首页 > 文献资料
-
CP节律性化疗对RPMI8226细胞增殖及其Notch1/NF-κB信号通路的影响
目的:研究持续低剂量磷酰胺氮芥(phosphoramide,PM)联合泼尼松龙(predniso1one)(即CP节律性化疗方案)对骨髓瘤细胞RPMI8226增殖及凋亡的影响,并探讨其对Notch1/NF-κB信号通路的调控作用.方法:实验分DMSO对照组,磷酰胺氮芥(PM)组,泼尼松龙组,磷酰胺氮芥+泼尼松龙组(即CP组),采用不同组的药物处理骨髓瘤细胞RPMI8226,用CCK8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期及凋亡,RT-PCR检测Notch1和NFκB的mRNA表达水平.结果:与DMSO对照组相比,随着时间的延长,PM、泼尼松龙及CP组均使RPMI 8226细胞的增殖抑制率明显提高(r分别为0.994、0.996、0.999,P＜0.001),并且在相同作用时间,不同组的药物对细胞的增殖抑制率也明显不同,PM对细胞的抑制率弱,而CP组对细胞的抑制率强,泼尼松龙组次之(P＜0.01).用药处理48 h后,与DMSO对照组相比,各用药组G1/Go期细胞比例明显增加,S期细胞比例明显减少,尤其在PM和CP组,G2/M期细胞比例在PM增加,而在泼尼松龙和CP组则减少.用药处理48 h后,与DMSO对照组相比,治疗组PM、泼尼松龙、CP组的RPMI8226细胞凋亡率依次增高(P＜0.01).用药处理48 h后,与DMSO对照组相比,泼尼松龙组、PM组、CP组RPMI8226细胞的Notch1和NF-κB mRNA表达均依次明显下降(P ＜0.001).结论:CP节律性化疗可以显著减少RPMI8226细胞增殖,促进其凋亡,使RPMI 8226细胞主要阻滞于G1/Go期,并能显著降低Notch1和NF-κB的表达水平,显示CP节律性化疗对MM的治疗作用有Notch1/NF-κB信号通路的参与.
-
shRNA干扰AKT基因对Jeko-1细胞增殖、凋亡及Notch1信号通路的影响
目的:探讨RNA干扰沉默AKT基因对套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞株的增殖、凋亡及Notch1信号通路的影响.方法:设计针对AKT基因短发夹RNA,将其连入pGPU6/GFP/Neo质粒中,构建AKTshRNA真核表达载体,经脂质体转染入Jeko-1细胞,应用RQ-PCR及Western blot鉴定其干扰效果,MTT法绘制细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞凋亡的变化,Western blot检测凋亡相关蛋白信号及通路相关蛋白p-AKT、Notch1、HES1的变化.结果:AKT shRNA转染Jeko-1细胞后,AKT的mRNA和蛋白表达均明显下降,有统计学意义(P＜0.05);转染组细胞增殖率明显低于Neg-shRNA组和空白对照组(P＜0.05),AKT shRNA传染48 h后,凋亡率为(37.72±4.39)％,而Neg-shRNA组和空白对照组分别为(2.62±1.53)％、(1.57±0.42)％,差异有统计学意义(P＜0.01);凋亡相关蛋白BCL-2表达下降,而BAX、caspase-3、caspase-9表达上升;PI3K/AKT信号通路相关蛋白p-AKT磷酸化水平下降、Notch1信号通路相关蛋白Notch1、HES1表达下调.结论:干扰沉默AKT基因可抑制套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能是特异性抑制PI3 K/AKT信号通路也能下调Notch1信号通路的活性.
