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杭菊黄酮醇合酶基因的原核表达与重组蛋白体外活性研究
从杭菊转录组数据库中筛选并通过RACE技术克隆出1条黄酮醇合酶基因(暂命名CmFLS),简单序列分析表明CmFLS基因全长1 235 bp,包含1个1 008 bp的开放阅读框(ORF),编码335个氨基酸.预测得到的CmFLS编码的蛋白相对分子质量为37.96 kDa,等电点(pI)为5.41,构建进化树发现CmFLS与菊科其他种植物同源性很高.利用原核表达技术成功诱导出大小43 kDa左右的重组融合蛋白,同时使用Ni-NTA树脂分离纯化出重组融合蛋白,并确定使用含250 mmol· L-咪唑的Ni-native buffer洗脱效果好.将纯化后的重组融合蛋白进行体外催化反应,然后将反应的产物萃取后进行HPLC分析,结果显示CmFLS重组融合蛋白在特定缓冲液及反应条件下能够将二氢槲皮素催化生成槲皮素,表明CmFLS编码的功能性蛋白在杭菊黄酮生物合成途径中具有双加氧酶活性.以上研究结果为进一步研究CmFLS的功能、阐明FLS酶的功能机制奠定了基础,同时为从分子水平调控杭菊黄酮醇成分代谢及体外催化合成黄酮醇提供新思路.
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清开灵注射液对高血压病患者高敏C反应蛋白活性的影响
近年来高敏C反应蛋白(hs-CRP)受到了广泛的关注,欧美开展了多项前瞻性研究,认为hs-CRP是高血压、血脂紊乱、糖尿病的独立危险因子,测定hs-CRP能较敏感地预测心血管危险事件[1].近几年我们观察了清开灵注射液是否能通过抑制hs-CRP活性的途径来改善高血压患者的病情,试图证明中医理论热毒、肝火对高血压治疗的重要指导意义.
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Aβ诱导大鼠海马磷酸化 NMDA受体亚单位突触内表达的改变
Aβ的突触毒性具有NMDA受体依赖性, NMDA受体的转录后磷酸化修饰是一个可逆的调节蛋白活性、定位及蛋白与蛋白间的相互作用过程。基于以前的研究结果,我们进一步探讨了Aβ诱导的大鼠海马磷酸化NMDA受体亚单位在突触内表达的改变。本研究发现在Aβ作用早期阶段,可以诱导大鼠海马pTyr1472-NR2 B及Fyn表达的减少,但是pTyr1325-NR2 A及Src的蛋白表达没有明显改变。这些结果提示大鼠海马pTyr1472-NR2 B在Aβ毒性作用早期变化更显著。而且,我们进一步还发现, Aβ可引起大鼠海马突触内pTyr1472-NR2 B和突触外pTyr1325-NR2 A的puncta密度减少,提示在Aβ毒性作用早期,突触内外位点发生了复杂的改变。本研究探索了阿尔茨海默病( AD)大鼠发生的早期突触变化的细胞和分子机制,将有助于临床AD大鼠的预防和早期治疗。
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脂联素相关研究进展
一、脂联素的结构及受体1.脂联素基因学和蛋白质结构:人类脂联素基因的编码基因为apM1,位于染色体3q27上,由3个外显子和2个内含子组成.人类脂联素的蛋白质结构含有244个氨基酸,包括N-端信号肽、C端芳香族氨基酸球状序列、N端特异的非胶原序列,其后紧接着一段类似胶原的G-X-Y3氨基酸重复序列[1].经过翻译加工修饰可以生成8种同源蛋白.其中C端芳香族氨基酸球状序列是脂联素蛋白活性的关键部位,这一结构域与胶原Ⅷ、X、补体c1q和TNF-α家族具有结构上的同源性[2].
