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胆囊胆固醇结石仓鼠胆囊平滑肌及Oddi括约肌中Caveolins、P450arom及黏蛋白的表达研究
目的 探讨胆囊胆固醇结石仓鼠胆囊平滑肌及Oddi括约肌中Caveolins、P450arom及黏蛋白的表达情况.方法 将100只仓鼠随机分为A组(常规饮食组)20只、B组(致石饮食2周组)20只、C组(致石饮食4周组)20只、D组(致石饮食6周组)20只和E组(致石饮食8周组)20只,检测5组仓鼠的胆囊平滑肌及Oddi括约肌Caveolin1、Caveolin3、P450arom及黏蛋白1、黏蛋白2、黏蛋白3的阳性表达率并进行比较.结果 E组胆囊平滑肌及Oddi括约肌中Caveolin1、Caveolin3、P450arom及黏蛋白1、黏蛋白2的阳性表达率均高于其他4组,D组高于A、B、C组,C组高于A、B组,差异均有统计学意义(P＜0.05).E组胆囊平滑肌及Oddi括约肌中黏蛋白3阳性表达率低于其他4组,D组低于A、B、C组,C组低于A、B组,差异均有统计学意义(P＜0.05).上述指标均与胆囊胆固醇结石有明显的相关性(均P＜0.05).结论 胆囊胆固醇结石仓鼠胆囊平滑肌及Oddi括约肌中Caveolins、P450arom及黏蛋白的表达呈现异常,对了解胆囊胆固醇结石的形成有一定意义.
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巴豆对豚鼠离体胆囊肌条收缩活动影响的实验研究
目的:观察巴豆水煎剂对胆囊平滑肌运动的影响并探讨可能的作用机理.方法:将肌条置于离体平滑肌灌注肌槽内,用生理记录仪记录肌条的收缩活动.结果:(1)巴豆剂量依赖性增高胆囊肌条张力,加快收缩频率,减小收缩波平均振幅.(2)苯海拉明、六烃季铵、消炎痛、酚妥拉明可部分阻断巴豆对胆囊肌条的作用.结论:巴豆对豚鼠胆囊肌条的作用与组胺H1受体、胆碱能N受体、前列腺素合成酶、肾上腺素能α受体有关.
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溪黄草与虎杖对豚鼠离体胆囊肌条运动的实验研究
目的:观察溪黄草与虎杖水煎剂对豚鼠离体胆囊肌条平滑肌运动的影响,并探讨其作用机理.方法:将胆囊肌条置于离体平滑肌肌槽内,用生理记录仪记录肌条的收缩活动.结果:溪黄草水煎剂、虎杖水煎剂可提高豚鼠胆囊肌条的张力,加快收缩频率及减少收缩波平均振幅;阿托品、异搏定可阻断溪黄草对胆囊肌条的作用;酚妥拉明、异搏定可阻断虎杖对胆囊肌条的作用.结论:溪黄草对胆囊肌条的作用与M受体、Ca2+有关;虎杖对胆囊肌条的作用与α受体、Ca2+有关.
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甘肃金银花对实验动物胆汁分泌及胆囊平滑肌的影响
目的:比较甘肃金银花与正品金银花对大鼠胆汁分泌及胆囊平滑肌收缩的影响,为甘肃金银花的临床应用提供实验依据.方法:40只大鼠随机分为空白组、甘肃金银花高、低浓度组、正品金银花高、低浓度组,采用在体胆汁引流法,观察分别单次给予不同浓度甘肃金银花、正品金银花水提液对大鼠胆汁分泌的影响;40只豚鼠同样分5组,采用离体试验法观察不同浓度甘肃金银花、正品金银花水提液对豚鼠胆囊平滑肌条的直接作用.结果:甘肃金银花和正品金银花水提液0.5g/mL、0.125g/mL能使大鼠给药后 30~90min 时段胆汁分泌增加,能使豚鼠离体胆囊平滑肌肌条张力增高、收缩频率加快、收缩幅度增强,与空白对照组比较均有统计学意义(P<0.05),但甘肃金银花和正品金银花各浓度组之间无显著性差异.结论:甘肃金银花和正品金银花水提液均能促进胆汁的分泌,增强胆囊平滑肌的收缩,即甘肃金银花在治疗消化不良、腹胀、胆囊炎、胆囊收缩功能不良等肝胆疾病方面与正品金银花具有相同的药用价值,可作为替代品使用.
