显著缩短,适用于规模化生产.
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酶解法转化染料木苷包合物制备染料木素的研究
目的 采用酶解法水解染料木苷-羟丙基-β-环糊精包合物制备染料木素.方法 运用饱和水溶液法制备染料木苷-羟丙基-β-环糊精包合物,再利用蜗牛酶将其水解从而获得染料木素.以染料木素转化率为指标,通过单因素实验分别考察染料木苷包合物和染料木苷酶解过程中不同的影响因素,确定佳的酶解条件.采用差示扫描量热法对包合物进行验证.建立高效液相色谱分析方法,比较酶解染料木苷包合物和染料木苷的转化率.采用1 H-NMR,13C-NMR鉴定水解产物.结果 染料木苷-羟丙基-β-环糊精包合物酶解反应适条件为反应介质pH5.0,温度为50℃,酶与底物的用量比为4:5,反应时间为12 h,在此条件下,包合物的转化率为(90.17±2.40)％,比未经包含的染料木苷转化率高了0.95倍.结论 蜗牛酶水解染料木苷-羟丙基-β-环糊精包合物制备染料木素,方法简单,酶解时间显著缩短,适用于工业化生产.
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淫羊藿总黄酮仿生酶解肠溶胶囊的制备及评价
目的 以淫羊藿总黄酮为模型药物,蜗牛酶为水解酶,加入制剂辅料制备可实时酶解、实时吸收的淫羊藿总黄酮仿生酶解肠溶胶囊,对其处方工艺进行优化和评价.方法 以淫羊藿总黄酮释放度为评价指标,采用UV法和单因素实验筛选制备淫羊藿总黄酮仿生酶解肠溶胶囊所需的填充剂种类、用量,崩解剂种类、用量及润湿剂种类等关键因素,并采用响应面法优化其制剂处方,同时采用HPLC法对肠溶胶囊中4种主要黄酮苷(淫羊藿苷及朝藿定A、B、C)的酶解过程进行考察.结果 淫羊藿总黄酮仿生酶解肠溶胶囊的优处方为淫羊藿总黄酮提取物100 mg,蜗牛酶68 mg,α-乳糖65 mg,低取代羟丙纤维素11.7 mg,该制剂在人工肠液中45 min内的总黄酮累积释放率可达85.43％,同时能够在肠道排空时间内(3～6h)酶解完全.结论 所制备的淫羊藿总黄酮仿生酶解肠溶胶囊有利于促进淫羊藿总黄酮在体内的水解转化,为研发高效的淫羊藿总黄酮新制剂提供研究基础.
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蜗牛酶中一种β-葡萄糖苷酶的纯化及酶学性质的研究
通过DEAE-Sepharose离子交换层析和Sephadex G-100凝胶过滤层析的联用从中华白玉蜗牛消化酶中分离出1种具有人参皂苷Rb_1水解活性的β-葡萄糖苷酶.纯化后该酶在SDS-PAGE上呈单一蛋白质条带.反应适pH为5.6,适温度是80 ℃.pH稳定范围很广,在pH为4.0～11.0的溶液中和温度60 ℃以下保持长时间稳定状态,是一个耐碱和中等耐热的糖苷酶.Na~+、K~+、Li~+、Ca~(2+)、Mg~(2+)、EDTA、DTT和SDS不影响该酶活性,而Cu~(2+)、Ag~+和Fe~(3+)对该酶则具有明显的抑制作用.pNPG为底物的动力学参数Km和Vmax分别为0.182 mmol/L和0.189 μmol/(min·mg).
