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人脂联素基因启动子荧光素酶报告基因载体的构建
目的:克隆不同长度人脂联素基因(AD)启动子片段,构建含人AD启动子片段的荧光素酶报告基因载体并进行测序鉴定.方法:利用PCR技术从人全血基因组DNA中扩增出AD启动子片段,经纯化酶切后克隆入载体pGL-3 basic中,形成重组质粒,筛选阳性克隆进行测序,并与GenBank比对.结果:从人全血基因组DNA中PCR扩增得到1.1 kb和2.1 kb AD启动子片段,构建2种报告基因载体,将其命名为AD promoter1.1-pGL-3 basic和AD promoter2.1-pGL-3 basic,经测序证实所插入的目的片段与GenBank检索的人AD启动子序列99.6％匹配.结论:成功构建了含人AD启动子片段的报告基因载体.
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连接酶反应技术检测冠心病三个相关基因的单核苷酸多态性
目的 利用聚合酶链反应-连接酶反应(polymorphism chain reaction-ligase detection reaction,PCR-LDR)技术检测瘦素受体基因Lys109Arg (A/G)、Gln223Arg (A/G),脂联素基因G276T、T45G,护骨素基因T950C、G1181C六个多态性位点的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP).方法 参照待测多态性位点所在DNA序列设计并合成一对引物及3条探针,先通过PCR反应获得含有待检测突变位点的基因片段,再进行LDR,根据测序电泳结果所显示的含荧光标记的LDR产物的片段长度来判断基因型别.结果 采用PCR技术成功扩增出包含瘦素受体基因(110 bp,130 bp)、脂联素基因(400 bp)、护骨素基因(118 bp,163 bp)多态性位点的基因片段.根据LDR产物片段长度不同进行基因分型,纯合子只有一种片段长度,杂合子包含两种纯合子的片段长度,如瘦素受体基因SNP Lys109Arg (A/G)的PCR产物长度为110 bp,LDR产物片段的长度为110 bp时则判断为AA基因型,112 bp则判断为GG基因型,AG基因型则具有110 bp、112 bp两种片段长度.PCR-LDR基因分型结果与DNA测序技术的检测结果一致(Kappa=1,P=0.00).结论 PCR-LDR技术简单、快速、准确、成本低,适用于大批量SNP检测.
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脂联素相关研究进展
一、脂联素的结构及受体1.脂联素基因学和蛋白质结构:人类脂联素基因的编码基因为apM1,位于染色体3q27上,由3个外显子和2个内含子组成.人类脂联素的蛋白质结构含有244个氨基酸,包括N-端信号肽、C端芳香族氨基酸球状序列、N端特异的非胶原序列,其后紧接着一段类似胶原的G-X-Y3氨基酸重复序列[1].经过翻译加工修饰可以生成8种同源蛋白.其中C端芳香族氨基酸球状序列是脂联素蛋白活性的关键部位,这一结构域与胶原Ⅷ、X、补体c1q和TNF-α家族具有结构上的同源性[2].
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中国人脂联素基因rs2241766单核苷酸多态性与高血压相关性研究的Meta分析
目的:探讨中国人脂联素基因(ADIP0Q) rs2241766单核苷酸多态性与高血压的相关性.方法:通过文献检索收集2016年4月以前完成或公开发表的,脂联素基因rs2241766单核苷酸多态性与高血压相关性的病例对照研究,剔除不符合要求的文献,以漏斗图检验入选文献的偏倚性,并根据各入选文献结果的同质性检验结果进行数据合并,计算总比值比,Meta分析采用Review Manager 5.3版软件.结果:总共有8篇文献纳入本次研究,其中有1 907例高血压患者和2 263例正常对照组.Meta分析结果显示:脂联素基因rs2241766等位基因模型(G VS T)合并后的总[OR=1.13,95％ CI:1.03,1.24];共显性模型(GG VS TT)合并后的总[OR=1.33,95％ CI:1.08,1.65].结论:中国人脂联素基因rs2241766单核苷酸多态性可增加患高血压的风险.
