黄芪活性成分研究

本实验是利用溶媒提取和层析方法相结合,分离出两种化合物,它们分别是芒柄花素和毛蕊异黄酮.

芒柄花素在肺动脉高压大鼠的治疗中的作用及机理探析

目的 主要分析芒柄花素在肺动脉高压大鼠治疗中的作用及其机理.方法 选取40只雄性wistar大鼠,随机分为对照组、MCT组、芒柄花素高、低剂量组.除对照组外,其余三组采用MCT造模,同时芒柄花素高、低剂量组接受常规治疗,造模三周后,评价芒柄花素的应用效果.结果 与对照组相比,MCT组大鼠的RVW、RVHI水平明显升高,且肺组织中的MMP-2表达上调;与MCT组相比,芒柄花素高、低剂量组RVW、RVHI水平降低,肺组织中的MMP-2表达减少(P<0.05).结论 芒柄花素在肺动脉高压大鼠的治疗中发挥着重要的作用,该物质主要通过抑制MMP-2的表达来缓解症状.

061伸筋草中α-芒柄花素的乙酰胆碱酯酶抑制活性

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定补阳还五汤中6种成分含量

目的 建立同时测定补阳还五汤中苦杏仁苷、芍药苷、阿魏酸、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、槲皮素及芒柄花素含量的方法.方法 采用超高效液相色谱-串联质谱(ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)联用技术,色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18(2.1 mm×150 mm,5μm),流动相为甲醇-2 mmol/L甲酸铵水溶液,等度洗脱,流速200μl/min;柱温35℃;进样量2μl;采用电喷雾化离子源、正负离子切换模式、多反应监测模式进行定量分析,离子源温度400℃,干燥气流量500 L/h,雾化气压力75.8 KPa,毛细管电压4000 V,干燥气温度400℃.结果 苦杏仁苷、芍药苷、阿魏酸、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、槲皮素及芒柄花素的质量浓度范围分别在0.5～32、0.2～12.8、0.1～6.4、0.8～51.2、0.4～25.6、0.08～5.12 ng范围内与各自的峰面积呈良好线性关系(r分别为0.9921、0.9945、0.9928、0.9958、0.9947、0.9966).加样回收率在99.21％～101.44％范围内,RSD均低于2.05％.结论 该法专属性强、快速灵敏,可用于补阳还五汤中苦杏仁苷、芍药苷、阿魏酸、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、槲皮素及芒柄花素的含量测定.

HPLC测定广西牛大力药材中芒柄花素和高丽槐素的含量

目的:建立牛大力药材中芒柄花素和高丽槐素的含量测定方法.方法:采用HPLC测定药材中芒柄花素和高丽槐素含量,色谱柱C18(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相乙腈-0.1%冰醋酸溶液(38∶62),检测波长248,310 nm,流速1.0 mL·min-1,柱温35℃.结果:芒柄花素进样量在0.002 3~0.060 0 μg与峰面积值呈现良好的线性关系(r=0.999 9),平均回收率100.0%,RSD为2.0%(n=6);高丽槐素进样量在0.039 1~1.015 6 μg与峰面积值呈现良好的线性关系(r=0.999 9),平均回收率为100.6%,RSD为0.7%(n=6).结论:该方法可用于牛大力药材中芒柄花素和高丽槐素的含量测定.

