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我国镍毒理学研究进展
镍是工业、国防和人民日常生活中广泛应用的一种金属,也是人体必需的微量元素,但过量的镍对机体可产生不良影响.近年,我国在镍化合物的毒性和致癌作用及其机理的研究方面取得了一些重要进展,主要归纳为以下几个方面.1 一般毒性与器官毒性镍化合物可经多种途径进入机体,通过机体的膜屏障与组织细胞内的生物分子相互作用,导致各种毒效应.业已证实,镍化合物是一类多器官毒物,可累及肝、肾、肺和心血管系统、血液等多种重要器官.我国现有的研究报告涉及吸入染毒、经口摄入、皮下注射和腹腔注射以及体外细胞培养等多种途径.
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细粒棘球蚴囊液对外周血淋巴细胞的影响
目的研究细粒棘球蚴囊液对健康人外周血单个核细胞(PBMC)及Jurkat T淋巴细胞等的影响. 方法 PBMC及Jurkat T淋巴细胞用含不同浓度(1 000、100和10 μg/ml)囊液的DMEM培养基培养5 d后,台盼蓝染色检测细胞活力.用含植物血凝素(PHA)的DMEM培养基培养PBMC,以 MTT法观察PBMC增殖情况,用流式细胞仪检测CD4+、CD8+细胞数量及CD4+/CD8+值,用原位末端标记法和Hoechst33258荧光染色法检测PBMC细胞凋亡. 结果各浓度囊液对PBMC和Jurkat T淋巴细胞未显示出毒性作用.囊液不影响PHA 对PBMC的增殖功能.在1 000 μg/ml囊液组CD4+、CD8+细胞数量与空白对照组(CD4+: 72.08±4.10,CD8+:29.32±2.62)相比,CD4+(49.32±8.32)显著减少(P<0.05),CD8+数量(32.02±6.57)略增加(P>0.05),CD4+/CD8+比值减少.未见细胞凋亡现象.结论细粒棘球蚴囊液对外周血单个核细胞的生长无抑制作用,但可以使CD4+、CD8+细胞的数量和比例改变,向Th2免疫抑制方向转变.
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发展中的新型病毒性疫苗
疫苗早已成为人类预防传染病的重要手段,其中病毒疫苗,对人类预防控制疾病的贡献尤其显著.比如曾经在全球严重威胁人类生命的天花,依靠牛痘苗的广泛预防接种已经被彻底消灭;对儿童造成数以万计的麻痹症而至终生残疾的脊髓灰质炎病,依靠脊灰疫苗的大面积儿童接种已经接近消灭.疫苗生产技术,传统方法主要有两种:一是将病毒大量培养出来,加入适量的灭活剂制成灭活疫苗(早是用动物或鸡胚培养病毒,60年代开始用体外细胞培养繁殖病毒).
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乳杆菌对肠上皮样细胞HT-29黏附的研究
乳杆菌是人和动物肠道内的重要的生理性有益菌,它具有维持胃肠道正常的微生态平衡的作用.本文采用体外细胞培养以及形态学观察的方法对乳杆菌的黏附特性进行研究,并将乳杆菌经过热、胰酶、蛋白酶及过碘酸钠等处理,以观察这些因素对乳杆菌黏附的影响.
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丙型肝炎病毒进入肝细胞机制的研究
0引言目前全世界有近1.7亿人感染了丙型肝炎病毒(HcV),其中相当一部分感染者发展为慢性肝炎,少数还发展成肝硬化甚至肝癌[1-3],且缺乏有效治疗[4],严重危害着人类健康.由于没有适当的体外细胞培养病毒复制系统和小动物模型,使HCV致病性的研究更为艰难.病毒黏附、侵入肝细胞是感染启动的第一步,HcV进入肝细胞机制也一直是众多学者们关注的重点.