-
miR-195在胃癌细胞中的表达及对癌细胞凋亡的机制研究
目的 探讨miR-195在胃癌细胞中的表达及对癌细胞凋亡的影响和机制.方法 以人胃黏膜正常细胞GES-1作为对照,RT-PCR检测人胃癌MNK-28、SGC-7901、BGC-823细胞中miR-195基因的表达;将miR-195 mimics转染BGC-823细胞,48 h后RT-PCR检测miR-195的mRNA表达;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测cleaved caspase3、Notch1、Hes1蛋白表达.结果 miR-195在MNK-28、SGC-7901、BGC-823细胞中的mRNA表达均显著低于GES-1(P<0.01),miR-195在BGC-823细胞中的表达低,选择作为后续研究对象;过表达组细胞凋亡率及cleaved caspase3蛋白表达显著高于对照组,Notch1、Hes1蛋白表达显著低于对照组(P<0.01),而空转染组细胞凋亡率及cleaved caspase3、Notch1、Hes1蛋白表达与对照组差异无统计学意义(P>0.05).结论 miR-195在胃癌细胞的过表达可促进癌细胞的凋亡,其机制与下调cleaved caspase3蛋白表达及Notch1信号通路有关.
关键词： 胃肿瘤 细胞凋亡 miR-195 Notch1信号通路 -
RNA干扰Rac1基因表达抑制胃癌细胞增殖及促进凋亡的机制研究
目的 RNA干扰抑制Rac1基因的表达对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及机制.方法 Western blot检测胃癌组织及相应的癌旁组织中Rac1基因的蛋白表达;将NC-siRNA、Rac1-siRNA转染至人胃癌SGC-7901细胞,不经任何处理的细胞作为空白对照组,48 h后,Western blot检测各组细胞中Rac1的蛋白表达;CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测ki67、PCNA、Cleaved caspase3、Notch1、Hes1蛋白表达.结果 Rac1在胃癌组织中的蛋白表达显著高于癌旁组织(P<0.01);RNA干扰SGC-7901细胞中Rac1基因后能显著降低Rac1的蛋白表达;与对照组及NC-siRNA组比较,Rac1-siRNA组细胞存活率及ki67、PCNA、Notch1、Hes1蛋白表达显著降低,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著升高(P<0.01).结论 Rac1基因在胃癌组织中高表达,RNA干扰抑制Rac1基因表达后能显著降低细胞的增殖及诱导细胞凋亡,其机制与抑制Notch1信号通路有关.
-
替吉奥胶囊对胃癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响及机制研究
目的 探讨替吉奥胶囊对胃癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响及机制.方法 6.25 μg/ml、12.5 μg/ml、25 μg/ml、50 μg/ml、100 μg/ml、200 μg/ml的替吉奥处理人胃癌BGC823细胞,不加药物处理的作为空白对照组,48 h后,CCK8实验检测细胞增殖;Transwell小室检测细胞侵袭能力;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测Cleaved caspase3、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、Notch1、Hes1蛋白表达.结果 6.25 μg/ml、12.5 μg/ml、25 μg/ml、50 μg/ml、100 μg/ml、200 μg/ml的替吉奥处理的细胞的抑制率均显著高于对照组,且具有浓度依赖性(P<0.01),选择115 μg/ml的替吉奥作为后续实验的研究对象;与对照组比较,替吉奥组细胞抑制率显著升高,细胞侵袭数显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cleaved caspase3蛋白表达显著上调,MMP-2、MMP-9、Notch1、Hes1蛋白表达显著下调(P<0.01).结论 替吉奥胶囊可降低胃癌细胞的增殖及侵袭能力,促进细胞的凋亡,其机制与抑制Notch1信号通路有关.
-
Notch1信号通路在乳腺癌中的研究进展
乳腺癌是女性常见、死亡率高的恶性肿瘤之一,近年来其发病率不断升高.研究发现Notch1信号通路在乳腺癌中起着重要的作用.研究发现Notch1在正常乳腺组织和乳腺良性病变以及乳腺癌中均有表达,在乳腺浸润性导管癌中的表达率明显高于导管原位癌,其表达与乳腺癌HER-2亚型有关,在HER-2阳性型中的Notch1的阳性表达率明显高于其他亚型.研究认为Notch1阳性表达率高与其乳腺癌的分化程度低、分期晚、淋巴结转移阳性率高以及脑转移有关,预示着乳腺癌的预后差,并被认为可作为判断预后的临床指标.此外研究发现Notch1的高表达可导致乳腺癌对阿霉素与紫杉醇的耐药.研究发现 Notch1 高表达与乳腺癌侵袭强、凋亡抑制有关. 研究还发现Notch1 的表达影响乳腺癌干细胞的数量,是维持乳腺癌干细胞恶性表型的重要因子.且 Notch1 与VEGF、c-myc、CCL2、TRB3、MMP2等相关基因表达及肿瘤微环境相关.针对Notch1的靶向治疗的研究有Notch1单克隆抗体、三氧化二砷以及金雀异黄素等药物,以及Notch1相关通路的靶向治疗药物,均可抑制乳腺癌细胞的生长,对乳腺癌有抗肿瘤作用.