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人脂联素、球状脂联蛋白基因克隆及真核表达载体的构建与表达
目的 构建高效表达球状脂联蛋白的真核表达载体,为研究脂联素、球状脂联蛋白在2型糖尿病及动脉粥样硬化中的作用奠定基础.方法 克隆人脂联素基因,构建球状脂联蛋白基因的真核表达载体,转染人脐静脉内皮细胞株(HUVEC),Western blot检测上清中球状脂联蛋白的表达.结果 测序结果表明克隆的人脂联素基因序列正确;构建的球状脂联蛋白基因真核表达载体能有效转染HUVEC,并在上清中检测到该基因的表达.结论 完成人脂联素基因克隆,成功构建了人球状脂联蛋白基因真核表达载体,并在HUVEC中获得分泌表达,为研究球状脂联蛋白对2型糖尿病的干预作用提供了可能.
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中国汉族人群2型糖尿病与脂联素基因SNP-11377位点相关性的Meta分析
目的 评价脂联素基因SNP-11377位点与T2DM的相关性.方法 采用Meta分析评估SNP-11377位点与T2DM的相关性.异质性检验后采用M-H固定效应模型合并比值比(OR)值,并进行发表偏倚检验.结果 (1)共纳入10篇文献,其中病例组2831例、对照组3035例.(2)异质性检验显示,脂联素基因SNP-11377在各研究间是同质(I2=11.2％,P＞0.05),各研究之间不存在异质性.(3)M-H固定效应模型进行数据合并,结果显示合并OR为1.09(95％CI为1.00～1.18,P=0.05).(4)Begg和Egger偏倚分析均显示无明显发表偏倚.结论 脂联素基因SNP-11377 G等位基因可能与中国汉族人群T2DM的发病风险相关.
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脂联素基因SNP276多态性与冠心病及胰岛素敏感性的相关性
目的:观察中国人脂联素基因(apM1)与冠心病(CHD)及胰岛素敏感性的关系.方法:对照组136例,冠心病患者281例,又分为单纯CHD患者131例,合并2型糖尿病患者150例,均为无亲缘关系的安徽地区汉族人.用稳态模式胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)估测胰岛β细胞胰岛素分泌功能及外周组织胰岛素敏感性.采用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)方法初筛apM1基因后,进行DNA直接测序.结果:apM1基因SNP276基因型GG+GT与TT型相比患CHD的风险增加,风险比值(OR)=2.976,95%可信限1.135～7.804,P=0.027,在固定性别、年龄及体重指数后,偏相关分析表明,GG+GT基因型与HOMA-IR 显著正相关(r=0.174,P=0.005).对照组中GG型或GT型与TT型比较,GG型或GT型的体重指数、腰臀比、体脂百分比、收缩压、空腹胰岛素及HOMA-IR均高于TT型(P<0.05,0.01或0.001),同时,GG型的空腹血糖亦显著升高(P<0.05).结论:apM1基因SNP276多态性与冠心病及胰岛素敏感性具有相关性.
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脂联素基因多态性与2型糖尿病
脂联素是新近发现的脂肪细胞特异性细胞因子,在机体糖和脂肪代谢,维持能量平衡过程中发挥重要作用,并具有抗炎、抗动脉粥样硬化以及增强胰岛素敏感性的作用.有多项研究提示,脂联素基因单核苷酸多态性可能影响血清脂联素水平,从而与2型糖尿病,胰岛素抵抗及血脂水平相关联,现将此方面的研究现状作一综述.
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黄连素对2型糖尿病大鼠脂联素基因表达的影响
目的 观察黄连素对高脂膳食加小剂量链脲佐菌素(STZ)诱导的2型糖尿病(2-DM)大鼠胰岛素抵抗指教及肾周脂肪组织脂联素基因mRNA表达的影响.方法 选用高脂饲料加小剂量STZ建立2-DM大鼠模型共40只,将2-DM大鼠随机分为模型组(水)和黄连素高、中、低剂量组(0.20、0.10、0.05 g/kg),每组10只.另选10只大鼠为正常组,各组灌胃8周后,空腹取材,采用逆转录聚合酶链式反应检测肾周白色脂肪组织脂联素基园mRNA水平,放射免疫法测定空腹胰岛素并计算胰岛素抵抗指数(IRI).结果 正常对照组大鼠与2型糖尿病模型组大鼠脂联素基园表达、IRI间比较差异有统计学意义(P<0.01);模型组与黄连素高、中剂量组大鼠脂联素基因表达、IRI间差异有统计学意义(P<0.01).结论 黄连素可增加2-DM大鼠脂联素基因mRNA的表达,降低IRI.
