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  • 结核性胸膜炎患者外周血CD4 CD25调节性T细胞水平及Foxp3 mRNA表达的分析

    作者:吕伟;薛克营;王成国;张宏伟

    目的 观察结核性胸膜炎患者外周血单个核细胞(PBMCs)中CD4 CD25调节性T细胞(CD4 CD25 Treg)水平及Foxp3 mRNA表达的变化,探讨CD4 CD25 Treg在结核性胸膜炎发病中的作用.方法 采用流式细胞仪检测58例结核性胸膜炎患者和51例健康志愿者(正常对照组)PB-MCs中CD4 CD25 Treg的比例;RT-PCR检测PBMCs中Foxp3 mRNA的表达.结果 结核性胸膜炎患者PBMCs中CD4 CD25 Treg的比例明显高于正常对照组(P<0.05);Foxp3 mRNA的表达明显高于正常对照组(P<0.05).结论 结核性胸膜炎患者外周血中具有免疫抑制活性CD4 CD25Treg的数量增加,功能增强,可能是结核性胸膜炎发生发展的一个因素.

  • FoxM1与BCRP在非特殊型浸润性乳腺癌中的表达及其预后意义

    作者:刘尧;刘月平;刘俊英;杨会钗;王占东

    目的:探讨叉头蛋白转录因子M1(FoxM1)、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)在非特殊型浸润性乳腺癌( IBC-NST)中的表达及其预后意义。方法选取本院2009至2010年78例IBC-NST病例手术切除标本,免疫组织化学检测FoxM1和BCRP在IBC-NST中的表达情况,采用卡方检验分析其表达与患者临床病理特征及预后的关系。结果 FoxM1在IBC-NST中阳性率为71.8%(56/78),其表达与肿瘤直径、TNM分期、雌激素受体( ER )、孕激素受体( PR )、HER2相关,差异有统计学意义( P <0.05);BCRP在IBC-NST中阳性率为53.8%(42/78),其表达与年龄、肿瘤直径、淋巴结转移、ER、HER2相关,差异有统计学意义(P<0.05)。 Kaplan-Meier生存分析结果显示,患者生存时间与肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移、FoxM1、BCRP、ER、PR和HER2有关,差异有统计学意义( P<0.05);多因素Cox回归结果显示,TNM分期、FoxM1、BCRP、HER2是影响患者生存时间的主要因素。结论对于IBC-NST患者,FoxM1的表达与肿瘤直径、TNM分期、ER、PR、HER2有关;BCRP的表达与年龄、肿瘤直径、淋巴结转移、ER、HER2有关。 FoxM1与BCRP均为患者预后影响因素。

  • RBP4与FOXO1基因单核苷酸多态性与2型糖尿病的相关性研究

    作者:杨春香;顾国浩;卢大儒

    目的 探讨视黄醛结合蛋白(RBP4)基因、叉头框因子-1(FOXO1)基因单核苷酸多态性(SNPs)在中国汉族人群中的频率分布及其与2型糖尿病(T2DM)的相关性.方法 采用TaqMan探针基因分型技术结合琼脂糖凝胶电泳技术,检测384例T2DM患者和384例健康者RBP4、FOXO1共10个SNP位点的基因型及等位基因频率分布,同时测定其空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)水平.结果 T2DM组RBP4-803,G>A;+5169,C>T;+6969,G>C 3个SNP位点的基因型频率和等位基因频率分布与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).经logistic回归分析,各位点均未发现与T2DM有关的基因型.单倍体表型分析也未发现与T2DM有关的单倍型.FOXO1的7个SNP位点检测结果显示,rs7324943 G/T的等位基因频率与基因型频宰在T2DM组和对照组间差异均有统计学意义(χ~2=4.02,P=0.044).分层分析显示,在年龄40岁和非高血压的人群中,GT基因型患T2DM的风险较GG纯合子高[比值比(OR)分别为1.47,1.80].T等位基因携带者患T2DM的风险较非T等位基因携带者高(OR分别为1.42,1.79).两组间rs17592236 C/T的等位基因频率和基因型频率(χ~2=0.39,P=0.401),差异均无统计学意义,但分层分析发现,在年龄≤40岁的人群中,CT与TT基因型患T2DM风险较CC纯合子高(OR分别为6.33,10.15),T等位基因携带者患T2DM风险较非T等位基因携带者高(OR=7.11).单倍体表型分析结果显示,单倍型CT可使T2DM患病风险下降约28%.结论 中国汉族人群RBP4-803,G>A;+5169,C>T;+6969,G>C的3个SNP位点与T2DM发病风险无关.FOXO1的rs7324943 G/T、rs17592236 C/T和单倍型CT与中国汉族人群T2DM发病风险有关,但其作用机制需深入研究.