-
靶向抑制TROP2基因表达对胰腺癌细胞生物学特性的影响研究
目的 探讨抑制胰腺癌组织中肿瘤相关钙信号传导因子2(TROP2)表达对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响及机制.方法 选取胰腺癌组织和相应的癌旁组织各46例.采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测并分析胰腺癌组织和癌旁组织中TROP2基因的mRNA表达情况;将人胰腺癌PANC-1细胞分为对照组、NC-siR-NA组和TROP2-siRNA组,培养48 h后,采用蛋白质印迹法检测并分析TROP2、cleaved caspase 3、NOTCH1和HES1蛋白表达情况;采用CCK8法和流式细胞仪分别检测并分析细胞的增殖和凋亡情况.结果 在胰腺癌组织中TROP2基因的mRNA表达明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P﹤0.01).对照组、NC-siRNA组和TROP2-siRNA组中,TROP2蛋白表达、细胞存活率、细胞凋亡率及cleaved caspase 3、NOTCH1、HES1蛋白表达比较,差异均有明显统计学意义(P﹤0.01);TROP2-siRNA组TROP2蛋白表达、细胞存活率及NOTCH1、HES1蛋白表达均明显低于对照组,细胞凋亡率和cleaved caspase 3蛋白表达均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01),而NC-siRNA组TROP2蛋白表达、细胞存活率、细胞凋亡率及cleaved caspase 3、NOTCH1、HES1蛋白表达与对照组比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05).结论 抑制胰腺癌组织中TROP2基因表达,可以明显降低肿瘤细胞的增殖能力,促进细胞凋亡,其机制与阻断NOTCH1信号通路有关.
关键词： TROP2基因 胰腺癌 Notch1信号通路 -
姜黄素对肝癌细胞凋亡及TNF-ɑ、IL-1β、IL-6炎性因子影响的机制研究
目的 探讨姜黄素对肝癌细胞凋亡及肿瘤坏死因子α(TNF-ɑ)、白介素1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)炎性因子的影响及机制.方法 采用5、10、20、40、80、160μmol/L的姜黄素处理人肝癌HepG2细胞24、48 h后,CCK8实验检测细胞的增殖情况,计算IC50值;50μmol/L的姜黄素处理HepG2细胞48 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Western blot检测TNF-ɑ、IL-1β、IL-6、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、Notch1、Hes1蛋白表达情况.结果 细胞抑制率随着姜黄素作用时间及浓度的增加显著升高.根据IC50值选择50μmol/L的姜黄素作为研究对象;以50μmol/L的姜黄素处理肝癌细胞的凋亡率及Cleaved Caspase-3蛋白表达明显高于对照组,TNF-ɑ、IL-1β、IL-6、Notch1、Hes1蛋白表达均明显低于对照组(P﹤0.01).结论 姜黄素可呈时间及剂量依赖式抑制人肝癌HepG2细胞增殖,可诱导细胞的凋亡,可通过降低TNF-ɑ、IL-1β、IL-6的表达达到抗炎作用,其机制与抑制Notch1信号通路有关.
