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HPLC同时测定不同产地葛根中6种主要异黄酮类成分的含量
目的:建立同时测定葛根药材中6种主要异黄酮类成分含量的HPLC方法.方法:采用RP-HPLC法,Kromasil C18(4.6 mm×250 mm,5μm)柱；流动相:甲醇-0.1％枸橼酸溶液,梯度洗脱；流速1.0 mL· min-1,柱温30℃,检测波长250 nm.结果:3’-羟基葛根素、葛根素、大豆苷、染料木苷、芒柄花苷、大豆苷元的线性范围分别为76.2～1 016,65.8 ～1 316,85.6 ～1712,49.98 ～499.8,21.94 ～219.4,48.5 ～485 ng,相关系数(R2)均大于0.999 6,6种成分的平均加样回收率分别为99.73％(RSD 0.6％),100.48％ (RSD 1.11％),100.37％ (RSD 0.79％),100.28％(RSD 1.07％),99.96％ (RSD 1.22％),97.36％(RSD 1.59％).结论:方法简便快速,重复性良好,结果准确可靠,可用于葛根药材中6种主要异黄酮类成分的含量测定.
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葛根异黄酮对糖尿病肾病患者血液流变学及TGFβ-Smad通路蛋白影响的研究
目的：对葛根异黄酮对糖尿病肾病患者血液流变学及 TGFβ- Smad 蛋白影响进行研究，为临床治疗提供参考。方法对2010年1月至2015年12月期间诊治的糖尿病肾病患者进行研究，分析患者经葛根素异黄酮治疗后血液流变学变化及 TGFβ- Smad 蛋白表达的影响。结果葛根素异黄酮对糖尿病肾病患者血液流变学参数全血高切黏度、全血低切黏度、血浆比黏度和纤维蛋白原均有明显的改善作用（ P <0.05），血清中转化生长因子β（TGFβ）、血管内皮生长因子（VEGF）、肿瘤坏死因子（TNFα）、Smad1、Smad2、Smad3、脑钠肽（BNP）、白细胞介素（IL）2、IL6、S100、β-淀粉样蛋白（Aβ）、Bax、Caspase3、C 反应蛋白、基质金属蛋白酶（MMP）2、MMP3及 MMP9蛋白表达明显降低（ P <0.05），而Bcl2蛋白和心肌肌钙蛋白表达明显增强（ P <0.05），随治疗时间的延长，效果越明显（ P <0.05）。结论葛根异黄酮对糖尿病肾病患者血液流变学有明显的改善效果，且可能与其调控细胞内 TGFβ- Smad 蛋白表达有关。
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葛根异黄酮对更年期大鼠学习记忆及抗氧化作用的研究
目的 观察葛根异黄酮对更年期雌性SD大鼠抗氧化作用及学习记忆的影响.方法 选用健康更年期雌性SD大鼠,随机分成空白对照组和低、中、高剂量4组.空白对照组给予蒸馏水,实验组每日分别灌服40、80、160 mg/kg剂量的葛根异黄酮,连续60 d.第60天用跳台实验方法测定大鼠学习记忆能力,取血测定血清过氧化脂质丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力.结果 与空白对照组比较,中、高剂量组大鼠血清MDA含量显著降低, 低、中、高剂量组血清SOD活力明显升高,中、高剂量组血清GSH-Px活力明显升高.结论 葛根异黄酮具有明显的抗氧化作用,并有效提高更年期雌性SD大鼠的学习记忆能力.
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葛根异黄酮对运动训练大鼠血液生化指标及抗氧化的影响
目的 探讨葛根异黄酮对运动训练大鼠血液生化指标及抗氧化的影响.方法 将健康雄性SD大鼠分为安静组、训练组、训练组+不同剂量的葛根异黄酮组.通过游泳运动训练比较各组大鼠血清中血液生化指标(谷草转氨酶、谷丙转氨酶、血糖、全血血红蛋白)及抗氧化能力(超氧化物歧化酶的活性、丙二醛的含量).结果 100.0、200.0 mg/kg的葛根异黄酮能显著升高运动训练大鼠的血清超氧化物歧化酶活性、血糖、全血血红蛋白含量(P＜0.05),并显著降低丙二醛含量和谷草转氨酶活性(P＜0.05).结论 葛根异黄酮对运动训练大鼠具有明显的抗氧化作用,可明显改善血液生化指标.
