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3'-甲氧基葛根素对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用研究
目的:观察3'-甲氧基葛根素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的脑梗死体积、自由基变化的影响,探讨3'-甲氧基葛根素对脑缺血损伤的保护作用.方法:采用线栓法诱导大鼠大脑中动脉栓塞建立局灶性脑缺血再灌注模型,分假手术组、模型组、3'-甲氧基葛根素2个剂量组(5,10 mg·kg~(-1)·d~(-1))和尼莫地平组(5 mg·kg~(-1)·d~(-1)).观察行为学的改变,脑梗死体积和测定超氧化物歧化酶(SOD)活力及丙二醛(MDA)含量.结果:3'-甲氧基葛根素具有显著减轻神经功能缺损症状,减少梗死体积,显著提高脑缺血再灌注损伤大鼠脑皮质SOD活力和降低MDA含量,其中10 mg·kg~(-1)的3'-甲氧基葛根素作用尤为显著.结论:3'-甲氧基葛根素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有保护作用.
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3'-甲氧基葛根素对大鼠脑缺血保护作用研究
目的:探讨中药葛根提取物3'-甲氧基葛根素(3'-methoxy-pueranin,3'-mo-pue)的脑保护作用,为扩大葛根的应用范围提供实验依据.方法:将动物随机分为假手术组、模型组、葛根素(pueravin,Pue)组和3'-mo-pue 组,采用三氯化铁覆着大脑中动脉造成大鼠局灶性脑缺血模型(MCAO);采用大鼠双侧颈总动脉结扎造成脑缺血再灌模型;观察不同剂量(O.1,O.2,O.4 g·kg-1)的3'-mo-pue对脑缺血的影响.结果:3'-mo-pue可不同程度的降低MCAO模型大鼠神经行为学评分、脑梗死范围和脑含水量;显著提高脑缺血再灌模型大鼠缺血区海马过氧化氢酶(cAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性和皮层CAT活性;降低脑缺血再灌模型大鼠缺血区海马过氧化脂质(LPO)和乳酸(LD)的含量.结论:3'-mo-pue具有脑保护作用,其机制可能与其抗氧化作用有关.
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响应面法优选葛根超微粉的制备工艺及活性成分测定研究
目的 建立葛根中8种主要黄酮类成分UPLC同时测定法,研究超微粉碎技术对葛根黄酮类成分含量的影响,确定葛根超微粉的生产工艺.方法 采用响应面设计方法对葛根粉碎技术中的粉碎时间、投药量和初始粒度3个因素进行考察,以粒径分布(D90、D50)和UPLC法测定的不同粒径葛根粉(10～40、40～65、300目)中8个黄酮类活性成分(3'-羟基葛根素、葛根素、3'-甲氧基葛根素、大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素和芒柄花素)的含量数据,共10个指标作为响应因子进行葛根超微粉碎技术评价研究.结果 葛根中8种黄酮类化合物分别在75.8～242.7、205.6～658.0、147.3～417.3、10.2～163.3、11.3～182.0、1.2～18.8、0.25～4.00、0.35～5.37 μg/mL与色谱峰峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为98.86％、99.25％、99.90％、100.17％、100.21％、101.40％、100.73％、101.42％,RSD均小于3.0％,UPLC同时测定结果显示,相较其他粒径葛根粉,葛根超微粉(300目)黄酮类含量更高.响应面法优选结果显示超微粉的佳工艺参数条件为在粒径为80目[(180.0±7.6)μm],通过5号筛时,投药量为247 g,粉碎时间为26 min.结论 响应面法优选的葛根超微粉碎工艺简便,准确度较高,得到的超微粉黄酮含量更高.该工艺可以为葛根超微粉碎技术提供参考.
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HPLC法同时测定降糖舒胶囊中6种成分
目的 建立HPLC法同时测定降糖舒胶囊(刺五加、葛根、人参等)中6种成分的含有量.方法 该药物70％甲醇提取液的分析采用Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);以甲醇(A)-0.1％甲酸(B)为流动相,梯度洗脱;体积流量0.9 mL/min;柱温25℃;进样量10 μL.结果 3'-羟基葛根素、葛根素、3'-甲氧基葛根素、刺五加苷B、刺五加苷E、异嗪皮啶分别在9.66～193.20、15.94 ～ 318.80、12.32～ 246.40、3.36～67.20、3.15～63.00、2.18～43.60 μg/mL范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率97.31％～99.60％,RSD(n=6)均小于2.0％.结论 该方法可为降糖舒胶囊的质量评价提供科学依据.
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脑脉通有效部位中葛根异黄酮类成分的含量测定
目的:建立脑脉通有效部位中葛根异黄酮类成分的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法,流动相为甲醇-水-冰醋酸,梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为250 nm.结果:葛根素的平均加样回收率为100.89%,RSD=2.10%,芹糖基葛根素的平均加样回收率为100.23%,RSD=1.06%,3'-甲氧基葛根素的平均加样回收率为101.04%,RSD=1.92%,大豆苷的平均加样回收率为99.82%,RSD=2.02%,大豆苷元的平均加样回收率为102.06%,RSD=1.34%.结论:该方法操作简便、易行,可用于脑脉通中葛根异黄酮的含量测定.