关键词： 姜黄素 肝癌 凋亡 炎性因子 Notch1信号通路 -
Survivin基因调控Notch1信号通路抑制骨髓瘤细胞增殖及侵袭的机制
目的 探讨Survivin基因调控Notch1信号通路对骨髓瘤细胞增殖及侵袭的影响.方法 RT-PCR检测42例骨髓瘤组织及正常骨髓组织中Survivin基因的mRNA表达;NC-siRNA和Survivin-siRNA转染人骨髓瘤细胞株RPMI8226,Western blot检测48 h后各组细胞中Survivin蛋白的表达;台盼蓝拒染法和Transwell小室分别检测细胞活率及侵袭能力;Western blot检测MMP-2、MMP-9、Notch1、Hes1蛋白的表达.结果 Survivin基因在骨髓瘤组织中的mRNA表达显著高于正常骨髓组织(P﹤0.01);转染siRNA后RPMI8226细胞中Survivin蛋白的表达显著降低(P﹤0.01);与对照组及NC-siRNA组的比较,Survivin-siRNA组细胞活率、细胞侵袭数及MMP-2、MMP-9、Notch1、Hes1蛋白表达均显著降低(P﹤0.01).结论 RNA干扰Survivin基因的表达可降低RPMI8226细胞活率及侵袭能力,其机制与抑制Notch1信号通路有关.
关键词： Survivin基因 骨髓瘤 增殖 侵袭 Notch1信号通路 -
厄贝沙坦对糖尿病大鼠心肌损伤中Notch1信号通路的影响
目的:观察厄贝沙坦对糖尿病大鼠心肌损伤的作用,分析Notch1信号通路在其中的变化.方法:实验分4组:正常对照组(CON)、高糖高脂组(HC)、糖尿病组(DM)和厄贝沙坦+糖尿病组(Ir+DM).制作2型糖尿病(T2DM)大鼠模型成功后,第8周开始检测大鼠空腹血糖水平(FBG)、全心质量及左心室重量,计算心脏指数(H/B)及左室重量指数(LVWI),检测大鼠血浆甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)水平,检测心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量变化,免疫组化检测Bcl-2、Bax表达变化,Western blot检测大鼠心肌组织Notch1、Hes-1及Jagged-1的蛋白表达.结果:与CON组相比,HC组H/B、LVWI、FBG无明显变化,血脂、MDA含量明显升高,SOD活性、Bcl-2/Bax及Notch1、Hes-1、Jagged-1蛋白表达降低;与HC组相比,DM组H/B、LVWI、FBG、MDA含量增加明显,血脂水平无明显变化,SOD活性、Bcl-2/Bax及Notch1信号通路蛋白表达进一步降低;与DM组相比,厄贝沙坦干预组H/B、LVWI明显降低,血脂、血糖水平无明显变化,但SOD活性、Bcl-2/Bax增加,MDA含量降低,同时Notch1信号通路相关蛋白表达增加.结论:糖尿病可导致大鼠发生心肌损伤,厄贝沙坦可能通过增强Notch1信号通路的表达发挥心肌保护作用.
关键词： 厄贝沙坦 糖尿病 大鼠 心肌损伤 Notch1信号通路 -
miR-34a通过Notch1信号通路对肺癌干细胞的抑制
背景：已有报道证实miR-34a对肺癌干细胞有一定的抑制作用，但是其作用机制目前还不清楚。
目的：探索miR-34a对肺癌干细胞的抑制作用及机制。
方法：应用免疫磁珠分选细胞技术从肺腺癌A549细胞系中分离出CD133+肺癌干细胞；脂质体转染技术构建miR-34a过表达的肺癌干细胞；双荧光素酶报告基因分析miR-34a与Notch1的靶向关系；基因敲除Notch1并检测其对肺癌干细胞的影响。
结果与结论：①经过免疫磁珠分选和流式细胞术检测得到高比率的 CD133+肺癌干细胞；②qRT-PCR检测发现 miR-34a 在 CD133+肺癌干细胞中的表达明显低于 CD133-肺癌细胞；③成功构建 miR-34a过表达的肺癌干细胞，发现 miR-34a 能够抑制肺癌干细胞的增殖，诱导细胞凋亡；④双荧光素酶报告基因分析证明Notch1与miR-34a具有靶向关系；⑤基因敲除Notch1显著抑制肺癌干细胞的增殖，诱导细胞凋亡；⑥结果提示，miR-34a可能通过抑制Notch1信号通路来抑制肺癌干细胞的生长。 -
小细胞肺癌中Notch1信号通路、ASCL1与EMT关系研究进展
小细胞肺癌(SCLC)是人类常见恶性肿瘤之一,其具有转移率和复发率高、对初始化疗敏感、易获得化学耐药等特征.上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是肿瘤细胞发生侵袭、转移前重要的细胞表象,EMT的发生与多种细胞因子、信号传导通路及转录因子有关.尽管Notch途径激活在非小细胞肺癌(NSCLC)中起着致癌的作用,但在神经内分泌肿瘤(neuroendocrine tumors,NET)中,Notch通路激活抑制肿瘤生长.在SCLC中,Notch1通路激活可以诱导产生E-钙黏蛋白(E-Cadherin),增强细胞的粘附,诱导间质-上皮转化,从而抑制EMT过程.ASCL1(achaete-scute complex homologue 1)是SCLC一种系特异性基因,其编码的转录因子同样具有促进神经内分泌分化、EMT的功能.Notch1信号通路可以抑制ASCL1的转录,同时也可对ASCL1进行转录后调节.因此,可通过激活Notch1信号通路、抑制ASCL1表达从而抑制SCLC的发生、侵袭和转移.
