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三叶青名实考辨
三叶青是我国特有珍贵草药,在南方地区特别是长江流域一直广为传用.传统认为三叶青具清热解毒、活血止痛、祛风化痰功效,现代研究认为其具抗肿瘤、抗病毒、调节免疫等确切药理作用.三叶青始载于清代吴其濬的植物学专著《植物名实图考》,但未明确其植物基原.《中国药典》至今未收录该药.近代学者鲜有对其进行系统考证,因而其植物基原为何物、何时得以明确、资源分布如何等一系列关键问题均未有定论.为此,该文通过查阅相关文献,梳理了三叶青的历史沿革,确定其植物基原,为葡萄科崖爬藤属崖爬藤亚属圆脐组植物三叶崖爬藤Tetrastigma hemsleyanum.文章全面叙述了三叶青同物异名、同名异物的现状,尝试分析了2种可能成因,并概括性归纳出三叶青资源自然分布情况,在我国长江以南所有省份及长江流经的大部分省份均有自然分布,但长江以北各地少见或未见.建议尽快将三叶青纳入相关行政管理范畴,并建议《中国药典》以三叶青名收录,明确葡萄科崖爬藤属三叶崖爬藤为其唯一植物基原.
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不同三叶青提取物体外抗肿瘤细胞作用研究
目的 明确三叶青水、乙醇、乙酸乙酯三种提取物体外对乳腺癌细胞(MCF-7)的抑制作用,分析不同提取方式对肿瘤细胞抑制强弱差异.方法 MTT法检测三叶青三种提取物含药血清分别在2、10、50、100、200μg·mL-1时对MCF-7细胞存活率的影响;采用流式细胞仪检测三种提取物含药血清在200μg·mL-1浓度时对MCF-7细胞凋亡的影响.结果 三种提取物均具有与浓度相关的MCF-7细胞体外抑制作用(P＜0.05),作用强弱依次是乙酸乙酯提取物＞乙醇提取物＞水提取物;三种提取物均能促进MCF-7细胞凋亡(水、乙醇组P＜0.05,乙酸乙酯组P＜0.01);乙酸乙酯提取物比水提物组、乙醇组具有更强的凋亡促进作用(P＜0.05).结论 三种提取物均具有体外抗乳腺癌MCF-7细胞作用,其中乙酸乙酯提取物作用强.
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三叶青根与茎叶转录组和差异性表达分析
目的 采用Illumina HiSeq 4000测序技术获得三叶青转录组数据,为三叶青分子生物学研究提供重要分子信息.方法 以三叶青根和茎叶为材料,进行转录组测序,对测试数据进行基因功能注释、代谢途径及微卫星等的生物信息学分析.结果 共获得24.13 Gb Clean Data,拼接组装得到84 433条Unigene,与7个基因数据库进行比对,终获得47 766个有注释信息的Unigene.在GO数据库中注释27 790条,其根和茎叶的差异表达基因数目为4989个,其中上调为3511个,下调为1478个;COG数据库得到16 152条三叶青Unigene的同源序列,共分为25个类别;在KEGG数据库有14 511条Unigene获得对应的Ko编号,可分为130个信号代谢分支,其中核糖体合成途径的Unigene数量多,有1042条,而异黄酮的生物合成途径只有1条Unigene.结论 对三叶青转录组进行拼接、组装和功能注释得到大量转录本信息,为三叶青分子生物学研究提供基因组数据库资源.