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葛根异黄酮对衰老模型大鼠学习记忆能力及海马神经元形态的影响
目的:观察葛根异黄酮对衰老模型大鼠学习记忆能力及海马神经元形态的影响.方法:大鼠随机分为对照组,衰老模型组,药物低、中、高剂量组,采用1%D-半乳糖100mg/kg颈背部皮下注射6周造衰老模型.造模后药物低、中、高剂量组每天分别给予40mg/kg、80mg/kg、160mg/kg葛根异黄酮灌胃给药8周.用药后水迷宫法测试大鼠学习记忆能力,后随将大鼠处死取海马组织,制作石蜡切片,苏木素伊红染色,光学显微镜观察神经元形态结构.结果:用药组与模型组比较,中、高剂量组逃避潜伏期明显缩短、所占距离百分比明显增高;光镜下,模型组与对照组相比锥体细胞明显减少,细胞排列稀疏,细胞核体积明显减少,结构不清楚;药物高剂量组与模型组比较结构、形态基本正常,细胞脱失现象较少.结论:葛根异黄酮对衰老模型大鼠学习记忆能力具有改善作用,对海马神经元具有保护作用.
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葛根异黄酮对去卵巢大鼠血管内皮功能的保护作用
目的：观察葛根异黄酮对去卵巢大鼠血管内皮功能的影响及机制。方法雌性 SD大鼠行双侧卵巢切除术后，分别灌胃给予150 mg/kg和50 mg/kg葛根异黄酮，时间为12周。酶联免疫吸附法检测血清雌二醇(E2)和内皮素(ET )含量。硝酸还原酶法检测血清一氧化氮(NO)水平。在分离的各组动脉环标本上，观察乙酰胆碱诱发的内皮依赖性血管舒张反应和硝普钠诱发的非内皮依赖性血管舒张功能变化。Western blot方法观察各组内皮组织样品的内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达变化。结果与假手术组比较，去卵巢组大鼠的血清 E2、ET和 NO水平出现显著改变，而且其动脉环对乙酰胆碱的舒张功能出现显著性障碍，但对硝普钠的舒张效应无影响。在去卵巢术后给予大小剂量的葛根异黄酮干预后，血清 E2、ET和 NO水平以及内皮舒张功能，与去卵巢组比较有统计学意义(P<0.05)。此外，葛根异黄酮也可上调去卵巢大鼠内皮组织的 eNOS表达。结论葛根异黄酮具有保护去卵巢大鼠血管内皮功能作用，其机制与类雌激素样作用、上调 eNOS表达和降低 ET水平等因素有关。
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葛根异黄酮联合维生素D防治骨质疏松的协同效应
背景:葛根异黄酮具有类雌二醇结构特征,对去卵巢大鼠的骨质丢失和骨量的减少有一定的抑制作用.但也有报道其对去卵巢大鼠骨质疏松的防治效果较弱且单独使用效果不明显.目的:观察葛根异黄酮与维生素D联合对去卵巢大鼠骨质疏松的作用.方法:将81只3月龄雌性SD大鼠随机分为9组:除假手术组外其他各组均行双侧卵巢摘除造模.低、中、高剂量TIP组,VitD组,低、中、高剂量联合组在去卵巢基础上分别灌胃给予相应剂量的葛根异黄酮和(或)维生素D;模型组和假手术组不给予药物治疗.给药3个月,计算大鼠子宫系数;测定大鼠血清碱性磷酸酶、血钙、血磷、骨钙素及血清雌二醇水平;检测大鼠股骨骨密度.结果与结论:与模型组比较,中、高剂量TIP组,低、中、高剂量联合组大鼠子宫系数、雌二醇水平明显增高(P < 0.05),血清碱性磷酸酶、骨钙素水平明显降低(P < 0.05),股骨中心及远心骨密度均明显增加(P < 0.05),均以高剂量联合组作用效果明显.且在子宫系数,雌二醇、血清碱性磷酸酶、骨钙素水平及股骨远心端骨密度方面,葛根异黄酮和维生素D均表现为协同作用.在血钙、血磷方面,葛根异黄酮和(或)维生素D的作用不明显.说明葛根异黄酮和维生素D联合使用对去卵巢大鼠骨质疏松的防治有协同效应.
