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刺五加抗疲劳活性部位中刺五加苷B的含量测定
目的:建立刺五加抗疲劳活性部位中刺五加苷B的含量测定方法.方法:用小鼠负重游泳实验,确定刺五加粗提物的抗疲劳活性部位;硅胶柱色谱,Sephadex LH-20柱色谱,制备液相色谱对活性部位分离纯化,并对分离所得化合物进行理化性质研究和结构鉴定;含量测定中高效液相色谱条件为Diamonsil C18柱(4.6 mm×250mm,5 μm),流动相乙腈-水-醋酸(10:90:0.01),流速1.0 mL·min-1,紫外检测波长344 nm.结果:从刺五加抗疲劳活性部位Asl中分离得到一化合物,鉴定为刺五加苷B;刺五加苷B的线性范围为0.104～20.8μg,r=0.999 9;平均回收率为97.68%,RSD 1.4%(n:6).结论:从刺五加抗疲劳活性部位As1中分离得到含量较高的刺五加苷B,作为质量控制的指标成分,并建立了刺五加抗疲劳活性部位中刺五加苷B含量测定方法.
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刺五加质量标准控制
目的：用大孔树脂分离纯化刺五加苷的2种主要成分作为控制刺五加药材质量的标准。方法用D-101大孔树脂对刺五加苷B、刺五加苷E进行分离纯化，用高效液相色谱法测定以上2个成分的含量，以此作为刺五加的质量标准。结果上样液浓度0.5 g· mL-1，吸附流速2 BV· h-1，30％乙醇的洗脱流速1 BV· h-1。透析袋处理。色谱柱：C18（4.6 mm ×250 mm，5μm）；检测波长220 nm；流动相：水-乙腈（0～10 min，90∶10；10～30 min，90～80∶10～20）；流速：1.0 mL· min-1；柱温25℃。结论该方法操作性强，重现性好，可作为刺五加药材质量控制的有效方法。
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烷基硫脲功能化硅胶脱除刺五加提取物中重金属的技术适应性研究
目的 研究烷基硫脲功能化硅胶(alkyl thiourea functionalised silica,ATFS)去除刺五加提取物(Acanthopanax senticosus extract,ASE)中重金属Pb、Cd、Hg、Cu的吸附规律和佳工艺.方法 以ASE(单方药材)模拟重金属元素Pb、Cd、Hg、Cu超标作为研究对象,通过静态吸附方式考察吸附剂用量、吸附时间、振荡频率和吸附温度对脱除率的影响,通过动态吸附方式考察径高比、上样量、洗脱体积流量和洗脱温度对脱除率的影响,分别通过正交试验优选动、静态佳吸附工艺;以ASE中指标成分刺五加苷B和刺五加苷E量、药液含固量和HPLC指纹图谱相似度作为考察指标,评价ASE脱除重金属前后化学成分的变化情况.结果 与空白硅胶比,ATFS静态吸附和动态吸附均具有较高的重金属脱除率,且静态吸附速度较快,佳静态吸附工艺条件:药材量与吸附剂量之比为80∶1,振荡频率为260次/min,吸附时间为600 min,吸附温度为45℃;佳动态吸附工艺条件:径高比为1∶20,上样量为100 mL,洗脱体积流量为3 BV/h,洗脱温度为15℃;重金属元素脱除前后刺五加中指标成分刺五加苷B和刺五加苷E变化率均小于2.00％;含固量损失率为0.18％;指纹图谱相似度达99.9％以上.结论 该方法可以满足选择性地高效脱除ASE中重金属元素,且对有效成分几乎无影响,操作简便、易行,可被推荐用于中药提取物中重金属元素超标时的前处理,为降低中药提取物中重金属元素量开辟了一条新的思路和研究方法.
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RP-HPLC法测定糙叶五加不同部位中刺五加苷B和E
目的 建立同时测定糙叶五加不同部位中的刺五加苷B和刺五加苷E的方法.方法 采用RP-HPLC法,色谱柱为Lichrom C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)柱,柱温35℃,0.1%磷酸水溶液-乙睛梯度洗脱(0→15 min,90:10;15→30 min,90:10→84:16),检测波长为220 nm,体积流量1.0 mL/min.结果 刺五加苷B的线性范围为14.4～72.0μg/mL(r=0.999 9),平均回收率为98.97%;刺五加苷E的线性范围37.4～187.0 μg/mL(r=0.999 7),平均回收率为99.13%.糙叶五加根、茎、叶中刺五加苷B的质量分数分别为:0.463 4、2.452 4、0.016 5 mg/g(n=3);刺五加苷E的质量分数分别为0.143 9、1.375 4、0.187 7 mg/g(n=3).结论 该方法简便快速,结果准确可靠.