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HPLC-Q-TOF-MS和UPLC-QqQ-MS的三叶青主要成分定性与定量研究
建立高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱法(HPLC-Q-TOF-MS)快速鉴定三叶青化学成分,建立超高效液相色谱串联三重四级杆质谱法(UPLC-QqQ-MS)同时测定三叶青中4种成分(芦丁、异槲皮苷、山柰酚芸香糖苷、紫云英苷)的含量.HPLC-Q-TOF-MS法采用月旭Ultimate-XB C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-0.1％甲酸水(B)梯度洗脱,流速0.8 mL·min-1,柱温30℃.飞行时间质谱,采用负离子模式扫描.UPLC-QqQ-MS法采用Waters CORTECS C18(2.1 mm× 100 mm,1.6 μm),流动相为乙腈(A)-0.1％甲酸水(B)梯度洗脱,柱温45℃,采用负离子多反应监测(MRM)方式进行含量测定.结果HPLC-Q-TOF-MS法推断鉴定了三叶青中的24种成分,UPLC-QqQ-MS法定量分析三叶青中4种成分在考察的浓度范围内,线性关系良好(r ＞0.996 6);回收率均在98.27％ ～ 101.6％,RSD 3.2％ ～ 5.9％.通过HPLC-Q-TOF-MS联用技术,为鉴定三叶青的化学成分提供了一种快速、高效的定性分析方法.建立的UPLC-QqQ-MS同时测定三叶青中4种成分的定量分析方法简便、快捷、准确,为综合评价三叶青的质量提供参考.
关键词： 三叶青 HPLC-Q-TOF-MS UPLC-QqQ-MS 质量控制 -
UPLC-MS/MS法同时测定三叶青中10种黄酮类成分
建立超高效液相色谱串联三重四级杆质谱法(UPLC-MS/MS)同时测定三叶青中10种黄酮类成分(原花青素B1、儿茶素、原花青素B2、芦丁、异槲皮苷、山柰酚-3-O-芸香糖苷、紫云英苷、槲皮苷、槲皮素和山柰酚)的含量.采用UPLC-MS/MS法及负离子多反应监测(MRM)模式进行含量测定.色谱条件:色谱柱为Waters CORTECS C18 (2.1 mm×100 mm,1.6 μm),流动相为乙腈(A)-0.1％甲酸水(B),梯度洗脱,流速0.25mL·min-1,柱温45℃.在所设定的色谱条件下,手性异构体原花青素B1和B2达到基线分离.定量分析的三叶青中10种黄酮类成分在考察的浓度范围内呈良好的线性关系(r＞ 0.996 6);回收率和RSD分别在95.44％～110.40％和2.37％～8.69％内.本研究所建立的同时测定三叶青中10种黄酮类成分的UPLC-MS/MS定量分析方法简便、快捷、准确,可为综合评价三叶青的质量提供参考.
关键词： 三叶青 UPLC-MS/MS 黄酮 质量控制 -
中药三叶青资源状况及其对策研究
三叶青为葡萄科崖爬藤属植物三叶崖爬藤Tetrastigrna hemsleyanum Diels et cilg 的块根或全草.主要分布于长江以南浙江、江西、福建等省,大致分为青色藤三叶青和紫色藤三叶青两种,具有清热解毒、活血祛风、抗肿瘤、抗病毒、抗炎镇痛与解热、保肝作用等.
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大孔树脂分离纯化三叶青总黄酮的工艺研究
目的 筛选出分离纯化三叶青总黄酮的较佳树脂,并对影响分离纯化的主要因素进行研究,得到优化的分离条件.方法 利用分光光度法测定三叶青总黄酮的含量;选择了10种国产大孔树脂,以三叶青总黄酮的吸附量和解吸率为指标,筛选出较优的树脂,并对其静态、动态吸附与解吸性能进行研究,进而优化工艺条件.结果 HPD826树脂具有较好的吸附和解吸性能,且吸附平衡数据符合Freundlich吸附等温模型,其较优的工艺如下:上样流速以2 BV·h-1为佳,上样后先用2 BV水洗脱,然后用3 BV、体积分数70%的乙醇以2 BV·h-1的流速洗脱.经HPD826大孔树脂一次纯化后的产物中,三叶青总黄酮含量提高了2.44倍.结论 HPD826大孔树脂能较好地用于分离纯化三叶青总黄酮.
