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HPLC测定千斤拔染料木苷及染料木素含量
目的 采用HPLC测定千斤拔染料木苷、染料木素含量.方法 色谱柱为PrepChrom C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈(A)-0.5％冰醋酸(B),梯度洗脱;流速1 ml/min;检测波长261 mn;柱温25℃;进样量10μl.结果 染料木苷和染料木素线性关系均较好,r均为0.9999,RSD分别为1.77％、1.16％,不同产地千斤拔染料木苷和染料木素含量有差异,广西阳朔地区的染料木苷含量高(0.575 mg/g),广西富州地区的染料木素含量高(0.264 mg/g).结论 所建立方法重现性和稳定性好,不同产地千斤拔药材中染料木苷和染料木素含量有一定差异,尤以广西地区的含量较高.
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染料木苷对3T3-L1脂肪细胞分化以及AMPK磷酸化的影响
目的 观察染料木苷(Genistin,GIN)对 3T3-L1 前脂肪细胞细胞分化以及分化过程中腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)磷酸化程度的影响.方法 用激素鸡尾酒法诱导 3T3-L1 前脂肪细胞分化,用MTT法观察GIN 对细胞生存率的影响,以油红O染色法镜下观察3T3-L1前脂肪细胞分化的情况,并通过比色分析法检测GIN对细胞内脂滴堆积量的影响;用 Western blotting方法分别检测对照组和给药组细胞分化过程中细胞中AMPK,P-AMPK(Thr172)蛋白表达量,借以计算AMPK磷酸化比率.结果 分化诱导后,对照组脂肪细胞呈典型的成熟脂肪细胞表型,形成"戒指环"结构,经100 μM GIN干预后,脂滴数量减少,体积减小,通过比色分析法量化后显示100 μM GIN可减少胞内脂质的堆积(P＜0.05).与对照组相比,给药组从第4天开始上调p-AMPK(Thr172)/AMPK 比率,并持续到第10天(P＜0.05).结论 GIN可通过激活AMPK抑制3T3-L1脂肪细胞分化.
关键词： 染料木苷 3T3-L1前脂肪细胞 分化 腺苷酸活化蛋白激酶 -
大豆黄卷质量控制方法研究
目的:建立大豆黄卷质量标准.方法:采用薄层色谱法,以亮氨酸、染料木苷作为对照品,对大豆黄卷进行定性鉴别；采用高效液相色谱法对大豆黄卷中大豆苷和染料木苷进行含量测定:采用C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-1％乙酸溶液为流动相,进行梯度洗脱,检测波长260 nm,流速1 mL· min-1.结果:薄层色谱中斑点清晰,重复性好；大豆苷在0.042 1 ～1.011 μg呈良好的线性关系,染料木苷在0.041 3 ～0.991 μg线性关系良好.结论:所建立的方法简便快速、准确度好,可作为大豆黄卷的质量控制方法.
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HPLC同时测定不同产地葛根中6种主要异黄酮类成分的含量
目的:建立同时测定葛根药材中6种主要异黄酮类成分含量的HPLC方法.方法:采用RP-HPLC法,Kromasil C18(4.6 mm×250 mm,5μm)柱；流动相:甲醇-0.1％枸橼酸溶液,梯度洗脱；流速1.0 mL· min-1,柱温30℃,检测波长250 nm.结果:3’-羟基葛根素、葛根素、大豆苷、染料木苷、芒柄花苷、大豆苷元的线性范围分别为76.2～1 016,65.8 ～1 316,85.6 ～1712,49.98 ～499.8,21.94 ～219.4,48.5 ～485 ng,相关系数(R2)均大于0.999 6,6种成分的平均加样回收率分别为99.73％(RSD 0.6％),100.48％ (RSD 1.11％),100.37％ (RSD 0.79％),100.28％(RSD 1.07％),99.96％ (RSD 1.22％),97.36％(RSD 1.59％).结论:方法简便快速,重复性良好,结果准确可靠,可用于葛根药材中6种主要异黄酮类成分的含量测定.
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星点设计效应面法优化染料木苷的酶解工艺
目的:优选染料木苷的酶解工艺.方法:利用超微粉碎技术过筛制备不同粒径的染料木苷原料,采用纤维素酶将其水解,制备染料木素.以染料木素转化率为指标,通过单因素试验考察粉酶解时间、温度、粒径及pH对酶解工艺的影响,响应面法优化染料木苷超微粉酶解制备染料木素的工艺.结果:染料木苷超微粉酶解反应佳条件为反应介质pH5.5乙酸-乙酸钠缓冲液,温度49℃,反应时间11h,酶与底物比1∶1.转化率(96.47 ±1.12)％,比普通粉染料木苷转化率高了1.84倍.结论:采用纤维素酶水解染料木苷超微粉制备染料木素的方法简单、酶解时间显著缩短,适用于规模化生产.
