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华蟾素注射液对人肝癌HepG-2细胞增殖及拓扑异构酶表达的影响
目的:探讨华蟾素注射液对人肝癌HepG-2细胞增殖及拓扑异构酶Ⅰ(Topo Ⅰ)和Ⅱ的影响.方法:实验分为对照组(不加药)与实验组(华蟾素注射液0.105,0.21,0.42 mg·L-1)；采用四甲基偶氮唑蓝还原法(MTT)观察对HepG-2细胞增殖的影响；采用流式细胞术(AnnexinV/PI)双染色法检测对HepG-2细胞凋亡的影响；采用流式细胞术法检测对HepG-2细胞周期的影响；采用逆转录-多聚酶联反应(RT-PCR)法检测对肝癌HepG-2细胞Topo Ⅰ,TopoⅡmRNA水平表达的影响；采用蛋白免疫印迹法(Western-blot法)观察对HepG-2细胞中Topo Ⅰ,TopoⅡ蛋白表达的影响.结果:华蟾素注射液抑制HepG-2细胞增殖(P＜0.05),诱导细胞凋亡(P＜0.05),呈时间和剂量依赖性；阻滞HepG-2细胞于S期(P＜0.05),呈剂量依赖性；下调Topo Ⅰ,TopoⅡmRNA(P ＜0.05)及蛋白的表达(P＜0.05),呈剂量依赖性.结论:华蟾素注射液能够抑制人肝癌HepG-2细胞增殖,诱导癌细胞凋亡,下调Topo Ⅰ,TopoⅡ表达可能是其机制之一.
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杨梅树皮素诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡机制的研究
目的:探讨杨梅树皮素(myricetin,MYR)对人肝癌HeptG-2抑制生长和诱导凋亡作用及其机制.方法:MTT法研究MYR对人肝癌HepG-2的抑制生长;荧光染色和电子透射电镜观察HepG-2细胞形态;流式细胞仪研究MYR对HepG-2细胞周期的影响及诱导凋亡作用,罗丹明123单染观察MYR对线粒体膜电位的改变;caspase 3,9试剂盒检测MYR对人肝癌HepG-2细胞内caspase3,9活性的影响.结果:MYR对人肝癌HepG-2细胞生长具有明显的抑制作用,并具有剂量依赖性,IC_(50)为58.6617 mg·L~(-1);MYR作用72 h后,HepG-2细胞呈现典型细胞凋亡特征,细胞周期阻滞于G_2/M期,凋亡率高为64.73%.同时线粒体膜电位明显下降,caspase3,9活性增加.结论:MYR对人肝癌HepG-2细胞有明显的抑制生长和诱导凋亡作用,其机制可能与线粒体凋亡途径有关.
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rhTNF-α对人肝癌细胞HepG-2体外抗肿瘤作用研究
目的：探讨重组人肿瘤坏死因子α（recombinant human tumor necrosis factor-α， rhTNF-α）体外对人肝癌细胞 HepG-2生长抑制、侵袭能力及化疗药物敏感性的影响。方法以人肝癌细胞HepG-2为细胞模型，用不同浓度rhTNF-α作用于体外培养的HepG-2肝癌细胞，四甲基偶氮唑蓝法检测rhTNF-α对HepG-2肝癌细胞生长抑制率及其对抗肿瘤药物的敏感性的影响，应用Matrigel模拟基质检测细胞侵袭能力，用ELISA 法检测经不同浓度rhTNF-α作用后 HepG-2细胞中胸苷磷酸化酶（thymidine phsphorylase， TP）水平，对检测结果进行统计学分析。结果 rhTNF-α能显著抑制HepG-2肝癌细胞的生长，呈现明显的量-效关系和时-效关系；rhTNF-α能增强HepG-2肝癌细胞的侵袭能力，且随剂量增高越明显；rhTNF-α能显著提高HepG-2肝癌细胞TP的表达水平，TP水平随着rhTNF-α浓度的增加而增加，对照组及各试验组间TP的表达水平差异有统计学意义（F＝12.062， P＝0.014），各组间两两比较差异均有统计学意义（P均＜0.05）；rhTNF-α与5-FU联合应用对提高HepG-2肝癌细胞对化疗药物的敏感性无明显影响，各组间差异无统计学意义（F＝0.485， P＝0.692）。 rhTNF-α与5′-dFUrd联合应用可提高HepG-2肝癌细胞对化疗药物的敏感性，各组间差异有统计学意义（F＝26.630， P＝0.006），且随着rhTNF-α浓度的增加，HepG-2肝癌细胞存活率逐渐降低，各组间两两比较，差异均有统计学意义（P均＜0.05）。HepG-2肝癌细胞对5′-dFUrd敏感性的增加与rhTNF-α上调TP呈正相关性（r＝0.679， P＝0.001）。结论 rhTNF-α在体外能有效抑制HepG-2肝癌细胞增殖，但对其侵袭能力亦有明显增强，且能通过上调TP的表达，显著提高5-FU前体药物的化疗作用，并呈现明显量效关系。
关键词： 重组人肿瘤坏死因子α HepG-2细胞 胸苷磷酸化酶 增殖 侵袭性 -
胰岛素基因在HepG-2细胞系中的调节表达
用脂质体介导法将质粒p(GIRE)3BP-11×Furin转染至HepG-2细胞.培养该细胞,以不同浓度的葡萄糖或胰岛素加入培养基.结果 显示,葡萄糖和胰岛素均能浓度依赖地分别刺激和抑制胰岛素基因的表达.