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复方肝癌宁抗乙型肝炎病毒的体外实验研究
目的:探讨复方肝癌宁体外抗乙肝病毒(HBV)作用.方法:通过复方肝癌宁作用于体外培养的2.2.15细胞,观察复方肝癌宁对2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg的影响及药物的细胞毒性作用.结果:复方肝癌宁作用于2.2.15细胞8 d后,对细胞的半数毒性浓度(TCso)为大于10 g/L,对HBsAg和HBeAg抑制的半数有效浓度(IC50)分别为0.67 g/L和0.13 g/L,复方肝癌宁对HBsAg和HBeAg的治疗指数(TI)分别为14.93和76.92.结论:复方肝癌宁在体外细胞培养中对HBsAg和HBeAg的分泌有较好的抑制作用,有显著的抗HBV作用.
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小剂量红霉素降低大鼠基础气道阻力的研究
支气管哮喘(简称哮喘)患者可出现反复气流阻滞、气道高反应性和慢性气道炎症.哮喘发病的确切机制尚不完全清楚,目前认为气道炎症为哮喘发病机制的枢纽.临床研究、体外细胞培养及动物模型均证实红霉素对过敏性气道炎症具有保护作用[1].
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BACs-on-Beads:一种快速可靠的产前诊断技术
传统的细胞遗传学分析方法主要为体外细胞培养及染色体核型分析,可以准确检测出染色体非整倍体以及染色体倒位、易位、大于5 Mb的重复和缺失等结构异常[1],但完成该过程需7~10 d,时间较长。随着分子遗传学技术的发展,定量荧光聚合酶链反应(quantitative fluorescence polymerase chain reaction,QF-PCR)、多重连接依赖的探针扩增(multiplex ligation-dependent probe amplifi-cation,MLPA)、荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)等技术可进行快速非整倍体筛查(rapid aneuploidy testing,RAT)[1-3]。但目前这些RAT技术只针对13、18和21号染色体以及性染色体的非整倍体检测,若要检测其他染色体异常,需要进行额外操作,增加了检测成本和时间[2-5]。染色体微阵列分析(chromosomal microarray analysis,CMA)技术分为基于微阵列的比较基因组杂交(array-based comparative genomic hybridization,aCGH)技术和单核苷酸多态性微阵列(single nucleotide polymorphism array,SNP array)技术两大类,采用比较基因组杂交的方法可检测染色体微缺失和微重复[6-9],但成本相对昂贵,且检测结果可能出现临床意义不明的拷贝数变异(copy number variant,CNV)[6,8]。
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耳廓软骨天然生物支架材料的制备及初步研究
目的探讨制备兔耳廓天然软骨细胞外基质材料的新方法,制备适用于组织工程应用的天然生物支架材料.方法①采用多步骤去污剂-酶处理技术抽提兔耳廓软骨细胞制备天然软骨细胞外基质(Nature Extracellular Matrix,NECM),对NECM行HE染色、澳新蓝染色、维多利亚蓝染色、VanGieson染色并进行组织学及扫描电镜观察;②以灰家兔NECM为支架材料和新西兰大白兔耳廓软骨细胞为种子细胞进行体外培养,倒置显微镜下观察其亲水性和对细胞的吸附力,并通过四氮唑盐比色法(MTT Assay)观察NECM对软骨细胞的增殖作用.结果通过HE染色、蛋白多糖、胶原及弹力纤维特染、扫描电镜观察分析证实经过多步骤去污剂-酶法抽提软骨细胞制备的天然生物支架材料里,不含细胞及细胞器成分,仅含有不溶解的胶原、弹性蛋白和蛋白多糖,亦即NECM;体外培养实验发现,兔耳廓软骨细胞易进入脱细胞异体软骨基质结构裸露的空穴,且生长旺盛,组织学检查证实兔耳廓软骨NECM上裸露的骨陷窝已部分被软骨细胞占据.MTT Assay检测证实NECM对软骨细胞增殖有促进作用.结论本实验制备的NECM脱细胞彻底、细胞外基质成分保留较完整,并具有促进细胞粘附、增殖和分化生长的作用,是一种较为理想的天然生物支架材料.
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九种中药活性成分抗耐药肿瘤细胞体外研究
目的分别从温阳、益气、化痰、活血类中药里选择九种单味中药活性成分,拟通过体外细胞培养证实其是否存在抗肿瘤耐药效应.方法采用MTT比色法,选择耐长春新碱的人口腔鳞状上皮癌细胞株(KBv200)为靶细胞,观察上述单味中药活性成分细胞毒与增敏效应.结果桂皮醛、大豆甙元、金雀黄素、薯蓣皂苷对KBv200细胞具有明显的抑制效应.结论桂皮醛、大豆甙元、金雀黄素、薯蓣皂苷在抑制肿瘤生长方面具有深入研究的价值.
