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高效液相色谱法测定黄芪赤风汤提取物中萜类和色酮类成分的含量
目的 建立HPLC法测定黄芪赤风汤提取物中萜类和色酮类成分的含量.方法 采用Venusil MP-C18(4.6×250 mm,5μm)色谱柱;以乙腈(A)-水(B)为流动相进行梯度洗脱(0~45 min,10%→18%A;45~100 min,18%→45%A);检测波长:220 nm;流速:1.0 mL/min;柱温:35℃;LCMS-IT-TOF法指认萜类和色酮类成分,分别以芍药苷和毛蕊异黄酮苷为参比计算两类成分含量.结果 芍药苷和毛蕊异黄酮苷的线性范围分别为0.279~6.696μg和0.192~4.608μg(r=0.9998);平均回收率(n=6)分别为98.83%和98.21%,RSD分别为3.06%和3.24%;经LCMS-IT-TOF法指认萜类成分4个,色酮类成分12个.结论 所建立的方法快速、简单、准确、专属性强,精密度好,可用于黄芪赤风汤提取物的质量控制.
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HPLC梯度洗脱法同时测定阿胶益寿晶中的二苯乙烯苷、大黄素甲醚、毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素
目的:建立梯度洗脱法同时测定阿胶益寿晶中二苯乙烯苷、大黄素甲醚、毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素含量的高效液相色谱法.方法:采用Agilent TC-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相A乙腈-甲醇(9∶1),流动相B0.1％磷酸溶液梯度洗脱,柱温30℃,流速1.0 mL·min-,进样量20 μL;二苯乙烯苷和大黄素甲醚检测波长为280nm,毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素检测波长为254 nm.结果:二苯乙烯苷、大黄素甲醚、毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素分别在5.23～104.60 mg·L-1(r=0.999 5),5.05 ～ 101.00 mg·L-1(r=0.999 1),5.92 ～118.40 mg·L-1(r =0.999 3),4.74～94.80 mg·L-1(r=0.999 8),4.85～97.00 mg·L-1(r=0.999 7),6.91～138.20 mg·L-1(r =0.999 7)线性关系良好;平均加样回收率(n=6)和RSD分别为98.52％(1.6％),97.95％(1.4％),99.47％(1.6％),96.99％(1.0％),99.24％(1.1％),98.13％(1.4％).结论:建立的HPLC梯度洗脱法同时测定阿胶益寿晶中二苯乙烯苷、大黄素甲醚、毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素含量.方法准确、灵敏度高、重复性好,为评价阿胶益寿晶质量控制提供可靠方法.
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HPLC同时测定黄芪白术药对提取物毛蕊异黄酮苷、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ含量
目的:建立黄芪白术药对提取物中毛蕊异黄酮苷、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ 3种成分HPLC同步测定新方法.方法:选用Kromasil 100-5C18(4.6 mm×250 mm)色谱柱；以乙腈-水为流动相梯度洗脱,流速1 mL·min-1；检测波长220 nm.结果:毛蕊异黄酮苷、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ分别在进样量范围内与峰面积线性关系良好,r ＞0.9995,仪器精密度和稳定性RSD均小于2％,3种成分的回收率在97％～103％(n=3).测定了6批白术黄芪药对中的毛蕊异黄酮苷、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ含量.结论:该方法快速、准确、重复性好,可同时定量白术黄芪药对的3种成分.
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当归补血不同制剂高效液相特征图谱比较
目的:比较当归补血汤剂、配方颗粒、口服液3种不同制剂多种成分差异及不同制剂方法对制剂中化学成分的影响.方法:对9批当归补血制剂采用5％甲醇水为溶剂制备样品溶液,应用Lab Alliance高效液相色谱仪,Kromasil C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,UV检测器进行测定.以甲醇-0.4％甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速1 mL· min-1,检测波长280nm.通过HPLC特征图谱比较,并利用中药指纹图谱信息数字化处理技术,分析当归补血汤剂、配方颗粒、口服液3种不同制剂中特征峰、主要成分和未知成分的差异.结果:9批当归补血制剂的HPLC特征图谱共有色谱峰特征明显,样品中共检测到15个共有峰,不同剂型的当归补血制剂相似度有一定差别,配方颗粒和口服液色谱峰的数目和面积均有不同程度减少,各种成分比例具有较大差异.结论:与汤剂相比,当归补血配方颗粒和口服液在制剂过程当中,化学成分受到不同程度的损失,可能影响其临床疗效.本研究建立的HPLC特征图谱方法快速、高效,为当归补血制剂的质量研究提供了有效手段.