  • 叉头状转录因子O1对游离脂肪酸诱导的人肝癌细胞株HepG-2胰岛素抵抗和脂质堆积作用的研究

    作者:张鹏宇;秦贵军;李雪峰;任高飞;刘会苗

    目的 研究叉头状转录因子O1(FoxO1)对游离脂肪酸介导的人肝癌细胞株(HepG-2)胰岛素抵抗和脂质堆积的作用以及对固醇调节元件结合蛋白-1c( SREBP-1c) mRNA和蛋白表达的影响.方法 将HepG-2细胞培养后用普通培养基培养为对照组,用含5.0×10-4 mol/L软脂酸的培养基诱导为软脂酸组,诱导后转染空白质粒为空白质粒组,诱导后转染FoxO1 siRNA质粒载体为FoxO1 siRNA载体组.运用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测FoxO1 mRNA表达,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,葡萄糖氧化酶法检测培养基中葡萄糖消耗量,油红O染色观察细胞脂质堆积;RT-PCR和Western blot技术分别检测SREBP-1c mRNA表达量以及蛋白的表达量.各组间均值比较采用单因素方差分析,样本间比较采用t检验.结果 软脂酸组较对照组细胞葡萄糖消耗量减少(1.17±0.56 vs 4.31±0.21,t=10.587,P<0.01)、细胞中的脂质堆积增多、FoxO1 mRNA升高(0.78±0.10 vs0.51±0.12,t =3.629,P <0.05)、SREBP-1c mRNA升高(0.71±0.17 vs 0.25±0.08,t =6.290,P<0.05)、SREBP-1c蛋白升高(0.69±0.10 vs0.41±0.07,t=4.797,P<0.01).转染FoxO1siRNA质粒载体后葡萄糖消耗量较软脂酸组增加(2.26±0.41 vs 1.17±0.56,t =3.144,P<0.05),FoxO1 mRNA、SREBP-1c mRNA、SREBP-1c蛋白的表达较软脂酸组均减少且接近于对照组(分别为0.38±0.06 vs 0.78±0.10,t=7.164,P<0.01;0.45 ±0.13 vs 0.71 ±0.17,t =2.479,P<0.05;0.41 ±0.06 vs 0.69±0.10,=4.797,P <0.01),细胞中的脂质堆积也较软脂酸组减少.结论 抑制FoxO1的表达,可改善游离脂肪酸诱导的细胞胰岛素抵抗、减少肝脏细胞内脂肪变性,其机制可能是通过下调SREBP-1c的表达.

  • 抑制叉头状转录因子O1表达可促进人胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞分化

    作者:于菲;魏蕊;杨进;洪天配

    目的 探讨叉头状转录因子O1(FoxO1)对人胚胎干细胞(hESCs)定向分化为胰岛素分泌细胞(IPCs)的调控作用.方法 体外诱导hESCs定向分化为IPCs,应用定量聚合酶链反应(PCR)和Western blotting分析FoxO1的动态表达,采用定量PCR检测八聚体结合转录因子4(Oct4)、叉头转录因子a2(Foxa2)、胰十二指肠同源盒因子1(Pdx1)及胰岛素表达的动态变化.在分化第3阶段细胞(胰腺前体细胞)中通过慢病毒感染敲减或过表达FoxO1,应用定量PCR检测胰腺前体细胞Foxa2、Pdx1及胰岛素的表达;利用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测葡萄糖刺激的胰岛素分泌.两组数据的比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析.结果 在hESCs定向分化为IPCs的五个阶段中,FoxO1 mRNA和蛋白水平可见持续稳定表达;Oct4表达水平随着分化进程呈显著进行性降低;Foxa2表达水平呈先升后降的趋势,在分化第3阶段达到高峰;Pdx1和胰岛素表达水平随着分化进程逐渐升高.与相应的对照组相比,敲减FoxO1可显著上调胰腺前体细胞中Foxa2(4.31±0.74比1.00± 0.34,t=7.08,P<0.01)、Pdx1(2.91±0.24比1.00±0.15,t=11.62,P<0.01)及胰岛素mRNA(2.60±0.25比1.00±0.12,t=10.08,P<0.01)表达水平,过表达FoxO1可显著下调胰岛素mRNA表达(0.81±0.07比1.00± 0.03,t=4.19,P<0.05),而对Foxa2和Pdx1的mRNA表达未有显著影响.此外,敲减FoxO1既可增加低糖(2 mmol/L葡萄糖)状态下的胰岛素分泌(7.53±2.02比1.00±0.05,t=3.23,P<0.05),又可促进高糖(20 mmol/L葡萄糖)刺激下的胰岛素分泌(17.39±3.04比6.45±1.34,t=3.30,P<0.05);而过表达FoxO1对低糖状态下的胰岛素分泌无明显影响,但可抑制高糖刺激下的胰岛素分泌(2.02±0.50比4.85±1.42, t=2.61,P<0.05),从而使细胞丢失对葡萄糖的反应性.结论 FoxO1在hESCs定向分化为IPCs的过程中发挥负性调控作用,抑制FoxO1表达可能是促进IPCs分化成熟的一种潜在策略.

