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HPLC法同时测定淫羊藿总黄酮胶囊中5种黄酮类成分＊
目的：建立同时测定淫羊藿总黄酮胶囊中朝霍定A、朝霍定B、朝霍定C、淫羊藿苷、宝霍苷I等5种成分含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法：所采用的色谱条件为：色谱柱：Eclipse Plus C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：乙腈-水，梯度洗脱；体积流量：1.0 mL·min-1；检测波长：270 nm；柱温：25℃。结果：朝霍定A、朝霍定B、朝霍定C、淫羊藿苷、宝霍苷I分别在3.10-62.00、5.70-114.00、9.14-182.80、15.20-304.00、1.56-31.20μg·mL-1范围内呈良好的线性关系，相关系数r均大于0.9993；平均加样回收率分别为101.06%（RSD=1.05%，n=6）、100.78%（RSD=1.08%，n=6）、99.17%（RSD=1.14%，n=6）、100.23%（RSD=0.68%，n=6）、99.09%（RSD=1.30%，n=6），该方法的精密度、重复性和稳定性良好。结论：该方法简便、准确，为淫羊藿总黄酮胶囊多成分含量测定提供一定的参考价值。
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HPLC同时测定芪骨胶囊中5种成分的含量
目的:建立芪骨胶囊的多成分指标定量方法.方法:采用高效液相色谱法同时测定芪骨胶囊中松果菊苷、朝藿定B,朝藿定C,淫羊藿苷和柚皮苷的含量,Platisil-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,流速1 mL· min-1,检测波长270 nm,柱温30℃.结果:松果菊苷,柚皮苷,朝藿定B,朝藿定C,淫羊藿苷分别在91 ～3 094 ng(r=0.999 8),19 ～646 ng(r =0.999 7),11～374 ng(r =0.999 5),25 ～850 ng(r =0.999 5),29 ～986 ng(r=0.999 6)与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率分别为98.9％ (RSD 1.2％),99.1％(RSD 1.3％),99.1％ (RSD 1.5％),99.4％ (RSD 1.5％),99.3％ (RSD 1.5％).结论:所建立的方法简便、准确、重复性好,可用于芪骨胶囊的质量控制.
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UPLC同时测定补肾强身片中6种化学成分的含量
目的:采用超高效液相色谱法(UPLC)同时测定补肾强身片中原儿茶酸、绿原酸、金丝桃苷、特女贞苷、朝藿定C和淫羊藿苷的含量.方法:以Agilent SB-C18色谱柱(4.6 mm×100 mm,2.7 μm),乙腈-0.1％磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速0.5 mL· min-1,柱温40℃,检测波长260,325,360,224,270 nm.结果:6个成分的检测范围分别为原儿茶酸0.78～201.00 mg·L-1(r =0.999 9),绿原酸0.79～202.60 mg·L-1(r =0.9997),金丝桃苷0.93～238.39 mg·L-1(r =0.9999),特女贞苷0.66 ～169.62 mg·L-1(r =0.999 9),朝藿定C 0.81 ～206.85 mg·L-1(r =0.999 9),淫羊藿苷0.74 ～ 190.85 mg·L-1(r=0.9999).平均回收率分别为97.6％ (RSD 1.0％),99.6％ (RSD 1.5％),99.7％ (RSD 1.5％),97.2％ (RSD 0.8％),95.5％ (RSD 0.4％),96.3％ (RSD 0.9％).结论:该方法简便可靠,可用于补肾强身片的质量控制.