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三叶青的化学成分及其体外抗肿瘤活性研究
目的 研究三叶青全草的化学成分及其体外抗肿瘤活性.方法 运用多种色谱技术分离三叶青中化学成分,采用1H-NMR、13C-NMR、MS、HR-MS等波谱技术确定化合物结构.以噻唑蓝法,测试各黄酮化合物对HepG2,HCT-8,A549 3种肿瘤细胞的体外抑制作用.结果 分离鉴定13个化合物,分别为β-谷甾醇(1)、十六烷酸(2)、十七烷酸(3)、芹菜素(4)、槲皮苷(5)、山柰酚-3,7-O-L-二鼠李糖苷(6)、山柰酚-3-O-新橙皮糖苷(7)、芹菜素-6-C-β-D-吡喃葡萄糖苷(8)、芹菜素-8-C-α-L-吡喃鼠李糖-(1-2)-β-D-吡喃葡萄糖苷(9)、芹菜素-8-C-β-D-吡喃葡萄糖苷(10)、芹菜素-8-C-β-D-吡喃葡萄糖-(1-4)-β-D-吡喃葡萄糖苷(11)、荭草素(12)、异荭草素(13).结论 化合物4～6,8～13系首次从该植物中分离得到,体外噻唑蓝活性筛选表明三叶青黄酮类化合物具有一定的抗肿瘤细胞增殖作用.
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三叶青三氯甲烷部位化学成分及其抗肿瘤活性研究
目的 研究三叶青三氯甲烷部位的化学成分及其体外抗肿瘤活性.方法 利用硅胶,制备薄层板,LH-20等各种色谱技术分离单体化合物,通过NMR和质谱对化合物进行结构鉴定,并采用气-质联用色谱对三叶青三氯甲烷部位的其他成分进行分析,采用MTT法对分离得到的单体化合物进行抗肿瘤活性评价.结果 通过经典色谱法分离得到6个化合物,分析鉴定为β-谷甾醇(1),4-羟基-3-甲氧基苯甲醛(2),齐墩果酸(3),5-羟甲基糠醛(4),壬二酸(5)和香草酸(6),并通过GC-MS指认了22个化合物.结论 化合物2～6首次从三叶青中分离得到.化合物1和3对Hela229有较强的细胞毒活性,IC50分别为40.78,25.69μg· mL.化合物3对A375有较强的细胞毒活性,IC50为69.87μg·mL-1.三叶青三氯甲烷部位的体外抗肿瘤活性由多种成分共同作用产生.
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活血止痛的三叶青
药材三叶青又名金钱吊葫芦、蛇附子、石老鼠，来源于葡萄科崖爬藤属植物三叶青，全草均可入药，以地下块根和果实的药用效果好。三叶青生长于山谷林或石壁中偶尔有毒蛇出没的阴湿处，全年均可采挖，但冬至到惊蛰期的品质好，块根淀粉含量可在70%以上。采挖后晒干或鲜用。
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三叶青多糖抗肝损伤作用的研究
目的 测定三叶青中多糖的含量,并研究三叶青多糖抗四氯化碳(CCl4)致急性肝损伤的作用.方法 采用硫酸-苯酚法测定三叶青多糖的含量,然后将ICR小鼠随机分为5组,即空白组、模型对照组、阳性对照组,三叶青多糖高、低剂量组,分别灌胃等容积的生理盐水、联苯双酯和三叶青多糖,给药一段时间后给小鼠腹腔注射四氯化碳致其肝损伤,检测其血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)水平.结果 三叶青中多糖的含量为8.69％；与模型组比较,三叶青多糖治疗组ALT、AST及MDA含量均明显降低(P＜0.01),而SOD水平显著提高(P＜0.01).结论 三叶青多糖对CCl4造成的小鼠急性肝损伤具有阻抗作用.
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三叶青提取物联合介入治疗兔VX2肝癌模型多层螺旋CT表现及肝功能动态分析
目的 评价单纯介入治疗与三叶青提取物联合介入治疗兔VX2肝移植瘤的疗效.方法 33只荷瘤兔,随机分为空白对照组、单纯介入治疗组和三叶青提取物联合介入治疗组,14天后,对比分析其多层螺旋CT(MSCT)影像学改变及肝功能变化.结果三叶青提取物联合介入治疗在2周后MSCT检查显示肿瘤大小,肿瘤生长率、坏死率较单纯介入治疗及空白对照组疗效有统计学意义(P＜0.05)；在肝功能方面三叶青提取物联合介入治疗组GPT、GOT明显较其他两组降低,比较有统计学意义(P＜0.05).结论 三叶青联合介入对VX2兔肝癌模型的介入治疗对肿瘤抑制及兔肝功能改变有一定疗效.