  • 叉头状转录因子O1与吡格列酮干预对肝癌HepG-2细胞葡萄糖消耗的影响

    作者:张鹏宇;秦贵军;王守俊;张颖辉;马笑堃;樊大贝

    目的 研究叉头状转录因子01( FoxO1)及吡格列酮干预对高胰岛素诱导的肝癌HepG-2细胞葡萄糖消耗的影响及机制.方法 1×10-6 mol/L胰岛素培养HepG-2细胞24h后,诱发培养基葡萄糖消耗减少建立细胞模型,将细胞分为对照组、空白质粒组、FoxO1 siRNA载体组、1×10-5 mol/L吡格列酮组.以普通培养基培养的细胞作为空白对照组.37℃、5% CO2培养箱中孵育24h,葡萄糖氧化酶法检测培养基中葡萄糖含量,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测FoxOl mRNA和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)mRNA表达,Western blot法检测PPAR-γ蛋白表达.将FoxO1 mRNA、PPAR-γ mRNA、PPAR-γ蛋白表达与葡萄糖消耗量进行相关分析和曲线拟合.采用单因素方差分析及多样本均数两两比较进行统计学分析.结果 高胰岛素培养24h较未诱导细胞培养基的葡萄糖消耗降低[分别为( 1.36±0.03)和(2.93±0.05) mmol/L,P<0.01],细胞FoxO1 mRNA升高(分别为0.513±0.016和0.425±0.011,P<0.05),PPAR-γmRNA降低(分别为0.260±0.025和0.441±0.012,P<0.05),PPAR-γ蛋白降低(分别为0.312±0.032和0.600±0.046,P<0.05).在抑制FoxO1和吡格列酮干预后此趋势有所缓解,逐渐接近于空白对照组.FoxO1 mRNA、PPAR-γmRNA和PPAR-γ蛋白表达与葡萄糖消耗量高度相关.结论 FoxO1表达升高或降低对葡萄糖代谢产生不利影响;增强PPAR-γ表达可有效恢复高胰岛素诱导的高糖,增加肝细胞的胰岛素敏感性.