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HPLC-CAD同时测定骨疏康胶囊中6种成分的含量
目的:建立HPLC-CAD同时测定骨疏康胶囊中柚皮苷,朝藿定B,朝藿定C,淫羊藿苷,5-羟甲基糠醛(5-HMF)及丹参酮ⅡA的含量,为骨疏康胶囊的质量控制提供参考.方法:采用高效液相色谱法联合电雾式检测器法(HPLC-CAD),Agilent ZORBAX Eclipse XDB C18色谱柱(4.6 mm ×250 mm,5μm),乙腈(A)m.05％甲酸水(B)为流动相,梯度洗脱(0～10 min,10％A;10～25 min,10％ ～ 25％A;25 ～ 30 min,25％～30％A;30 ～ 45 min,30％ ～60％A;45 ～50 min,60％～75％A),流速0.8 mL· min-,雾化器温度为35℃,柱温35℃,进样量10 μL,测定骨疏康胶囊中6种成分的含量.结果:柚皮苷,朝藿定B,朝藿定C,淫羊藿苷,5-羟甲基糠醛及丹参酮ⅡA的质量浓度分别在0.006 ～0.120 μg(r =0.999 7),0.041 ～0.820 μg (r=0.999 9),0.011 ～0.220 μg(r =0.999 6),0.022 ～0.440 μg(r=0.999 8),0.012～0.240 μg(r=0.999 8),0.005～0.100 μg(r =0.999 8)与峰面积呈良好的线性关系.柚皮苷,朝藿定B,朝藿定C,淫羊藿苷,5-羟甲基糠醛及丹参酮ⅡA的平均加样回收率分别为99.26％,97.99％,98.17％,99.34％,98.26％及99.25％,RSD(n =6)分别为1.7％,1.0％,1.6％,1.4％,1.9％和1.3％.结论:该方法准确、简便、重复性好、灵敏度高,可用于骨疏康胶囊中多成分的质量控制研究.
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淫羊藿提取物的质量研究
目的:考察目前市场上淫羊藿提取物的质量.方法:采用HPLC测定市售的淫羊藿提取物中朝藿定C、淫羊藿苷、箭藿苷B的含量和指纹图谱,紫外分光光度法测定总黄酮含量.结果:大部分提取物中淫羊藿苷含量与公司提供的标示量一致,全部测定样品的指纹图谱分为3类,分别对应于不同的来源药材,淫羊藿苷标示含量相同的样品中朝藿定C、箭藿苷B以及总黄酮的含量存在差异.结论:将提取物指纹图谱与药材指纹图谱进行比对,可以初步确定其来源的药材,药材的不同是造成提取物质量差异的主要因素,建议淫羊藿提取物应该标示药材来源,并进行多项的含量检测,以便实现提取物质量的稳定.
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相同摩尔浓度下淫羊藿苷及朝藿定C单体在斑马鱼骨质疏松模型中的活性研究
目的 用泼尼松龙诱导的斑马鱼骨质疏松模型评价相同摩尔浓度下淫羊藿苷和朝藿定C单体的抗斑马鱼骨质疏松作用.方法 将受精后4日的斑马鱼胚胎分为S组(0.5％二甲亚砜DMSO)、A组(泼尼松龙25μmol/L,0.5％ DMSO)、B组(2 IU/L鲑降钙素,泼尼松龙25μmol/L,0.5％ DMSO)、C组(淫羊藿苷1.5μmol/L,泼尼松龙25μmol/L,0.5％ DMSO)、D组(淫羊藿苷15μmol/L,泼尼松龙25μmol/L,0.5％DMSO)、E组(淫羊藿苷150μmol/L,泼尼松龙25 μmol/L,0.5％ DMSO)、F组(朝藿定C 1.5 μmol/L,泼尼松龙25 μmol/L,0.5％ DMSO)、G组(朝藿定C 15μmol/L,泼尼松龙25 μmol/L,0.5％ DMSO)、H组(朝藿定C 150μmol/L,泼尼松龙25μmol/L,0.5％ DMSO).