芒柄花素对人非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡的影响及相关机制探讨

目的:探讨芒柄花素对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法:培养人NSCLC细胞株A549,分别按10,20,40,80,160 μmol· L-1梯度浓度加入芒柄花素,另设不含药物空白组,培养48 h后采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活力,利用Annexin V-FIFC/碘化丙啶(PI)双标法检测细胞凋亡情况,利用流式细胞仪检测细胞周期,利用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和免疫印迹法(Western blot)分别检测细胞中周期蛋白E1(cyclin E1),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax) mRNA和蛋白表达.结果:40,80,160 μmol· L-1芒柄花素组细胞生长抑制率和细胞凋亡率均高于空白组(P＜0.05).与空白组比较,40,80,160 μmol·L-1芒柄花素组G0/G1期细胞比例上升,S期细胞比例下降,80,160μmol· L-1芒柄花素组下降更为明显(P ＜0.05);40,80,160 μmol·L-1芒柄花素组cyclin E1,Bcl-2 mRNA和蛋白表达量均较空白组降低,Bax mRNA和蛋白表达量升高,与40μmol·L-1芒柄花素组比较,80,160μmol· L-1芒柄花素组cyclin E1,Bcl-2 mRNA和蛋白表达量均降低,Bax mRNA和蛋白表达量升高(P＜0.05).结论:芒柄花素可抑制NSCLC细胞增殖,加速细胞凋亡发生,可能通过下调cyclin E1表达而影响细胞周期,并通过调控Bcl-2和Bax表达而促使细胞凋亡发生.

不同溶剂对鸡血藤提取物总黄酮含量及抗肿瘤活性的影响

目的:探讨不同溶剂对鸡血藤提取物中的总黄酮含量和抗肿瘤活性的影响.方法:分别用不同浓度的乙醇水溶液、丙酮水溶液作为提取溶剂,利用回流法、超声提取法制备鸡血藤提取物;采用四甲基噻唑蓝(MTT)法测定提取物对结肠癌HT-29细胞增殖的抑制活性;采用分光光度法测定提取物中总黄酮含量;采用HPLC法测定提取物中芒柄花素含量.结果:60%乙醇回流60 mn所得提取物总黄酮含量高并且对HT-29细胞增殖的抑制活性强.结论:鸡血藤抗肿瘤活性提取物的制备以60%乙醇回流提取为佳.

芒柄花素抑制小鼠Th2型变应性接触性皮炎的机制分析

目的:研究芒柄花素对过敏性炎症的影响及初步作用机制.方法:采用异硫氰酸荧光素(FITC)诱导Th2型变应性接触性皮炎(allergic contact dermatitis,ACD)模型的方法,BALB/c小鼠35只,随机分为5组,分别为正常组,模型组和芒柄花素0.5,5,10 mg·kg-1组,每组7只,在第1天,第2天用1.5％ FITC溶液进行腹部致敏,每天1次,第6天用0.6％ FITC溶液对小鼠右耳进行攻击.各组小鼠从致敏前2d开始给予芒柄花素至第3天,每天1次,共5次(致敏初期预防给药),造模第6天攻击,攻击24 h后观察小鼠耳肿胀度及苏木素-伊红(HE)染色观察耳组织病理组织学变化,酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测耳组织匀浆中白细胞介素-4(IL-4),IL-5,IL-9的水平.结果:与正常组比较,模型组小鼠耳肿胀度显著增加,并有大量的淋巴细胞浸润(P＜0.01),耳组织真皮层组织明显水肿,耳组织中IL-4,IL-5,IL-9水平显著升高(P＜0.01);与模型组比较,致敏初期预防给予芒柄花素能明显减轻耳肿胀度,减少淋巴细胞浸润(P ＜0.05,P＜0.01),减轻耳病理组织学改变,且不同程度地抑制耳组织中2型细胞因子IL-5,IL-9水平(P ＜0.05,P＜0.01).结论:发现了芒柄花素具有抑制过敏性炎症的新活性,其作用环节在致敏初期,且机制可能与抑制2型细胞因子的分泌有关.

HPLC梯度洗脱法同时测定阿胶益寿晶中的二苯乙烯苷、大黄素甲醚、毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素