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叉头状转录因子O1与吡格列酮干预对肝癌HepG-2细胞葡萄糖消耗的影响
目的 研究叉头状转录因子01( FoxO1)及吡格列酮干预对高胰岛素诱导的肝癌HepG-2细胞葡萄糖消耗的影响及机制.方法 1×10-6 mol/L胰岛素培养HepG-2细胞24h后,诱发培养基葡萄糖消耗减少建立细胞模型,将细胞分为对照组、空白质粒组、FoxO1 siRNA载体组、1×10-5 mol/L吡格列酮组.以普通培养基培养的细胞作为空白对照组.37℃、5％ CO2培养箱中孵育24h,葡萄糖氧化酶法检测培养基中葡萄糖含量,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测FoxOl mRNA和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)mRNA表达,Western blot法检测PPAR-γ蛋白表达.将FoxO1 mRNA、PPAR-γ mRNA、PPAR-γ蛋白表达与葡萄糖消耗量进行相关分析和曲线拟合.采用单因素方差分析及多样本均数两两比较进行统计学分析.结果 高胰岛素培养24h较未诱导细胞培养基的葡萄糖消耗降低[分别为( 1.36±0.03)和(2.93±0.05) mmol/L,P＜0.01],细胞FoxO1 mRNA升高(分别为0.513±0.016和0.425±0.011,P＜0.05),PPAR-γmRNA降低(分别为0.260±0.025和0.441±0.012,P＜0.05),PPAR-γ蛋白降低(分别为0.312±0.032和0.600±0.046,P＜0.05).在抑制FoxO1和吡格列酮干预后此趋势有所缓解,逐渐接近于空白对照组.FoxO1 mRNA、PPAR-γmRNA和PPAR-γ蛋白表达与葡萄糖消耗量高度相关.结论 FoxO1表达升高或降低对葡萄糖代谢产生不利影响;增强PPAR-γ表达可有效恢复高胰岛素诱导的高糖,增加肝细胞的胰岛素敏感性.
