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转sck基因水稻中CpTI蛋白的细胞内定位
目的 转sck基因水稻中CpTI蛋白细胞内定位.方法 运用免疫组织化学方法,应用免疫电镜技术,观察在转sck基因水稻根部细胞、叶片细胞中CpTI蛋白的定位情况.结果 在转sck基因水稻根尖部细胞的内质网中和内质网附近有胶体金颗粒大量存在,细胞的质体、叶绿体、细胞质、细胞核中也散在一些胶体金颗粒,在对照水稻的根部内质网和其他部位未发现胶体金颗粒存在.水稻叶片细胞由于有叶泡的存在,内质网不明显,但是细胞核、细胞质和质体内也发现胶体金颗粒,在非转基因水稻的叶片中未发现胶体金颗粒.结论 转sck基因水稻中的CpTI蛋白在内质网中大量存在,在细胞的质体、叶绿体、细胞质、细胞核中也存在少量CpTI蛋白.
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人腺病毒41型纤维丝状包涵体免疫电镜研究
为明确人腺病毒41型(Adenovirus type 41,Ad41)形态发生过程中形成的纤维丝状包涵体(Fibrillous inclusion body,FIB)是否含有Ad41的长纤维(Long fiber,LF)蛋白与短纤维(Short fiber,SF)蛋白.我们分别原核表达和纯化Ad41 LF、SF的球部(Knob)蛋白,分别命名为LFK与SFK.以LFK和SFK分别免疫BALB/c小鼠,分别获得LFK抗血清和SFK抗血清.Western blot、间接免疫荧光和免疫负染结果表明,LFK抗血清和SFK抗血清分别与LF和SF结合,LFK抗血清和SFK抗血清之间无交叉反应,可以应用于免疫电镜标记.通过Ad41抗血清、腺病毒纤维单克隆抗体4D2、LFK抗血清与SFK抗血清分别对FIB进行免疫电镜胶体金标记,表明Ad41抗血清、腺病毒纤维单克隆抗体4D2、LFK抗血清与SFK抗血清均能标记FIB,说明FIB中含有Ad41长纤维蛋白和短纤维蛋白.
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戊型肝炎病毒分子生物学及疫苗研究进展
戊型肝炎病毒(hepatitis E virus, HEV)是一种经肠道传播的非甲-非乙型炎病毒(RT-NANBH),1983年Balagan等应用免疫电镜技术从一名志愿受试者粪便中观察到直径为27nm~30nm的病毒样颗粒,从而证实该病毒为一新型非甲-非乙型肝炎病毒。
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免疫电镜染色技术中存在的问题及对策
免疫电镜集电子显微技术与免疫细胞化学技术于一体,能显示抗原或抗体在细胞超微结构水平的位置,已成为当今生物医学领域的一项重要研究手段[1].由于免疫电镜制作过程长,操作程序烦锁,因此,要得到满意的免疫金染色切片,必须在关键环节上给予注意,本文就免疫电镜染色技术中的几个问题,与同道们探讨.
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颌面部福尔马林致痛大鼠远位触液神经元和三叉神经脊束核P物质的表达
目的:研究大鼠远位触液神经元(distal cerebrospinal fluid contacting neuron,dCSF-CN)是否参与颌面部炎性痛的痛觉调制过程.方法:利用颌面部福尔马林致痛模型,采用免疫组织化学双标及免疫电镜技术结合福尔马林行为学实验观察P物质(Substance P,SP)在dCSF-CN和三叉神经脊束核(spinal trigeminal nucleus,STN)的表达.SPF级雄性SD大鼠(体重290~310 g)12只随机分成两组(n=6).麻醉后用立体定位侧脑室注射30%CB-HRP 3μl逆行示踪标记dCSF-CN.48h后行颌面部福尔马林试验并观察行为学差异,福尔马林注射2h后灌注固定取材行组织学分析.结果:(1)dCSF-CN是脑干内的一类特别的神经元,其胞体位于室管膜内的脑实质、突起伸入脑室腔的脑脊液;(2)颌面部注射福尔马林诱导的急性炎性痛显著上调SP在dCSF-CN和STN的表达,并与其行为学表现相一致.结论:推测SP在dCSF-CN和STN的痛觉调制中扮演重要角色.