关键词： SCLC Notch1信号通路 ASCL1 EMT -
STC2基因在乳腺癌中的表达及抑制其表达对癌细胞生物学特性的影响研究
目的:探讨斯钙素-2(STC2)基因在乳腺癌中的表达及抑制其表达对癌细胞增殖、周期及凋亡的影响.方法:RT-PCR及Western blot分别检测乳腺癌组织中STC2基因的mRNA及蛋白表达,并分析其与病理特征的关系;将STC2-siRNA转染人乳腺癌MCF-7细胞,另设空白对照组(Control)和阴性对照组(NC-siRNA),转染48 h后,Western blot检测各组细胞中STC2、ki67、细胞周期素(cyclin D1)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase3)、Notch1、Hes1蛋白表达;CCK8检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡.结果:STC2基因在乳腺癌中的mRNA及蛋白表达均显著高于癌旁组织(P<0.05);STC2基因表达与乳腺癌患者年龄、组织学分级及是否发生转移无关(P>0.05),与病理分期、肿瘤大小相关(P<0.05);NC-siRNA组STC2的蛋白表达与Control组差异无统计学意义(P>0.05),STC2-siRNA组STC2的蛋白表达显著低于Control组(P<0.05);STC2-siRNA组细胞存活率、S期和G2/M细胞及ki67、cyclin D1、Notch1、Hes1蛋白表达显著低于Control组,细胞凋亡率、G0/G1期细胞及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于Control组(P<0.05).结论:STC2基因在乳腺癌中高表达,其表达与病理分期和肿瘤大小相关,抑制其表达可降低癌细胞的增殖,阻滞细胞于G1期,并诱导细胞凋亡,其机制与下调ki67、cyclin D1和上调Cleaved caspase3表达及下调Notch1信号通路有关.
关键词： STC2基因 乳腺癌 增殖 凋亡 Notch1信号通路 -
RNAi结肠癌HOXB7基因表达对癌细胞增殖及凋亡的机制研究
目的:探讨抑制HOXB7基因表达对结肠癌细胞增殖凋亡的影响.方法:通过LipofectamineTM2000脂质体介导法将合成的阴性对照siRNA(阴性对照组)及HOXB7-siRNA(HOXB7转染组)转染人结肠癌SW480细胞,未经特殊处理的细胞为空白组.收集转染48 h的细胞,RT-PCR及Western blot分别检测细胞中HOXB7的mRNA及蛋白表达;分别于转染后的24、48、72、96 h,CCK8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测转染后48 h细胞的凋亡情况;Western blot检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关 X 蛋白(Bax)及 Notch1信号通路 Notch1、Hes1的蛋白表达.结果:HOXB7转染组HOXB7的mRNA及蛋白表达均显著低于空白组(P<0.05);转染24 h后三组细胞的OD值间差异无统计学意义(P>0.05), 48、72、96 h后,与空白组比较,HOXB7转染组OD值均显著降低(P<0.05);与空白组比较,HOXB7转染组细胞凋亡率显著升高,Bcl-2、Notch1、Hes1蛋白显著下调表达,Bax蛋白显著上调表达(P<0.05).结论:RNAi结肠癌HOXB7基因表达可通过抑制Notch1信号通路降低癌细胞的增殖,并诱导细胞凋亡.