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HPLC法测定刺五加根中刺五加苷B、E的含量
目的:利用HPLC法对刺五加根中刺五加苷B、E的含量进行测定,建立刺五加根中刺五加苷B、E含量的测定方法.方法:采用高效液相色谱(H PLC)法测定,Hypersil C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 um),以水-乙腈为流动相,流速为0.8 mL·min-1,柱温:室温,检测波长是210 nm.结果:在同一色谱条件下,刺五加苷B在0.043-0.77 ug·ml-1范围内线性关系良好,r=0.9996,回收率99.21％,RSD为1.9％；刺五加苷E在0.047-0.51ug·ml-1范围内线性关系良好,r=0.9998,回收率为101.81％,RSD为1.3％.结论:该分析方法灵敏快速、结果准确、重现性好,可用于刺五加根中刺五加苷B、E含量的测定.
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刺五加苷B、苷E在大鼠体内肠道菌群中的代谢
目的：观察刺五加苷B、刺五加苷E等刺五加有效部位在大鼠体内肠道菌群中的代谢情况。方法：以10倍剂量给大鼠灌胃刺五加的有效部位，收集1、2、4、6、8、12 h的大鼠肠道内容物和12 h的大鼠粪便，加水使粪便与水的比例为1g：4ml，13000 r／min离心，取上清液采用HPLC法检测刺五加苷B刺五加苷E的道谢情况。结果：在给大鼠灌胃刺五加有效部位后，12 h内的大鼠粪便里检测不到刺五加的有效成分和代谢产物，经过对大鼠肠道内容物的研究得出，4h后刺五加的有效部位被完全代谢，但检测不到刺五加苷B、刺五加苷E的代谢产物。结论：绿原酸和异秦皮啶在大鼠肠道菌群中不发生代谢。体内研究显示，刺五加的有效部位在4h后被完全代谢吸收，但是检测不到刺五加苷B、刺五加苷E的代谢产物，推测其代谢产物可能直接被大鼠吸收。
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HPLC法同时测定降糖舒胶囊中6种成分
目的 建立HPLC法同时测定降糖舒胶囊(刺五加、葛根、人参等)中6种成分的含有量.方法 该药物70％甲醇提取液的分析采用Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);以甲醇(A)-0.1％甲酸(B)为流动相,梯度洗脱;体积流量0.9 mL/min;柱温25℃;进样量10 μL.结果 3'-羟基葛根素、葛根素、3'-甲氧基葛根素、刺五加苷B、刺五加苷E、异嗪皮啶分别在9.66～193.20、15.94 ～ 318.80、12.32～ 246.40、3.36～67.20、3.15～63.00、2.18～43.60 μg/mL范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率97.31％～99.60％,RSD(n=6)均小于2.0％.结论 该方法可为降糖舒胶囊的质量评价提供科学依据.
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刺五加苷B的大鼠在体肠吸收特性研究
目的:考察刺五加苷B在大鼠肠道各区段的吸收动力学特性、吸收部位及吸收机制,以期为其现代制剂设计提供理论依据.方法:采用大鼠在体肠段灌流实验,研究了刺五加苷B的吸收部位和吸收动力学特征.结果:不同肠段药物的吸收量和校正的肠壁渗透率(P*w)按十二指肠、空肠、回肠和结肠的顺序依次下降;刺五加苷B经含肠道酶肠灌流液降解后,其含量按十二指肠、空肠、回肠和结肠的顺序依次下降;采用HPLC法,在血浆和胆汁中未检出刺五加苷B.结论:刺五加苷B生物利用度低是因为肠道酶代谢,引起刺五加苷B被降解,而不仅仅是吸收因素.
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刺五加抗脑缺血作用物质基础纯化工艺优选
目的:优选刺五加抗脑缺血作用物质基础的纯化工艺.方法:比较D-101大孔树脂、聚酰胺和正丁醇萃取3种纯化工艺所得样品对大鼠缺血再灌注损伤模型和小鼠断头张口模型的抗脑缺血作用.结果:D-101大孔树脂纯化样品的抗脑缺血作用强于其他两种方法,刺五加苷B与刺五加抗脑缺血作用正性相关.结论:D-101大孔树脂吸附法是刺五加提取物较佳的纯化工艺.