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米非司酮对早期妊娠妇女绒毛组织中波形蛋白基因表达的影响
波形蛋白是一种细胞骨架蛋白[1],它在维持细胞和细胞器的形态、参与细胞间的信号传导、基因表达和细胞分化发育等方面发挥重要作用[2,3].为了解波形蛋白在早期妊娠妇女绒毛组织中的表达情况及米非司酮对其表达的影响,我们采用间接免疫荧光法、免疫组化、胶体金标记、免疫电镜技术,结合Leica-Qwin计算机图像分析系统,定位和检测早期妊娠妇女绒毛组织中波形蛋白的表达情况,并比较米非司酮作用前后的变化,旨在探讨米非司酮抗早孕的机理.
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金标β一葡萄糖醛酸酶免疫电镜技术的建立及其在人肝细胞中的表达
我们应用低温包埋,胶体金标记,免疫电镜技术,对人体肝细胞中的β-葡萄糖醛酸酶(β-G)进行超微结构定位研究.
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中国电子显微学应用概况
1 中国电子显微学沿革20世纪30年代,德国的RUSKA第一次发现了电子显微镜,随后利用刚刚形成的电子显微镜技术第一次看到了烟草花叶病毒,随着电子显微镜技术的不断完善和发展,60年代中期,电子显微镜技术也传人中国,当人们满怀兴趣去揭示熟悉这项技术时,文化大革命暴发了,致使中国生物领域科学技术的发展停滞了十几年,电子显微镜也被封存了十几年.
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包埋前免疫金电镜标记的使用难点及解决方法
根据免疫标记与标本之间的不同关系,免疫电镜技术可分为包埋前、包埋后及冷冻超薄切片免疫电镜技术.本文仅介绍包埋前免疫金电镜标记在使用过程中的一些难点及解决方法.
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类天疱疮样扁平苔藓基底膜带自身抗体的靶抗原定位
类天疱疮样扁平苔藓(lichenplanuspemphigoides,LPP)是一种少见的自身免疫性大疱性皮肤病,它在临床表现、组织病理、免疫病理等方面兼有典型的扁平苔藓和大疱性类天疱疮的特点,但又不是二者的简单重叠.LPP患者血清中存在抗皮肤基底膜带的自身抗体(basalmembranezoneantibodies,BMZ)[1],我们采用免疫印迹(immunoblotting,IB)、间接免疫荧光(indirectimmunofluorescense,IIF)、包埋后金标记间接免疫电镜技术(indirectimmunogoldelectronmicroscopy,IIEM)等方法检测了2例LPP患者的BMZ-Ab,并对其靶抗原进行定位.
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我国甲型肝炎疫苗免疫的影响与思考
甲型肝炎是由HAV 感染引起的急性传染病。甲型肝炎是一种古老的疾病,曾被认为由飞沫传播。1923年Blumer总结分析了美国1812—1922年间的63次暴发报告,开始确认了人与人之间的密切接触是该病的主要传播方式。20世纪50年代至70年代初,Hollinger等[1-2]详细研究了MS-1肝炎病原体在成人志愿者中的表现,证明了甲型肝炎的粪-口传播途径。1973年,Feinstone与Kapikian运用免疫电镜技术在甲型肝炎暴发患者的粪便中首次发现了HAV颗粒[3-4]。1979年,Provost与Hilleman在体外细胞培养HAV成功,对HAV的研究与疫苗的研制具有决定性意义[1-2]。
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新发现的诺瓦克病毒性腹泻
20世纪70年代,电镜和免疫电镜技术的发展,使研究者先后发现诺瓦克病毒、轮状病毒、星状病毒和腺病毒等是引发胃肠炎的病因,从而认识到病毒在感染性腹泻中占有重要的位置[1].
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免疫电镜技术在肾活检中的应用
肾活检标本中,多数是免 疫复合物介导的肾小球肾炎,通过免疫病理学方法检测肾小球内的免疫沉积物的性质和分布 ,对于终的病理诊断至关重要.免疫电镜检查对肾小球炎的病理诊断虽然不是常规方法, 但为了精确分析沉积于肾小球的抗原抗体复合物,免疫电镜仍为行之有效的手段.本文探讨 了肾活检标本的低温包埋及常规树脂包埋的胶体金标记的透射电镜方法.