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高脂饮食对老年大鼠棕色脂肪组织线粒体内膜解偶联蛋白活性与含量的影响
老年肥胖者易患高血压、冠心病、糖尿病等疾病,而肥胖与饮食习惯有明显的关系.正常大鼠过度饮食时,可以通过增加能量消耗避免发展成为肥胖,这种现象被称为食物诱导的产热,也就是食物的热效应;而给予肥胖大鼠过度饮食则可导致大鼠体重过度增加.棕色脂肪与能量平衡有关,肥胖大鼠棕色脂肪明显减少,食物诱导的产热减少可能与棕色脂肪有关.我们于1999年9~10月应用高脂饲料喂养老年大鼠,旨在了解高脂饮食对解偶联蛋白(uncoupling protein,UCP)的影响,探索肥胖发生的机制,为临床治疗肥胖探寻新的途径.一、材料和方法1.试剂:[8-3H]鸟嘌呤核苷三磷酸(GTP)和[U-14C]蔗糖,为英国Amersham公司产品;羧基苍术苷(carbxyatractyloside)钾盐,为美国Sigma公司产品;三乙醇胺盐酸盐,为德国Boehringer公司产品;GTP由上海丽珠生物技术有限公司生产.2.动物及分组:18月龄雄性SD大鼠24只,体重370~390 g,随机分为正常对照组、高脂饮食组,每组各12只.正常对照组给予标准饲料(第二军医大学动物实验中心提供):碳水化合物热卡占61%,脂肪占12%,蛋白质占26%,喂养30 d;高脂饮食组予配制的高脂饲料:碳水化合物热卡占20%,脂肪占61%,蛋白质占19%,喂养30 d.饲养期间大鼠置于室温(22±1)℃中,自由饮水.3.UCP的测定:取肩胛间区棕色脂肪组织,以差速离心法分离出线粒体.用3H标记的GTP与UCP结合,用液体闪烁仪测定放射活性.后用Scatchard作图法对测定的数据进行分析,得出UCP与GTP结合的解离常数(Kd)及大结合容量(Bmax)值,其中Kd的大小反映UCP活性的高低;Bmax的大小反映UCP含量的多少.
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电离辐射对小鼠免疫器官SOD基因转录以及蛋白活性的影响
电离辐射通过水的辐解作用可产生出各种自由基,并可由自由基引发脂质过氧化反应影响生物膜的结构与功能并进而影响整个细胞的功能.
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NAD(P)H:醌氧化还原酶1基因与2型糖尿病相关性研究
NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO1)是一个含274个氨基酸的黄素蛋白,又称DT-黄递酶,可催化双电子还原以及降解醌及其衍生物的毒性,从而保护细胞对抗氧化还原循环以及氧化应激[1].由于醌及醌异构体可以抑制胰岛素的分泌,因此,NQO1对β细胞以及胰岛素分泌也具有保护作用.研究发现,NQO1基因P187S纯合突变可导致NQO1蛋白活性的丢失[2].我们应用PCR-RFLP方法对198例中国汉族人进行基因型检测,旨在研究NQO1基因P187S多态性与2型糖尿病的相关性,报告如下.
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阿糖胞苷代谢酶与急性髓系白血病患者临床耐药关系的研究
阿糖胞苷(Ara-C)药理作用首先是在代谢酶的作用下转化成三磷酸阿糖胞苷(Ara-CTP),而人体内同时存在使得Ara-CTP分解的酶.为了明确代谢酶在AML耐药中所起的作用,我们特从酶基因的表达和蛋白活性两个角度对脱氧胞苷激酶(DCK,使Ara-C活化的限速酶)和胞苷脱氨酶(CDD,使Ara-C降解)在Ara-C耐药中所发挥的作用进行探讨.
