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毛子草化学成分及其促PC-12细胞的分化作用研究Ⅰ
目的:研究毛子草的化学成分及其促PC-12细胞的分化作用.方法:利用反复硅胶柱色谱进行分离和纯化,通过理化方法及光谱分析鉴定其结构.采用PC-12细胞株模型对毛子草不同提取部位及各单体化合物进行了促分化作用研究.结果:从毛子草的正丁醇溶解部分分离得到5个化合物,鉴定为:车前醚苷(Ⅰ),5-羟基-4',6,7-三甲氧基黄酮(Ⅱ),4',5-二羟基-6,7-二甲氧基黄酮(Ⅲ),4',5-二羟基-7-甲氧基黄酮(Ⅳ),5-羟基-4',7-二甲氧基黄酮(Ⅴ).结论:化合物Ⅰ为首次从该植物中分离得到;化合物Ⅱ~Ⅴ为首次从角蒿属植物中分离得到.生物活性表明毛子草正丁醇溶解部位和化合物Ⅰ对PC-12细胞均具有一定的营养活性.
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一种简单诱导小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化的方法
目的:小鼠胚胎干细胞(mESCs)具有多向分化潜能,包括向心肌细胞分化,被广泛应用于心脏再生、细胞治疗与免疫治疗中。目前,mESCs向心肌细胞分化的诱导剂主要有DMSO,5-aza,RA,ICA,vitaminC以及中药丹参等。据报导,一定浓度的青链霉素(双抗)对mESCs的有丝分裂具有一定的抑制作用。然而,双抗诱导mESCs向心肌细胞分化却未见报导。我们的研究旨在探讨双抗诱导mESCs向心肌细胞分化作用。
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9-顺维A酸对肺鳞癌细胞周期及细胞分化的生物学作用
随着对维A酸与肺癌关系的研究发现:全反式维A酸(ATRA)虽能抑制支气管上皮细胞的生长和鳞状分化[1],但这种作用在肺癌的形成过程中消失,且在体外实验的大多数人肺癌细胞株对ATRA有显著的抗性作用[2,3].近已证实,ATRA的一种立体异构体--9-顺维A酸(9-cis-RA)能与维A酸受体(RARs)和维A类X受体(RXRs)结合而发挥其生物学作用,故9-cis-RA倍受研究者的重视[4].我们的研究旨在观察9-cis-RA对肺鳞癌细胞株的细胞周期及分化作用的影响.
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骨髓造血细胞介导的GM-CSF基因疗法对骨髓移植后造血重建的影响
粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)是一种具有广谱造血活性的细胞因子,尤其对粒-巨噬系造血祖细胞具有明显的促增殖与分化作用,许多实验证明GM-CSF可提高受照小鼠的生存率,减轻造血组织辐射损伤,并使感染和出血易于控制[1].但因其半衰期短,需大剂量反复长时间使用以维持疗效,常伴有诸多副作用,致使影响其临床应用及疗效.由此人们设想建立使体内持续分泌造血因子的基因疗法[2]为造血障碍性疾病开辟一条有效可行的新途径.作者以前的研究[3]已经证实GM-CSFcDNA导入造血祖细胞中可以表达.
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诱导骨髓基质干细胞向软骨细胞分化的实验研究
目的 研究和评价转化生长因子-β1(TGF-β1)和胰岛素样生长因子-I(IGF-I)在BMG三维支架中对骨髓基质干细胞(SMCs)向软骨细胞分化的影响.方法 从大白兔的髂骨骨髓液中提取和分离骨髓基质干细胞,将无血清Mc5A培养液分为四组,含有5 ng的TGF-β1和100 ng的IGF-I组为A组、含有TGF-β1为B组、含有IGF-1组为C组及无血清Mc5A培养液为D组作为空白对照,先进行单层细胞培养的10天,再置于松质骨基质明胶(BMG)支架中继续培养10天,然后进行甲苯胺蓝染色、蛋白多糖含量的测定.结果 第5、10天后,各组单层细胞培养的细胞个数均有显著性差异,即A组>B组>C组>D组;第20天后各组的BMG支架蛋白多糖含量检测结果,即A组>C组>B组>D组(P<0.05).结论 早期应用TGF-β1可提高骨髓基质干细胞的软骨分化能力,而IGF-I可提高TGF-β1对骨髓基质干细胞软骨分化作用.