关键词: 中药活性成分 肿瘤多药耐药性 人口腔鳞状上皮癌细胞株 体外细胞培养 -
Pdx1诱导胰岛素分泌细胞形成研究进展
Pdx1基因对胰腺发育胰岛功能的影响有着十分重要的作用,近年来利用Pdx1在体外细胞培养的转分化作用,将成体肝细胞、胚胎干细胞、骨髓间充质干细胞、肠上皮细胞等诱导分化成胰岛素分泌细胞的试验研究已经成为糖尿病基因和细胞学治疗的研究热点之一.
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高压氧联合阿霉素对白血病K562/A02细胞周期及移植瘤生长的影响
高压氧作为辅助治疗手段已广泛应用于临床[1],有关高压氧对白血病细胞多药耐药的影响研究尚少,我们拟通过体外细胞培养及构建裸鼠移植瘤模型实验,探讨0.2 MPa高压氧联合阿霉素(ADM)逆转多药耐药白血病细胞系K562/A02细胞耐药性的效果.
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壮通饮对大鼠内源性神经干细胞分化作用的研究
目的 探讨壮通饮对体外培养大鼠大脑海马区内源性神经干细胞(NSC)分化作用的影响.方法 利用无血清DMEM/F12(含20 ng/mL bFGF和EGF及2%B27)体外培养技术从新生Wistar大鼠大脑海马区中培养NSC,在NSC分化过程中添加不同剂量(20 mg/L、40 mg/L和80 mg/L)壮通饮进行干预,以免疫荧光及细胞化学方法对NSC及其分化后的细胞进行鉴定.结果 从大脑海马区分离培养的NSC能够表达巢蛋白(Nestin),并具有分化为神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞的能力.在同一接种密度条件下,不同剂量壮通饮干预组Nestin阳性细胞表达数分别为:20 mg/L组 (20.2±1.4);40 mg/L组 (23.6±1.9);80 mg/L组 (32.8±2.2),与对照组(16.7±1.5)比较明显增加(P<0.05).壮通饮各剂量组表达神经元核心抗原(NeuN)、胶原纤维酸性蛋白(GFAP)、髓鞘碱性蛋白(MBP)的阳性细胞数较对照组明显增加(P<0.05).结论 壮通饮能诱导大脑海马区NSC分化,具有一定的促进神经再生的作用.
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葡多酚对小鼠肝细胞乳酸脱氢酶影响
葡多酚又称葡萄原花青素(grape procyanidins,GPC),是从葡萄籽中提取的一种天然多酚类物质.据国内外研究报道,葡多酚不仅具有清除自由基、抗氧化等生物学功效[1,2],还能促进多种细胞的增殖活性[3].本实验采用经口灌胃给葡多酚和体外细胞培养的方法,研究葡多酚对小鼠肝细胞乳酸脱氢酶(Lactic acid dehydrogenase,LDH)影响,探讨其对肝细胞增殖活性的作用.