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一种源于蜗牛的壳聚糖水解酶的纯化和定性
目的 研究属于蜗牛的壳聚糖水解酶的纯化方法,得到壳聚糖水解酶的纯品,从而为氨基酸序列分析、基因克隆及工业菌制备奠定前期基础.方法 建立检测蜗牛壳聚糖水解酶活性的手段并考察影响酶活性的各种因素,比较现有层析方法纯化蜗牛壳聚糖水解酶的实际效果,确定纯化的佳条件,从而设计出合理的纯化方案.结果 经苯基琼脂糖柱层析,DEAE-Sepharose离子交换层析和Sephacryl S-300凝胶过滤分离,得到高纯高活性蛋白质,在SDS-PAGE上用银染的方法呈单一蛋白质条带,比活性提高33.333倍,纯化倍数为18.272,得率为0.15.结论 实验建立了1种从蜗牛中分离高效高纯度壳聚糖水解酶的方法,为壳寡糖的酶解工业生产提供了新思路、新方法.
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对一种源于蜗牛的壳聚糖水解酶的不同纯化方法的选择
目的 研究源于蜗牛的壳聚糖水解酶的纯化方法,得到壳聚糖水解酶的纯品,从而为氨基酸序列分析、基因克隆及工业茵制备奠定前期基础.方法 对比疏水作用层析、离子交换层析、羟基磷灰石柱(HA)层析、凝胶过滤层析等方法纯化蜗牛酶的实际效果,确定纯化的佳条件,从而设计出合理的纯化方案.结果 分别用苯基琼脂糖柱层析,DEAE-Sepharose离子交换层析,羟基磷灰石柱层析,Sephacryl S-300凝胶过滤层析分离蜗牛酶,终确定为用弱阴离子交换填料DEAD-Sepharose,疏水作用层析,凝胶过滤层析进行分离.结论 本文探讨了蜗牛酶的不同纯化方法,建立了一种从蜗牛酶中分离高效高纯度壳聚糖水解酶的方法,为壳寡糖的酶解工业生产提供了新方法.
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糊精湿法制粒对淫羊藿总黄酮酶解的影响
目的 研究制粒因素对淫羊藿总黄酮酶解的影响.方法 将蜗牛酶、淫羊藿总黄酮和糊精混合经湿法制粒制成含酶淫羊藿总黄酮颗粒,HPLC法测定其酶解过程中淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、和朝藿定C以及酶解产物(宝藿苷Ⅰ、箭藿苷A、箭藿苷B、鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ和淫羊藿苷元)的含有量变化.结果 与未经制粒的淫羊藿总黄酮粉末酶解相比,经糊精湿法制粒得到的含酶淫羊藿总黄酮颗粒在37℃缓冲溶液中酶解时淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B和朝藿定C的酶解速率变慢,但在肠道排空时间(4～6h)内可以完全酶解转化成次级苷宝藿苷Ⅰ、箭藿苷A、箭藿苷B和鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ,次级苷继续被水解可生成淫羊藿苷元.结论 糊精湿法制粒对淫羊藿总黄酮的酶解转化有一定影响.
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马钱苷的酶解工艺及其产物的降血糖活性
利用蜗牛酶对马钱苷(1)进行水解,并考察水解产物的降血糖活性.以水解得率为指标,考察加入酶量、反应温度、反应时间3个主要因素对工艺的影响,结果确定较合适的工艺条件:蜗牛酶与1的质量比1∶1,反应温度37℃,反应时间6h.通过理化性质、纯度检验及LC-MS鉴定确定水解产物即为马钱苷元(2).采用链脲佐菌素诱导糖尿病模型考察2的降血糖活性,结果显示,连续给药4周后,2中、高剂量组小鼠血糖分别下降了46.45％和52.39％,与二甲双胍效果相当.