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Pdx1诱导胰岛素分泌细胞形成研究进展
Pdx1基因对胰腺发育胰岛功能的影响有着十分重要的作用,近年来利用Pdx1在体外细胞培养的转分化作用,将成体肝细胞、胚胎干细胞、骨髓间充质干细胞、肠上皮细胞等诱导分化成胰岛素分泌细胞的试验研究已经成为糖尿病基因和细胞学治疗的研究热点之一.
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白细胞介素-2在造血干细胞移植中的应用
白细胞介素-2(IL-2)是T细胞分泌的具有促进淋巴细胞增殖、分化作用的细胞因子,处于免疫反应的中心位置,是临床用于肿瘤生物治疗的主要细胞因子之一.现在,造血干细胞移植越来越成为治疗血液系统肿瘤、放/化疗敏感实体肿瘤的主要方法之一.IL-2在造血干细胞移植中广泛应用,具有动员造血干/祖细胞入血,能净化干细胞收集物,IL-2活化干细胞收集物能产生移植物抗肿瘤(GVT)效应,清除微小残留病变(MRD),促进移植后免疫功能恢复,减少感染机会,影响移植物抗宿主疾病(GVHD)的发生等作用.现就IL-2在造血干细胞移植中的应用,综述如下.
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阿克拉霉素及联用红细胞生成素对骨髓增生异常综合征细胞株细胞分化作用初探
采用诱导分化方法使骨髓增生异常综合征(MDS)恶性克隆分化成熟,将有助于减少并发症,延长患者生存期.因此,寻找有效的分化诱导剂,在MDS的治疗中具有重要的意义.我们以一种对各种分化诱导剂均无反应的MDS细胞株--MUTZ-1为研究对象,初步探讨阿克拉霉素(ACM)及联用红细胞生成素(Epo)对MUTZ-1细胞体外分化作用的影响.
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硝普钠对HL-60细胞诱导分化作用的观察
我们曾报道了有关外源性一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)诱导HL-60细胞凋亡及其分子机制的研究.实验中发现低浓度SNP在体外还可诱导HL-60细胞分化,并对细胞分化作用的分子机制进行了实验研究.
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Thl/Th2细胞因子的临床意义
1986年Mosmann和Coffman首次报告[1]根据其分泌细胞因子的不同,可以将鼠T辅助淋巴细胞分为两组功能性亚群.选择性分泌IFN-γ的称为Th1细胞,选择性分泌IL-4的称为Th2细胞.随后的研究证明Th0是Th前体细胞,能分泌IFN-γ和IL-4两类细胞的细胞因子.广义上说,Th1型细胞因子包括IFN-γ、IL-2和TNF-β;Th2细胞因子包括IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、1L-13,可能还包括IL-9.目前,发现Th1型、Th2型细胞因子不仅来自CD4+T淋巴细胞,其它的白细胞,甚至非血液细胞也能分泌.由此,在命名上以Ⅰ型(typeⅠ)或Th1-样(Th1-like)细胞替代Th1细胞,以Ⅱ型(typeⅡ)或Th2-样(Th2-like)细胞替代Th2细胞,更为合适.这样的命名方法,强调的是细胞功能,而不仅仅是指来源.弄清楚Ⅰ型、Ⅱ型细胞因于对免疫反应的调节或障碍,对于揭开致病机理和临床治疗是极其重要的. 