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高胆固醇饮食对胃肠移行性复合运动及胃肠激素影响的实验研究
胆固醇结石形成的因素包括:饮食因素、代谢障碍、运动障碍(胆囊平滑肌收缩能力减弱、胆汁淤积、肠道转运减慢)及反常的遗传背景.小肠运动障碍对胆固醇结石形成的影响作用日益受到重视.
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舒胆通颗粒对实验动物胆汁分泌及胆囊平滑肌的影响
目的 观察舒胆通(SDT)颗粒对大鼠胆汁分泌及胆囊平滑肌的影响.方法 采用在体胆汁引流法,观察单次给予SDT对大鼠胆汁分泌以及总胆红素(TB)的影响;采用离体试验法观察SDT对豚鼠胆囊平滑肌条的直接作用及其对阿托品、酚妥拉明、苯海拉明、雷尼替丁的拮抗作用.结果 SDT 5,10,20g·kg-1剂量能使大鼠给药后30～90min时段胆汁分泌增加,但胆汁中TB水平无明显改变;终浓度为2.5×10-4,5×10-4,1×10-3mg·mL-1的SDT能使离体豚鼠胆囊肌条张力增高、收缩频率加快、收缩幅度增加,并呈现明显的量效关系,其兴奋作用可被阿托品完全阻断,也可被酚妥拉明部分阻断,但不能被苯海拉明、雷尼替丁所阻断.结论 SDT能增强胆囊平滑肌的兴奋性,促进胆汁分泌;其利胆作用可能主要经由胆碱能M受体介导,部分经由肾上腺素能α受体介导、而与组胺H1受体、前列腺素受体等途径无关.
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大黄素对豚鼠胆囊平滑肌L型钙电流的调节
目的 研究大黄素对豚鼠胆囊肌条收缩及L型钙电流的调节.方法 取成年豚鼠,分离胆囊肌条,使用张力传感器记录胆囊肌条的收缩活动.采用酶消化法急性分离豚鼠胆囊平滑肌细胞,使用全细胞膜片钳技术记录L型钙电流.结果 预先加入硝苯地平,大黄素对胆囊肌条的收缩效应明显减弱.大黄素增加胆囊平滑肌细胞L型钙电流,呈浓度依赖性.与正常对照组相比,10 μmol·L-1大黄素明显增强+10 mV时L型钙电流幅度的(45.2±2.26)% (P<0.05). 预先加入PKC抑制剂十字孢碱,大黄素对钙电流的调节基本被抑制.结论 大黄素可通过PKC途径增强胆囊平滑肌L型钙电流,从而促进胆囊平滑肌收缩.
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补骨脂对大鼠胆汁分泌和豚鼠胆囊平滑肌收缩力的影响
目的 研究补骨脂生药粉对大鼠胆汁分泌和豚鼠胆囊平滑肌收缩力的影响.方法 大鼠连续灌胃给予补骨脂生药粉(2.1g·kg-1)30天,同时设时照组.束次给药后用水合氯醛麻醉动物,进行胆总管插管,收集胆汁,比较补骨脂组与对照组在同时间点胆汁量和总胆汁量的差异.脬鼠禁食24小时后击头致毙,迅速取出胆囊,制成平滑肌条,观察不同浓度补骨脂液对平滑肌收缩力的影响.结果 朴骨脂2.1g·kg-1组大鼠胆汁分泌量与对照组之间无显著差异,补骨脂4.8g·L-1、2.4g·L-1、1.2g·L-1能显著增高豚鼠离体胆囊平滑肌条张力,与剂量呈现一定的正相关性.结论 补骨脂对大鼠胆汁分泌没有显著影响,但是可以促进豚鼠胆囊平滑肌的收缩.