  • 叉头状转录因子O1对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞氧化应激的影响

    作者:吉鸿飞;秦贵军;张伟伟;吴丽娜;马晓君

    目的 通过激活和抑制叉头状转录因子O1 (FoxO1)活性及表达,探讨其对高糖培养下大鼠肾小球系膜细胞(MCs)氧化应激的作用.方法 采用脂质体转染法将FoxO1短发夹样RNA(FoxO1 shRNA)质粒载体稳定转染MCs;用高糖(30.0 mmol/L)和白藜芦醇(Resv 20.0 μmol/L)培养稳定转染后的MCs.以5.6 mmol/L葡萄糖培养的MCs为正常对照组(NG),将高糖培养的MCs分为5组:单纯高糖组(HG)、HG+ Resv组、HG+ FoxO1 shRNA转染组、HG+ Resv+ FoxO1 shRNA转染组、HG+转染阴性对照组(shNC).培养72 h后,用荧光酶标仪检测各组MCs内活性氧(ROS)水平;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测去乙酰化酶(Sirtl)、FoxO1、锰超氧化物歧化酶(MnSOD) mRNA表达;Western blotting法检测FoxO1及磷酸化FoxO1 (p-FoxO1)水平.多组间数据比较采用单因素方差分析.结果 与NG组相比,HG组Sirtl mRNA表达下降,p-FoxO1水平升高,MnSOD mRNA表达下降,ROS水平升高,差异均有统计学意义(t=12.38、13.27、14.13、8.36,均P<0.05).与HG组相比,HG+ FoxOlshRNA转染组FoxO1mRNA表达被抑制,MnSOD mRNA表达更低,ROS水平更高,差异均有统计学意义(t =20.61、13.61、10.13,均P<0.05);HG+ Resv组Sirtl mRNA表达升高,p-FoxOl水平下降,MnSOD mRNA表达升高,ROS水平下降,差异均有统计学意义(t=6.02、10.69、5.39、5.37,均P <0.05).与HG+ Resv组比较,HG+ Resv+ FoxO1shRNA转染组,FoxO1mRNA表达被抑制,MnSOD mRNA表达降低,ROS水平升高,差异均有统计学意义(t=22.53、15.31、14.63,均P<0.05).结论 FoxO1是调节MCs内ROS水平的重要转录因子,其可能通过激活下游抗氧化靶基因MnSOD的表达,保护MCs对抗氧化应激.

  • 吲哚胺2,3-双加氧酶和叉状头转录因子3在骨肉瘤中表达与预后的关系

    作者:郑传禧;张世权;万鹏;郑建荣;关弘

    目的 检测骨肉瘤组织中吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)及叉状头转录因子3(FOXP3)的表达水平,并分析IDO与FOXP3的表达与患者预后的关系.方法 2005年5月至2014年9月,选取在深圳市第二人民医院确诊且有完整临床资料的骨肉瘤患者标本39例,骨巨细胞瘤患者标本20例,骨软骨瘤患者20例.骨肉瘤患者标本来自于患者术后大体标本.骨巨细胞瘤标本均取自四肢骨巨细胞瘤患者;骨软骨瘤标本均取自单发四肢骨软骨瘤患者,多发骨软骨瘤和骨软骨瘤病标本不纳入本实验.应用免疫组织化学法测定IDO及FOXP3在39例骨肉瘤和20例骨巨细胞瘤,20例骨软骨瘤中的表达情况.应用SPSS 19.0软件进行统计学分析.卡方检验分析各样本组间的差异,生存分析采用Kaplan-Meier法和log-rank检验;Cox比例风险模型进行单因素,多因素生存分析.结果 IDO,FOXP3在骨肉瘤组中阳性率分别为69.2%(27/39),53.8%(21/39),在骨巨细胞瘤组中阳性率分别为15%(3/20), 0%,骨软骨瘤组中无阳性表达,各组间IDO,FOXP3表达差异具有统计学意义(IDO: x2=6.201,P<0.05;FOXP3:x2=5.834,P<0.05).IDO高表达(评分≥5分)在Enneking分期,肺部转移亚组间有差异(x2=6.594,P<0.05;x2=8.770,P<0.05)而FOXP3在各亚组表达差异无统计学意义.通过Kaplan-Meier生存分析发现IDO,FOXP3高表达患者各时点总体生存时间均短于低表达者,差异具有统计学意义(x2=8.905,P<0.05;x2=4.573,P<0.05).单因素分析表明,肺转移及 IDO,FOXP3表达水平是影响骨肉瘤患者预后的因素而多因素分析显示,肺转移(HR=6.053,95% CI:13 ~34,P=0.040)是影响骨肉瘤预后的相关独立因素.结论 IDO,FOXP3在骨良恶性肿瘤中的表达具有显著差异;IDO、FOXP3的高表达可作为评判骨肉瘤不良预后的指标.