1 Thl、Th2细胞的分化目前,用流式细胞术在单细胞水平上检测CD4+T淋巴细胞内细胞因子的产生,证实确有Th1和Th2的存在,根据淋巴细胞产生细胞因子的不同,而将CD4+T细胞(Th)分为三个亚群,各亚群的功能不尽相同.Th1促进细胞介导的免疫,清除细胞内的病原体;Th2促进体液免疫,消除细胞外病原体;Th0是它们的前体,分泌淋巴细胞因子不受限制. Th1和Th2细胞的分化受多种因素的影响,重要的有三个:①局部环境的细胞因子,②TCR与配体的亲合力,③遗传多形性.如:IL-12、IL-4分别诱导T淋巴细胞向Th1和Th2分化.MHC-II/抗原肽复合物与TCR间相互作用强度,依赖于抗原递呈细胞(APC)与T细胞间的亲合力强弱,也可以调控T淋巴细胞的细胞因子分泌.低亲合力的相互作用,有助于T细胞间Th2细胞分化.另外,Th1和Th2亚群之间也相互调控CD4+T细胞的分化.IL-12有很强的促进Th1细胞分化作用,并抑制IL-4介导的IgE合成.INF-γ能放大IL-12依赖的Th1分化,抑制Th2增生.相反,IL-4和IL-10可促进Th2的分化,抑制Th1分泌相应的淋巴细胞因子.IL-4、IL-10和IL-13抑制Th1细胞的增生,主要是通过下调IL-12来完成的. 根据细胞表达IL-12、IFN-γ受体的不同,能够从分子机制上解释Th1/Th2的分化作用.IFN-γ促进Th1分化,抑制Th2增生,其原因可能与Th1细胞缺乏IFN-γ受体β链有关.然而,IFN-γ处理的Th2细胞也丧失IFN-γ受体β链,因此,IFN-γ受体B链不能作为Th1的标志.相反,向Th2分化的细胞迅速导致IL-12信号消失.Th2细胞对IL-12的不反应,可能是由于IL-12R β2亚单位的选择性下调引起的.体外实验也证实:抑制Th1、诱导Th2,与细胞表达IL-12Rβ2亚单位的下调有关. 抗原递呈细胞(APC)在Th1、Th2的分化过程中起重要的作用[6].以单核-巨噬细胞为主的APC通常驱动T细胞向Th1发展,以B细胞呈递过敏原为主的APC通常驱动T细胞向Th2发展,低浓度的过敏原也同样能引起高水平的IL-4产生.动物模型证实,以CD80诱导的T细胞增生主要产生Th1型细胞因子,相反,CD86诱导的T细胞增生主要产生Th2型细胞因子.
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以成纤维细胞作为饲养层供角朊细胞生长
体外角朊细胞培养已有多年的历史,随着人们对角朊细胞(Keratinocyte,KC)生长状况、结构功能及生物学特性的不断了解,培养技术日趋完善.比较成熟的是以NIH3T3细胞作为饲养层,有血清培养法[1]和无血清培养法[2],前者可以培养出整张细胞膜片用于临床;后者用于对KC特性的实验研究,但3T3细胞作为异种细胞,存在伦理学问题及潜在的危害,因此本研究用成纤维细胞作为饲养层培养KC,旨在观察其促贴壁、生长和分化作用,为临床提供理论依据.
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干扰素治疗对慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞调节Th1/Th2分化的影响
树突状细胞(DCs)在慢性乙型肝炎(CHB)患者中的功能是低下的[1].因此,DCs异常可能导致抗原提呈功能失调,引起体液和细胞免疫紊乱,终导致患者病情迁延不愈.CHB患者辅助性T细胞(Th)亚群即Th1、Th2细胞的平衡与患者的预后有关,并且Th0 向Th1/Th2的分化受多种因素的调节.本研究主要探讨干扰素对CHB患者外周血DCs,以及DCs对Th1/Th2分化作用的影响.