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HPLC-MS/MS法测定超声提取刺五加果实中刺五加苷B、E和异嗪皮啶的含量
目的:建立一个高效液相-质谱联用(HPLC-MS/MS)测定刺五加果实中刺五加苷B、E和异嗪皮啶含量的方法.方法:建立HPLC-MS/MS方法,进行色谱和质谱方法的考察,得到优的分析条件,即流动相为乙腈-0.05％的甲酸溶液(20∶80,V/V),流速为0.5 ml/min.采用电喷雾离子源(ESI)进行电离,多离子反应监测(MRM)模式进行信号采集,采用外标法进行定量;采用HPLC-MS/MS方法同时测定刺五加果实中刺五加苷B、E和异嗪皮啶的含量.结果:刺五加苷B、刺五加苷E和异嗪皮啶分别在0.7～30000 ng/ml、0.4～ 10 000 ng/ml和0.3 ～ 16 000 ng/ml浓度范围内呈良好的线性关系(r＞0.9997),检出限(LOD)分别为0.17 ng/ml、0.12 ng/ml和0.09 ng/ml,定量限(LOQ)分别为0.7 ng/ml、0.4 ng/ml和0.3 ng/ml,不同浓度下的平均加标回收率为98.10％、98.19％和98.21％;在优提取条件下刺五加果实中刺五加苷B的含量为(1.935 0±0.001 5)mg/g,刺五加苷E的含量为(0.273 0±0.003 5)mg/g,异嗪皮啶的含量为(0.013 0±0.001 2)mg/g.结论:HPLC-MS/MS法灵敏度高、选择性好、分析时间短,可对刺五加果实中刺五加苷B、刺五加苷E和异嗪皮啶进行准确的定量分析.
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HPLC法测定刺五加中刺五加苷B的含量
目的:对不同生长年限、不同药用部位的刺五加中刺五加苷B进行了含量测定,为合理开发、利用这一药用植物资源提供了理论依据.方法:采用高效液相色谱法,研究了不同生长年限、不同药用部位的刺五加中的刺五加苷B含量的变化规律.结果:3年生的刺五加中刺五加苷B的含量高于1年生的刺五加,且均以茎皮中含量较高,茎中含量次之,根中低.结论:对刺五加药材的合理采收提供了参考依据.
关键词： 刺五加 刺五加苷B 高效液相色谱法(HPLC) 含量测定 -
不同性别类型刺五加根茎和茎有效成分季节积累规律的研究
目的 评价不同性别类型刺五加根茎和茎有效成分季节积累规律,从而确定出优质药材性别类型和佳采收期.方法 采用RP - HPLC色谱法检测刺五加苷B、绿原酸及刺五加苷E和异嗪皮啶含量.结果 不同性别类型刺五加的有效成分含量季节积累规律相似.长花丝刺五加中刺五加苷B、刺五加苷E和绿原酸含量大于短花丝刺五加,特别在花期前(7月中旬)表现更加明显.异嗪皮啶的含量相反,短花丝类型高于长花丝类型.结论 长花丝刺五加优于短花丝刺五加,春季和秋季活性成分含量较高.
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体外培养刺五加生产刺五加苷B、E的研究
目的 探讨2,4-D和培养基对刺五加愈伤组织和体细胞胚胎生产刺五加苷B、E的影响,建立有利于刺五加苷B、E积累的刺五加体外培养体系.方法 将来自同一外植体的刺五加愈伤组织和体细胞胚胎分别诱导增殖或产生次级体胚,HPLC法测定培养物中刺五加苷B、E含量和培养物质量,考察培养物类型、培养基种类和激素对刺五加苷B、E生产的影响.结果 体细胞胚胎的质量虽略低于愈伤组织的质量,但体细胞胚胎生产刺五加苷B、E的能力优于愈伤组织.2,4-D对刺五加苷B、E含量影响较小,仅改变了培养物的质量.MS培养基处理中培养物的刺五加苷B、E产量优于1/2MS培养基.结论 刺五加体外培养物可以生产刺五加苷B、E,其产量取决于培养物类型、培养基种类和2,4-D浓度.
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高效液相色谱法测定刺五加粉中刺五加苷B和苷E的含量
目的:建立刺五加及其制剂中刺五加苷B和刺五加苷E的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法测定刺五加苷B和刺五加苷E的含量.结果:在同一色谱条件下,刺五加苷B在1.472 8～7.364 0 μg范围内线性关系良好,回收率100.7%,RSD为2.6%;刺五加苷E在1.305 6～11.750 4 μg范围内线性关系良好,回收率为101.9%,RSD为2.0%.结论:该分析方法简便易行,重现性好.
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HPLC法测定刺五加提取物缓释微球中刺五加苷B的含量
目的:建立测定刺五加提取物缓释微球中刺五加苷B含量的方法.方法:采用HPLC法.色谱柱为Agilent Eclipse Plus C18(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈:水(17:83),流速为1.0 ml·min-1,柱温为30℃,检测波长为220 nm,进样量为20 μl.结果:刺五加苷B浓度在10.00～120.00 μg·ml-1范围内线性关系良好(r=0.999 9);平均加样回收率为98.10%(RSD=0.98%,n=6).结论:该方法结果准确可靠,可以作为该制剂的质量控制方法.