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UPLC-DAD技术快速分析黄芪药材及制剂中主要黄酮成分
目的:采用UPLC-DAD技术快速测定黄芪及其制剂中主要黄酮类成分的含量.方法:采用超高效液相色谱仪,用ACQUITY UPLC TMBEH C18柱(2.1 mm×50 mm,1.7 μm)；流动相由甲醇-0.2％甲酸水溶液线性梯度洗脱；流速0.5 mL·min -1,检测波长200～400 nm,柱温30℃.结果:毛蕊异黄酮苷、芒柄花素苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素的线性范围分别为0.1313～1.313 g·L-1(r=0.9997),0.1186～1.186 g·L-1 (r=0·9994),0.0206～0.206 g·L-1(r=0.999 5),0.015 0 ～0.150 g·L-1(r =0.999 5);平均同收率分别为97.07％,97.26％,97.45％,96.97％.结论:本方法快速、准确、可靠,可以作为控制黄芪药材及制剂质量的方法.
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UPLC-MS/MS联合细胞膜固相色谱法分析补阳还五汤作用于神经元样PC12细胞的效应成分
目的:筛选补阳还五汤(BYHWT)中特异作用于神经元样PC12细胞的化学成分,为该复方的后续研究与应用提供实验依据.方法:采用固相萃取、神经元样PC12细胞细胞膜固相色谱法富集补阳还五汤特异结合神经元样PC12的效应成分,采用超高效液相色谱联用电喷雾飞行时间质谱(UPLC-MS/MS)鉴定特异结合成分,色谱条件为流动相甲醇-0.1％甲酸水溶液梯度洗脱,进样量3 μL,流速0.3 mL·min-1;质谱条件为雾化器压力和辅助气压力均为379.2 kPa,气帘气压力241.3 kPa,离子源温度500℃,喷雾电压-4.5 kV.结果:补阳还五汤特异结合神经元PC12细胞的化学成分可能为6-羟基山柰酚-3,6-二-O-葡萄糖苷,6-羟基山柰酚-3,6,7-三-O-葡萄糖苷和毛蕊异黄酮苷.结论:6-羟基山柰酚-3,6-二-O-葡萄糖苷,6-羟基山柰酚-3,6,7-三-O-葡萄糖苷和毛蕊异黄酮苷可特异结合神经元样PC12细胞,可能是补阳还五汤中发挥神经保护的效应成分.
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玉屏风方饮片及汤剂中毛蕊异黄酮苷、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量相关性研究
目的:建立玉屏风汤剂中毛蕊异黄酮苷、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量测定方法,研究黄芪、防风饮片及玉屏风汤剂中此3种成分的含量相关性.方法:采用HPLC法,色谱柱为Hypersil ODS;流动相为乙腈-水(梯度洗脱);检测波长为254 nm;流速为1 mL·min-1;柱温为30℃.结果:黄芪中的毛蕊异黄酬苷、防风中的升麻素苷与5-O-甲基维斯阿米醇苷的提取率分别为45.58%～63.35%,45.01%～65.09%,53.62%～87.75%.结论:饮片与汤剂中的含量呈现一定相关性,但不同批次饮片的提取率差异性较大;为玉屏风汤剂物质基础的研究提供了一定的参考.
关键词： 玉屏风汤剂 毛蕊异黄酮苷 升麻素苷 5-O-甲基维斯阿米醇苷 高效液相色谱法 -
甘肃不同产地红芪中总黄酮及总多糖含量测定研究
目的 建立甘肃不同产地红芪中总黄酮及总多糖的含量测定方法.方法 采用紫外分光光度法,以毛蕊异黄酮葡萄糖苷、葡萄糖为对照品,在波长分别为260、484 nm处测定甘肃不同产地红芪中总黄酮和总多糖的含量.结果 甘肃不同产地红芪中总黄酮含量在2.82～6.79 mg/g之间,平均加样回收率为97.96％;总多糖含量在106.14～746.40 mg/g之间,加样回收率为102.90％.结论 甘肃不同产地红芪中总黄酮、总多糖含量存在差异,采用紫外分光光度法测定红芪中总黄酮、总多糖含量的方法操作简便,重复性好,准确可靠,可作为红芪中总黄酮和总多糖的测定方法.