关键词： 黄连素 2型糖尿病 逆转录-聚合酶链反应 脂联素基因 -
脂联素基因SNP276多态性与2型糖尿病的关系
目的 研究脂联素基因276位点单核苷酸多态性(SNP)与山西地区汉族人2型糖尿病的关系.方法 选取210名无亲缘关系的山西地区汉族人,其中正常对照组76名,2型糖尿病组134例,用聚合酶链反应-限制性内切酶长度多态性(PCR-RFLP)技术对SNP276多态性位点进行基因分型.结果 SNP276基因型及等位基因频率在正常对照组和2型糖尿病组之间分布差异有统计学意义(P＜0.05),2型糖尿病组G等位基因频率显著高于正常对照组(P＜0.01).与TT型相比,携带GG+GT型者患2型糖尿病的危险因素增加.结论 脂联素276位点的基因多态性与中国山西汉族人群2型糖尿病相关.G等位基因是胰岛素抵抗、2型糖尿病的危险因素.
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脂联素基因多态性与2型糖尿病及胰岛素抵抗相关因素研究
目的：研究脂联素基因单核苷酸多态性(SNP 45,SNP 276)与2型糖尿病的关系。方法：用聚合酶链反应-限制性片段长度多态法(PCR-RFLP),检测正常对照者和2型糖尿病病人SNP 45,SNP 276多态性,比较其基因型及等位基因频率,并测定分析其相关生化指标及胰岛素抵抗指数的关系。结果：脂联素基因SNP 45在2型糖尿病病人组突变纯合子G/G基因型频率高于正常对照组,正常人SNP 45和甘油三脂有关,突变杂合子T/G基因型者比未突变野生T/T基因型者有较高的甘油三脂。脂联素基因SNP 276和2型糖尿病、胰岛素抵抗相关因素、HOMEIR指数无关。结论：脂联素基因SNP 45和2型糖尿病、甘油三脂有关,SNP 276与2型糖尿病及胰岛素抵抗相关因素、胰岛素抵抗指数无关。
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中国人群2型糖尿病脂联素基因+45位点多态性的Meta分析
目的 综合评价中国人群脂联素基因+45位点多态性与2型糖尿病的关联性.方法以2型糖尿病组和健康对照组的脂联素基因型及等位基因型频数分布的0R值为统计量,在基因分型水平上做meta分析.结果 脂联素基因SNP+45的GG基因型是中国人群2型糖尿病的危险基因型(OR=2.41,95%CI为1.63～3.55).结论 脂联素基因+45G为中国人群2型糖尿病的危险等位基因型,SNP+45GG基因型与2型糖尿病显著关联.
