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高脂饮食对老年大鼠棕色脂肪组织线粒体内膜解偶联蛋白活性与含量的影响
老年肥胖者易患高血压、冠心病、糖尿病等疾病,而肥胖与饮食习惯有明显的关系.正常大鼠过度饮食时,可以通过增加能量消耗避免发展成为肥胖,这种现象被称为食物诱导的产热,也就是食物的热效应;而给予肥胖大鼠过度饮食则可导致大鼠体重过度增加.棕色脂肪与能量平衡有关,肥胖大鼠棕色脂肪明显减少,食物诱导的产热减少可能与棕色脂肪有关.我们于1999年9～10月应用高脂饲料喂养老年大鼠,旨在了解高脂饮食对解偶联蛋白(uncoupling protein,UCP)的影响,探索肥胖发生的机制,为临床治疗肥胖探寻新的途径.一、材料和方法1.试剂:[8-3H]鸟嘌呤核苷三磷酸(GTP)和[U-14C]蔗糖,为英国Amersham公司产品;羧基苍术苷(carbxyatractyloside)钾盐,为美国Sigma公司产品;三乙醇胺盐酸盐,为德国Boehringer公司产品;GTP由上海丽珠生物技术有限公司生产.2.动物及分组:18月龄雄性SD大鼠24只,体重370～390 g,随机分为正常对照组、高脂饮食组,每组各12只.正常对照组给予标准饲料(第二军医大学动物实验中心提供):碳水化合物热卡占61%,脂肪占12%,蛋白质占26%,喂养30 d;高脂饮食组予配制的高脂饲料:碳水化合物热卡占20%,脂肪占61%,蛋白质占19%,喂养30 d.饲养期间大鼠置于室温(22±1)℃中,自由饮水.3.UCP的测定:取肩胛间区棕色脂肪组织,以差速离心法分离出线粒体.用3H标记的GTP与UCP结合,用液体闪烁仪测定放射活性.后用Scatchard作图法对测定的数据进行分析,得出UCP与GTP结合的解离常数(Kd)及大结合容量(Bmax)值,其中Kd的大小反映UCP活性的高低;Bmax的大小反映UCP含量的多少.
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心理应激对大鼠多巴胺受体功能的影响及酪氨酸的干预作用
目的探讨心理应激对大鼠中枢多巴胺受体功能的影响以及酪氨酸的干预作用.方法用Communication Box模型对大鼠进行连续14天、每天30min的心理应激,并经饲料给予250、500、1 000mg/kg三个剂量的酪氨酸干预.采用放射性配基结合分析法测定不同应激时间的中脑腹侧被盖区(VTA)、伏隔核(Nac)、前额皮质(mPFC)等脑区多巴胺D1、D2受体的大结合容量(Bmax)和平衡解离常数(Kd).结果心理应激组mPFC、Nac区D1受体大结合容量较对照组有明显下降(P＜0.05),mPFC区D2受体大结合容量也有明显的下降(P＜0.05).与心理应激组相比,酪氨酸500mg/kg干预组mPFC区D1受体大结合容量升高(P＜0.05),1000mg/kg干预组VTA、mPFC区D1受体大结合容量升高(P＜0.05).心理应激及酪氨酸干预组D1、D2受体平衡解离常数无明显差别.结论心理应激能够降低mPFC、Nac区D1受体大结合容量,酪氨酸干预能够提高心理应激时mPFC、VTA区的D1受体大结合容量.心理应激对不同脑区D2受体功能的影响可能不同.
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肾病综合征大鼠肾小球血管紧张素Ⅱ受体结合的变化及机制
血管紧张素Ⅱ(AⅡ)在肾病综合征(NS)蛋白尿产生、水肿形成和肾小球硬化中发挥作用.为探讨肾局部肾素-血管紧张素系统(RAS)在NS中的作用,对阿霉素肾病大鼠(ADR)肾小球AⅡ受体进行测定.材料与方法:(1)雄性SD大鼠,随机分为对照组和肾病组,经尾静脉一次性注射盐酸阿霉素( 6 .5 mg*kg-1).部分动物结合实验前给予依那普利(10 mg·kg-1·d -1 ).(2)肾小球的分离纯化参照Fong氏的方法.(3)放射配基结合实验:反应体系-- 反应介质、肾小球、标记AⅡ和系列浓度的非标记AⅡ.反应体积300 μl.依次加入反应介质、肾小球、标记AⅡ和非标记AⅡ,在22 ℃振荡水浴中反应60 min,冰水终止反应.过滤分离结合的配基.自动γ计数仪测量放射性强度,所得数据作Scatchard分析,求出解离常数(Kd) 和大结合容量(Bmax).(4)放免法测定血浆AⅡ.(5)数据以[AKx- ±s表示,受体参数用配对比较t检验.