  • Foxp3基因多态性与原因不明复发性自然流产易感性的关系

    作者:吴再归;游泽山;张彩;李珠玉;苏秀梅;张秀明;李银广

    目的 探讨转录因子Foxp3基因多态性与原因不明复发性自然流产(URSA)易感性的关系.方法 分别采用PCR-限制性片段长度多态性技术(针对Foxp3基因的rs3761548、rs2294021位点)和PCR-等位基因特异性扩增技术(针对rs2232365、rs5902434位点),检测146例URSA患者(URSA组)和112例健康妇女(对照组)血中Foxp3基因上述4个位点的基因型分布.结果 (1)rs3761548和rs2232365位点:URSA组和对照组妇女中,rs3761548位点的3种基因型频率分别为C/C基因型10.3%、22.3%,A/C基因型38.4%、40.2%,A/A基因型51.4%、37.5%,rs2232365位点的基因型频率分别为A/A基因型5.5%、15.2%,A/G基因型47.9%、50.0%,G/G基因型46.6%、34.8%,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05);rs3761548A和rs2232365G等位基因明显增加URSA的发病风险(OR=1.73、1.61,P均<0.05).(2)rs5902434位点:3种基因型在两组的分布分别为ATT/ATT基因型7.5%、12.5%,del/ATT基因型42.5%、50.0%,del/dei基因型50.0%、37.5%,分别比较,差异均无统计学意义(P=0.10);但缺失型等位基因del频率URSA组明显高于对照组(分别为71.2%、62.5%;OR=1.49,P=0.04).(3) rs2294021位点:3种基因型(C/C、T/C、T/T)和T、C等位基因频率在URSA组和对照组的分布无差异(P=0.18、0.08).(4)单体型分析:del-A-G单体型明显增加URSA的发病风险(OR=2.51,P<0.01),而del-C-G和ATT-A-A单体型则对URSA的发病具有保护作用(OR=0.18、0.22,P均<0.01).结论 Foxp3基因的功能性多态位点可能通过改变Foxp3基因的表达或其功能而增加URSA的发病风险.

  • 变应性鼻炎小鼠外周调节性T细胞的表达特征

    作者:李颖;锡琳;范尔钟;金菩哲;张罗

    目的 运用流式细胞仪检测小鼠变应性鼻炎模型的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)和脾脏单个核细胞中Foxp3+、CD4+、CD25+的表达情况,比较与正常对照组间是否存在差异.方法 选取8周龄成熟雌性BALB/c小鼠30只,随机分为实验组和对照组各15只.卵清蛋白致敏建立BALB/c小鼠变应性鼻炎模型.21天实验结束取鼻腔HE染色观察形态学特点及差异;分别取脾脏和外周血分离获得单个核细胞,流式细胞仪检测其Foxp3+、CD4+、CD25+的表达情况.结果 卵清蛋白造模成功,实验组小鼠均出现喷嚏、搔鼻、鼻周红肿等症状;镜下可见鼻黏膜下较多嗜酸性粒细胞、浆细胞及肥大细胞浸润.实验组PBMC中CD4+CD25+T细胞和Foxp3+CD4+CD25+T细胞明显低于对照组,均具有极显著性差异(P<0.01).小鼠脾脏单个核细胞中CD4+CD25+T细胞和Foxp3+CD4+CD25+T细胞均略低于对照组,但统计学显示无显著性差异(P>0.05).结论 调节性T细胞(regulato ry T cell,Treg)在变应性鼻炎中作用机制尚未完全明晰,本实验从分子水平分析变应性鼻炎中CD4+细胞的表达特征,旨在为Treg的深入研究提供又一实验依据.

  • 鼻内糖皮质激素对鼻息肉中Foxp3+调节性T细胞的影响

    作者:蔡克敏;李华斌;赵质彬;牟忠林;程雷

    目的 探讨叉头状转录因子p3+(Foxp3+)调节性T细胞(T regulatory cells,Treg)在鼻息肉发病中的作用和鼻内糖皮质激素治疗对其的影响.方法 采用免疫组织化学、免疫荧光双重标记和Western blot 技术检测14例慢性鼻及鼻窦炎伴鼻息肉患者和10例正常对照鼻黏膜组织中Foxp3的表达和Foxp3+Treg 细胞的浸润情况,并与糠酸莫米松喷鼻1个月后的鼻息肉组织进行比较.结果 正常鼻黏膜组织和糠酸莫米松鼻喷雾剂治疗前、后鼻息肉组织中Foxp3+细胞数分别为(125±35)、 (41±15.4)、 (144±33)个/mm2(P<0.05):Foxp3+CD4+细胞数分别为(115±22)、 (37±11)、 (133±17)个/mm2(P<0.05):Foxp3蛋白的相对表达量分别为0.44±0.15、0.25±0.11、0.67±0.24(P<0.05).结论 Foxp3+Treg细胞在鼻息肉组织中数量减少可能与鼻息肉的发病机制有关,鼻内糖皮质激素可显著增加鼻息肉中的Foxp3+Treg细胞.