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有关前导肽影响目标蛋白表达及活性的研究与展望
选择目前已报道的5种含有前导肽的目标蛋白(枯草杆菌蛋白酶、α-水解蛋白酶、米根霉脂肪酶、华根霉脂肪酶、米黑霉脂肪酶),对其表达情况与活性测定的结果进行对比,结果表明前导肽的存在对目标蛋白的正确表达具有重要意义。通过分析前导肽的变化对成熟蛋白活性的影响,提出前导肽进化对目标蛋白进化具有重要意义。
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芳香族氨基酸脱羧酶及其与帕金森病基因治疗的关系
帕金森病(PD)是一种以黑质纹状体多巴胺能神经元减少为特征的疾病,给予左旋多巴可以提高帕金森病人脑内纹状体多巴胺的水平.芳香族氨基酸脱羧酶(AADC)在脑内多巴胺神经递质合成过程中将L-DOPA转换成为多巴胺,它在基因表达和蛋白活性上分别受到调节.PD病程中,与L-DOPA的波动相关的AADC基因调节对疾病的治疗有重要作用.AADC将在帕金森病的基因治疗中发挥重要潜能.
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AQP-4研究进展
AQP-4是一种选择性水通透的内在膜蛋白,属于主体内在蛋白家族的成员,是目前哺乳动物组织中已被鉴定的十种水通道蛋白中的一种.大多数水通道蛋白活性可被汞抑制,而AQP-4为汞不敏感水通道蛋白(MIWC),现已发现AQP-4主要存在哺乳动物的脑组织中,而眼、肾、胃肠、肺组织等则表达较少.但在不同器官组织中,其作用及调节水转运机制不同.研究AQP-4分子结构、生化、病理生理变化及水代谢障碍疾病的关系,对于指导临床水代谢障碍疾病如脑水肿、肾衰竭等的治疗及其新药的开发具有十分重要的意义.
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原发性高血压的血栓前状态研究
近年来的临床研究发现,原发性高血压病引起的血栓栓塞发病率有上升趋势,而高血压病存在潜在的高凝状态并没有得到公认[1].本文通过88例高血压病患者(其中58例并发腔隙性梗死)的血浆抗凝和纤溶系统某些蛋白活性的测定,对高血压病的血栓前状态诊断作一初步研究,为临床高血压的综合治疗提供依据.1对象和方法1.1对象随机选择1999年度住本院心血管内科的原发性高血压患者88例.其中58例经核磁共振检查明确为原发性高血压合并腔隙性梗死.58例腔梗与30例无腔梗患者的平均血压和血脂没有明显差异,同时采集59例20~60岁健康人的血浆(男30,女29例)测定上述指标作为对照,详见表1.
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两种脂质体制备方法对碱性成纤维细胞生长因子活性的影响
目的 考察两种脂质体制备方法对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)活性的影响.方法 采用薄膜分散法和冻干重建法制备bFGF脂质体,MTT法检测两种方法制备的脂质体中bFGF的活性.结果 薄膜分散法和冻干重建法制备的bFGF脂质体活性分别为1.99×107和1.94×107 IU/ml.与对照bFGF水溶液相比,两种脂质体制备方法均未降低bFGF活性,且包封率与粒径差异无显著意义.结论 采用薄膜分散法和冻干重建法制备bFGF脂质体,对其活性均无影响.
关键词: 碱性成纤维细胞生长因子 脂质体 蛋白活性 -
静电纺丝纳米纤维体外释放与蛋白活性的研究
目的:通过选择不同的模型蛋白,探讨准确的研究静电纺丝纳米纤维支架的体外释放和快速的测定蛋白活性的方法.方法:通过O/W乳液法静电纺丝制备纳米纤维,并用扫描电镜对纳米纤维表面进行了表征.以GM-CSF为模型蛋白,采用ELISA双抗体夹心法考察纤维的体外释放行为;以BSA为模型蛋白,用SEC-H-PLC比较纤维制备前后蛋白的聚集情况;以β-半乳糖苷酶为模型蛋白,用ONPG法比较纤维制备前后酶的催化活性.结果:纤维表面平滑,直径均一,呈现互相连通的三维网状结构.纤维在5天内释放90%以上;纤维中回收的BSA单体比例为66.53%;β-半乳糖苷酶在纤维中的催化活性保持原活性的3.37%.结论:通过选择不同的模型蛋白,能够准确的测定静电纺丝纤维的体外释放,快速的考察纤维中的蛋白活性,对于更好的研究蛋白药物纳米纤维支架具有重要的参考价值.