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植物异黄酮对更年期妇女骨密度和骨代谢血清生化指标的影响
目的:研究植物异黄酮(葛根异黄酮和大豆异黄酮)对更年期妇女骨密度和骨代谢生化指标的影响.方法:将96例身体健康的更年期女性随机分为5组,安慰剂组、钙儿奇-D组、葛根异黄酮组、大豆异黄酮组和钙儿奇-D+大豆异黄酮组.服药3个月后,比较各处理组用药前后血清钙(Ca)、血清碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(BGP)和骨密度(BMD)等指标的变化情况.结果:服药后血清Ca有升高的趋势,其中钙儿奇-D和葛根异黄酮组的血清Ca比服药前显著升高(P＜0.05);服药后血清ALP葛根异黄酮和大豆异黄酮组有上升趋势;服药后血清BGP(除了安慰剂组)各组有增加的趋势,其中钙儿奇-D组的血清BGP明显增加.结论:植物异黄酮可以使更年期妇女血清Ca升高,使血清ALP和BGP处于较活跃的水平.
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葛根异黄酮对衰老模型大鼠学习记忆及海马CA1区长时程增强的影响
目的 观察葛根异黄酮对衰老模型大鼠学习记忆及海马CA1区长时程增强(LTP)的影响.方法 选用3～4月龄,雌性Wistar大鼠,体重180±20 g,随机分为生理盐水组,模型组,药物低、中、高剂量组,每组11只.造模时,模型组、药物组每天颈背部皮下注射1％D-半乳糖100 mg/kg,生理盐水组每天颈背部皮下注射等量生理盐水,连续6w.造模成功后,第2天开始灌胃给药,药物(低、中、高剂量)组每天分别给予(40、80、160 mg/kg)葛根异黄酮灌胃,模型组、生理盐水组每天给予80 mg/kg生理盐水灌胃,连续8w.用药结束后,再用水迷宫法测试大鼠学习记忆功能.测试完后,采用高频刺激Schaffer侧支,然后在同侧海马CA1区诱导LTP的方法检测大鼠海马突触可塑性的变化.结果 用药组与模型组比较,中、高剂量组逃避潜伏期(EL)明显缩短(P＜0.01)、所占距离百分比明显增高(P＜0.01,P＜0.05)；中、高剂量组高频刺激后PS幅度明显大于模型组(P＜0.01).结论 葛根异黄酮对衰老模型大鼠学习记忆功能具有促进作用,其机制之一可能与大鼠海马CA1区LTP的提高有关.
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葛根异黄酮对大鼠前列腺增生的影响
目的 探讨葛根异黄酮对丙酸睾酮诱导的去势大鼠前列腺增生的抑制作用及其发生机制.方法 雄性Wistar大鼠,随机分为6组.空白组大鼠行假手术(其余均行去势手术).饲养7 d后,除空白组注射生理盐水外,其余5组均皮下注射丙酸睾酮10 mg/(kg·d),连续注射10 d,复制前列腺增生模型.随后隔两日一次皮下注射丙酸睾酮维持,阳性对照组灌胃非那雄胺1.0 mg/(kg·d),葛根异黄酮高、中、低剂量组按照180、120、60 mg/(kg·d)灌胃,其余两组给予生理盐水,连续给药35 d.取血清,测定前列腺特异性酸性磷酸酶活力;分离前列腺组织,称重,计算前列腺指数(PI);用足趾容积测量仪测前列腺体积的变化;光镜下观察前列腺组织形态的变化.结果 各剂量组葛根异黄酮对大鼠前列腺湿重、体积及PI相对模型组有明显影响(P<0.05).组织形态学观察,不同剂量的葛根组均可缓解由丙酸睾酮所致的大鼠前列腺增生的症状,表现为上皮变薄,腺腔内分泌物减少,间质减少等.结论 葛根异黄酮对大鼠前列腺增生有一定抑制作用.
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葛根异黄酮药理作用的研究进展
葛根是一味较古老的中药材,具有重要的药用价值.其中富含异黄酮类化合物,研究表明其在扩血管、抗衰老、抗血栓、降脂降压、增强记忆力、增强免疫力及雌激素样作用等方面有广泛的应用价值.本文对近年来国内外相关文献报道加以概括总结.
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葛根异黄酮对MPP+诱导的SHSY5Y细胞凋亡的保护作用
目的 探讨葛根异黄酮对甲基-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导的SHSY5Y细胞凋亡的保护作用与机制.方法 建立人神经母细胞瘤SHSY5Y细胞的体外MPP+损伤模型,采用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度葛根异黄酮对SHSY5Y细胞存活率的影响,采用RT-PCR法检测各Bcl-2和Bax表达水平.结果 MPP+处理的细胞活力较空白对照组降低,阴性对照组Bcl-2表达水平降低,而Bax表达水平升高,差异具有统计学意义(P<0.01).与阴性对照组比较,葛根异黄酮组Bcl-2表达水平升高,而Bax表达水平降低,差异具有统计学意义(P<0.01).结论 葛根异黄酮对MPP+诱导的SHSY5Y细胞凋亡具有抑制作用,上调Bcl-2和下调Bax mRNA表达可能是其作用的机制之一.