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Box-Benhnken设计效应面法优选黄芪切制工艺
黄芪始载于《神农本草经》,列为上品,为临床常用中药,切片多生用或蜜炙后应用,目前开展的研究中,对蜜炙工艺研究报道较多,而对黄芪切制工艺则缺少相关的研究报道,黄芪切制目前多凭药工经验操作,没有具体的切制工艺参数,很容易出现有效成分流失、发生霉变等多种问题,导致目前市场上流通的黄芪饮片质量良莠不齐,饮片和制剂的质量难以控制,严重影响了临床疗效,针对上述问题,该实验以优选黄芪的佳切制工艺为研究目的,采用响应面分析法中的Box-Benhnken中心组合设计,以黄芪甲苷、毛蕊异黄酮苷含量和外观性状为考察指标,选择软化润制时间、干燥温度和干燥时间3个因素对黄芪切制工艺进行优选,得到了实验室佳切制工艺参数:润制时间3h,干燥温度50℃,干燥时间4h.验证试验表明,确定的黄芪切制工艺稳定可行,对于规范黄芪切制工艺有一定的意义.
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HPLC-MS测定黄芪药材中3种成分的含量
黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge. var. mongholicus (Bge.) Hsiao或膜荚黄芪Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge.的干燥根,具有补气固表、利尿脱毒、敛疮生肌等功效[1].
关键词： 高效液相色谱-质谱联用 黄芪药材 毛蕊异黄酮苷 黄芪甲苷 芒柄花素 -
高效液相色谱法测定防芷鼻咽颗粒中7种活性成分的含量
目的 建立高效液相色谱法同时测定防芷鼻咽颗粒中7种活性成分的含量,以制定防芷鼻咽颗粒的质量控制标准.方法 采用Dikma Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温为30℃,以乙腈(A)-0.2‰乙酸水(B)溶液为流动相进行梯度洗脱(0 ～5 min,15％ A→15％ A;5 ～ 35 min,15％A→75％A;35 ～40 min,75％A→95％A;40 ～ 45 min,95％A),流速1 mL·min-1,进样量20 μL;检测波长:升麻素苷、毛蕊异黄酮苷、欧前胡素和异欧前胡素254 nm;龙胆苦苷、丹皮酚和木兰脂素为274 nm.结果 龙胆苦苷、升麻素苷、毛蕊异黄酮苷、丹皮酚、木兰脂素、欧前胡素和异欧前胡素的线性范围分别为12.50 ～400.0,1.245 ～ 39.84,1.475 ～47.20,8.512 ～ 272.4,8.050～257.6,0.925 0 ～ 29.60和0.840 0 ～26.88 μg· mL-1(r≥0.999 1),峰面积与浓度有良好的线性关系;加样回收率分别为97.32％～102.7％,RSD分别为0.78％ ～2.79％.结论 本方法操作简便可靠,重复性好,可作为防芷鼻咽颗粒的定量测定方法.
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UPLC-MS/MS法同时测定通塞脉微丸中10种有效成分
目的 建立同时测定通塞脉微丸中10种有效成分(绿原酸、芹糖甘草苷、毛蕊异黄酮苷、木犀草苷、甘草苷、阿魏酸、异甘草苷、哈巴俄苷、甘草素和肉桂酸)的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)分析方法.方法 采用BEHC18(100 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.1％甲酸水溶液,梯度洗脱,体积流量为0.3 mL/min,采用电喷雾电离源(ESI),多反应离子监测(MRM)扫描方式进行检测.结果 10种成分线性关系分别为绿原酸Y=294.09 X+ 17 624:芹糖甘草苷Y=19.296X+748.42;毛蕊异黄酮苷Y=670.8 X+ 11 121;木犀草苷Y=490.45 X+2 938.3;甘草苷Y=33.489X+555;阿魏酸Y=127.76 X+1 343.5;异甘草苷Y=57.87 X+804.81;哈巴俄苷Y=13.125 X-20.365;甘草素Y=29.057X+367.71;肉桂酸Y=72.867 X+1 301.5,且各相关系数(r)均大于0.999 0.精密度、重复性和稳定性良好;加样回收率在96.00％～104.67％,RSD值均小于3％.结论 所建立的方法准确、快捷,重复性好,可用于通塞脉微丸中绿原酸、芹糖甘草苷、毛蕊异黄酮苷、木犀草苷、甘草苷、阿魏酸、异甘草苷、哈巴俄苷、甘草素和肉桂酸10种有效成分的同时测定.