关键词： 叉头转录因子类 过氧化物酶体增殖物激活受体 吡格列酮 HepG-2细胞 -
BAPTA-AM指质体通过恢复胞质钙稳态抑制D-GalN致HepG-2细胞凋亡
目的：探讨1，2-二（2-氨基苯氧基）乙烷-N，N，N'，N'-四乙酸四乙酰氧甲基酯（ BAPTA-AM）恢复胞质钙离子稳态后对D-GalN诱导HepG-2细胞凋亡的影响。方法建立D-GalN诱导HepG-2细胞凋亡模型，采用MTT比色法、台盼蓝染色及Annexin Ⅴ-EGFP、Hoechst-33258荧光染色等考察HepG-2细胞活性及细胞凋亡情况；通过Fura-2/AM钙离子荧光探针法测定不同处理组细胞内游离钙浓度，初步评价钙离子稳态与细胞凋亡的关系。结果 BAPTA-AM脂质体能显著抑制D-GalN致胞质钙离子浓度的升高，恢复胞质钙稳态，维持细胞形态，减少D-GalN诱导细胞凋亡。在一定范围内，细胞内钙离子浓度的增加与细胞活性的提高呈负相关，且钙离子载体 A23187能够拮抗BAPTA-AM脂质体对HepG-2细胞的保护作用。结论BAPTA-AM脂质体通过减轻钙超载，抑制D-GalN诱导HepG-2细胞凋亡。
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华蟾素注射液对人肝癌HepG-2细胞增殖与凋亡及拓扑异构酶Ⅱ的影响
目的 观察华蟾素注射液对人肝癌HepG-2细胞增殖、凋亡及拓扑异构酶Ⅱ表达的影响.方法 分为对照组与实验组(3个剂量0.10,0.21,0.42 μg·mL-1华蟾素注射液);用MTT法观察华蟾素对HepG-2 细胞增殖的影响;用流式细胞术法检测华蟾素对HepG-2细胞周期的影响;用逆转录-多聚酶连反应法检测华蟾素对肝癌HepG-2 细胞拓扑异构酶Ⅱ(TOPO酶Ⅱ)的mRNA水平表达的影响;用蛋白免疫印迹法观察华蟾素对HepG-2细胞中TopoⅡ蛋白表达的影响.结果 华蟾素注射液对HepG-2 细胞增殖具有抑制作用,呈时间和剂量依赖性;阻滞HepG-2细胞于S期,可明显下调TopoⅡmRNA(P<0.05)及蛋白的表达(P<0.05),均呈剂量依赖性.结论 华蟾素注射液能够抑制人肝癌HepG-2细胞增殖,下调TOPOⅡ的表达是其可能的药效之一.
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栀子苷对胰岛素抵抗 HepG-2细胞葡糖转运体4表达的影响
目的：研究栀子苷对胰岛素抵抗 HepG -2细胞中葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）表达的影响。方法用100 nmol· L-1胰岛素体外诱导培养法，建立HepG-2胰岛素抵抗细胞模型，随机分为对照组、栀子苷组和空白组，用RT-PCR和细胞免疫化学技术，观察各组细胞在分别培养4，12，24，36 h后GLUT4的表达变化。结果经栀子苷处理过的HepG-2细胞中，GLUT4的表达量随时间的延长先增加后递减，在8 h时达到高峰。 HepG-2细胞中GLUT4表达，栀子苷组与对照组比较差异有统计学意义（ P＜0.05）。结论栀子苷对HepG-2细胞胰岛素抵抗具有明显的改善作用，其作用机制可能与动态调节GLUT4的表达有关。
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牛膝多糖对HepG-2荷瘤小鼠肿瘤微环境T细胞亚群、VEGF和TGF-β1的影响
目的：研究牛膝多糖(ABPS)对HepG-2荷瘤小鼠肿瘤微环境T细胞亚群、血管内皮生长因子(VEGF)和肿瘤生长转化因子-β1(TGF-β1)的影响。方法用ABPS给HepG-2荷瘤小鼠灌胃，连续2周后，测定肿瘤重量，并计算抑瘤率，采用流式细胞术检查肿瘤浸润T淋巴细胞亚群的数量，同时采用免疫组化法测肿瘤微环境中VEGF和TGF-β1的表达变化。结果 ABPS可明显抑制肿瘤细胞的生长，提高CD4+、CD8+T淋巴细胞的百分率，降低VEGF和TGF-β1的阳性细胞表达率。结论 ABPS有一定抗肿瘤活性作用。
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牛耳枫生物碱F21对HepG-2细胞的抑制作用及机制
目的 探讨牛耳枫生物碱F21对HepG-2增殖的影响及抗肿瘤作用机制.方法 F21 6.25～100 mg·L-1作用24,48和72 h,MTT法检测细胞抑制率并计算IC50.F21 10 ～ 100 mg·L-1作用48 h,瑞姬氏染色光学显微镜下观察细胞形态,琼脂糖凝胶电泳观察DNA的梯形条带,流式细胞仪检测细胞凋亡.F2110,30 mg·L-1+ Z-VAD-FMK(胱天蛋白酶抑制剂)20 μmol·L-1作用48 h,MTT法检测抑制率.结果F21可明显抑制HepG-2细胞增殖,其于24,48和72 h的IC50值分别为5.3±0.1,1.3+0.1和(0.13 +0.1)mg·L-1,且具有量效(F=232.39,P＜0.05)和时效(F=65.59,P＜0.05)关系.F21 10 ～30 mg·L-1可使HepG-2细胞体积增大、胞质内细胞核周围出现大量空泡、细胞膜完整、细胞核破碎甚至细胞形态消失.琼脂糖凝胶电泳未观察到典型的凋亡细胞DNA梯形条带.流式细胞术分析显示,与正常对照组比较,F21 10,30和100 mg·L-1处理HepG-2细胞48 h后,晚期凋亡率分别(17.34±0.01)％,(25.45 +0.01)％和(43.67±0.03)％(P＜0.05).Z-VAD-FMK可明显抑制星形孢菌素诱导的细胞死亡.F21 10和30 mg·L-1组的增殖抑制率分别为(18.42±0.09)％和(42.77±0.01)％,而F21 10,30 mg· L-1+ Z-VAD-FMK组的增殖抑制率分别为(16.46±0.01)％和(44.01±0.01)％,与相应的F21组相比无统计学差异.结论 F21在体外对HepG-2细胞具有显著的抑制作用,其作用机制并非通过激活胱天蛋白酶途径而诱导肿瘤细胞的凋亡.