关键词： 葛根异黄酮 对甲基-苯基-吡啶离子 SHSY5Y细胞 mRNA表达 -
葛根异黄酮对缺糖缺氧损伤SHSY5Y细胞的保护作用
目的 探讨葛根异黄酮对缺糖缺氧损伤SHSY5Y细胞的保护作用.方法 将SHSY5Y细胞分为空白对照组、损伤组、损伤+葛根异黄酮给药组(高、中、低浓度分别为200mg·L-1、100mg·L-1、50mg·L-1)共计5组,利用噻唑蓝(MTT)法检测各组SHSY5Y细胞的活力,用分光光度法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率;用黄嘌呤氧化酶法,测定超氧化物歧化酶(SOD)活力;用硫代巴比妥酸比色法,测定丙二醛(MDA)含量.结果 与正常对照组比较,缺糖缺氧损伤组细胞活力和SOD活性显著降低,MDA含量和LDH释放率显著升高(均P<0.05).与缺糖缺氧损伤组比较,不同剂量葛根异黄酮处理组抑制了这些指标的改变,其中,损伤+高浓度的葛根异黄酮组的细胞活力和SOD活性显著升高,MDA含量和LDH释放率显著降低(均P<0.05).结论 葛根异黄酮对缺糖缺氧损伤SHSY5Y细胞具有保护作用.
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葛根异黄酮对大鼠实验性牙周炎的治疗作用
目的:评估葛根异黄酮对牙周炎的治疗效果,通过TNF-α在牙周组织中的表达的图像的半定量分析,来为葛根异黄酮用于治疗和预防牙周疾病提供实验依据.方法:用牙颈部丝线结扎+喂饲高糖水法复制牙周炎模型,成模后灌喂不同剂量的葛根异黄酮混悬液.结果:葛根异黄酮高剂量组建模术后7周时GI和肿瘤坏死因子α阳性表达降低明显(P<0.01).结论:在牙周炎发生后,给予葛根异黄酮治疗,能有效降低牙周组织的炎症程度.
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内部沸腾法提取分离葛根中的葛根异黄酮和大豆异黄酮
目的:采用正丁醇为提取溶剂的内部沸腾法提取葛根异黄酮和大豆异黄酮.方法:用少量乙醇溶液润湿葛根粉末使其中的葛根异黄酮充分解吸,然后加入一定温度的含水正丁醇溶液,使渗透到葛根组织内部的乙醇沸腾,强化提取过程.由于大豆异黄酮与葛根异黄酮在丁醇中的溶解度有较大差异,因此浓缩过程中可采用分步蒸发浓缩结晶,浓缩除去部分溶剂后,结晶分离出大豆异黄酮,后蒸干结晶母液,得到葛根异黄酮.结果:在80 mL 60%乙醇、解吸时间20 min、含水量20%的600 mL正丁醇温度90℃时,总黄酮得率可达到11.3%.当浓缩除去90%的溶剂时,大豆异黄酮与葛根异黄酮的质量比为1:3.经液相检测,葛根异黄酮中葛根素含量可达46.0%;大豆异黄酮中大豆苷的含量为6.12%.结论:内部沸腾提取及溶剂蒸发结晶分离的工艺简单,为从葛根中同时提取大豆异黄酮与葛根异黄酮的工业化生产提供了依据.
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几种提取葛根异黄酮的方法比较及实验优化
目的:选择微波辅助提取葛根异黄酮的佳条件,并对葛根异黄酮的微波辅助提取法与常用的回流法、冷浸法和索氏提取法进行对比研究.方法:采用微波辅助提取法、回流法、冷浸法和索氏提取法提取葛根异黄酮,并用紫外分光光度法测定提取干膏中的异黄酮含量.结果:实验条件为:固液比1:38、乙醇浓度45%、微波功率为224 W和时间7 min时,微波辅助提取法的提取率(167 mg·g-1)和纯度(59.4%)均较高,且明显优于回流法(69.6 mg·g-1)和冷浸法(45.5%).结论:微波辅助提取法是一种合适的提取法.