关键词： 刺五加提取物缓释微球 刺五加苷B 高效液相色谱法 含量测定 -
刺五加苷B、苷E在体外大鼠肠道菌群中的代谢
目的 观察体外大鼠肠道菌群对刺五加苷B、苷E的代谢.方法 收集大鼠新鲜粪便在厌氧培养基37℃培养24h,分别加入刺五加苷B、刺五加苷E,培养后加甲醇提取离心,取上清液采用HPLC及UPLC/MS方法对代谢成分进行分离和定性分析.结果 刺五加苷B、苷E在大鼠粪便孵育液中代谢,24h后样本中能检测出较高浓度代谢物.在离体条件下,刺五加苷B、苷E可以被大鼠的肠道菌群代谢,经过UPLC/MS的检测,刺五加苷B代谢物的分子离子峰[M+H]+为193.108,推测为刺五加苷B的苷元再脱一分子水；刺五加苷E代谢物的分子离子峰[M+H]+为417.17,推测为刺五加苷B的苷元.结论 刺五加苷B、苷E可以被大鼠肠道菌群代谢.
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高效液相色谱波长切换法同时测定微达康膏中的梓醇、刺五加苷B、刺五加苷E、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ
目的建立HPLC波长切换法同时测定微达康膏中的梓醇、刺五加苷B、刺五加苷E、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ的方法.方法 采用Waters Nova-pak C18色谱柱,以乙腈(A)-0.2％磷酸溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速0.9 mL·min-1.结果梓醇、刺五加苷B、刺五加苷E、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ分别在4.53～90.60 μg·mL-1、6.18～123.60 μg·mL-1、3.92～78.40 μg·mL-1、7.51～150.20μg·mL-1、7.14～142.80 μg·mL-1与峰面积呈良好的线性关系,相关系数分别为0.9999、0.9998、1.000、0.9996、0.9999;平均加样回收率及相应的RSD分别为98.5％(1.2％)、98.9％(0.77％)、99.1％(0.90％)、97.5％(1.8％)、97.1％(0.84％).结论本方法快速、准确度高、专属性好,可用于微达康膏的质量控制.
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刺五加苷B对MPP+诱导PC12细胞损伤ERK通路的影响
目的 观察刺五加苷B对MPP+诱导损伤的PC12细胞ERK1/2蛋白及相关转录因子表达的影响,探究其神经保护作用机制.方法 以MPP+损伤的PC12细胞为模型组,以正常PC12细胞为对照组,Western blot法检测细胞ERK1/2表达及磷酸化水平,荧光定量PCR法检测c-fos和c-jun mRNA 的表达水平.结果 模型组ERK1/2磷酸化水平较对照组显著降低(P＜0.01).c-fos和c-jun表达明显上调,差异有统计学意义;给予刺五加苷B(10 mg·L-1)后,受损细胞ERK1/2的磷酸化水平明显升高,c-fos 和c-jun基因的过表达水平降低.结论 刺五加苷B对MPP+诱导的PC12细胞损伤的保护作用机制可能与提高ERK1/2蛋白磷酸化水平.避免诱发c-fos和c-jun基闪过表达有关.
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HPLC法测定刺五加中刺五加苷B和刺五加苷E的含量
[目的]建立刺五加中刺五加苷B和刺五加苷E含量的测定方法.[方法]采用高效液相色谱(HPLC)法测定刺五加苷B和刺五加苷E的含量.[结果]在同一色谱条件下,刺五加苷B在2.76～43.92μg·ml-1范围内线性关系良好,r=0.9998,回收率98.7%,RSD为1.8%;刺五加苷E在2.34～37.52μg·ml-1范围内线性关系良好,r=0.9996,回收率为101.9%,RSD为2.0%.[结论]该分析方法简便、准确、重现性好,可用于刺五加药材中刺五加苷B和刺五加苷E的含量测定.
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刺五加苷B抗运动性疲劳作用的实验研究
目的 研究刺五加苷B对大鼠运动性疲劳的作用.方法 通过大鼠的递增强度跑台训练,建立运动疲劳模型,并测定跑台力竭时间以及血清中的BUN、CK、LDH、BUN、MDA、肌糖元、肝糖原、血糖等反映机体代谢和能量供应的指标.结果 刺五加苷B能明显提高运动后大鼠体内肝糖原、肌糖原等指标,有效降低BUN、ALT、AST、LDH等指标.结论 大鼠服用刺五加苷B有利于能量物质的储存和积累,加速某些导致疲劳代谢物质的清除,维持细胞的正常生理功能,延缓疲劳的发生,加快疲劳的恢复.