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大豆异黄酮中共存成分对染料木素溶解度及渗透性的影响
目的:考察染料木素的平衡溶解度和大鼠在体肠吸收特性以及大豆苷、染料木苷和大豆苷元的影响.方法:参照《中华人民共和国药典》中溶解度的测定方法和大鼠在体肠吸收模型研究不同质量浓度染料木素的溶解吸收特性并考察上述3种成分的影响.结果:染料木素在K-R试液(pH值为7.4)的溶解度为29.27mg/L,3种同用成分均会对其溶解产生抑制作用.在质量浓度0.60-21.30mg/L范围内染料木素在大鼠肠道内均有良好的吸收且不具有浓度依赖.染料木苷、大豆苷和大豆苷元对染料木素吸收不会产生影响.结论:染料木素属于低溶解度药物但拥有良好的渗透能力,吸收机制为被动转运.同服的大豆异黄酮中其他成分会对染料木素的溶解度产生影响但不会对其吸收产生作用.
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HPLC同时测定槐角丸中生药槐角的4种有效成分
目的:建立测定槐角丸中游离染料木苷、芸香苷、槲皮素和染料木素的反相高效液色谱测定法.方法:shim-pack Vp-ODS色谱柱(4.6mm×150mm,5 μm);MeOH-H2O-HAc(40:60:0.25)为流动相;检测波长为256 nm;柱温30℃.结果:染料木苷在0.059～0.352μg、芸香苷在0.435～2.610μg、槲皮素在0.020～0.121μg、染料木素在0.053～0.319μg线性关系良好,r分别为0.999 6,0.998 2,0.998 9,0.999 9,4组分平均回收率在98.7%～100.2%,RSD分别为1.21%,1.36%,0.47%,1.54%(n=5).结论:该方法同时测定4种有效成分,方便、准确、灵敏度高,重复性好,可适用于槐角丸质控.
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高效液相色谱-质谱联用分析鉴别葛根的异黄酮成分
葛根为豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd.)Ohwi的干燥根茎,为常用中药,有解肌退热、生津、透疹、升阳止泻的功能;异黄酮类和多酚类是其主要化学成分,已发现的异黄酮类成分有:大豆苷元-4′,7-二葡萄糖苷、3′-羟基葛根素(PG-1)、3′-甲氧基葛根素(PG-3)、3′-羟基葛根素4′-D-脱氧己糖苷、3′-甲氧基葛根素木糖苷、3′-甲氧基大豆苷元、大豆苷元-7-O-甲醚、3′-甲氧基大豆苷元-7-O-甲醚、3′-甲氧基刺芒柄花素、3′-甲氧基大豆苷、鹰嘴豆芽素A、葛根素、葛根素-7-木糖苷、葛根素木糖苷(PG-2)、葛根素-4′-D-β-D-葡萄糖苷(PG-6)、大豆苷、大豆苷元、刺芒柄花素-7-O-β-D-葡萄糖苷、刺芒柄花素、大豆苷元名-8-C-芹糖基(1→6)-葡萄糖苷、染料木素-8-C-芹糖基(1→6)-葡萄糖苷、染料木苷、金雀异黄素、染料木素-8-C-葡萄糖苷、6″-O-丙二酸单酰大豆苷、3′-羟基-4′-O-β-D-葡萄糖基葛根素.本研究采用高效液相色谱-质谱联用技术对野葛的异黄酮类成分进行鉴别分析.
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染料木苷药理作用的研究进展
染料木苷是大豆异黄酮的有效成分之一,结构上属于植物雌激素.目前,关于染料木苷的药理学活性研究已有较多报道,但对其药理学活性的总结与展望尚显不足.本文综述了其改善女性更年期综合征、抗肿瘤、改善心肌缺血、调节代谢综合征、抗炎和细胞保护等药理活性,以期为染料木苷和其他异黄酮类化合物的研究和应用提供理论依据和借鉴.
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响应面法优化纳米二氧化硅固体分散技术辅助酶解制备染料木素
本研究旨在使用纳米二氧化硅固体分散技术,提高酶解制各染料木素的效率.首先采用溶剂法制备染料木苷-纳米二氧化硅固体分散体,利用差示扫描量热法和扫描电镜对固体分散体进行验证,再利用蜗牛酶将其水解从而制备染料木素.以染料木素转化率为指标,通过单因素试验分别考察染料木苷及其固体分散体在酶解过程中不同的影响因素,再利用响应面法优化染料木苷固体分散体酶解制备染料木素的工艺.染料木苷-纳米二氧化硅固体分散体酶解反应佳条件:反应介质pH 7.1、温度为52.2℃、加酶量5.0 mg·mL-1、反应时间为7h.在此条件下,转化率为(93.47±2.40)％,比未经形成固体分散体的染料木苷转化速率提高了2.62倍.对水解产物进行纯化得到单体染料木素.采用蜗牛酶水解染料木苷-纳米二氧化硅固体分散体制备染料木索,方法简单,酶解时间显著缩短,适用于规模化生产.