  • Foxp3表观遗传学研究进展

    作者:姜婷婷;王卫华;马兆鑫

    调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)在肿瘤、自身免疫性疾病、器官移植等多个领域中发挥着重要作用.叉头状转录因子Foxp3是Tregs发育和功能的核心元件.DNA及组蛋白的表观遗传学修饰对基因表达发挥重要的调控作用.目前关于Foxp3表观遗传学修饰的机制尚不十分明确,本文对近年来Foxp3表达的表观调控研究进行综述.

  • 先天性小睑裂综合征FOXL2基因缺失和突变分析

    作者:周仲民;梁德生;全意;薛晋杰;李红艳;夏晓波;邬玲仟

    目的 对5例先天性小睑裂综合征(BPES)患者行遗传学分析,探讨基因型与表型的关系.方法 综合应用核型分析、荧光原位杂交(FISH)、单核苷酸多态性微阵列(SNP array)、聚合酶链反应及DNA测序技术对1例BPES伴智力障碍和4例单纯BPES患者行FOXL2基因缺失和突变分析.结果 BPES伴智力障碍患者染色体3q22.1-q23存在包含FOXL2基因在内约9.4 Mb的杂合性缺失;例2和例3患者FOXL2基因存在c.704delG杂合突变,已报道该突变病例的临床表型为Ⅰ型BPES,但例3临床表现为Ⅱ型BPES;例4和例5未检测到突变.结论 染色体3q22.1-q23可能存在导致智力障碍的相关基因;FOXL2基因c.704delG杂合突变(表达截短蛋白)可导致Ⅰ和Ⅱ型BPES.

  • 我国睑裂狭小综合征患者FOXL2基因突变研究

    作者:叶娟;石鑫;贺金晶;张惠娜

    目的 明确我国睑裂狭小综合征(BPES)患者Forkhead box L2 (FOXL2)基因突变位点及突变类型,分析突变引起的蛋白质结构变化,以提高疾病的诊断准确率.方法 实验研究.2008年1月至2009年12月在浙江大学医学院附属第二医院眼科中心收集到5例我国BPES患者,采集患者外周静脉血,提取基因组脱氧核糖核酸(DNA),应用聚合酶链反应和DNA测序技术检测FOXL2基因编码序列,并与患者家属及110名正常人相应序列进行比对.结果 两个家系中BPES患者均检测到c.672_701dup30(p.Ala224_Ala234dup)杂合突变,3例散发患者分别检测到c.655C>T(p.Q219X)、c.370 A>G(p.K124E)和c.858_874dup17(p.P292fs)杂合突变.结论 在BPES患者中发现FOXL2基因c.370A>G(p.K124E)和c.858_874dup17(p.P292fs)两种新的杂合突变,扩展了国内外FOXL2基因突变谱,在两个家系中均发现c.672_701dup30(p.Ala224 _Ala234dup)杂合突变,再次证明这一位点为国内BPES患者FOXL2基因突变热点.

  • 密度感应系统基因lasR/rhlR对大鼠铜绿假单胞菌生物膜感染气管插管模型肺组织Foxp3、TGF-β1和IL-10表达的影响

    作者:向青青;芦起;余加林;王政力;冯蕾;艾青;张云辉

    目的 研究铜绿假单胞菌野生株(PAO1)及其密度感应(QS)系统基因lasR/rhlR缺失株(AlasR△rhlR)生物膜感染对气管插管模型鼠肺组织Foxp3、转化生长因子β1(TGF-β1)、白细胞介素10(IL-10)表达的影响.方法 21只SD大鼠随机均分为3组(n=7):PAO1组、△lasR△rhlR组及无菌对照组.体外培养生物膜(BF)并经导管置入气管,7d后行肺组织HE染色及肺部组织匀浆菌落计数(cfu),并检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-10、肺组织TGF-β1、肺组织细胞Foxp3mRNA表达情况.结果 PAO1组、△lasR△rhlR组肺组织均培养出细菌(cfu分别为10400.00±6313.70、975.00±559.97/g肺组织),显著高于无菌对照组(未培养出细菌,P<0.05),且PAO1组肺部细菌量明显高于△lasR△rhlR组(P<0.05);肺组织HE染色结果显示:无菌对照组局部轻微充血,无明显炎症改变;PAO1组血管及支气管周围大量炎症细胞浸润,肺泡间隔增宽,局部脓肿、坏死;△lasR△rhlR组肺组织病理改变较PAO1组减轻.PAO1组、△lasR△rhlR组IL-10含量(分别为188.07±57.01ng/ml、93.31±17.26ng/ml)明显高于无菌对照组(57.43±22.13ng/ml),且PAO1组明显高于△lasR△rhlR组(P<0.05).PAO1组、△lasR△rhlR组TGF-β1累积光密度值明显高于无菌对照组,且PAO1组明显高于△lasR△rhlR组(P< 0.05).PAO1组、△lasR△rhlR组Foxp3 mRNA表达量(分别为4.62±1.07、2.15±1.43)明显高于无菌对照组(0.65±0.32),且PAO1组明显高于△lasR△rhlR组(p<0.05).结论 铜绿假单胞菌QS系统lasR/rhlR基因可促进铜绿假单胞菌生物膜引起的气管插管模型大鼠的炎症反应,促进肺组织Foxp3表达上调,伴随TGF-β1、IL-10分泌增多,促使感染迁延化和慢性化.