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HPLC波长切换联合梯度洗脱法同时测定参苏宣肺丸中的6种成分
目的 建立HPLC波长切换联合梯度洗脱法同时测定参苏宣肺丸中咖啡酸、迷迭香酸、3'-羟基葛根素、葛根素、3’-甲氧基葛根素、大豆苷的含量.方法 采用ZOBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相A为甲醇-乙腈(1:1),流动相B为0.1％冰醋酸溶液,进行梯度洗脱;流速为1.0 mL·min-1;咖啡酸和迷迭香酸的检测波长为320 nm,3'-羟基葛根素、葛根素、3’-甲氧基葛根素和大豆苷的检测波长为250 nm;进样量为20 μL.结果 咖啡酸、迷迭香酸、3'-羟基葛根素、葛根素、3’-甲氧基葛根素、大豆苷的浓度与峰面积分别在2.32～46.40 μg·mL-1(r=0.999 8)、3.06～61.20 μg·mL-1(r＝0.999 5)、4.45～89.00 μg·mL-1(r=0.999 9)、14.48～289.60μg·mL-1(r＝o.999 9)、4.86～97.20 μg·mL 1(r=0.999 7)、3.69～73.80 μg·mL-1(r=0.999 6)内具有较好的线性关系,平均加样回收率和相应的RSD分别为99.0％(1.6％),97.5％(0.6％),99.3％(0.9％),98.6％(1.3％),97.6％(1.3％),97.0％(0.9％).结论 方法操作准确、简便,可用于参苏宣肺丸的质量控制.
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3'-甲氧基葛根素对大鼠局灶性脑缺血及血液流变学的影响
目的:探讨葛根成分3'-甲氧基葛根素(3'-methoxy-puerarin,3'-mo-pue)对脑缺血及血流变的影响.方法:将动物随机分为对照组、模型组、葛根素(puerarin,Pue)组和3'-mo-pue组,采用三氯化铁覆盖大脑中动脉造成大鼠局灶性脑缺血模型(MCAO),观察其对脑缺血的影响;采用皮下注射角叉菜胶10mg/kg造成体内血栓模型,进行血流变分析.结果:3'-mo-pue可显著降低MCAO模型大鼠脑梗死范围;明显降低体内血栓模型大鼠尾部血栓长度、全血粘度、血浆粘度、血小板聚集率,减少纤维蛋白含量.结论:3'-mo-pue具有脑保护作用,其机制可能与改善其血液流变学有关.
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不同产地粉葛四种异黄酮含量比较
目的：考察不同产地粉葛中葛根素、3＇－甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的含量，为制定粉葛药材质量标准提供参考依据。方法：采用 RP －HPLC 法，色谱柱 Hypersil C18色谱柱（4.6 mm ×250 mm，5μm）；流动相：乙腈－0.2％磷酸，梯度洗脱；流速1.0 ml ／min，柱温30℃，检测波长250 nm。结果：葛根素、3＇－甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的线性范围分别为12.4～620ng、1.52～76ng、2.4～120ng、3.28～164 ng，四种成分的平均加样回收率分别为101.1％、99.86％、101.78％、103.39％，RSD 分别为1.43％、1.29％、0.95％、1.21％。结论：该方法简便快速，重复性良好，结果准确可靠，可用于不同产地粉葛药材中四种异黄酮类成分的含量测定。
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葛根素注射剂杂质研究
目的 研究葛根素注射剂的杂质谱,并对杂质进行结构鉴定.方法 建立高效液相梯度洗脱法,分析11个厂家共12批次葛根素注射剂杂质谱,利用半制备高效液相对注射剂中的杂质进行分离并结合核磁技术进行杂质结构确认.结果 不同生产厂家及批次的葛根素注射剂杂质种类及含量差别明显,共分离并鉴定了注射剂中的5个杂质,分别为3'-羟基葛根素、3'-甲氧基葛根素、染料木素-8-葡萄糖苷、新葛根素B、新葛根素A,均为葛根素异构体或其衍生物.结论 采用此方法检出的杂质峰数目较现行方法多,且精密度高、重复性好.通过对葛根素注射剂杂质谱的研究,可以有目的地控制部分杂质,为质量控制研究提供参考.
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葛根芩连片特征图谱及含量测定方法研究
目的:建立葛根芩连片的特征图谱,并对葛根素和盐酸小檗碱进行定量研究.方法:采用HPLC法建立特征图谱和含量测定方法,并以液质联用对特征峰进行指认.采用TC-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),以甲醇为流动相A,以0.15％三氟乙酸溶液为流动相B,梯度洗脱(0～25 min,23％A→30％A;25 ～ 26 min,30％A→35％A;26 ～ 39 min,35％A→42％A;39～40 min,42％ A→45％A;40～55 min,45％A),流速1.0mL·min-1,检测波长250 nm(用于特征图谱建立和葛根素含量测定)、348 nm(用于盐酸小檗碱怾含量测定);采用电喷雾离子源进行正离子模式扫描,对葛根芩连片特征图谱中8个特征峰进行指认.结果:建立了以葛根素和小檗碱为参照峰的葛根芩连片HPLC特征图谱,并指认了葛根素、盐酸小檗碱、3'-羟基葛根素、3'-甲氧基葛根素、葛根素木糖苷、大豆苷、盐酸巴马汀和黄芩苷8个特征峰;葛根素含量在8.8～12.9 mg·片-1之间,盐酸小檗碱含量在2.5～7.0mg·片-1之间.结论:本法为葛根芩连片的质量控制提供了有效的技术方法;提出的以双标峰进行特征峰相对保留时间定位,为中药特征图谱评价系统提供新的思路.