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HPLC-MS/MS法同时测定参乌健脑胶囊中8种成分
目的 建立高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)同时测定参乌健脑胶囊(SJC)中8种成分(葛根素、丹参酮ⅡA,二苯乙烯苷、芍药苷、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、毛蕊异黄酮苷、黄芩苷)的定量方法.方法 选用YMC-Triart C18色谱柱,以甲醇-0.2％甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,体积流量为0.6 mL/min,柱温40℃.质谱条件:ESI源,采用多反应监测模式(MRM),以定量离子对峰面积进行定量.结果 SJC中葛根素、丹参酮ⅡA、二苯乙烯苷、芍药苷、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、毛蕊异黄酮苷、黄芩苷分别在20.31～20 310、25.66～25 660、20.45～20 450、50.79～50 790、50.57～50 570、50.38～50 380、10.32～10 320、25.74～25 740 ng/mL内线性关系良好(r≥0.999 0);精密度良好,重复性良好,RSD均小于2.0％;在室温条件下24 h内稳定;加样回收率为97.98％～102.48％,RSD小于1.6％.所测8种成分在6批样品中的质量分数依次为葛根素1.843～1.860 mg/g,丹参酮ⅡA 1,618～1.629 mg/g、二苯乙烯苷2.116～2.129 mg/g、芍药苷2.537～2.547mg/g、人参皂苷Re 0.034～0.041 mg/g、人参皂苷Rg1 0.048～0.055 mg/g、毛蕊异黄酮苷0.551～0.564 mg/g和黄芩苷2.333～2.346 mg/g.结论 该方法快速、简便、重复性好,可用于同时测定SJC中多种成分.
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UPLC-MS/MS法同时测定康艾注射液中11种成分
目的 建立UPLC-MS/MS法同时测定康艾注射液中11种成分(毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、芒柄花素、黄芪甲苷、人参皂苷Rf、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd、人参皂苷Rb1)的方法.方法 采用正负离子切换多反应监测模式(MRM),ESI离子源;Phenomenex C18色谱柱(100 mm×3.0 mm,2.6μm)进行分离,流动相为甲醇(A)、乙腈(B)、5 mmol/L乙酸铵-0.05 mmol/L乙酸钠水溶液?,梯度洗脱,分析时间为7.0 min.结果 所测11种主要有效成分在测定浓度范围内线性关系良好,r均大于0.99;精密度、重复性和稳定性良好;平均加样回收率为95.2％～104.4％,RSD≤4.64％.4个批次康艾注射液中毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、芒柄花素、黄芪甲苷、人参皂苷Rf、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd、人参皂苷Rb1测得量分别为0.004～0.006 μg/mL、0.002～0.003 μg/mL、125.75～148.00 μμg/mL、51.75～77.00 μg/mL、0.010～0.013 μμg/mL、51.50～87.75 μg/mL、27.83～30.73μg/mL、4.23～5.15 μg/mL、8.40～13.35 μg/mL、17.33～27.68 μg/mL和9.03～11.00 μg/mL.结论 首次建立可同时测定康艾注射液的11种主要成分的UPLC-MS/MS方法,该法操作简便,灵敏度高,专属性好,分析速度快,可用于康艾注射液的质量控制.
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二次通用旋转组合法优化黄芪中毛蕊异黄酮苷和芒柄花素的酶解提取工艺
目的 采用二次通用旋转组合设计优化黄芪中毛蕊异黄酮苷和芒柄花素的酶解提取工艺.方法 在确定酶比例的基础上,选定复合酶用量、酶解时间、加水量和提取时间为考察因素,以毛蕊异黄酮苷、芒柄花素提取量为指标,采用二次通用旋转组合设计优化黄芪酶解提取工艺.结果 优化所得黄芪酶解提取的佳工艺条件:复合酶用量340 mg,酶解时间110min,加水量19倍,提取时间150m in,在此条件下,毛蕊异黄酮苷、芒柄花素提取量分别为0.25 mg/g、67.95 μg/g.结论 优化所得黄芪酶解提取工艺稳定可行.
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黄芪营养生长期茎叶毛蕊异黄酮苷和黄芪甲苷含量测定
目的:测定黄芪2年生和3年生营养生长期茎叶毛蕊异黄酮苷和黄芪甲苷含量.方法:采用HPLC,色谱条件为色谱柱C18(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为乙腈-水,梯度洗脱,流速1.0 mL,min-1,柱温30℃,检测波长分别为250 nm,203 nm.结果:2年生黄芪营养生长期毛蕊异黄酮苷和黄芪甲苷含量变化范围分别为0.1853 ～ 0.2940,0.2337～0.5367 mg· g-1;3年生黄芪营养生长期毛蕊异黄酮苷和黄芪甲苷含量变化范围分别为0.2180～ 0.3830,0.2733 ～0.6150 mg·g-1.结论:毛蕊异黄酮苷和黄芪甲苷含量3年生高于2年生,随生长时间的延长含量也随之增加;本研究也改进了毛蕊异黄酮苷含量测定方法.