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前列腺癌相关肿瘤标志物的研究进展
前列腺癌与其他恶性肿瘤一样,应争取早防、早诊、早治.寻求肿瘤标志物是目前肿瘤早期诊断常用的方法.本文就前列腺特异性抗原(prostate specific antigen,PSA)和新发现的几种相关肿瘤标志物综述如下.1PSAPSA是目前临床上广泛应用的检测指标,它是20世纪60年代末在研究免疫避孕过程中发现的.PSA是前列腺腺泡和导管上皮细胞分泌的一种分子量约34 000的单链糖蛋白,是精液的主要成分之一.其具有糜蛋白活性,能水解精液凝固蛋白,使精液液化.PSA蛋白只在前列腺组织中存在,在前列腺癌患者血清中也有不同程度升高.1986年美国食品及药品管理局推荐将血清PSA检测用于前列腺癌的诊断.
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解聚素金属蛋白酶和肝素结合表皮生长因子在肝癌组织中的分布及临床意义
解聚素金属蛋白酶(a disintegrin and metalloproteinase,ADAM)是一类新近发现的Ⅰ型膜锚定糖蛋白家族,目前发现它们高表达于许多恶性肿瘤组织中,参与肿瘤细胞的侵袭与转移.其中,ADAM一个重要的作用途径就是作为蛋白水解酶参与一些膜锚定蛋白活性外功能区的释放.
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缺血预适应抗脑缺血再灌注后神经元凋亡的基因机制
缺血性脑中风是目前严重威胁人类健康的疾病之一,动物实验研究证明,脑缺血后神经元的死亡包括坏死和凋亡两种形式[1~3].近年来研究发现,短暂的非致死性缺血可启动细胞内信号转导通路,通过调节靶蛋白活性,合成多种对细胞有保护作用的应激蛋白质,从而对抗细胞凋亡,这一现象称为缺血预适应(ischemic preconditioning,IPC).脑缺血再灌注后神经元凋亡,是一个复杂的过程.本文仅对脑缺血预适应抗凋亡的基因机制作以综述,以期对探讨脑缺血再灌注后神经元凋亡的干预措施或基因治疗有所帮助.
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终末期肾衰竭中成纤维细胞生长因子23与继发性甲状旁腺功能亢进症的相关性
成纤维细胞生长因子23(FGF23)是新近发现的一种 重要调磷因子[1].研究已明确,FGF23通过抑制近端肾小 管上2型钠磷转运蛋白活性,抑制磷的重吸收[1-3],在维生素D代谢调节系统中充当1,25(OH)_2D_3 的反调节因子,对抗1,25(OH)_2D_3对甲状旁腺激素的抑制及肠道磷重 吸收的促进作用,维持体内磷平衡[2].
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抑癌基因p16在胃黏膜异型增生及胃癌中的表达
p16基因蛋白作用于CDK4、CyclinD1和Rb的反馈回路,通过调节Rb的蛋白活性,防止细胞过度增殖[1].笔者采用免疫组化技术,对胃癌组织蛋白的表达进行了研究,重点探讨p16与胃癌临床病理特征的关系.
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184例石棉尘接触者血清铜蓝蛋白活性测定结果分析
矽肺、煤工尘肺和石棉肺是常见的3种尘肺.为探索石棉肺的发病机理及有效防治石棉肺,本文对184例石棉尘接触者血清铜蓝蛋白活性进行了测定和分析.1 对象与方法1.1 对象 观察组:重庆某石棉厂接触石棉尘工人184例为观察组,其中男103例,女81例;平均年龄55(25~88)岁;平均工龄25(0.5~50)年.排除其他影响……