所有培养液均含有0.5％ DMSD.将各组幼鱼放置与24孔板中,每日更换培养液,在恒温环境28.5℃培养箱中,培养至第9天处死,以茜素红染色.用显微镜对斑马鱼颅骨腹侧进行观察,定量分析将成像染色区域.结果 与S组比较,A组骨矿化累计光密度值降低(P＜0.01);B组骨矿化累计光密度值升高(P＜0.01).而C、D、E组随浓度增加矿化面积呈微弱的递增趋势(P＜0.05).与A组比较,B组累计光密度值增高明显,差异有统计学意义(P＜0.01),C、D组差异无统计学意义(P＞0.05),而E组明显升高(P＜0.05).F、G组随浓度增加,矿化面积呈递增趋势,颅骨染色累计光密度值升高(P＜0.05),H组内斑马鱼胚胎无存活.E、F、G组间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).S组斑马鱼头颅骨染色清晰,脊椎骨及两旁鳃骨染色清晰.A组在相同染色区域的强度明显减少.B组在相同条件下呈现骨组织成骨加快,矿化面积明显增多,骨组织深染等特点.C、D、E、F、G组,在染色中颅骨矿化程度逐渐增加,椎骨及两侧腮骨矿化面积及染色强度递增,以椎骨改变为显著,但均未达到B组的染色强度.结论 斑马鱼骨质疏松模型是一种简单、高效的中药成分筛选模型,低浓度朝藿定C在该模型中的活性优于淫羊藿苷,高浓度朝藿定C的可能毒性作用还需要深入研究.
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朝藿定C诱导C3H小鼠胚胎间充质干细胞向内皮样细胞分化的研究
目的 研究朝藿定C (Epimedin C)诱导C3H小鼠胚胎间充质干细胞(murine embryonic mesenchymal stem cells,C3H/10T1/2)内皮样分化作用.方法 体外培养C3 H/10 T1/2细胞,MTT法和结晶紫法检测不同浓度下朝藿定C对细胞的毒性作用;显微镜下观察朝藿定C诱导后的细胞形态变化;采用流式细胞仪检测朝藿定C对细胞周期分布的影响;采用半定量PCR检测血管内皮细胞标志物CD31、CD34、血管内皮细胞锌指1(vascular endothelial zinc finger 1,Vezf1)、血管生成素1(angiopoietin 1,Ang1)、血管生成素2(angiopoietin 2,Ang2)mRNA的表达;采用免疫细胞化学染色法检测血小板内皮黏附分子-1(platelet-endothelial cell adhesion molecule-1,CD31)、细胞外-5'-核苷酸酶(ecto-5'-nucleotidase,CD73)、内皮细胞特异性分子-1(endothelial cell specific molecule-1,ESM-1)、整合素β5(integrin β5)的表达.结果 朝藿定C在浓度1～30μmol/L时,不影响C3H/10T1/2细胞的存活率.30 μm ol/L处理24 h后,对细胞周期无明显影响.朝藿定C能诱导C3H/10T1/2细胞向血管内皮细胞分化,使细胞呈明显漩涡状排列.PCR检测结果显示,与干预前比较,经诱导5天后的C3H/10T1/2细胞血管内皮细胞标志因子、CD34、Vezf1、Ang1、Ang2 mRNA水平明显增加(P＜ 0.05,P＜0.01);细胞免疫化学染色结果显示诱导5天后的C3 H/10T1/2细胞血管内皮细胞标志性蛋白CD31、CD73、ESM-1均呈阳性表达,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05).结论 朝藿定C能诱导C3 H/10 T1/2细胞向血管内皮样细胞分化.