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葛根异黄酮类成分对缺氧复氧损伤心肌细胞保护作用的研究
目的 建立葛根异黄酮类成分的HPLC指纹图谱,分析其对心肌细胞缺氧复氧损伤保护作用的相关性.方法 HPLC-TOF-MS法对葛根异黄酮各指纹峰进行辨认,并考察不同剂量葛根异黄酮给药组对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用,然后采用灰色关联分析法将峰面积和细胞存活率药效数据相关联.结果 从HPLC指纹图谱中鉴定出7个葛根异黄酮类成分,分别为葛根素、3'-羟基葛根素、葛根素木糖苷、3'-甲氧基葛根素、葛根素-7-木糖苷、大豆苷和大豆苷元,这些成分的药效并无很大差异,相关系数大值葛根素(0.761 4)与小值大豆苷(0.670 8)之间相差不到0.1.结论 葛根异黄酮保护缺氧复氧损伤心肌细胞的作用可能是通过多组分协同而发挥疗效.
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葛根异黄酮对去卵巢大鼠的抗骨质疏松作用及其机制
目的 研究葛根异黄酮对去卵巢大鼠抗骨质疏松的作用机制.方法 选择3月龄健康雌性Wiser大鼠60只,随机分为假手术组、模型组、尼尔雌醇组、葛根异黄酮低、中和高剂量组等6组,每组10只.假手术和模型组灌胃给予0.5％ CMC-Na溶液；尼尔雌醇组灌胃给予尼尔雌醇0.5 mg/kg,每周2次(周一和周四)；葛根异黄酮低、中和高剂量组分别灌胃给予葛根异黄酮25,50,和100 mg/kg,时间均为70 d.采用ELISA法测定血清细胞因子IL-6、IGF-1水平；免疫组化法测定颅骨成骨细胞骨形态发生蛋白-2(BMP-2)的表达；双能X线骨密度仪测量股骨中点及远心端骨密度.结果 葛根异黄酮能明显的增加股骨中点及远心端骨密度(P＜0.05),升高血清IGF-1的水平(P＜0.05),降低血清IL-6的水平(P＜0.01),并且能较好的增加成骨细胞BMP-2表达水平(P＜0.01).结论 葛根异黄酮能够改善骨质疏松,作用机制可能通过下调IL-6表达水平和提高成骨细胞BMP-2的表达实现的.
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分子模拟辅助设计合成葛根异黄酮分子印记整体柱
目的:通过分子模拟辅助设计合成对葛根异黄酮具有特异性识别能力的分子印记整体柱,并从理论上探究其特异性分子识别机制.方法:以染料木素为模板,4-乙烯吡啶、丙烯酰胺和甲基丙烯酸为候选功能单体,采用密度泛函(DFT)精确预测和计算染料木素与不同功能单体间的氢键能,从而筛选出佳功能单体及其与模板分子的比例.根据计算的结果,采用原位聚合法合成葛根异黄酮分子印记整体柱.结果:4-乙烯吡啶与染料木素之间的相互作用强,为佳功能单体,且4-乙烯吡啶与染料木素形成的复合物的佳比例为2∶1；并在此条件下,成功制备出葛根异黄酮分子印记整体柱.结论:实验结果表明分子模拟辅助设计对葛根异黄酮分子印记整体柱的制备具有理论指导意义,并可推广应用到其他非共价印记体系.
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葛根异黄酮对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用
目的 探讨葛根异黄酮(Total isoflavones from pueraria lobata,TIP)对甲基一苯基一吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyr-idinium,MPP+)诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及其机制.方法 用不同浓度TIP预处理体外培养的PC12细胞后.加入MPP+诱导多巴胺能神经损伤模型,用MTY法检测PC12细胞活力,采用实时定量RT-PCR检测Bcl-2和BaxmRNA的表达水平.结果 MPP+处理48～96 h,细胞活力较空白对照组降低,阴性对照组Bax 2-△△Ct升高,而Bcl-22△△Ct降低,差异具有统计学意义(P<0.05).与阴性对照组比较,葛根异黄酮组Bax 2-△△Ct降低,而Bcl-2 2-△△Ct升高,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 葛根异黄酮对MPP+诱导的PC12细胞凋亡具有抑制作用,下调Bax和上调Bcl-2 mRNA表达可能是其作用的机制之一.
关键词： 帕金森病 葛根异黄酮 1-甲基-4-苯基吡啶离子 细胞凋亡