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华蟾素注射液对与人肝癌HepG-2细胞共培养下人淋巴管内皮细胞的增殖及管状结构形成的影响
目的 探讨华蟾素注射液对与人肝癌HepG-2细胞共培养下人淋巴内皮细胞增殖、迁移及管状结构形成的影响.方法 采用Transwell方法建立HepG-2细胞与人淋巴内皮细胞共培养系统;通过绘制细胞生长曲线,观察华蟾素注射液对共培养系统中人淋巴内皮细胞增殖的影响;通过细胞迁移实验,观察华蟾素注射液对共培养系统中人淋巴内皮细胞迁移的影响;通过基质胶实验,观察华蟾素注射液对共培养系统中人淋巴内皮细胞管状结构形成的影响.结果 华蟾素注射液能够显著抑制与HepG-2细胞共培养下人淋巴内皮细胞增殖(P＜0.05),迁移(P＜0.05)及管状结构形成(P＜0.05),呈剂量依赖性.结论 华蟾素注射液抑制与HepG-2细胞共培养下人淋巴内皮细胞增殖,迁移及管状结构形成,可能是华蟾素注射液抑制肿瘤淋巴道转移的机制之一.
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SIRNA表达载体与阳离子脂质体复合物转染HEPG-2细胞的实验研究
目的 观察针对HIF1 岬腟IRNA表达载体Genesil-HIF1a与阳离子脂质体复合物对EPG-2细胞增值及其对HIFl a表达的影响.方法 以pGenesil表达载体分别设计阳性对照(pG-shRNA-Hif-1a),阴性对照(pG-shRNA-HK),未处理细胞为空白对照(KB).用3ug:15ul配比的pGenesil-SIRNAc与阳离子脂质体的复合物转染HEPG-2细胞,Q418 400mg/ml培养转染后的细胞10天,拍荧光照片.37℃,5%CO2,5%O2、90%N2培养36小时,用RT-PCR测定HIF-1a mRNA的表达,用cck-8测细胞增殖.结果 培养36小时的阳性对照组Hif-1a m RNA表达明显减低(P＜0.05),对Hepg-2细胞增殖抑制作用明显(P＜0.05);结论 3ug:15ul计量配比组pGenesil-hif-1a与阳离子脂质体复合物可有效转染 Hepg-2细胞,能有效抑制HEPG-2细胞Hif-1a的表达,并抑制其增殖.
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甘草提取物(Gc34)对HepG-2细胞侵袭、增殖能力的影响
目的 通过体外实验研究甘草提取物(Gc34)对人肝癌细胞HepG-2侵袭、增殖生物学行为的影响及其可能的分子机制.方法 将人HepG-2细胞分为对照组、Gc34组.常规培养细胞.对照组用酒精干预,使其终浓度为0.5％;Gc34组用Gc34干预,使其终浓度为12.5、25.0、50.0mg/L.细胞侵袭实验测定HepG-2细胞侵袭力.四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测HepG-2细胞的增殖活性.酶联免疫吸附实验(ELISA)测定细胞培养上清基质金属蛋白酶(MMP)2、9的含量.比色法测定细胞培养上清还原性谷胱甘肽/谷胱甘肽(GSH/GSSG)、超氧化物岐化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量.结果 HE染色光学显微镜下HepG-2细胞核浆比例增大,核深染、大小、形态和染色不一,核分裂像增多并可见病理性核分裂像:巨核、双核、多核.24h及以上的同时间,Gc34 25.0、50.0 mg/L组HepG-2细胞增殖活性显著低于对照组(P均＜0.01).Gc34组HepG-2细胞侵袭数、MMP-2、MMP-9、GSH/GSSG、SOD分别为45±7、(40.3±6.2) mg/L、(42.7±5.6)mg/L、4.2±0.8、(67.2±7.9)U/(mg·L),均显著低于对照组(P均＜0.01).Gc34组HepG-2细胞培养上清MDA含量为(45.4±8.5) mmol/g,显著高于对照组(P＜0.01).HepG-2细胞侵袭力与MMP-2、MMP-9正相关(r分别为0.65、0.72,P均＜0.01).HepG-2细胞增殖活性与GSH/GSSG、SOD正相关(r分别为0.55、0.64,P均＜0.01),与MDA负相关(r=-0.58,P＜0.01).结论 甘草提取物(Gc34)下调MMP-2、MMP-9表达,抑制HepG-2细胞侵袭能力;下调GSH/GSSG、SOD表达,上调MDA表达,抑制HepG-2细胞增殖活性.