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HPLC法同时测定天山岩黄芪中4种异黄酮
目的 建立HPLC法同时测定天山岩黄芪中4种异黄酮的含有量.方法 天山岩黄芪70％乙醇提取液的分析采用YMC-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);以乙腈-0.2％甲酸为流动相,梯度洗脱;体积流量0.8 mL/min;检测波长254 nm;柱温35℃.结果 毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素分别在1～50、2～70、0.8～50、2～70 μg/mL范围内呈良好的线性关系(r=0.999 9),平均加样回收率95.1％ ～104.1％,RSD 0.5％～2.8％.结论 该方法稳定可靠,可用于天山岩黄芪的质量控制.
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加味补阳还五汤对糖尿病大鼠血糖的影响及其抗氧化活性
目的 考察加味补阳还五汤(黄芪、当归尾、赤芍,等)对糖尿病大鼠血糖的影响及其抗氧化活性.方法 建立链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠模型,以二甲双胍为阳性对照组.给药组灌胃加味补阳还五汤后,测定各组大鼠空腹血糖、血清及组织(心脏、肾脏、胰腺)中超氧化物岐化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含有量.HPLC法测定血浆中抗氧化成分毛蕊异黄酮苷、芍药苷含有量,计算其药动学参数.结果 与模型组比较,加味补阳还五汤组降血糖作用明显(P＜0.05);血清及各组织(除胰腺外)中SOD活性显著提高,MDA含有量显著降低(P＜0.05).毛蕊异黄酮苷、芍药苷的药动学行为符合二室开放模型,血药质量浓度在50 ～ 70 min内达到高,180 ～720 min内变化不明显.结论 加味补阳还五汤可降低糖尿病大鼠血糖,并提高心脏和肾脏抗氧化活性.方中毛蕊异黄酮苷和芍药苷吸收较快,代谢较慢,有利于相关治疗.
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当归补血不同制剂中4种指标成分的含量测定与比较
建立了高效液相色谱法同时测定当归补血制剂中毛蕊异黄酮苷、阿魏酸、毛蕊异黄酮和芒柄花素的含量,并比较当归补血不同制剂中4个指标成分的含量.采用Kromasil C18色谱柱,流动相为甲醇:0.4％甲酸,梯度洗脱,检测波长280 nm.毛蕊异黄酮苷、阿魏酸、毛蕊异黄酮和芒柄花素分别在0.8～16、1～20、0.6～12和0.56～1 1.2 μg/ml浓度范围内线性关系良好,回收率分别为99.4％、99.6％、96.8％和98.2％,R泐分别为2.1％、1.6％、1.8％和1.9％.
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高效液相色谱法测定黄芪中毛蕊异黄酮苷和芒柄花素的含量
目的:采用高效液相色谱法测定膜荚黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.) Bge.中毛蕊异黄酮苷和芒柄花素的含量.方法:依利特Hypersil ODS 2色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:A相为乙腈-甲醇(体积分数 9∶1),B相为水,梯度洗脱;流速:1.0 ml/min;检测波长:260 nm;柱温:室温;进样量:20 μl.黄芪药材以甲醇超声提取2次,每次20 min.结果:毛蕊异黄酮苷和芒柄花素色谱峰的理论塔板数分别为50 134和25 258.回归方程分别为Y=58 924 X-12 352,r=0.999 9和Y=9 237 X-124 447,r=0.999 9,线性范围分别为2.022～101.1 μg/ml和38.04～1 522 μg/ml.方法学考察结果表明,毛蕊异黄酮苷和芒柄花素的日内和日间RSD均<2.0%,低检测限分别为0.202 2 μg/ml和1.522 μg/ml,加样回收率结果分别为98.34%,RSD＝1.33%(n=3)和98.84%,RSD＝0.12%(n=3).测定了10批次黄芪药材的毛蕊异黄酮苷和芒柄花素的含量.结论:该方法稳定简便,结果可靠,能够用于黄芪药材中毛蕊异黄酮苷和芒柄花素含量测定的研究.