目的:建立梯度洗脱法同时测定阿胶益寿晶中二苯乙烯苷、大黄素甲醚、毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素含量的高效液相色谱法.方法:采用Agilent TC-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相A乙腈-甲醇(9∶1),流动相B0.1％磷酸溶液梯度洗脱,柱温30℃,流速1.0 mL·min-,进样量20 μL;二苯乙烯苷和大黄素甲醚检测波长为280nm,毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素检测波长为254 nm.结果:二苯乙烯苷、大黄素甲醚、毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素分别在5.23～104.60 mg·L-1(r=0.999 5),5.05 ～ 101.00 mg·L-1(r=0.999 1),5.92 ～118.40 mg·L-1(r =0.999 3),4.74～94.80 mg·L-1(r=0.999 8),4.85～97.00 mg·L-1(r=0.999 7),6.91～138.20 mg·L-1(r =0.999 7)线性关系良好;平均加样回收率(n=6)和RSD分别为98.52％(1.6％),97.95％(1.4％),99.47％(1.6％),96.99％(1.0％),99.24％(1.1％),98.13％(1.4％).结论:建立的HPLC梯度洗脱法同时测定阿胶益寿晶中二苯乙烯苷、大黄素甲醚、毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素含量.方法准确、灵敏度高、重复性好,为评价阿胶益寿晶质量控制提供可靠方法.

HPLC测定沙苑子中3个黄酮成分

目的:建立沙苑子中3个黄酮的HPLC的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法,Kromasil C18色谱柱(4.6mm ×250 mm,5μm),流动相为甲醇-1%冰醋酸(56:44).流速为lmL·min-1,柱温30℃,检测波长为266 nm.结果:沙苑子中毛蕊异黄酮、芒柄花素、鼠李柠檬素的线性范围依次为0.348～1.74(r=0.999 7),0.288～1.44(r=0.999 8),0.120～0.60(r=0.999 7),平均回收率(n=5)分别为100.3%(RSD 0.33%),99.8%(RSD 2.78%),98.6%(RSD 2.91%).结论:该方法操作简便,结果准确,能够同时测定沙苑子药材中3个黄酮的含量,为沙苑子的质量控制和质量标准制定提供了参考依据.

HPLC测定芪芍方有效部位中芒柄花素的含量

目的:进一步表征芪芍方有效部位中异黄酮类化合物的含量,建立HPLC法测定芪芍方有效部位中芒柄花素含量的方法.方法:采用ODSHYPERSIL色谱柱(4.6 nm ×250 mm,5μm),乙腈-2‰磷酸水梯度洗脱,柱温35℃,流速1 mL·min -1,检测波长249 nm.结果:芒柄花素的线性回归方程为Y=6×106X - 16 320(r=0.999 8),表明芒柄花素在0.036 48～0.364 8 μg,线性关系良好.平均加样回收率为98.70％,RSD 0.77％.3批芪芍方有效部位中芒柄花素的平均含量分别为0.81,0.74,0.63 mg·g-1.结论:方法简便、准确、重复性好,可以用于芪芍方有效部位中芒柄花素的质量控制.为芪芍方有效部位中异黄酮类化合物质量控制方法的建立提供支撑,同时为有效控制芪芍方有效部位质量奠定基础.

HPLC同时测定扶正解毒颗粒中5种成分的含量

目的:建立一种高效液相色谱分析方法,同时测定扶正解毒颗粒中丹参素、原儿茶醛、阿魏酸、丹酚酸B和芒柄花素的含量.方法:迪马ODS-C(18)色谱柱(4.6 mm × 250 mm,5 μm),甲醇和0.05%磷酸水溶液梯度洗脱,280 nm波长测定丹参素、原儿茶醛和丹酚酸B,316 nm波长测定阿魏酸,248 nm波长测定芒柄花素.结果:5个化合物在一定范围内线性关系良好(r>0.999),平均回收率为98%～101%,RSD<3.55%.结论:该法简便、灵敏、准确、重复性好,可用于同时测定该制剂中5种成分的含量,为该制剂质量控制提供了基础.