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过氧化体增殖物激活型受体激活物对HepG-2细胞PAI-1表达的影响
目的:观察不同的过氧化体增殖物激活型受体(peroxisome proliferator-activated receptors,PPARs)激活物对HepG-2细胞纤溶酶原激活物抑制剂-1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1) mRNA表达及其活性的影响,探讨过氧化体增殖物激活型受体在PAI-1基因调控中的作用.方法:分别利用硬脂酸、油酸、亚油酸、非诺贝特、吡格列酮作为诱导因素刺激HepG-2细胞,采用半定量RT-PCR法检测PAI-1mRNA及PPARs mRNA的转录水平,比色法检测PAI-1活性变化,Western blot法检测PPARs蛋白表达情况.结果:与对照组比较,油酸、亚油酸组HepG-2细胞PAI-1mRNA表达及蛋白活性显著增加;非诺贝特组HepG-2细胞PAI-1 mRNA表达及活性显著降低;硬脂酸、吡格列酮组HepG-2细胞PAI-1 mRNA表达及蛋白活性均无显著变化;各组PPARs在mRNA及蛋白水平均无明显差异.结论:PPARs激活物对HepG-2细胞PAI-1 mRNA表达及其活性具有调节作用,PPARα可能是实现该调节作用的重要途径之一,同时不排除其他调控因素介入该调节过程.
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索拉非尼联合热疗对肝癌HepG-2细胞抑制及促凋亡作用的研究
目的 探讨索拉非尼联合热疗对肝癌HepG-2细胞的抑制作用.方法 实验细胞分为4组:对照组(正常培养的HepG-2细胞)、索拉非尼组(索拉非尼药物浓度为12 μmol/L)、热疗组(加热温度为43℃,加热时间为2 h)及索拉非尼联合热疗组.以MTT法测定HepG-2细胞的增殖抑制情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 ①索拉非尼组、热疗组、索拉非尼联合热疗组细胞增殖均明显受到抑制,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).以索拉非尼联合热疗组抑制作用为显著,与索拉非尼组和热疗组比较差异有统计学意义(P＜0.01),索拉非尼和热疗两种处理因素对细胞增殖抑制存在交互作用(F=129.183,P＜0.01).②与对照组比较,索拉非尼组、热疗组及索拉非尼联合热疗组细胞的早期凋亡率均明显增加,差异有统计学意义(P＜0.01);与索拉非尼组和热疗组比较,索拉非尼联合热疗组早期凋亡更加明显 (P＜0.01),索拉非尼和热疗两种处理因素对细胞凋亡诱导存在交互作用(Annexin V-EGFP染色,F=197.630,P＜0.01;PI染色,F=643.210,P＜0.01).结论 索拉非尼和热疗对肝癌HepG-2细胞均有增殖抑制作用及促凋亡作用,索拉非尼联合热疗具有协同作用.