  • 下调Foxp3基因表达对人调节性T细胞功能的影响

    作者:孙磊;易寿南;陈丽

    目的 利用RNA干扰技术下调Foxp3表达,观察其对人CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)表型及功能的影响.方法 利用Foxp3 siRNA转染人CD4+CD25+Treg,荧光显微镜和流式细胞仪(FACS)检测转染效率,实时定量PCR和Western印迹分别鉴定Foxp3基因及Treg功能相关基因表达、Foxp3蛋白表达,细胞增殖实验检测Treg抑制功能,FACS测Treg表型标记,ELISA检测细胞因子表达.结果 Foxp3 siRNA转染人CD4+CD25+Treg效率为68%,与对照组相比,转染后的细胞Foxp3基因下调了61.4%(P<0.01),Foxp3蛋白表达较低,Treg功能相关基因和主要表型标记也较对照组有改变,差异有统计学意义.功能试验提示无论是在异种还是同种抗原刺激的淋巴细胞反应中,Foxp3 siRNA转染的Treg与对照组相比,对效应性T细胞的抑制作用较弱(异种抗原组83%比48%,P<0.05;同种抗原组65%比28%,P<0.01),且主要抑制性和效应性细胞因子的表达下降,差异有统计学意义.结论 Foxp3是人天然Treg 维持其抑制性功能的核心细胞内标志.

  • 过表达FoxO1对高糖诱导下大鼠肾小球系膜细胞细胞外基质分泌的影响

    作者:郭丰;王庆祝;秦贵军;周英旎;吴丽娜;刘飞

    目的 研究叉头转录因子O1(FoxO1)过表达对高糖培养下大鼠肾小球系膜细胞(MCs)细胞外基质(ECM)蛋白分泌的影响及其作用机制.方法 以含组成性激活突变型(CA)FoxO1编码序列的慢病毒载体(LV-CA-FoxO1)及空慢病毒载体(LV-NC-GFP)转染MCs.实验分4组:正常糖(5.6 mmol/L)组(NG组),高糖(25 mmol/L)组(HG组)、高糖+LV-CA-FoxO1组(LV-CA组)、高糖+空病毒载体组(LV-NC组).各组培养72 h后,实时荧光定量PCR(Real-timePCR)检测FoxO1、纤维连接蛋白(FN)、Ⅰ型胶原蛋白(Col Ⅰ)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)、转化生长因子β1(TGF-β1)和TGF-β Ⅰ型及Ⅱ型受体(TGF-βR Ⅰ/Ⅱ)mRNA的表达水平;Western印迹法检测FoxO1、磷酸化FoxO1(p-FoxO1)、TGF-β1、TGF-βRⅠ/Ⅱ的蛋白表达;细胞免疫荧光化学检测TGF-βR Ⅰ在细胞内表达分布.结果 (1) FoxO1表达及活性改变:HG组FoxO1 mRNA及蛋白表达与NG组相比差异均无统计学意义(均P >0.05),p-FoxO1蛋白表达高于NG组(P<0.05);与HG组相比,LV-CA组FoxO1mRNA与蛋白表达水平均高于HG组(mRNA:为17.36±1.13比1.01 ±0.12,蛋白:4.38±0.09比0.93 ±0.10,均P<0.05),p-FoxO1/FoxO1低于HG组(P<0.05),FoxO1表达增加,转录活性增强.(2) ECM蛋白分泌改变:HG组FN、Col Ⅰ及ColⅣmRNA表达高于NG组(均P<0.05),LV-CA组FN、Col Ⅰ及ColⅣ表达低于HG组(均P<0.05).(3) TGF-β传导通路激活改变:HG组TGF-β1、TGF-βRⅠ/Ⅱ表达均高于NG组(均P<0.05),而LV-CA组上述指标均低于HG组(均P<0.05);细胞免疫荧光化学结果提示,LV-CA组TGF-βR Ⅰ在细胞内分布与HG组相比减少.LV-NC组上述指标与HG组相比差异均无统计学意义(均P>0.05).结论 FoxO1能够抑制TGF-β传导通路的激活,从而减少MCs在高糖诱导下过度分泌ECM蛋白.