当归补血不同制剂高效液相特征图谱比较

目的:比较当归补血汤剂、配方颗粒、口服液3种不同制剂多种成分差异及不同制剂方法对制剂中化学成分的影响.方法:对9批当归补血制剂采用5％甲醇水为溶剂制备样品溶液,应用Lab Alliance高效液相色谱仪,Kromasil C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,UV检测器进行测定.以甲醇-0.4％甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速1 mL· min-1,检测波长280nm.通过HPLC特征图谱比较,并利用中药指纹图谱信息数字化处理技术,分析当归补血汤剂、配方颗粒、口服液3种不同制剂中特征峰、主要成分和未知成分的差异.结果:9批当归补血制剂的HPLC特征图谱共有色谱峰特征明显,样品中共检测到15个共有峰,不同剂型的当归补血制剂相似度有一定差别,配方颗粒和口服液色谱峰的数目和面积均有不同程度减少,各种成分比例具有较大差异.结论:与汤剂相比,当归补血配方颗粒和口服液在制剂过程当中,化学成分受到不同程度的损失,可能影响其临床疗效.本研究建立的HPLC特征图谱方法快速、高效,为当归补血制剂的质量研究提供了有效手段.

UPLC-DAD技术快速分析黄芪药材及制剂中主要黄酮成分

目的:采用UPLC-DAD技术快速测定黄芪及其制剂中主要黄酮类成分的含量.方法:采用超高效液相色谱仪,用ACQUITY UPLC TMBEH C18柱(2.1 mm×50 mm,1.7 μm)；流动相由甲醇-0.2％甲酸水溶液线性梯度洗脱；流速0.5 mL·min -1,检测波长200～400 nm,柱温30℃.结果:毛蕊异黄酮苷、芒柄花素苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素的线性范围分别为0.1313～1.313 g·L-1(r=0.9997),0.1186～1.186 g·L-1 (r=0·9994),0.0206～0.206 g·L-1(r=0.999 5),0.015 0 ～0.150 g·L-1(r =0.999 5);平均同收率分别为97.07％,97.26％,97.45％,96.97％.结论:本方法快速、准确、可靠,可以作为控制黄芪药材及制剂质量的方法.

不同剂量配伍对黄芪-当归中5种化学成分的影响

目的:采用UPLC-MS研究黄芪-当归不同剂量配伍药液及小肠吸收液中5种化学成分(阿魏酸、毛蕊异黄酮苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素、黄芪甲苷)的含量变化,为二者的临床配伍用药提供参考.方法:利用水提法制备黄芪-当归不同剂量配伍的药液,运用大鼠外翻肠囊法进行药物吸收试验制备药物的小肠吸收液,通过UPLC-MS测定药液和小肠吸收液中5种成分的含量,流动相0.1％甲酸水溶液-乙腈梯度洗脱,流速0.4 mL.min-1,进样量1μL,毛细管电压4 kV.结果:黄芪-当归以10∶1和5∶1配伍时,5种成分的溶出量大多与理论值相近;当黄芪-当归以1∶1和1∶5配伍时,5种成分的溶出大多高于理论值.黄芪-当归10∶1和5∶1配伍时,相应质量浓度小肠吸收液中毛蕊异黄酮苷、毛蕊异黄酮、黄芪甲苷和阿魏酸吸收率大多数高于单用黄芪和单用当归;黄芪-当归1∶1和1∶5配伍时,相应质量浓度小肠吸收液中5种成分的吸收率大多数高于单用黄芪和单用当归.结论:黄芪-当归以1∶1和1∶5配伍时可促进药物中大多数成分的溶出,且黄芪和当归不同剂量配伍时可不同程度地促进大多数成分的吸收.

HPLC与紫外-可见分光光度计对养阴通脑颗粒有效部位的质量控制

目的:利用紫外-可见分光光度计( UV-VIS)检测养阴通脑颗粒中有效部位总黄酮含量.并利用梯度洗脱,建立高效液相色谱法( HPLC)测定养阴通脑颗粒中总黄酮有效部位中葛根素、芒柄花素、毛蕊异黄酮含量的方法.方法:以芦丁为对照品UV-VIS测定养阴通脑颗粒有效部位中总黄酮含量.采用HPLC,色谱柱为Eclipse XDB-C18( 150mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈(A)和0.04％磷酸水溶液(B)梯度洗脱,流速1.00mL/min,检测波长250nm.结果:养阴通脑颗粒有效部位总黄酮含量70％以上,葛根素的线性范围为0.530-296.300mg/L(r=0.9998),平均回收率为99.80％,RSD=0.40％,毛蕊异黄酮的线性范围为0.064-44.440mg/L( r=0.9994),平均回收率为99.70％,RSD=1.10％,芒柄花素的线性范围为0.064-43.110mg/L( r=0.9994),平均回收率为99.40％,RSD=1.50％.结论:本方法操作简便,测定结果准确可靠,为养阴通脑颗粒有效部位黄酮的质量控制提供方法.