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肺动脉高压模型大鼠肺动脉平滑肌RyR结合特性及基因C-末端序列的研究
目的 分析肺动脉高压时肺动脉平滑肌Ryanodine受体(ryanodine receptor,RyR)的结合功能改变及基因序列的变化.方法 梯度离心法提取肺动脉平滑肌肌浆网膜蛋白组分,放射配基结合方法 测定平衡解离常数(Kd)、大结合容量(Bmax)的变化;体外提取肺动脉平滑肌细胞总RNA,反转录合成RyR2 cDNA,以cDNA为模板使用特异性引物对目的 片段进行PCR扩增,切胶回收后Sanger双脱氧末端终止法测定序列.结果 野百合碱(monocrotaline,MCT)所致肺动脉高压组RyR大结合容量(Bmax)为(197±21.4)nmol·g-1 protein,较对照组(168±13.7) nmol·g-1 protein明显增加(P<0.01);平衡解离常数(Kd)为(0.276±0.026) nmol·L-1与对照组(0.282±0.031) nmol·L-1相比差异无显著性(P>0.05);野百合组RyR2 C-末端基因序列与对照组无差异.结论 MCT所致肺动脉高压大鼠RyR大结合容量(Bmax)增加,提示受体的数量发生了上调;Kd无明显变化,说明与受体的亲和力无改变.MCT所致肺动脉高压大鼠2型RyR(RyR2)C-末端基因序列无变化.
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川芎嗪对VEGF受体与其放射性配体结合的抑制
目的探讨川芎嗪对VEGF受体与其放射性配体结合的影响.方法采用血清药理学方法,分别制备川芎嗪大剂量、小剂量、阳性对照组鱼精蛋白、生理盐水各组含药血清,采用反相高效液相色谱法测定川芎嗪含药血清中药物浓度.将各组血清作用于人脐静脉内皮细胞ECV304,采用放射配体受体结合分析法(RBA)观察川芎嗪对VEGF受体大结合容量(Bmax)和解离常数(Kd值)的影响.结果川芎嗪大剂量组Kd=343.30±36.64 pmol·L-1,Bmax=46.26±5.85fmol/2×105 cells,与生理盐水组相比Kd增大(P＜0.05),Bmax减小(P＜0.05).川芎嗪小剂量组与生理盐水组相比Kd有增大趋势、Bmax有减小趋势,但差异无显著性.阳性对照组Kd=179.07±25.65 pmol·L-1,受体大结合容量Bmax=38.65±9.83 fmol/2×105 cells,与生理盐水组相比Kd差异无显著性(P＞0.05),Bmax减小(P＜0.05).结论在川芎嗪作用下VEGF受体与125I-VEGF结合的亲和力下降,VEGF受体数目下降,川芎嗪抑制VEGF受体与125I-VEGF结合.川芎嗪含药血清(143.0 mg·kg-1组)抑制VEGF受体与125I-VEGF结合.
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胆石病胆囊缩胆囊素受体及其基因表达的研究
胆囊缩胆囊素受体(CCK-1R)异常在胆固醇结石胆囊收缩功能损害中起重要作用.本研究采用受体放射配基结合法检测胆囊CCK-1R的大结合容量(Bmax) 和平衡解离常数(Kd),同时采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定CCK-1R mRNA在胆囊平滑肌中的表达,旨在探讨胆汁胆固醇对胆囊CCK-1R功能及其基因表达的影响和作用机制.
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大鼠心肌细胞核Ca2＋释放受体在心肌肥厚时的变化
细胞核上存在相对独立的Ca2＋摄取和释放系统，如1，4，5-三磷酸肌醇受体(inositol 1,4,5 triphosphate receptors,IP3R)是一类配基(IP3)操纵的Ca2＋释放通道，存在于内质网肌浆网和细胞核膜上。IP3R数目和结构的变化可能会影响到核内Ca2＋信号的幅度和频率，并精确地调控核内Ca2＋变化，进而影响核的各种功能。为了研究细胞核Ca2＋释放受体-IP3R在心肌肥厚时的变化，及体外蛋白磷酸化和核外Ca2＋浓度对它的影响，我们在腹主动脉缩窄大鼠心肌肥厚模型上，通过差速离心提纯心肌细胞核，采用［3H］IP3的放射受体分析的方法，观察心肌细胞核膜IP3R与其配体的大结合容量(Bmax)和亲和力(Kd)，从而进一步揭示心肌肥厚发生的分子机制。结果发现腹主动脉缩窄大鼠心肌肥厚组IP3与核膜结合的大容量Bmax比对照组增加54.9%［每毫克蛋白(891.0±111.0)vs(401.82±121.4)fmol,P<0.05］。
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大鼠空肠黏膜上皮细胞酪酪肽受体的分布与特性
目的 检测正常大鼠空肠黏膜酪酪肽(PYY)受体的分布并测定反映酪酪肽受体特性的基本参数,初步阐明酪酪肽的作用位点和作用特点.方法 用125I标记酪酪肽并对其进行受体放射分析,测得酪酪肽受体的平衡解离常数,大结合容量及Hill系数.结果 正常大鼠空肠黏膜上皮细胞酪酪肽受体的平衡解离常数(Kd)为(386.69±129.95)pmol/L,大结合容量(Bmax)为(303.21±116.85)fmol/mg蛋白;Hill系数为1.酪酪肽受体为高亲和力受体.结论 正常大鼠空肠黏膜上皮细胞有酪酪肽受体的分布,酪酪肽受体之间无正负协同效应;酪酪肽受体对PYY具有高亲和性;可能有PYY直接与空肠黏膜上皮酪酪肽受体结合而直接抑制空肠黏膜的分泌.