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脂联素基因多态性与肥胖、血清脂联素水平的相关性
目的:研究发现,脂肪组织分泌的脂联素在体脂变化,糖、脂代谢以及抗动脉粥样硬化中发挥有益的作用.分析脂联素基因(apM1)多态性与肥胖、血清脂联素水平的相关性.方法:⑴试验对象:选取2000-08/2003-07在上海市华阳社区肥胖流行病学调查所诊断的超重/肥胖人群以及上海市第六人民医院门诊就诊的390名患者.男171例,女219例,平均年龄(51±1)岁.纳入标准:①符合世界卫生组织(WHO)肥胖诊断标准.②所有纳入对象均为汉族人.③对试验目的知情同意.⑵试验方法及评估:根据世界卫生组织(WHO)肥胖诊断标准将受试对象分为正常体质量组(体质量指数＜ 25 kg/m2)182例和超重/肥胖组(≥25 kg/m2)208例.进一步根据腹腔内脂肪面积将超重/肥胖组分为腹内型肥胖(腹腔内脂肪面积≥100 cm2)114例和非腹内型肥胖(腹腔内脂肪面积＜100 cm2)94例.采用多聚酶链反应-限制性片段长度多态性方法检测apM1基因第二外显子+45(Exon2+45)和第三外显子+331(Exon3+331)2个位点的基因多态性.应用核磁共振测定局部体脂,放射免疫分析法测定空腹血清脂联素水平.试验对数据先进行正态分布检验,如果符合正态分布,两组间计量资料的比较采用t检验,多组间比较用F检验.计算基因多态性的基因型频率,确认符合Hardy-Weinberg平衡,计算等位基因频率,基因型分布作Hardy-Weinberg吻合度检验.等位基因频率和基因型频率的比较采用χ2检验.结果:正常对照组182例和超重/肥胖组208例均进入结果分析.①中国汉族人apM1基因Exon2+45位点存在基因多态性,有3种基因型,即TT,TG,GG;Exon3+331位点不存在基因多态性,均为TT基因型.②apM1基因Exon2+45位点基因型及等位基因频率在超重/肥胖者与正常体质量者之间无显著差异;在腹内型肥胖与非腹内型肥胖者间亦无显著差异.③apM1基因Exon2+45位点各基因型组间血清脂联素水平无显著差异.结论:中国汉族人脂联素基因Exon2+45位点的多态性与肥胖以及肥胖类型、血清脂联素水平无相关性;Exon3+331位点不存在基因多态性.
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脂联素与糖尿病及其临床问题
代谢综合征与肥胖及胰岛系抵抗有关.成人肥胖的特征是脂肪细胞体积增大,而脂肪组织分泌一些有生物活性的脂肪激素参与机体内能量平衡的调节.在转脂联素基因或脂联素基因剔除小鼠中功能分析中发现,脂联素是一个有胰岛素增敏作用的脂肪激素.事实上,肥胖对脂联素的降调节是肥胖导致胰岛素抵抗和糖尿病的一个机制.
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脂联素基因SNP 276多态性与2型糖尿病及大血管病变的关系
糖尿病严重危害人类健康,其发病率逐年上升,目前已经成为继肿瘤、心脑血管疾病之后第3位严重危害人类健康的慢性疾病,其中90%～95%是2型糖尿病患者.2型糖尿病的重要发病机制之一是胰岛素抵抗.脂联素是新近发现的由成熟脂肪细胞分泌的一种脂肪细胞因子,具有降糖、增加胰岛素敏感性、抗炎、抗动脉粥样硬化等多种作用.
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汉族人群脂联素基因+45T/G多态性与子痫前期的关系
目的 探讨汉族人群脂联素(APN)基因启动子区+45T/G单核苷酸多态性(SNP)与子痫前期及脂联素水平的关系.方法 选择2011年1～9月在中国人民解放军第202医院定期产前检查并住院诊治的汉族孕妇259例,包括子痫前期组孕妇127例及正常妊娠对照组孕妇132例.采用基因测序法检测这两组孕妇脂联素基因单核苷酸多态性并进行序列分析,并采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定其血浆脂联素水平.结果 (1)与正常妊娠对照组相比,GG+ TG基因型分布频率在子痫前期组明显升高(x2=10.8,P＜0.05,OR=2.29,95％CI 1.39～3.75),G等位基因分布频率在子痫前期组明显高于正常妊娠对照组(x2=11.2,P＜0.05,OR=1.91,95％ CI 1.31～2.79).(2)血浆脂联素水平在正常妊娠对照组TT与TG+ GG基因型间比较差异无统计学意义(P＞0.05)；在子痫前期病例组,GG +TG基因型患者血浆脂联素水平明显低于TT基因型者,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 汉族子痫前期孕妇存在脂联素基因启动子区+ 45 T/G多态性,T→G突变可能通过影响脂联素代谢参与子痫前期的发病.