HPLC-DAD-ELSD法同时测定芪蛭降糖胶囊中6种成分的含量

目的:建立定量测定芪蛭降糖胶囊中4种黄酮类成分:毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素,2种皂苷类成分:黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅰ的方法.方法:采用HPLC-DAD-ELSD法,Agilent SB-C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相乙腈-0.1％甲酸水溶液梯度洗脱,柱温30℃,体积流量1.0mL/min,检测波长254nm;ELSD漂移管温度100C,气体流量2.4L/min.结果:毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素、黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅰ在0.4296～1.0024μg(r=0.9993)、0.2214～ 0.5166μg(r=0.9991)、0.6762 ～ 1.5788μg(r=1.0000)、0.2286～0.5334μg(r=1.0000)、3.1374 ～ 7.3206μg(r=0.9990)、0.6375～1.4875μg(r=0.9993)范围内分别与峰面积积分值呈良好的线性关系;芪蛭降糖胶囊中6个成分的平均回收率分别为95.28％、96.18％、98.38％、97.61％、96.20％、100.39％.结论:建立了HPLC-DAD-ELSD法同时测定芪蛭降糖胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素、黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅰ含量的方法.方法准确、灵敏度高、重复性好,可为芪蛭降糖胶囊质量控制提供可靠方法.

基于一测多评法测定甘肃红芪中4种黄酮类成分

目的 建立甘肃红芪中芒柄花苷、毛蕊异黄酮、金雀异黄酮、芒柄花素4种黄酮类成分的一测多评法,验证该方法 在红芪质量评价中应用的准确性及可行性.方法以毛蕊异黄酮为内标,分别建立毛蕊异黄酮与芒柄花苷、金雀异黄酮、芒柄花素的相对校正因子,计算红芪中毛蕊异黄酮、金雀异黄酮、芒柄花素的含量,实现一测多评.结果 各相对校正因子重复性良好,一测多评法测定结果与外标法无显著差异.结论 以毛蕊异黄酮为内标,同时测定芒柄花苷、金雀异黄酮、芒柄花素的一测多评法可用于红芪的定量分析.

红芪药材性状及鉴别研究

目的 研究红芪药典标准,优化红芪药材的质量标准.方法 从性状、薄层色谱鉴别、高效液相色谱(HPLC)测定、水分、总灰分、醇溶性浸出物等方面对8批红芪药材质量标准进行研究.结果 红芪药材性状描述有别于以往文献记载,薄层色谱鉴别采用乙酸乙酯-三氯甲烷-水(4:9:1)展开系统,效果优于 2010 年版《中华人民共和国药典》红芪标准.以芒柄花素为对照,建立了红芪HPLC特征图谱.结论 本研究所建立的红芪薄层鉴别方法简单易行、准确可靠.

不同来源黄芪药材中毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花素的定量分析

目的:建立黄芪药材中毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花素的含量测定方法,并对不同来源的药材进行分析,为黄芪质量标准的制定提供依据.方法:采用HPLC-DAD法建立黄芪药材中毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花素的含量测定方法,通过对来源于我国8个省59批黄芪药材的分析,阐明产地、生长方式、生长年限等对黄芪中异黄酮类成分的影响.结果:不同产地、生长方式及生长年限的黄芪药材,其毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花素的含量差异较大.从产地分析,以山西、内蒙古和陕西等道地产地含量较高;从生长方式分析,以半野生含量较高;从生长年限分析,年限越短,含量越高.结论:本研究建立的毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花素的含量测定方法简便、准确、重现性好,可用于黄芪药材中异黄酮类成分的质量控制.