关键词： RNAi 结肠癌 HOXB7基因 Notch1信号通路 -
下调SLP-2基因表达抑制脑胶质瘤细胞增殖及诱导凋亡的机制研究
目的:探讨下调入Stomatin like protein 2(SLP-2)基因表达对脑胶质瘤细胞增殖凋亡的影响.方法:SLP-2的靶向siRNA序列转染人脑胶质瘤U251细胞(SLP-2敲低组),另设空白组(细胞未做任何处理)和阴性对照组(细胞转染无义siRNA序列),转染48 h后Western blot检测各组细胞中SLP-2、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Notch1、Hes1的蛋白表达;CCK8检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:阴性对照组SLP-2的蛋白表达与空白组差异无统计学意义(P＞0.05),而SLP-2敲低组SLP-2的蛋白表达显著低于空白组(P＜0.05);阴性对照组细胞存活率、细胞凋亡率、IL-6和TNF-α的mRNA表达及Bcl-2、Bax、Notch1、Hes1蛋白表达与空白组差异无统计学意义(P＞0.05),而SLP-2敲低组细胞存活率、IL-6和TNF-α的mRNA表达及Bcl-2、Notch1、Hes1的蛋白表达显著低于空白组,细胞凋亡率及Bax蛋白表达显著高于空白组(P＞0.05).结论:下调SLP-2基因表达可显著抑制脑胶质瘤细胞增殖及诱导细胞的凋亡,下调炎症细胞因子IL-6和TNF-α的表达,其机制与抑制Notch1信号通路有关.
关键词： SLP-2基因 脑胶质瘤 增殖 凋亡 Notch1信号通路 -
miRNA-21调控胃癌细胞增殖及侵袭的机制
目的 探讨靶向沉默miRNA-21表达对胃癌细胞增殖及侵袭的影响和机制.方法 将人胃癌SGC-7901细胞分为正常对照组、转染siRNA Control的阴性对照组和转染siRNA miRNA-21基因的沉默组,按照Invitrogen公司的脂质体LipofectamineTM 2000方法进行转染,48 h后,CCK8实验检测细胞增殖;Transwell小室检测细胞侵袭能力;Western印迹检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、Notch1、Hes1蛋白表达.结果 转染siRNA miRNA-21后能显著降低miRNA-21的表达(P<0.01);与正常对照组及转染阴性组比较,沉默组细胞存活率、细胞侵袭数显著降低,MMP-2、MMP-9、Notch1、Hes1蛋白表达显著下调(P<0.01).结论靶向沉默miRNA-21表达能显著降低胃癌细胞的增殖及侵袭能力,其机制与抑制Notch1信号通路有关.
关键词： miRNA-21 胃癌 增殖 侵袭 Notch1信号通路 -
Fgl2基因对H9C2心肌细胞凋亡的影响
目的 探讨纤维蛋白原样蛋白(Fgl)2基因对H9C2心肌细胞凋亡的影响及机制.方法 空白试剂、阴性病毒和Fgl2 siRNA慢病毒感染H9C2心肌细胞,分别为空白对照组、阴性对照组、Fgl2-siRNA组,48 h后收集细胞,Western印迹检测各组细胞中Fgl2的蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western印迹检测酶切caspase3、Notch1、Hes1蛋白表达.结果 空白对照组和阴性对照组Fgl2蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05),Fgl2-siRNA组Fgl2蛋白表达显著低于空白对照组(P＜0.01);与空白对照组及阴性对照组比较,Fgl2-siRNA组H9C2细胞凋亡明显降低,酶切caspase3蛋白表达显著下调,Notch1、Hes1蛋白表达显著上调(P＜0.01).结论 沉默Fgl2基因的表达可有效抑制H9C2心肌细胞凋亡,其机制与下调酶切caspase3蛋白表达、激活Notch1信号通路有关.