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急性胆道梗阻及去除梗阻对胆囊Cajal间质细胞及平滑肌收缩的影响
目的 观察急性胆道及解除梗阻对豚鼠胆囊鼠胆囊平滑肌的收缩、Cajal间质细胞(ICC)的影响.方法 将雄性豚鼠随机分为假手术对照组( Sham)、胆总管结扎2 d(BDL)和胆总管结扎2d后去结扎2 d(DBDL)3组.苏木素-伊红(HE)染色观察各组胆囊组织炎症,亚甲蓝染色在活组织中观察胆囊ICC的网络结构,c-kit免疫荧光染色观察胆囊ICC数目的改变,张力换能器记录豚鼠离体胆囊平滑肌的张力.结果 HE染色结果可见,Sham组豚鼠胆囊未见明显炎症改变(Sham 2d及4d炎症评分分别为0.40 ±0.04、0.43±0.06),BDL组炎症改变明显(1.68±0.17),而DBDL炎症(0.88±0.0.08)较BDL组轻.亚甲蓝特异性染色后,NC、BDL及DBDL3组豚鼠胆囊ICC网络状结构均存在,差异无统计学意义(P＞0.05)；同NC组比较,BDL及DBDL两组胆囊c-kit免疫阳性细胞均减少；但是,去结扎后,胆囊c-kit免疫阳性细胞有所恢复.Sham、BDL、DBDL豚鼠胆囊平滑肌对1×10-8 mol/L 8肽胆囊收缩素(CCK-8)的效应值分别为(1.675±0.233)、(1.301±0.229)、(1.402±0.234)g,对1×10-6mol/L乙酰胆碱(Ach)的效应值分别为(3.085±0.272)、(2.364±0.238)、(2.612 ±0.278)g.3组豚鼠离体胆囊平滑肌肌条对CCK及Ach的效应均增强,呈浓度依赖性；BDL和DBDL两组振幅效应值同NC组比较小,起作用时间较慢(P＜0.05).结论 急性胆道梗阻导致胆囊收缩功能障碍,ICC的数目减少可能是其中因素之一.
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胆石病胆囊缩胆囊素受体及其基因表达的研究
胆囊缩胆囊素受体(CCK-1R)异常在胆固醇结石胆囊收缩功能损害中起重要作用.本研究采用受体放射配基结合法检测胆囊CCK-1R的大结合容量(Bmax) 和平衡解离常数(Kd),同时采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定CCK-1R mRNA在胆囊平滑肌中的表达,旨在探讨胆汁胆固醇对胆囊CCK-1R功能及其基因表达的影响和作用机制.
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高胆固醇抑制孕酮下调豚鼠胆囊平滑肌Gαi3蛋白的表达
目的:探讨孕酮在高胆固醇环境下对胆囊平滑肌Gαi3蛋白表达的影响.方法:28只雄性豚鼠按处理因素随机分为正常饮食+生理盐水注射组(NC组)、正常饮食+孕酮注射组(P4组)、高胆固醇饮食+生理盐水注射组(Ch组)和高胆固醇饮食+孕酮注射组(Ch+P4组),每组7只.测量禁食状态下胆囊胆汁量(FB),全自动生化仪测定胆汁中胆固醇(TC)含量,用Western blotting法检测胆囊平滑肌组织的Gαi3蛋白的表达变化.结果:①Ch组、Ch+P4组TC含量高于NC组、P4组(P＜0.05);Ch组和Ch+ P4组间、NC组和P4组间无明显差异(P＞0.05).②P4组、Ch组的FB明显多于NC组(P＜0.05),Ch+P4组的FB与P4组、Ch组相比无显著差异(P＞0.05).③P4组的Gαi3蛋白表达量明显低于NC组(P＜0.001),Ch+P4组的Gαi3蛋白表达量低于Ch组而高于P4组(P＜0.05),NC组、Ch组间的Gαi3蛋白表达量无明显差异(P＞0.05).结论:孕酮可以明显降低胆囊平滑肌中的Gαi3蛋白表达量,其下调Gαi3蛋白表达的效应可部分被胆固醇阻断,表明孕酮可通过下调收缩功能性Gαi3蛋白损伤胆囊运动,但在胆汁富含胆固醇环境下其作用可能会被削弱.
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山苦茶提取物对豚鼠离体胆囊肌条的作用及其机制
目的研究山苦茶提取物对豚鼠离体胆囊肌条的作用及作用机制.方法将肌条置于恒温浴槽,以BL-410生物功能实验系统记录肌条张力变化.结果山苦茶提取物对离体胆囊肌条具有剂量依赖的收缩作用,大效应为乙酰胆碱(10 μmo·L-1)的76%±8%,EC50为0.14～0.30 mg·mL-1(n=8),阻滞药吲哚美辛和维拉帕米显著降低其缩胆囊作用.结论山苦茶提取物可通过增加前列腺素的释放以及直接作用于钙通道对豚鼠离体胆囊产生收缩作用.