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纤维连接蛋白表面修饰后聚酯纤维韧带细胞相容性的变化
目的:观察纤维连接蛋白表面预处理增加新型聚酯纤维韧带(ligament advanced reinforcement system,LARS)的细胞相容性的作用.方法:实验于2005-09/11在上海复旦大学放射医学研究所骨细胞实验室完成.①实验分组:采用纤维连接蛋白表面修饰LARS人工韧带材料,为蛋白处理组.LARS人工韧带材料不做任何处理,为未处理组.蛋白处理组和未处理组在培养后2,4,6,8,10,12 d测定成骨细胞数量、MTT法测定吸光度(A值)、测定碱性磷酸酶值(A值).②实验评估:成骨细胞和与LARS人工韧带材料体外共培养.培养后3,7 d扫描电镜观察成骨细胞在两组材料上的形态.培养后7 d行碱性磷酸酶染色,观察细胞的形态及细胞和材料的细胞相容性情况.结果:①成骨细胞的数量:细胞在接种到材料后即开始增殖,在1~3 d内增殖较缓慢,自第4天起细胞增殖迅速,蛋白处理组至第8天达到增殖高峰,未处理组至第10天才达到增殖高峰.蛋白处理组材料和未处理组材料上细胞增殖基本符合正常细胞增殖.蛋白处理组材料细胞对数增长期较未处理组细胞增殖期长,且高峰值也高(P<0.05).②成骨细胞的增殖能力:培养后2,4,6,8,10,12 d细胞增殖能力迅速增加,两组细胞增殖能力到第6天达高峰,以后逐渐降低,在每个时间段蛋白处理组材料上的细胞的增殖能力均高于未处理组,差异有显著性意义(P<0.05).③成骨细胞的功能:培养后2,4,6,8,10,12 d细胞碱性磷酸酶值随时间推移基本稳定,略有下降,两组间差异无显著性意义(P=0.46).④扫描电镜下成骨细胞形态:培养后3 d,未处理组材料上细胞沿材料表面和纤维孔径之间生长,细胞形态尚不典型.蛋白处理组材料上细胞形态比较典型,具有伪足和触角结构,细胞表面具有大量毛刺样结构.培养后7 d,蛋白处理组材料和未处理组材料上细胞生长情况均较好,可见细胞大量汇合,沿纤维表面和纤维间隙之间生长,可见细胞在蛋白处理组材料上数量更多,汇合面积更大.⑤成骨细胞的碱性磷酸酶染色:成骨细胞与LARS人工韧带支架材料共培养后,培养后2 d起在材料的周边可见梭形和三角形的细胞游离出,进而贴壁汇合,数量逐渐增多,细胞生长情况良好,尤其是在蛋白处理组可发现更明显的细胞黏附生长情况.结论:LARS人工韧带在体外实验中表现出良好的生物相容性,采用纤维连接蛋白表面预处理的方法简便、有效,能够有效增加材料的细胞相容性.
关键词: 人工韧带 聚对苯二甲酸乙二酯(聚酯) 细胞相容性 体外细胞培养 -
急性髓性白血病细胞自分泌造血生长因子水平及其临床意义
体外细胞培养发现在无外源性HGFs存在情况下,部分AML患者的原始细胞可自发增殖并形成集落,而这种自发性增殖可能是由于白血病细胞自身分泌HGFs的结果.我们观察了21例AML 细胞体外自分泌GCSF、GM-CSF的水平,并分析了与临床预后的关系.
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康莱特注射液胸腔灌注治疗晚期肺癌并恶性胸水患者的护理
恶性胸水是晚期肺癌常见并发症,因胸水生长迅速,极易引起呼吸和循环功能不全,严重影响患者生活质量及生存时间.因此,有效控制恶性胸水生长在晚期肺癌的综合治疗中占有重要地位.体外细胞培养结果提示,康莱特注射液(下称康莱特)有直接杀灭癌细胞作用[1],还能激活、增强免疫功能,供给机体高能量营养,对控制癌性胸水、镇痛均有一定作用[2].
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EGCG 对人乳腺癌细胞作用的分子靶点
近年来对于绿茶的抗癌作用已经明确,研究非常广泛,无论是从流行病学、体外细胞培养、体内动物实验还是临床研究都表明绿茶具有抗癌作用,绿茶癌症化学预防作用主要是由于绿茶含有抗癌成分儿茶素,其主要包括:表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、表没食子儿茶素(EGC)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)和表儿茶素(EC)[1]。EGCG 为绿茶天然活性提取物,是绿茶中含量高、活性强的多酚类化合物,占多酚类总量的50%-80%。已有大量体外实验对 EGCG的癌症预防作用机制进行了广泛研究[2-4],EGCG 抗癌作用主要为:1)抑制肿瘤细胞生长和增殖;2)诱导肿瘤细胞凋亡;3)阻断肿瘤细胞侵袭和转移;4)阻止肿瘤血管的生成[5]。目前已鉴定出多个 EGCG 癌症预防作用分子靶点如蛋白酶体、蛋白激酶基质金属蛋白酶及其他潜在靶点。也有研究揭示,一些高亲和力 EGCG 结合蛋白可能是 EGCG 的直接作用靶点[6-8]。