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大鼠延髓腹外侧A1/C1区儿茶酚胺能神经元的电镜观察—包埋前液氮冻融和Triton X-100组织处理方法的比较
目的:比较液氮冻融和Triton X-100不同方法对大鼠延髓腹外侧A1/C1区儿茶酚胺能神经元多巴胺β羟化酶(dopamine-β-hydroxylase,DβH)免疫反应(immunoreactive,ir)标记的影响.方法:实验分组包括:液氮冻融1次组、液氮冻融2次组、0.03% Triton X-100组、0.05% Triton X-100组.应用包埋前纳米金-银加强免疫电镜技术,标记延髓腹外侧A1/C1区DβH-ir神经元.结果:光镜下可观察到DβH-ir产物分布于胞体和突起,清晰标记A1/C1区神经元.不同组间DβH-ir神经元数量明显不同:冻融组数量少,突起少且细短;Triton X-100组数量明显增多,突起浓密且长,其中以0.05% Triton X-100组为明显,差异显著.电镜结果显示:DβH-ir金-银颗粒主要分布在神经元胞体、树突和轴突终末内,DβH-ir轴突终末与胞体或树突形成密切接触或非对称性突触.金颗粒标记的数量在Triton X-100组明显多于冻融组,这与光镜观察结果相一致.结论:包埋前免疫电镜技术中应用少量Triton X-100处理,可取代液氮冻融,能更好地增加胞膜的通透性,提高抗体的组织渗透能力和特异性标记,是一种较好的包埋前免疫电镜的处理方法.
关键词: 多巴胺β羟化酶 免疫电镜技术 液氮冻融 triton X-100 大鼠 -
一氧化氮合酶调节伤段脊髓血流量的作用及其机制
目的 探讨一氧化氮合酶(NOS)在脊髓损伤早期调节伤段脊髓血流量的作用及其机制. 方法 通过大鼠脊髓伤前30 min蛛网膜下腔注射NOS底物左旋精氨酸(L-Arg)及其不同剂量的抑制剂亚硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME),采用激光多普勒血流仪观测不同NOS活性状态对伤段脊髓血流量的影响;同时应用免疫组化和酶标免疫电镜技术,进一步研究NOS在脊髓组织中的分布规律及其调节血流量的超微结构特征. 结果 伤前注射L-Arg导致伤段脊髓伤后早期血流量明显改善;而注射不同剂量的抑制剂则导致剂量依赖性血流量降低.参与脊髓血流量调节的NOS主要是位于神经细胞胞浆内的Ⅰ型. 结论 NOS在脊髓损伤早期伤段脊髓血流量的调节中起着极其关键的作用;许多含有NOS的神经细胞和其突起与脊髓微血管毗邻的解剖学结构确保了半衰期极短的一氧化氮(NO)在其丧失活性之前作用于微血管,从而发挥其调节微循环的功能.
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免疫电镜技术运用过程中电子染色方法的选用
目的 探究免疫电镜不同染色方法对免疫组化阳性实验结果影响的关系.方法 组织切片经常规免疫组化(雌激素受体GPR30)并行DAB-硫酸镍铵显色后进行电镜切片,然后分为双氧铀-柠檬酸铅双染、双氧铀单染与未染色3组,以便对不同电子染色结果进行比较.结果 GPR30免疫阳性产物位于细胞核外的膜性结构上,在铀-铅双染组显示很高的电子密度,但是背景染色也很深,在铀单染组的反差比较好,而未染色组的反差更好.结论 免疫电镜技术中针对不同的免疫阳性反应选用不同的电子染色方法,有利于阳性结果的判断与鉴别.
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诺如病毒检测技术新进展
诺如病毒(Norovirus NoV)又称诺瓦克病毒(Norwalk-like viruses),属杯状病毒科诺如病毒属,是引起病毒性胃肠炎的重要病原体[1].NoV是美国学者Kapikian于1972年通过免疫电镜技术首先在发生于美国俄亥俄州诺瓦克镇暴发腹泻疫情患者粪便中发现的病毒颗粒[2].NoV为单股正链RNA病毒,是一组形态相似、抗原性略有不同的病毒颗粒.由于目前不能进行细胞培养和没有动物模型不能进行中和试验,NoV目前无法进行经典的血清分型[3-5].该组病毒极易变异,此后在其他地区又相继发现并命名了多种类似病毒,统称为诺如病毒.由于NoV遗传的高度变异,在同一时期和同一社区内可能存在遗传特性不同的毒株流行.NoV抗体没有显著的保护作用,尤其是没有长期免疫保护作用,极易造成反复感染[6].大多数感染者在1~3天后好转,但小孩、老人和低免疫力低下者可能导致严重脱水[7].