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索拉非尼联合热疗对肝癌HepG-2细胞中Bax、Bcl-2表达的影响
目的 探讨索拉非尼联合热疗对人肝癌HepG-2细胞株中Bax及Bcl-2蛋白表达的影响.方法 将实验细胞分为4组:对照组(正常培养的HepG-2细胞)、索拉非尼组(索拉非尼药物浓度为12 μmol/L)、热疗组(加热温度为43℃,加热时间为2 h)及索拉非尼联合热疗组.用免疫组织化学染色法观察各组人肝癌HepG-2细胞株中Bax及Bcl-2的表达情况.结果 肝癌HepG-2细胞Bax表达于胞浆和(或)胞膜,Bcl-2主要表达于胞膜,均呈棕黄色弥漫状分布;索拉非尼及热疗均使人肝癌HepG-2细胞中Bax蛋白的表达有所增加(P＜0.01),且均使Bcl-2蛋白的表达有所降低(P＜0.01),与索拉非尼组及热疗组化较,索拉非尼联合热疗组Bax蛋白的表达明显增加(P＜0.01)、Bcl-2蛋白的表达明显降低(P＜0.01).结论 索拉非尼联合热疗通过增加人肝癌HepG-2细胞中Bax蛋白的表达和降低Bcl-2蛋白的表达协同诱导肝癌细胞凋亡,可能成为治疗肝癌的新方法.
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马鞭草总黄酮对HepG-2细胞增殖及侵袭力影响
目的 探讨马鞭草总黄酮(TFV)对肝癌HepG-2细胞增殖和侵袭力的影响.方法 实验设对照组、TFV 50、100、200 mg/L组,噻唑蓝法检测人肝癌HepG-2细胞增殖率,Hoechest 33342染色检测HepG-2细胞凋亡情况,Transwell法检测HepG-2细胞侵袭力变化,ELISA法测定HepG-2细胞中基质金属蛋白酶9(MMP-9)及血管内皮生长因子(VEGF)表达水平.结果 各剂量TFV均能明显抑制HepG-2细胞生长,呈现剂量依赖性(P＜0.05);与对照组比较,TFV 50、100、200 mg/L组HepG-2细胞凋亡率[分别为(10.31±0.51)％、(16.02±0.63)％、(35.05±1.12)％]明显增加,透膜细胞数[分别为(119.2±17.1)、(98.5±13.5)、(54.8±6.4)个]明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.05);与对照组比较,TFV 50、100、200 mg/L组HepG-2细胞MMP-9和VEGF表达水平[分别为(7.81±0.48)、(6.28±0.41)(3.08±0.35)和(0.87±0.07)、(0.63±0.04)、(0.45 ±0.06)]明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 马鞭草总黄酮可明显抑制人肝癌HepG-2细胞增殖、降低HepG-2细胞侵袭力,其机制可能与下调HepG-2细胞内MMP-9和VEGF表达水平有关.
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三叶青总黄酮对人肝癌HepG-2细胞及裸鼠异种移植瘤的药效作用研究
目的:三叶青抗肝癌作用具有良好的临床基础,而三叶青总黄酮(Total flavonoids from Radix Tetrastigmae,TF)提取物的抗癌活性尤其显著.本研究从细胞-动物实验明确三叶青总黄酮抗肝癌作用,为三叶青治疗肝癌建立药效物质基础.方法:通过CCK-8法检测三叶青总黄酮对肝癌细胞增殖的抑制作用,并计算药物的IC50,确定TF的高、中、低剂量.采用Annexin V-FITC/PI双染法染色HepG2细胞,采用流式细胞仪检测HepG2细胞凋亡率.通过建立人肝癌细胞系HepG2移植瘤裸鼠模型,观察TF对HepG2移植瘤裸鼠模型的体质量、肿瘤生长体积、抑瘤率的影响.结果:TFIC50为3.247 mg/mL,TF的高、中、低的剂量分别为5、1.25、0.312 5 mg/mL;与对照组比较,TF高、中、低浓度剂量48 h后对肝癌HepG2细胞增殖均有明显的抑制作用,且随浓度的增加而逐渐增强,均具有显著差异(P＜0.01);TF高、中、低浓度剂量24 h后均有明显促进肝癌HepG2细胞的凋亡作用,且随浓度的增加而逐渐增强,均具有显著差异(P＜0.01).TF的高、中、低剂量的抑瘤率分别为64.07％、53.64％、46.69％,TF高剂量对肝癌小鼠肿瘤生长的抑制作用优于CTX(环磷酰胺),而TF中、低剂量对肝癌小鼠肿瘤生长的抑制作用弱于CTX.结论:三叶青总黄酮(高、中、低浓度)对肝癌HepG2细胞增殖均有明显的抑制作用,且随浓度的增加而逐渐增强;对肝癌细胞的凋亡均有明显促进的作用,且随浓度的增加而逐渐增强.TF高剂量(15g/kg)对肝癌小鼠肿瘤生长的抑制作用优于CTX,而TF中、低剂量(7.5、3.75 g/kg)对肝癌小鼠肿瘤生长的抑制作用弱于CTX.