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仿生酶解肠溶胶囊提高淫羊藿总黄酮口服生物利用度的可行性研究
基于淫羊藿黄酮苷的肠道水解代谢规律和骨质疏松病理状态下的肠道吸收特征,制备了添加有少量外源性水解酶(蜗牛酶)的仿生酶解肠溶胶囊,探索该胶囊提高淫羊藿总黄酮口服生物利用度的可行性.建立了骨质疏松大鼠模型,再分别灌胃给予淫羊藿总黄酮提取物及其仿生酶解肠溶胶囊(以淫羊藿总黄酮计剂量为500 mg/kg).采用HPLC法测定淫羊藿总黄酮提取物中原型苷(朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷)及其代谢产物(箭藿苷A、箭藿苷B、2”-O-鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ、宝藿苷Ⅰ、淫羊藿苷元)的血药浓度,绘制药-时曲线.结果显示,各原型苷及代谢产物在骨质疏松模型大鼠体内的药-时曲线均呈双峰现象.计算了各原型苷及代谢产物的药动学参数,并对其进行整合和比较.结果表明,淫羊藿总黄酮仿生酶解肠溶胶囊的AUC0→t显著提高(P＜0.01),但其他药动学参数未见明显变化.
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罗布麻花中异槲皮素的蜗牛酶提取工艺研究
目的 研究罗布麻花中异槲皮素的提取工艺.方法 以蜗牛酶提取作为提取方法,高效液相色谱法测定异槲皮素含量为指标,通过正交实验,考察蜗牛酶用量、酶解温度、酶解时间和酶解pH值等对提取效果的影响.结果 罗布麻花中异槲皮素的佳提取工艺为酶解温度为60℃,酶用量为0.2 mg/ml,酶解时间为1 h,酶解pH值为5.0,测得异槲皮素含量为4.0585%.结论 酶法提取具有反应温和.设备简单的特点,提取过程节能环保,并且减少对提取物的氧化,适合中药材的大量提取.
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蜗牛酶辅助降解茯苓多糖工艺优化研究
目的:优选蜗牛酶降解茯苓多糖的反应条件.方法:以茯苓多糖酶解得率为指标,采用单因素试验针对影响茯苓酶解的pH、加酶率、固液比、反应温度、反应时间等5个主要因素分别加以研究,并利用正交试验进行优化.结果:优选茯苓多糖的降解条件为:pH=6,加酶率1.8％,固液比1:20,酶解温度40℃,酶解时间5h.结论:在该优选条件下,茯苓多糖降解率为40.2％,证实蜗牛酶可有效降解茯苓多糖,提高茯苓多糖的水溶性,与传统的水提醇沉法比较,得率提高65％以上.
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蜗牛酶促毛蕊异黄酮苷转化成毛蕊异黄酮的条件研究
目的：探讨蜗牛酶酶解毛蕊异黄酮苷转化生成毛蕊异黄酮的佳转化条件和方法。方法采用恒温摇床，将蜗牛酶溶于合适温度的水中，加入用DMSO溶解的苷，边加边搅拌，加完后反应30 min，后用乙腈终止反应。通过反复重结晶得到所需要的苷元。结果佳转化条件为，当蜗牛酶与毛蕊异黄酮苷的比例为1：2时，加入200 mL的保温35~37℃水中，待蜗牛酶溶解均匀后，再加入毛蕊异黄酮苷（溶于1 mL的DMSO中），pH维持5~8，孵化0.5 h后，用乙腈等量终止反应。结论该法能有效使毛蕊异黄酮苷转化为纯度大于98%的毛蕊异黄酮，方法简单，易于操作。
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蜗牛酶降解壳聚糖制备壳寡糖的研究
目的 研究筛选蜗牛酶降解壳聚糖的佳反应条件.方法 采用正交试验法,以降解产物中寡糖的量和糖收率为指标,考察温度、酶浓度、pH对蜗牛酶降解壳聚糖的影响,筛选佳反应条件;采用SDS-PAGE检测降解产物,用改良Schales法测定还原糖的含量并计算寡糖的收率.结果 蜗牛酶降解壳聚糖的佳反应条件为:pH4、40℃、酶底比为8:100.佳条件下的寡糖收率为64.74%,产物主要是聚合度为4以上的寡糖.结论 在佳反应条件下,蜗牛酶能较好地降解壳聚糖.