关键词： 纤维蛋白原样蛋白2基因 H9C2心肌细胞 凋亡 Notch1信号通路 -
RNA干扰Mcl-1基因表达对淋巴瘤Raji细胞增殖和凋亡的机制研究
目的:探讨抑制Mcl-1基因表达对淋巴瘤Raji细胞增殖和凋亡的影响及机制.方法:NC-siRNA、Mcl-1-siRNA转染Raji细胞,以不作任何处理的细胞作为空白对照组,48h后Western blot检测各组细胞中Mcl-1的蛋白表达;CCK8实验和流式细胞仪分别检测细胞的增殖和凋亡情况;Western blot检测Cleaved caspase3、Notchl、Hesl蛋白表达.结果:转染Mcl-1-siRNA后Mcl-1的蛋白表达显著降低;与对照组及NC-siRNA组比较,Mcl-1-siRNA组细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cleaved caspase3蛋白显著上调表达,Notch1和Hes1蛋白显著下调表达.结论:RNA干扰抑制Mcl-1基因表达可显著降低Raji细胞增殖及诱导细胞凋亡,其机制与抑制Notch1信号通路有关.
-
水飞蓟宾通过抑制Notch1信号通路发挥抗食管癌EC109细胞的作用
目的:探讨水飞蓟宾(silybin,SIL)对人食管癌EC109细胞系的作用,并探求Notch1以及凋亡通路在其中的角色.方法:实验分为对照组和SIL处理组(75、150、300 μM),各组细胞分别处理12、24、36小时.Cell Counting Kit-8 (CCK-8)测细胞活力;粘附实验测细胞粘附能力;Caspase-Glo(R) 3/7定量试剂盒测细胞Caspase3/7的表达;Western-blot测Notch1、Bcl2和Bax蛋白表达.结果:CCK-8检测结果示SIL可有效抑制EC109细胞的活力(P＜0.01),并呈浓度时间依赖性;粘附实验结果示SIL可以降低EC109细胞粘附能力(P＜0.01);Caspase3/7检测结果示SIL可以使EC109细胞Caspase3/7活性升高(P＜ 0.0l);Western-blot检测结果显示SIL可以使EC109细胞Notch1和Bcl2表达下降,Bax表达上升(P＜0.01).结论:SIL可有效抑制食管癌EC109细胞活力,其作用机制可能与抑制Notch1通路,激活凋亡通路相关,SIL可能是食管癌药物治疗领域具有开发前景的药物.
关键词： 水飞蓟宾 食管癌 EC109细胞系 凋亡 Notch1信号通路 -
5-氮杂胞苷可通过抑制Notch1通路诱导食管癌细胞凋亡
背景与目的:5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-azaC)作为一种DNA甲基转移酶抑制剂在临床上已用于多种恶性肿瘤的治疗,但有关5-azaC在食管癌中作用的研究相对较少.凋亡逃逸是肿瘤主要特点之一,也是抗肿瘤治疗研究的热点.Notch1信号通路是促进食管癌发生、发展的重要通路之一,与细胞的增殖、侵袭及凋亡等密切相关.该研究旨在探讨5-azaC对食管癌细胞凋亡的作用及其对Notch1信号通路的影响,从而探索5-azaC作用可能涉及的机制.方法:采用50μmol/L浓度的5-azaC处理TE-1及OE33两种食管癌细胞系;采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测5-azaC对细胞增殖的抑制效率;采用倒置显微镜观察细胞形态变化;采用流式细胞术、蛋白质印迹法(Western blot)检测两种细胞株在药物处理组与空白对照组的凋亡情况及抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-XL(B-cell lymphoma-extra large,BCL-XL)的表达;采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)及Western blot分别检测两种细胞系中Notch1 mRNA表达和蛋白水平的变化及其Notch细胞内区(Notch intracellular domain,NICD)蛋白水平的变化.结果:5-azaC可诱导食管癌细胞TE-1及OE33凋亡,并明显抑制两种细胞增殖;5-azaC作用于TE-1及OE33细胞时可使Notch1 mRNA表达升高,而NICD蛋白表达水平显著下降.结论:5-azaC对食管鳞癌细胞株TE-1及食管腺癌细胞株OE33均有较强的促凋亡作用,其作用机制可能是通过下调NICD蛋白从而抑制Notch1信号通路.
关键词： 5-氮杂胞苷 食管癌 Notch1信号通路
