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利用siRNA靶向沉默Jeko-1细胞survivin mRNA 基因的实验研究
本研究旨在探讨Survivin基因在淋巴瘤细胞中的生物学作用,为将来以Survivin为靶点治疗套细胞淋巴瘤提供实验室证据.体外化学合成针对survivin mRNA基因的siRNA片段,通过DMRIE-C转染Jeko-1细胞,以无关siRNA、未转染的细胞为对照,采用RT-PCR和Western blot方法检测siRNA的抑制效果,利用流式细胞术检测细胞的凋亡率,用CCK-8法检测转染24、48、72 h对细胞增殖的影响.结果表明,与未转染的空白组相比,siRNA转染Jeko-1细胞后24、48、72 h survivin mRNA的相对表达量分别为0.49 ±0.03、0.38 ±0.02和0.17+0.02;细胞增殖抑制率分别为(31.2±2.1)％、(43.3±3.4)％和(52.6±2.5)％；细胞凋亡率分别为(6.3±0.5)％、(13.5±1.1)％和( 23.6±1.6)％；survivin蛋白表达水平逐步减低.结论:靶向survivin的siRNA能在体外特异性下调目的基因survivin mRNA和蛋白的表达,表现出抑制Jeko-1细胞增殖和促使其凋亡的生物学效应,survivin基因有望成为淋巴瘤治疗的一个药物靶点.
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盐酸青藤碱对Jeko-1细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制研究
目的:探讨盐酸青藤碱对人套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞株增殖、凋亡及AKT信号通路的影响.方法:应用四甲基偶氮唑盐方法(MTT)绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞凋亡的变化,Western blot检测细胞周期蛋白Cyclin D1、凋亡相关蛋白BCL-2、BAX、Caspase-3及Akt信号通路相关蛋白Akt、p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K的变化.结果:盐酸青藤碱能明显抑制Jeko-1细胞株的增殖,Jeko-1细胞经终浓度为0、1、2和4 mmol/L盐酸青藤碱作用24 h后,凋亡率分别为(2.21±1.05)％、(11.29±2.42)％、(18.79±2.84)％和(31.05±3.52)％,其差异有统计学意义(P＜0.01);Western blot检测发现,细胞周期蛋白CyclinD1、凋亡相关蛋白BCL-2表达下降,而BAX、Caspase-3蛋白表达上调,Akt信号通路相关蛋白中Akt表达无变化,而p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K蛋白磷酸化水平降低.结论:盐酸青藤碱可明显抑制Jeko-1细胞增殖,其机制有可能通过下调Akt信号通路中的p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K磷酸化水平,从而抑制Akt信号通路,促进细胞凋亡.
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shRNA干扰AKT基因对Jeko-1细胞增殖、凋亡及Notch1信号通路的影响
目的:探讨RNA干扰沉默AKT基因对套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞株的增殖、凋亡及Notch1信号通路的影响.方法:设计针对AKT基因短发夹RNA,将其连入pGPU6/GFP/Neo质粒中,构建AKTshRNA真核表达载体,经脂质体转染入Jeko-1细胞,应用RQ-PCR及Western blot鉴定其干扰效果,MTT法绘制细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞凋亡的变化,Western blot检测凋亡相关蛋白信号及通路相关蛋白p-AKT、Notch1、HES1的变化.结果:AKT shRNA转染Jeko-1细胞后,AKT的mRNA和蛋白表达均明显下降,有统计学意义(P＜0.05);转染组细胞增殖率明显低于Neg-shRNA组和空白对照组(P＜0.05),AKT shRNA传染48 h后,凋亡率为(37.72±4.39)％,而Neg-shRNA组和空白对照组分别为(2.62±1.53)％、(1.57±0.42)％,差异有统计学意义(P＜0.01);凋亡相关蛋白BCL-2表达下降,而BAX、caspase-3、caspase-9表达上升;PI3K/AKT信号通路相关蛋白p-AKT磷酸化水平下降、Notch1信号通路相关蛋白Notch1、HES1表达下调.结论:干扰沉默AKT基因可抑制套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能是特异性抑制PI3 K/AKT信号通路也能下调Notch1信号通路的活性.
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13-顺式维甲酸联合干扰素α2b对套细胞淋巴瘤细胞株Jeko-1细胞作用及其机制的体外研究
目的：探讨13-顺式维甲酸/异维甲酸（13cRA）、干扰素α2b（IFN-α2b）单独及联合应用对套细胞淋巴瘤（MCL）细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用及其机制。方法13cRA、IFN-α2b单独及其联合应用于MCL细胞株Jeko-1细胞，应用CCK-8法检测不同药物处理方案对细胞增殖的影响， AnnexinⅤ/PI双重染色法检测其对细胞凋亡的影响，流式细胞术（FCM）检测其对细胞周期的影响， Western blot法检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）及凋亡途径相关蛋白caspase-9、Rb的表达。结果①单用13cRA、IFN-α2b及联合应用均对Jeko-1细胞增殖有抑制和诱导凋亡作用（P值均<0.05）；13cRA （100μmol/L）+IFN-α2b（10000 IU/ml）联合组对细胞的增殖抑制率在第1天为（69.37±8.31）%，细胞凋亡率在第5天为（99.87±0.12）%（联合用药协同系数为0.735），均高于阳性对照组的（63.34±4.22）%和（87.80±3.22）%，差异均有统计学意义（P值均<0.05）；抑制增殖与促凋亡作用均呈药物浓度和时间依赖性，并引起G1期+G2期细胞比例的明显增加（P<0.05），S期细胞明显减低（P<0.05）。②单用13cRA、IFN-α2b及联合应用均能下调Jeko-1细胞Cyclin D1及Rb蛋白的表达水平，促进caspase-9裂解。结论单用13cRA、IFN-α2b及联合应用均对Jeko-1细胞有抑制增殖和诱导凋亡效应，可降低S期细胞比例，使细胞停滞于G1、G2期，两药联合应用有协同作用；其作用可能与下调Cyclin D1、Rb蛋白的表达水平及激活caspase-9有关。