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三叶青叶黄酮类化学成分的UPLC-MS/MS定性分析及HPLC含量测定
目的 定性、定量分析三叶青叶黄酮类化学成分.方法 采用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)对三叶青叶化学成分进行鉴定,色谱柱为C18Luna Omega(2.1 mmx100 mm,1.6 μm);流动相:乙腈-水(50∶50,V/V);流速0.4 mL/min;柱温35℃;进样量5μL;全扫描模式扫描.采用高效液相色谱法(HPLC)同时测定三叶青叶中5种碳苷黄酮的含量.色谱柱为Ultimate XB C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.2％ H3PO4(10∶90,V/V);流速为1 mL/min;检测波长为350 nm;室温;进样量20 μL.结果 三叶青叶中共鉴定出6个化学成分,其中5个黄酮成分的保留时间、光谱图和质谱碎片离子信息与对照品一致,分别为异荭草素、荭草素、牡荆素鼠李糖苷、牡荆素、异牡荆素.HPLC测定8个不同产地来源的样品中上述5种成分含量,各成分线性关系良好(r＞0.9997),加样回收率在95.0％～ 105.0％之间.结论 三叶青叶子中主要含2类碳苷黄酮,即荭草素类和牡荆素类;本研究建立的方法可定性、定量分析分析三叶青叶中主要化学成分,可用于控制药材质量.
关键词： 三叶青 黄酮类 超高效液相色谱-串联质谱 高效液相色谱 -
三叶青内生真菌Phomopsis sp.YK-7的化学成分研究
目的 研究三叶青Tetrastigma hemsleyanum内生真菌Phomopsissp.YK-7发酵产物中的化学成分.方法 采用色谱分离技术进行分离和纯化,并根据谱学数据鉴定化合物的结构.结果 从Phomopsis sp.YK-7的发酵产物中分离得到15个化合物,包括13个芳基苯并呋喃类化合物和2个甾体类化合物,分别鉴定为wittifuran X(1)、4-hydroxy-2-(4'-hydroxy-2'-methoxyphenyl)-6-methoxybenzofuran-3-carbaldehyde (2)、erypoegin J (3)、桑辛素S(4)、桑辛素T(5)、桑辛素C(6)、wiffifuran E(7)、iteafuranal A(8)、burttinol D(9)、7-methoxy-2-(4-methoxyphenyl)-3-methyl-5-(3-prenyl)-benzofuran (10)、桑辛素N (11)、桑辛素P(12)、桑辛素M(13)、过氧麦角甾醇(14)和25-hydroxy-ergosta-4,6,8(14),22-tetraen-3-one (15).结论 化合物1～9为首次从该属真菌中分离得到.
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三叶青扩展蛋白家族基因全长cDNA的克隆及其生物信息学和表达分析
目的 克隆三叶青Tetrastigma hemsleyanum的扩展蛋白家族基因,对其进行器官表达分析,并初步探讨其功能.方法 根据GenBank中登录的扩展蛋白基因保守区域序列设计1对简并引物,以三叶青球形块根cDNA为模板进行RT-PCR扩增,再结合RACE技术,获得三叶青扩展蛋白基因全长cDNA序列,命名为Th-exp.采用半定量RT-PCR和荧光定量PCR分析Th-exp基因在不同器官中的表达情况.结果 克隆获得扩展蛋白家族基因,共782 bp,其中包含630 bp开放阅读框,编码209个氨基酸(GenBank登陆号KP693606).Th-exp编码的蛋白质具有典型的扩展蛋白结构特征,N端含有8个半胱氨酸的结构域,C端含有4个保守的色氨酸结构域,中间含有组氨酸功能域.Blast分析显示,Th-exp与葡萄、醉蝶花中扩展蛋白基因具有相似性.半定量RT-PCR和荧光定量PCR分析表明,Th-exp在三叶青叶、茎、普通细根和球形块根中均有表达,但球形块根中表达强于其他器官.结论 克隆得到三叶青扩展蛋白家族基因Th-exp全长cDNA,初步预测其参与了三叶青块根的发育过程.