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鼠萎缩性胃炎生长激素及其受体表达
生长因子家族是20世纪逐步被发现的一组蛋白质激素,它包括生长激素(GH)、表皮生长因子(EGF)、转化生长因子(TGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、胰岛素样生长因子(ILGF)、成纤维生长因子(bFGF)等.它们具有促进细胞DNA、RNA和蛋白质合成,控制上皮组织生长、分裂以及分化作用.它们能促进损伤上皮修复,保护黏膜屏障.黏膜受到炎症等损伤刺激后的愈合过程受生长因子及受体调控.近年来研究发现,生长因子与胃黏膜疾病关系密切.但临床上能否用生长因子类或刺激生长因子类分泌的药物对萎缩性胃炎作逆转治疗,这一问题一直难以回答.本研究试图通过实验手段,控制在单纯性萎缩性胃炎状态下,探讨生长激素与萎缩性胃炎的关系.
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正常骨髓基质对HL-60细胞分化作用的影响
目前认为白血病的发病机制可能与细胞凋亡不足和分化受阻有关.骨髓基质细胞(BMSCs)与其分泌的细胞因子、细胞外基质构成的骨髓微环境在造血干细胞的增殖、分化、凋亡和恶性血液病发生等生理、病理过程中发挥重要作用.现笔者利用正常的骨髓基质作用于HL-60细胞,以探讨其对HL-60细胞分化作用的影响,报道如下.
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盐酸小檗碱对HL-60细胞增殖与分化的影响
目的研究盐酸小檗碱对人早幼粒白血病HL-60细胞增殖与分化的影响.方法应用生长曲线测定法、克隆形成实验检测药物对HL-60细胞生长抑制作用;细胞分化根据细胞形态、硝基蓝四氮唑(NBT)还原能力、细胞表面标记的改变来决定;细胞周期变化用流式细胞仪测定.结果 HL-60细胞经小檗碱处理后生长明显受抑,呈时间和浓度依赖性.选择1、2、4、8 mg·L-1小檗碱作用于HL-60细胞,动态观察发现,HL-60细胞向成熟细胞分化:细胞核变小,核浆比减少;NBT还原能力增强;CD11b表达升高.细胞周期分析发现,小檗碱处理后细胞阻滞于G0/G1期,S期细胞明显减少.结论盐酸小檗碱可抑制HL-60细胞的增殖,并诱导HL-60细胞向成熟细胞分化.
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异甘草素对SHG44人脑胶质瘤干细胞增殖和分化的影响
目的 探讨不同浓度异甘草素对SHG44人脑胶质瘤干细胞增殖和分化的影响及机制.方法 实验分为二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)对照组,异甘草素(10 ~160 μmol/L)诱导组,氮-[氮-(3,5-二氟苯乙酰)-L-丙氨酰]-s-苯基甘氨酸丁酯(N-[N-(3,5-difluorophenacetyl)-1-alanyl]-S-ph,DAPT)(2.0μmol/L)阻断剂组,异甘草素+阻断剂组(10~ 160 μmol/L+2.0 μmol/L DAPT),采用CCK-8法、免疫荧光染色、Western blot及Real-time PCR分别检测细胞抑制率、相关分化蛋白及Notch1通路相关基因表达情况.结果 异甘草素在12~ 48 h,随着浓度增加,细胞抑制率减弱(P<0.05),且分化细胞越多,干细胞减少;72 h后随着浓度增加,细胞抑制率增强(P<0.05),分化细胞及干细胞同时减少;隔日加药至第7d时,经统计分析胶质瘤干细胞球数目减少、直径减小(与对照组比),且P<0.05.异甘草素作用72 h后:与对照组比较,随着异甘草素浓度的增加Nestin蛋白表达量逐渐下调(P<0.05);与对照组比较,10、40、160 μmol/L组GFAP蛋白表达水平均上调(P<0.05),且40 μmol/L组GFAP蛋白表达量较其他浓度组均较高,(P<0.05);与对照组比较,10、40、160 μmol/L组p-TubulinⅢ蛋白表达水平均上调(P<0.05),且10 μmol/L组β-TubulinⅢ蛋白表达量较其他浓度组均较高(P<0.05).Notch1通路阻断剂作用后,与对照组比较,各异甘草素组和阻断剂组Notch1、RBP-JK及Hes1基因表达均显著下调(P<0.05);与异甘草素组比较,Notch1、RBP-JK及Hes1基因表达在异甘草素加DAPT组及阻断剂组显著下调(P<0.05);与阻断剂组比较,Notch1、RBP-JK及Hes1基因表达在异甘草素加DAPT组显著下调(P<0.05).结论 异甘草素能诱导SHG44人脑胶质瘤干细胞向星形胶质细胞和神经元细胞分化,且能抑制其增殖,可能与下调Notch1信号通路中的Notch1、RBP-JK及Hes1有关.