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酶解法转化染料木苷包合物制备染料木素的研究
目的 采用酶解法水解染料木苷-羟丙基-β-环糊精包合物制备染料木素.方法 运用饱和水溶液法制备染料木苷-羟丙基-β-环糊精包合物,再利用蜗牛酶将其水解从而获得染料木素.以染料木素转化率为指标,通过单因素实验分别考察染料木苷包合物和染料木苷酶解过程中不同的影响因素,确定佳的酶解条件.采用差示扫描量热法对包合物进行验证.建立高效液相色谱分析方法,比较酶解染料木苷包合物和染料木苷的转化率.采用1 H-NMR,13C-NMR鉴定水解产物.结果 染料木苷-羟丙基-β-环糊精包合物酶解反应适条件为反应介质pH5.0,温度为50℃,酶与底物的用量比为4:5,反应时间为12 h,在此条件下,包合物的转化率为(90.17±2.40)％,比未经包含的染料木苷转化率高了0.95倍.结论 蜗牛酶水解染料木苷-羟丙基-β-环糊精包合物制备染料木素,方法简单,酶解时间显著缩短,适用于工业化生产.
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染料木苷在大鼠肝微粒体中的代谢及酶促反应动力学研究
目的 建立HPLC-MS法,初步鉴定染料木苷在大鼠肝微粒体中的代谢产物,并研究其酶促反应动力学.方法 建立大鼠肝微粒体体外孵育体系对染料木苷进行代谢研究,应用HPLC-MS鉴定其体外代谢产物.以磺胺甲(噁)唑为内标,采用代谢物生成法,对代谢产物染料木素进行定量测定.应用GraphPad Prism 5.0软件分析数据,计算酶促反应动力学常数Vmax和Km.结果 染料木苷在体外孵育体系中生成代谢产物,经鉴定其为苷元染料木素.染料木苷在大鼠肝微粒体中佳温孵时间为40 min,佳蛋白质量浓度为1 mg·mL-1,底物浓度为50 μmol·L-1,代谢产物染料木素酶促反应的Vmax=(0.1042±0.003 3)μmol·min-1·mg(pro)-1,Km=(28.96±2.80) μmol·L-1.结论 染料木苷在大鼠肝微粒体中通过水解反应,生成相应苷元.代谢物生成法是一种可靠、简便测定肝微粒体酶促反应动力学参数的方法,所得到的酶促反应动力学参数为染料木苷进一步研究提供了重要参数.
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胡枝子化学成分的研究I
目的对胡枝子(LespedezabicolorTurcz.)根中保肝活性部位的化学成分进行研究.方法利用溶剂提取、硅胶柱色谱和聚酰胺色谱等进行分离,根据化合物理化性质和光谱数据鉴定其结构.结果分得4个化合物,鉴定为1,3,5-三甲氧基苯(1,3,5-trimethoxybenzene,I)、染料木苷(genistin,Ⅱ),tachioside(Ⅲ),芦丁(rutin,Ⅳ).结论化合物I,Ⅲ为首次从该属植物中分得;化合物Ⅱ,Ⅳ为首次从该植物中分得.
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高效液相色谱(HPLC)法对豆类及豆制品中黄豆苷、黄豆苷元、染料木苷和染料木黄酮的定量分析
流行病学调查发现，日本人的乳腺癌、前列腺癌的患病率低于欧美人，其原因之一是与所摄取的食品种类有关。特别是大豆类食品的食入量与乳腺癌、前列腺癌疾患呈负相关。有很多报告认为是与大豆类食品中所含的异黄酮类如：黄豆苷、黄豆苷元、染料木苷、染料木黄酮的含量关系密切。 本文作者应用高效液相色谱(HPLC)梯度淋洗法对黄豆及豆制品中异黄酮β-糖苷轭合物(黄豆苷、染料木苷)和葡萄糖苷(黄豆苷元、染料木黄酮)进行定性和定量分析。
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西洋参DNA导入大豆实现遗传转化的研究Ⅱ.导入后代异黄酮类成分的含量测定
用高效液相色谱法测定了西洋参DNA导入大豆后代的异黄酮类成分、大豆苷(daidzin)、大豆黄素(daidzein)、染料木苷(genistin)、染料木素(genistein)的含量,采用Unisil Q C18柱,4.6 mm×250 mm,流动相乙腈-0.003 mol/L磷酸氢二钠(17∶83),流速1.0 mL/min,检测波长254 nm,结果表明,4种成分分离效果好,成分含量发生了广泛变异,从中可筛选出有效成分含量较高的新材料.