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大蒜素抗人肝癌HepG-2细胞的实验研究
目的:研究大蒜素对人肝癌细胞HepG-2生长的影响,探讨其抗人肝癌HepG-2细胞作用以及相关机制.方法:选用人肝癌HepG-2细胞为研究对象.通过倒置显微镜及hoechst染色荧光显微镜观察大蒜素作用后细胞形态的变化.MTT法检测不同浓度大蒜素作用后细胞增殖活性改变并计算抑制率(IR).流式细胞术(FCM)检测大蒜素对细胞周期及凋亡率的影响.免疫细胞化学染色了解大蒜素作用后HepG-2细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的变化.结果:大蒜素作用24 h后人肝癌HepG-2细胞形态发生改变,表现为细胞缩小变圆,突起消失,分部稀疏,细胞核浓缩,边缘化,且随着大蒜素浓度增加,上述改变逐步明显.Hoechst染色荧光倒置显微镜观察对照组细胞核呈均匀一致的荧光,而实验组可观察到细胞凋亡形态变化,表现为细胞核固缩,染色质凝聚,边缘化,部分碎裂,呈致密的颗粒状强荧光.MTT法检测结果显示不同浓度的大蒜素(12.5 μg/mL、25μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL)在不同时间(24 h、48 h、72 h)作用于HepG-2细胞后细胞增殖活性受到抑制,与阴性对照组及阳性对照组相比大部分组别差异有统计学意义.流式细胞仪检测结果提示与阴性对照组相比大蒜素组G0-G1期比例明显增加,细胞凋亡率明显上升.免疫细胞化学染色表明大蒜素作用后细胞Bax表达水平上升,Bcl-2/Bax比例下降,Caspase-3表达上升.结论:大蒜素对人肝癌HepG-2细胞的增殖有抑制作用,并能诱导HepG-2细胞凋亡.在一定范围内随着大蒜素浓度的增高,时间的延长,细胞增殖活性逐步降低,凋亡率逐步上升,呈时间-剂量依赖性.大蒜素抑制肝癌细胞增值诱导其凋亡与G0-G1期阻滞有关,经大蒜素作用后G0-G1期细胞比例明显高于对照组,其分子机制涉及上调Bax、Caspase-3表达.
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比较叶酸和聚乳酸修饰Pluronic共聚物纳米粒子的细胞相容性
背景:研究发现,纳米材料与细胞接触时可诱导细胞产生氧化应激反应、过敏反应,进而产生细胞毒性和基因毒性,因此,对纳米毒理学的研究越来越受到广泛的关注.目的:比较Pluronic(P85,F127和F87)三嵌段共聚物经叶酸(folic acid,FA)和聚乳酸[poly(lactic acid),PLA]修饰前后的纳米结合物的细胞相容性.方法:对Pluronic三嵌段共聚物(P85,F127和F87)进行修饰,在其两端接上聚乳酸和叶酸,分别合成了多种两亲性嵌段共聚物(PLA-P85-PLA,FA-P85-PLA,PLA-F127-PLA,FA-F127-PLA,PLA-F87-PLA和FA-F87-PLA)纳米粒子.选取HepG-2细胞为研究对象,从细胞形态、细胞代谢活性、细胞膜效应来评价纳米粒子的细胞毒性.结果与结论:①未经叶酸和聚乳酸修饰的P85,F127和F87纳米粒子(5,10,20,50,100 mg/L)作用HepG-2细胞24 h后,与对照组相比,细胞相对增长率差异无显著性意义(P>0.05),且在低质量浓度范围内(5,10,20,50 mg/L)有促进细胞增殖的作用;当质量浓度增加到400 mg/L时,P85和F87纳米粒子对细胞增殖有明显的抑制作用;②经叶酸和聚乳酸修饰的P85,F127和F87纳米粒子(5,10,20,50,100,200,400 mg/L)作用HepG-2细胞后,与对照组相比,差异无显著性意义(P>0.05);③结果表明,用叶酸和聚乳酸修饰Pluronic(P85,F127和F87)三嵌段共聚物,可提高其细胞相容性,合成的PLA-Pluronic-PLA纳米粒子和FA-Pluronic-PLA纳米粒子可用作药物载体.