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高胆固醇饮食致石大鼠胆囊黏膜和平滑肌囊性纤维化跨膜传导因子蛋白表达的改变
目的 观察胆固醇结石形成过程中胆囊黏膜和平滑肌囊性纤维化跨膜传导因子(CFTR)蛋白表达的改变,探讨CFTR蛋白在胆固醇结石形成过程中的作用.方法 28只雄性豚鼠随机分为正常饮食30 d组(A组,n=7)、正常饮食60 d组(B组,n=7)和高胆固醇饮食30 d组(C组,n=7)、高胆固醇饮食60 d组(D组,n=7).A、B组给予正常饮食喂养,C、D组给予2％的高胆固醇饲料喂养.实验动物剖腹后,测量胆囊大长径(L)和相互垂直的两横径(W,H),以Dodds公式V=0.52 × L × W × H(cm3)计算空腹胆囊体积(FV),穿刺抽吸胆囊内全部胆汁,测量空腹胆囊胆汁量(FB),并留取部分胆囊胆汁测定胆汁中胆固醇(TC)含量.切开胆囊,观察豚鼠胆囊的结石形成情况,于胆囊体部切取适量胆囊组织,用免疫组化S-P法和免疫荧光法检测胆囊组织CFTR氯通道的表达,用Western blot法检测胆囊组织CFTR的表达变化.结果 A、B组豚鼠无胆囊结石或胆泥形成,C组有2只豚鼠观察到有胆泥或胆囊结石形成,D组有4只豚鼠观察到有胆泥或胆囊结石形成.C组FV、FB、TC均高于A组;D组FV、FB、TC均高于B组;D组FV、FB、TC均高于C组,差异有统计学意义(P＜0.05).C组CFTR蛋白的表达量低于A组;D组CFTR蛋白的表达量低于B组;D组CFTR蛋白的表达量低于C组,差异有统计学意义(P＜0.05).CFTR蛋白表达于胆囊黏膜及平滑肌,黏膜上皮细胞顶膜表达多;阳性表达率正常组高于胆固醇组,并随致石时间的延长而降低.结论 高胆固醇饮食致石过程中胆囊黏膜及平滑肌CFTR的表达量降低,CFTR可能通过影响胆囊黏膜分泌、吸收及平滑肌运动而参与了胆囊结石的形成过程.
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柴胡与苦豆子对豚鼠离体胆囊肌条收缩活动影响的实验研究
目的:观察不同浓度的柴胡水煎剂、苦豆子水煎剂对胆囊平滑肌运动的影响并初步探讨其作用机理.方法:将肌条置于离体平滑肌灌流肌槽内,用生理记录仪记录肌条的收缩活动.结果:柴胡水煎剂、苦豆子水煎剂可增高豚鼠胆囊肌条的张力,加快收缩频率及减少收缩波平均振幅;阿托品可部分阻断柴胡对胆囊肌条的作用;酚妥拉明、异搏定可部分阻断苦豆子对胆囊肌条的作用.结论:柴胡对胆囊肌条的作用与M受体有关;苦豆子对胆囊肌条的作用与α受体、Ca2+有关.
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黄体酮、雌二醇对豚鼠离体胆囊肌条收缩的活动影响
目的:观察不同阻断剂对黄体酮、雌二醇效应的影响.方法:将豚鼠胆囊制备成平滑肌条标本,固定在浴槽中,连接张力换能器.用8个灌流肌槽同时记录胆囊肌条的自发收缩.结果:黄体酮和雌二醇均抑制胆囊肌条的收缩活动;雷尼替丁可阻断雌二醇对豚鼠胆囊肌条的抑制作用,而六烃季胺、消炎痛、心得安和L-NNA无此作用;实验中所用的阻断剂均未阻断黄体酮对豚鼠胆囊肌条的抑制作用.结论:雌二醇对胆囊肌条的抑制作用可被雷尼替丁阻断.黄体酮对胆囊肌条的作用可能是直接作用于平滑肌.