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朝藿定C对骨质疏松模型小鼠骨组织形态学的影响
目的探讨朝藿定C对骨质疏松模型小鼠骨组织形态学的影响.方法以0.4%戊巴比妥钠麻醉动物后,造模小鼠切除双侧卵巢,对照小鼠切除卵巢旁同样大小的脂肪团.术后45d将小鼠分为6组:假手术组(等容积常水)、模型组(等容积常水)、阳性药组(己烯雌酚2mg/kg)、朝藿定C高剂量组(20mg/kg)、朝藿定C中剂量组(10mg/kg)、朝藿定C低剂量组(5mg/kg),每组14只小鼠.各组动物按各自药物和剂量灌胃给药,每日1次.连续给药60d后,处死小鼠,以BI-2000医学图像分析系统对股骨做骨组织形态计量学分析.结果与对照组比较,模型组骨小梁平均宽度及骨小梁面积百分率、成骨细胞数明显减少,破骨细胞数明显增多,差异显著;与模型组比较,朝藿定C高中剂量组及己烯雌酚组骨小梁平均宽度及骨小梁面积百分率、成骨细胞数明显增高,破骨细胞数明显减少.(P＜0.05或P＜0.01).结论朝藿定C能增加去卵巢小鼠骨的骨量,具有促进骨形成和抑制骨吸收的双重作用.
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一测多评法测定补肾强身制剂中淫羊藿苷与朝藿定C的含量
目的 建立补肾强身制剂中淫羊藿苷与朝藿定C的一测多评法.方法 建立HPLC法测定淫羊藿苷与朝藿定C间的相对校正因子,并应用于补肾强身制剂,比较计算值与测得值的差异.结果 用一测多评法对6批样品中淫羊藿苷与朝藿定C进行测定,与外标法实测值基本一致.结论 该方法可靠,结果准确,可用于补肾强身制剂质量控制.
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朝藿定C与淫羊藿苷对去卵巢小鼠子宫的影响
目的 观察朝藿定C与淫羊藿苷对去卵巢小鼠子宫的作用.方法 取昆明种雌性小鼠,手术摘除双侧卵巢,术后3天随机分为8组:模型组、己烯雌酚组、朝藿定C高、中、低剂量组及淫羊藿苷高、中、低剂量组,另设假手术组.连续给药60d后,处死动物,观测动物子宫系数(UC)、子宫内膜厚度(ET)和子宫腺体直径(UGD).结果 与假手术组比较,模型组UC、ET和UGD明显降低.与模型组比较,淫羊藿苷高、中、低组的UC、UGD明显增加；朝藿定C高、中、低组的UC、UGD明显增加,而ET增加不明显.结论 淫羊藿苷和朝藿定C均具有拟雌激素样作用,但淫羊藿苷拟雌激素样作用高于朝藿定C.
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黔岭淫羊藿化学成分的研究Ⅱ
目的研究黔岭淫羊藿(Epimedium leptorrhizum Stearn.)根的化学成分,为阐明其有效成分提供依据.方法利用硅胶、聚酰胺柱层析及硅胶制备薄层进行分离,根据化合物的光谱数据(IR,UV,MS,1H-NMR,13C-NMR)和化学方法鉴定其结构.结果从其根的正丁醇萃取物中分离得到5个化合物,分别鉴定为:淫羊藿次苷(Ⅰ),淫羊藿苷(Ⅱ),淫羊藿次苷C(Ⅲ),icariesionl-4′-β-D-glucopyranoside(Ⅳ),朝藿定C(Ⅴ).结论化合物Ⅰ～Ⅴ系首次从该植物中分离得到.
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高效液相色谱法测定淫羊藿药材及饮片中朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C和淫羊藿苷的含量
目的:采用高效液相色谱法,建立测定淫羊藿药材及饮片中朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C和淫羊藿苷含量的方法.方法:采用Agilent ZORBAX SB-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.01％磷酸水(V:V=24:76),流速为1.0 ml/min,柱温为30℃,检测波长为270 nm.结果:朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C和淫羊藿苷分别在0.068～0.408、0.316～1.896、0.280～2.240和0.434～2.604μg范围内线性关系良好,其平均加样回收率分别为103.49％、98.80％、96.75％和102.10％.结论:该方法快捷、准确,能够更好地实现对淫羊藿药材和饮片的质量控制.