  • 下调叉头转录因子M1基因表达对非小细胞肺癌细胞生长与侵袭能力的影响

    作者:周磊;张萍海;徐欣;许诺;高磊;白春学;张新

    目的 研究用叉头转录因子M1(FoxM1)基因小干扰RNA下调非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株FoxM1基因表达后细胞增殖与侵袭能力的改变,为开发新的NSCLC靶向治疗方法提供依据.方法 设计靶向FoxM1小干扰RNA(siFoxM1),分别以siFoxM1和无关对照siRNA转染人NSCLC细胞株SPC-A-1、A549和LTEP-a-2,采用实时逆转录PCR和蛋白质印迹法检测FoxM1 mRNA和蛋白表达,采用集落形成试验、划痕试验和细胞侵袭试验研究下调FoxM1基因表达对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响.结果 转染siFoxM1可高效特异地下调SPC-A-1、A549和LTEP-a-2细胞的FoxM1mRNA表达(分别下降83.9%、83.6%、88.6%)和蛋白表达.转染siFoxM1的SPC-A-1、A549和LTEP-a-2细胞集落形成数[分别为(136.0±15.5)、(87.0±2.6)和(121.7±9.4)个]和穿膜细胞数[分别为(19.2±2.5)、(4.2±0.8)和(6.2±1.8)个]均明显低于转染无关对照siRNA细胞[集落形成数分别为(222.3±20.5)、(164.7±14.1)和(260.7±13.5)个,穿膜细胞数分别为(81.4±6.2)、(39.2±4.6)和(35.6±3.0)个,均P<0.01];转染siFoxM1的SPC-A-1细胞划痕愈合率(52.6%±7.8%)明显低于转染无关对照siRNA细胞(85.3%±18.6%,P<0.01).结论 FoxM1基因表达下调可显著降低多种NSCLC细胞的增殖与侵袭能力,提爪FoxM1是潜在的肺癌治疗靶点.

  • IDO和Foxp3在胚胎反复植入失败患者黄体中期的表达

    作者:许思娟;张红红;倪亚莉;谢广妹;高喜红;张霖;刘丽娟

    目的:探讨吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)和叉头状转录因子3(Foxp3)基因在胚胎反复植入失败中的作用.方法:采用荧光定量实时聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定50例胚胎反复植入失败患者(组1)黄体中期Foxp3和IDO基因的表达,并与50例正常生育能力妇女(组2)和50例首次行体外受精-胚胎移植(IVFET)并妊娠的妇女(组3)进行比较.结果:3组黄体中期外周血Foxp3 mRNA和IDO mRNA表达比较差异有统计学意义(P<0.05);组2和组3 Foxp3 mRNA及IDO mRNA的表达均高于组1(均P=0.000),组2 Foxp3 mRNA及IDO mRNA的表达高于组3(均P< 0.05).结论:Foxp3 mRNA和IDO mRNA在黄体中期的低表达可能是反复植入失败的免疫性不孕原因.

  • 转录因子FOXO1在多囊卵巢综合征中的作用研究进展

    作者:冷芹;方有燕;李君;魏兆莲

    叉头框转录因子(FOX)家族O类亚群成员之一FOXO1在许多细胞类型中表达,参与了许多病理和生理过程,包括细胞增殖、凋亡、自噬、代谢、炎症反应、细胞因子的表达、免疫分化和氧化应激抵抗等.这些过程会引起许多临床现象,如致癌作用、糖尿病、心血管疾病、宿主反应等.多囊卵巢综合征(PCOS)是育龄期妇女常见的内分泌紊乱疾病,发生机制仍不明确.FOXO1可能参与了PCOS的胰岛素抵抗、低度炎症反应等病理生理.研究FOXO1在PCOS的发生及其并发症中的作用,有利于为PCOS的治疗策略提供新的思路.

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