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“蛇年”话“蛇药”--清热解毒蛇附子
蛇附子又名三叶青、小扁藤，为葡萄科植物三叶崖爬藤的根，分布于浙江、江西、福建、湖北、湖南、广东、四川等地区，全年均可采挖，每年的冬至到惊蛰期间采摘的质量好，这时采挖的根，淀粉含量在70%以上，药用效果佳。把根挖出，除去杂质，洗净，润软，切厚片，干燥后即可入药，亦可鲜用。
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三叶青转录组SSR信息分析
目的 通过对三叶青转录组数据的分析,开发三叶青SSR分子标记技术,为三叶青遗传多样性分析和资源保护提供方法.方法 将三叶青高通量测序获得的Unigene进行简单重复序列(SSR)位点挖掘和分析.结果在84433条Unigene搜索出8263条符合条件的SSR,发生频率为9.79%,平均每11.72 kb中出现1个SSR位点.共有174种重复基元,四核苷酸重复基元多有68种,(A/T)n、(T/A)n、(GA/TC)n的比例较高,四、五、六核苷酸出现频率较低占比例为1.61%.SSR的长度集中在10~24 bp,其中10 bp多有1531个,其次为15 bp,为1042个,11、12、14、18 bp的个数超过500个,分别为689、970、576、895.三叶青SSR长度在12~20 bp为4880条,占59畅02%,在理论上具有中等以上的多态性.结论 通过对三叶青转录组序列SSR信息分析和挖掘,为三叶青遗传多样性分析、分子育种、分子标记开发及遗传资源保护等方面提供了参考依据.
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三叶青的种类、分布与现状
正宗的三叶青属葡萄科多年生、蔓生藤本植物,[学名]三叶青(Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg),[别名]金线吊葫芦(因其块根呈葫芦状而得名),为我国所独有的珍稀药用濒危植物,常生长于阴湿山坡、山溪谷旁.形貌特征:藤茎细软,卷须与叶对生,卷须以直行捆绑式使藤攀爬于其它植物上,从不缠绕,较老藤茎扁形、表皮紫褐色,较嫩藤茎圆形、表皮青色,叶互生,一柄长三叶,中叶稍大,叶呈卵状披针形,边缘有锯齿,叶柄及叶子表面翠绿.夏初开花,浆果球状,黄豆般大小,成熟后色泽鲜红艳丽,挂果期长达数月.
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三叶青的种类、分布与现状
正宗的三叶青属葡萄科多年生,蔓生藤本植物,[学名]三叶青(Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg),[别名]金线吊葫芦(因其块根呈葫芦状而得名),为我国所独有的珍稀药用濒危植物,常生长于阴湿山坡、山溪谷旁.
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三叶青不同洗脱组分的抗氧化活性研究
目的:研究三叶青乙醇提取物不同洗脱组分的抗氧化活性差异.方法:三叶青用70％乙醇回流提取得到三叶青乙醇提取物,上D-101大孔树脂,分别用不同浓度的乙醇进行洗脱,得到不同洗脱物TDG-W、TrDG-30％、TDG-50％、TDG-70％、TDG-90％.比较不同洗脱物的总黄酮、总多酚含量并采用DPPH法、FRAP法和ORAC法测定其抗氧化活牲,2,6-二叔丁基--4-甲基苯酚(BHT)作为阳性对照.结果:TDG-W、TDG-30％、TDG-50％、TDG-70％、TDG-90％中总黄酮和总多酚含量分别为2.69％、33.25％、61.12％、40.54％、4.12％和0.62％、3.48％、5.07％、4.35％、2.70％.其清除DPPH自由基能力、还原能力和总抗氧化能力均随总黄酮和总多酚浓度的增加而上升;5种洗脱物的抗氧化能力与所含总黄酮和总多酚的量有一定相关性.结论:三叶青不同洗脱组分均有较强的抗氧化能力,对体外自由基有较好的清除作用.