关键词: 异甘草素 SHG44胶质瘤干细胞 Notch1信号通路 分化作用 抑制作用 -
逆转素的研究进展
逆转素(reversine)是一种人工合成的小分子的嘌呤衍生物.它可以令已去分化的定向系细胞转变为未分化祖细胞.以往对干细胞的研究表明,非特异性的前体细胞在合适的培养条件下可以通过自我更新以及分化成为其他组织类型.由于干细胞具有可塑性,逆转素可以较容易地改变和控制其分化的进程.较早期研究显示,逆转素对于小鼠C2C12成肌细胞具有去分化作用,使其转变成未分化祖细胞的状态.这种祖细胞可以再分化为脂肪细胞和成骨细胞的.此外,其他实验也就逆转素的靶基因以及相关信号通路做了深入的研究.有研究表明逆转素具有治疗癌症的前景.本文就逆转素现有的研究证据以及潜在的作用作一综述.
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TGF-β诱导骺板肥大区软骨细胞向成骨样细胞分化
传统经典学说认为骺板肥大区软骨细胞是终末分化细胞, 不能增殖分化,在软骨内成骨过程中,它的命运是退化死亡,被骨组织所取代.有学者认为体内肥大软骨细胞能进一步分化为成骨或成骨样细胞,是否受到生长因子的作用并不清楚. 转化生长因子-β(TGF-β)是骨形成的重要局部生长因子.由于TGF-β的作用与基质、其它生长因子的存在与否密切相关,所以它的骨形成作用并不十分明确.为此,我们用鸡胚股骨无血清培养作为骨形成的模型,在排除血清中其它生长因子的影响,细胞维持相对稳定微环境的情况下,观察TGF-β对骺板肥大区软骨细胞的分化作用.结果表明TGF -β可使肥大区软骨细胞表达Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白(FN),并使碱性磷酸酶(ALP )表达增加,细胞形态呈梭形,并存在着量效和时效关系.结论:TGF-β可以诱导鸡胚股骨骺板肥大区软骨细胞向成骨样细胞分化,与TGF-β作用剂量和时间密切相关.
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他卡西醇软膏联合丙酸氟替卡松软膏治疗白癜风68例
他卡西醇软膏(商品名:萌尔夫,帝人株式会社制造)为活性维生素D3治疗药,副作用少,具有抑制表皮细胞增殖作用、诱导表皮细胞的分化作用、促进黑色素细胞产生色素作用;丙酸氟替卡松软膏(商品名:克廷肤,葛兰素史克制造)为全新、强效的"软性激素".我院于2004年8月~2005年5月联合使用他卡西醇软膏和丙酸氟替卡松软膏治疗白癜风,现总结报告如下.
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碱性成纤维细胞生长因子缓释微球促周围神经再生作用的研究进展
碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)是一种具有广泛生物学活性的肽类生长因子,对神经外胚层和中胚层的多种细胞具有促增殖和分化作用,在神经创伤修复这一研究领域中具有广阔的应用前景.但bFGF对热和酸均不稳定,在体内的半衰期为3~5 min,全身应用则会被快速灭活而难以发挥其有效作用,局部穿刺给药对深部神经损伤难以保证每次释药部位的准确性,且不适宜长期用药[1,2].因此,研究bFGF的缓释制剂对长期维持损伤局部的有效药物浓度、促进神经再生有着重要意义.现就有关bFGF促周围神经再生以及bFGF缓释制剂的研究综述如下.