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响应面法优选葛根超微粉的制备工艺及活性成分测定研究
目的 建立葛根中8种主要黄酮类成分UPLC同时测定法,研究超微粉碎技术对葛根黄酮类成分含量的影响,确定葛根超微粉的生产工艺.方法 采用响应面设计方法对葛根粉碎技术中的粉碎时间、投药量和初始粒度3个因素进行考察,以粒径分布(D90、D50)和UPLC法测定的不同粒径葛根粉(10～40、40～65、300目)中8个黄酮类活性成分(3'-羟基葛根素、葛根素、3'-甲氧基葛根素、大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素和芒柄花素)的含量数据,共10个指标作为响应因子进行葛根超微粉碎技术评价研究.结果 葛根中8种黄酮类化合物分别在75.8～242.7、205.6～658.0、147.3～417.3、10.2～163.3、11.3～182.0、1.2～18.8、0.25～4.00、0.35～5.37 μg/mL与色谱峰峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为98.86％、99.25％、99.90％、100.17％、100.21％、101.40％、100.73％、101.42％,RSD均小于3.0％,UPLC同时测定结果显示,相较其他粒径葛根粉,葛根超微粉(300目)黄酮类含量更高.响应面法优选结果显示超微粉的佳工艺参数条件为在粒径为80目[(180.0±7.6)μm],通过5号筛时,投药量为247 g,粉碎时间为26 min.结论 响应面法优选的葛根超微粉碎工艺简便,准确度较高,得到的超微粉黄酮含量更高.该工艺可以为葛根超微粉碎技术提供参考.
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不同炮制方法对槐角黄酮类成分量的影响
目的 比较槐角不同炮制品中黄酮类成分的量.方法 采用HPLC法,Zorbax Eclipse Plus C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);柱温30℃;流动相为甲醇-0.4％冰乙酸水溶液,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;检测波长256 nm.结果 染料木苷:生品(0.86％)＞蜜炙(0.67％)＞炒炭(0.48％);芦丁:生品(3.0％)＞蜜炙(2.2％)＞炒炭(0.88％);槐角苷:生品(8.08％)＞蜜炙(5.73％)＞炒炭(3.58％);槲皮素:生品(0.04％)＜蜜炙(0.05％)＜炒炭(0.12％);染料木素:生品(0.06％)＜蜜炙(0.08％)＜炒炭(0.21％);山柰素:生品(0.01％)＜蜜炙(0.02％)＜炒炭(0.54％).结论 槐角饮片中黄酮类成分炮制后染料木苷等黄酮苷成分的量降低,苷元的量升高,可能是饮片功效不同的原因.
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HPLC法测定大豆异黄酮的不确定度评定
目的 对HPLC法测定大豆异黄酮中的大豆苷和染料木苷的测定不确定度进行分析,找出影响不确定度的因素.方法 采用HPLC法测定大豆苷和染料木苷,并根据<测量不确定度评定与表示>(JF1059-1999)中有关规定评估其不确定度.结果 不确定度评估大豆苷为±0.51%、染料木苷为±0.79%.结论 大豆苷不确定度各分量均较小,而染料木苷不确定度主要由对照品的稀释、样品及对照品的峰面积所引入.
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大豆中三羟异黄酮、二羟异黄酮提取鉴定
大豆异黄酮是存在于大豆中的一类非营养成分,主要包括三羟异黄酮(Genistein)和二羟异黄酮(Daidzein),它们在大豆中的存在形式主要是与糖苷配基结合形成的染料木苷(Genistin)和黄豆苷元(Daidzin),只有少量游离形式的三羟异黄酮和二羟异黄酮,结合形式的大豆异黄酮在酸水解或者细菌发酵作用下释放糖苷配基形成游离的Genstein和Daidzeino.
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大豆异黄酮与肝病
大豆异黄酮(soybean isoflavones)是大豆中重要的非营养成分,它主要包括染料木苷(genistin)、大豆苷(daidzin)和6甲基大豆苷(glicitin).大豆经加工、微生物发酵或体外酸水解作用后,释放出游离形式的三羟异黄酮(即金雀异黄酮,genistein)和二羟异黄酮(大豆苷原,daidzein),它们可被肠道有效吸收入血从而发挥作用,金雀异黄酮经反复肝肠循环后,大部分在肝内与葡萄糖醛酸结合,其余以硫酸脂等形式经肾排出.研究发现大豆异黄酮有许多功效,如改善妇女更年期综合征症状、防治老年人的骨质疏松、预防早期动脉粥样硬化、抗氧化作用及对多种肿瘤的抑癌作用[1].随着大豆异黄酮生物功效的研究进展,其与肝病的关系日益受到重视,本文就近年来它对各种肝病的作用做一综述.