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HPLC测定骨松宝颗粒中淫羊藿苷和朝藿定C的含量
目的：建立同时测定骨松宝颗粒中淫羊藿苷和朝藿定 C 含量的高效液相色谱方法。方法：采用 Elite Hypersil ODS2色谱柱（250 mm ×4.6 mm，5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（25∶75），流速1 mL/min，检测波长270 nm。结果：朝藿定 C 进样量在0.216～4.303μg，淫羊藿苷在0.042～0.831μg 范围内呈良好线性关系（r =0.9998）；朝藿定 C 和淫羊藿苷回收率（n =3）分别为98.53%～101.92%，97.32%～103.69%；骨松宝颗粒中朝藿定 C 和淫羊藿苷的含量分别为9.48～18.91 mg/g，1.60～3.62 mg/g。结论：该方法简便、快速、准确，重复性好，可作为骨松宝颗粒多成分检测的方法。
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炮制对巫山淫羊藿黄酮类成分的影响
目的:为巫山淫羊藿饮片质量控制指标的选择提供科学依据.方法:对贵州不同产地的巫山淫羊藿生品和油炙品饮片,采用紫外-可见分光光度法测定总黄酮含量,HPLC测定朝藿定C和淫羊藿苷含量.结果:巫山淫羊藿炮制后总黄酮含量降低,淫羊藿苷含量升高,朝藿定C含量有升有降.结论:巫山淫羊藿饮片以总黄酮、朝藿定C和淫羊藿苷等多指标进行质量评价为佳.
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一测多评法测定淫羊藿中淫羊藿苷和朝藿定A、B、C
目的 建立一测多评(QAMS)法测定淫羊藿中的黄酮类成分,以提高淫羊藿药材的质量控制水平.方法 采用HPLC法,检测波长为270 nm,在一定的线性范围内,测定淫羊藿苷与朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C的相对校正因子,并考察不同色潜柱、不同仪器测定各成分相对校正因子的重现性,以淫羊藿苷为对照品,用所建立的相对校正因子计算淫羊藿药材中朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C的量;同时采用外标法测定100批淫羊藿药材中4种成分的量,以验证QAMS法的准确性和科学性.结果 所建立各成分的相对校正因子重现性良好,分别为1.352、1.384、1.340,其RSD值均小于5％,采用该校正因子计算的朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C的量与外标法实测值之间没有显著性差异.结论 该方法准确可靠,简便可行,且节约对照品及检测成本,该方法可以作为淫羊藿药材多指标成分测定质量控制方法.
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HPLC法制备巫山淫羊藿中的淫羊藿属苷A和朝藿定C对照品
目的 研究制备型高效液相分离纯化巫山淫羊藿中淫羊藿属苷A和朝藿定C的条件.方法 巫山淫羊藿粗提物经大孔吸附树脂和硅胶柱色谱得朝藿定C与淫羊藿属苷A的混合物,进行HPLC制备色谱分离,以乙腈-水(24∶76)为流动相,收集相应流分浓缩至干,甲醇溶解,滤过,滤液蒸干即得.结果 该法所得产品极易结晶,用面积归一化法定量,质量分数大于98.0％,经紫外、红外、核磁共振确定结构,与文献数据基本一致.结论 本法简便快捷,可获得高纯度的淫羊藿属苷A和朝藿定C,解决在常规柱色谱法制备朝藿定C对照品中存在的不易结晶和纯度不够的问题,产品可用作分析用对照品.
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原料勾兑在前列舒乐胶囊质量均一性控制中的应用
目的 通过原料勾兑来控制前列舒乐胶囊质量均一性.方法 采用药材勾兑计算器V2对原料药进行均一化勾兑,比较原料勾兑前后前列舒乐胶囊中朝藿定C、淫羊藿苷质量分数的差异.结果 原料勾兑前、后前列舒乐胶囊中朝藿定C质量分数的RSD分别为82.5％和11.2％,淫羊藿苷质量分数的RSD分别为35.3％和8.7％,指标成分质量分数差异减小,表明其质量均一性明显提高.结论 原料勾兑在控制中成药质量均一性中效果明显,适用于实际生产中.