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脂联素基因多态性与新疆地区哈萨克族2型糖尿病的相关性研究
目的 研究脂联素基因(APM-1)45T/G单核苷酸多态性(SNPs)与新疆地区哈萨克族人2型糖尿病(T2DM)的相关性.方法 采用病例一对照研究方法,应用聚合酶链反应一限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,比较新疆地区哈萨克族人正常糖耐量组(NGT)和T2DM组APM-1 SNP45基因型与等位基因分布频率差异；比较不同基因型血清APM-1水平以及NGT组不同基因型体测与生化指标的差异.结果 NGT组与T2DM组相比较,APM-1 SNP45位点基因型与等位基因频率以及血清APM-1水平差异均无统计学意义(P＞0.05)；NGT组TG+GG基因型者体质指数(BMI)、腰围(WAIST)、腰臀比(WHR)及血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(CH)和低密度脂蛋白(LDL)水平显著高于TT基因型者(P＜0.05),高密度脂蛋白(HDL)水平显著低于TT基因型者(P＜0.01).结论 APM-1 SNP45T/G多态位点可能与新疆地区哈萨克族T2DM无相关性.
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海南地区APM-1基因多态性与脑梗死患者血清脂联素水平的相关性
目的 探讨中国海南地区汉族人群APM-1基因多态性与脑梗死(ACI)患者血清脂联素水平的关系.方法 利用PCR-RFLP与测序检测APM-1中45T/G与276G/T的基因型在120例脑梗死患者及120例正常健康人中的分布,同时检测各基因型与血清脂联素的关系.结果 在ACI组的APM-1 SNP45的T/T、G/T及G/G 3种基因型中,脂联素的血清水平分别为(3.92±1.2) μg/ml、(4.07±1.5)μg/ml及(3.99±1.4)μg/ml,t=0.287,P=0.593,而在ACI组的APM-1 SNP276的T/T、G/T及G/G 3种基因型中,脂联素的血清水平分别为(4.07±1.6)μg/ml、(4.01±1.4) μg/ml及(3.38±0.7)μg/ml,G/G基因型与T/T基因型比较差异显著(t=29.53,P＜0.001).结论 海南地区汉族人群ACI患者血清脂联素水平明显降低,ACI患者APM-1 SNP276位点多态性与血清脂联素水平有关,G/G基因型个体的血清脂联素水平较低,携带APM-1 SNP276 G/G基因型可能增加ACI患病的风险.
关键词： 动脉粥样硬化性脑梗死 脂联素基因 基因多态性 -
出血性脑卒中与APM-1基因45 T/G和276 G/T多态性的关系
目的 探讨脂联素基因多态性与中国海南地区的出血性脑卒中的关系.方法 利用PCR-RFLP与测序检测APM-1中45T/G与276G/T的基因型及等位基因在120例出血性脑卒中患者及120例正常健康人中的分布特征.结果 SNP276位点的3种基因型的分布情况为脑出血组是G/G为60例；G/T 41例；T/T 19例,对照组中G/G为72例；G/T为40例；T/T为8例.而等位基因的分布在脑出血组为G等位基因是161例；T等位基因为79例,对照组G等位基因为184例；T等位基因为56例.两组的基因多态性位点上的T/T基因型与等位基因T出现的频率分布有显著性差异,有统计学意义,P＜0.05.而SNP45位点T/G基因型则无统计学差异.结论 APM-1基因的SNP276 G/T位点的TT基因型及等位基因T的变异可能是脑出血的易感因素.
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脂联素基因SNP45 T/G多态性与2型糖尿病相关性研究
目的:探讨脂联素基因(APM1)SNP45 T/G多态性与湖北汉族人群2型糖尿病的相关性.方法:采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)方法分析了479例样本的APM1基因SNP45T/G多态性,并测定身高、体重、腰围、臀围、血压和空腹血糖等生理指标.结果:两种实验设计中对照组与病例组基因型和等位基因频率差异均无统计学意义.结论:脂联素基因SNP45T/G多态性在湖北汉族人群2型糖尿病的发生发展中可能不起主要作用.