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一测多评法在仙灵骨葆胶囊中多成分检测的应用研究
目的 采用一测多评法同时测定仙灵骨葆胶囊中5种成分.方法 以淫羊藿苷为基准,建立仙灵骨葆胶囊中该成分与朝藿定C、川续断皂苷Ⅵ、补骨脂素及异补骨脂素的相对校正因子,利用相对校正因子分别计算其量,同时对一测多评法的计算值与外标法实测值进行比较,并用不同色谱柱考察相对保留时间及计算量,评价一测多评法在仙灵骨葆胶囊中应用的可行性和准确性.结果 建立了仙灵骨葆胶囊中多成分一测多评的定量控制方法,外标法各成分的进样量淫羊藿苷在8.2～328.0 ng (r=0.999 5)、朝藿定C在0.055 6～2.224 0 μg (r=0.999 6)、川续断皂苷Ⅵ在0.144 1～5.764 0 μg (r=0.999 6)、补骨脂素在5.4～215.2 ng (r=0.998 0)、异补骨脂素在6.6～265.6 ng (r=0.998 5)线性关系良好,平均回收率分别为97.59％、98.58％、98.11％、97.86％、98.22％,RSD均小于2.0％;并采用夹角余弦法对一测多评计算值与外标实测值进行评价,结果无显著性差异.结论 采用基于相对保留时间定位和相对校正因子计算的一测多评法既能利用一种对照品同时测定多成分的量,节约对照品,又能适合多指标质量评价模式的要求,提高工作效率.
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HPLC同时测定仙灵骨葆胶囊中朝藿定C、淫羊藿苷、补骨脂素和异补骨脂素
目的 建立HPLC同时测定仙灵骨葆胶囊中朝藿定C、淫羊藿苷、补骨脂素和异补骨脂素的方法.方法 RP-HPLC法测定,色谱柱为Spherisorb C18柱(250 mm ×4.6mm,5μm),乙腈-水梯度洗脱,体积流量1mL/min,检测波长250 nm,柱温25℃.结果 朝藿定C在0.505～5.050 μg (r=0.999 99),淫羊藿苷在0.245～2.450 μg (r=0.999 99),补骨脂素在50.05～500.50 ng (r=0.999 99),异补骨脂素在0.047～0.470 μg (r=0.999 99)与峰面积呈良好的线性关系；平均回收率分别为99.7％、98.2％、98.4％、98.0％,RSD分别为1.6％、2.0％、1.7％、2.5％.结论 本方法分析时间短且重现性和稳定性较好,可作为仙灵骨葆胶囊的质量控制方法.
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淫羊藿总黄酮仿生酶解肠溶胶囊的制备及评价
目的 以淫羊藿总黄酮为模型药物,蜗牛酶为水解酶,加入制剂辅料制备可实时酶解、实时吸收的淫羊藿总黄酮仿生酶解肠溶胶囊,对其处方工艺进行优化和评价.方法 以淫羊藿总黄酮释放度为评价指标,采用UV法和单因素实验筛选制备淫羊藿总黄酮仿生酶解肠溶胶囊所需的填充剂种类、用量,崩解剂种类、用量及润湿剂种类等关键因素,并采用响应面法优化其制剂处方,同时采用HPLC法对肠溶胶囊中4种主要黄酮苷(淫羊藿苷及朝藿定A、B、C)的酶解过程进行考察.结果 淫羊藿总黄酮仿生酶解肠溶胶囊的优处方为淫羊藿总黄酮提取物100 mg,蜗牛酶68 mg,α-乳糖65 mg,低取代羟丙纤维素11.7 mg,该制剂在人工肠液中45 min内的总黄酮累积释放率可达85.43％,同时能够在肠道排空时间内(3～6h)酶解完全.结论 所制备的淫羊藿总黄酮仿生酶解肠溶胶囊有利于促进淫羊藿总黄酮在体内的水解转化,为研发高效的淫羊藿总黄酮新制剂提供研究基础.
