PCI-32765和Bortezomib对B细胞肿瘤细胞系细胞增殖、凋亡的影响及其机制的研究

本研究旨在探讨Btk抑制剂PCI-32765和蛋白酶体抑制剂bortezomib对Raji、Ramos细胞的增殖、凋亡的影响及其作用机制.PCI-32765和bortezomib单药及联合用药处理Raji和Ramos细胞后,分别运用CCK-8法及流式细胞术检测细胞的增殖与凋亡,Western blot法检测Btk、NFκB、c-IAP1、Bcl-xL、caspase-3等蛋白的表达.结果表明:①PCI-32765(0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0μmol/L)和bortezomib(10、20、30、40、50、60、80 nmol/L)处理Raji和Ramos细胞48 h,均可抑制细胞增殖,抑制率呈剂量依赖性,且两药具有协同作用；②PCI-32765(2.0μmol/L)、bortezomib(20 nmol/L)单药及联合用药处理Raji和Ramos细胞不同时间(8、12、24、36、48、72 h),均可抑制细胞存活率,抑制率呈时间依赖性,且两药具有协同作用；③PCI-32765(2μmol/L)和bortezomib(20 nmol/L)单药及联合用药处理Raji和Ramos细胞48 h,可明显促进Raji及Ramos细胞的凋亡.Raji细胞实验结果,空白对照组、PCI-32765和bonezomib单药组、联合用药组的细胞凋亡率分别为10.34±0.53％、24.26±0.91％、43.66±1.08％与74.06±0.72％,各组间有统计学差异(P＜0.05)；Ramos细胞实验结果,空白对照组、PCI-32765和bortezomib单药组、联合用药组的细胞凋亡率分别为15.16±1.49％、71.36±0.82％、75.32±2.36％与84.30±0.91％,各组间有统计学差异(P＜0.05)；④PCI-32765和bonezomib单药处理Raji、Ramos细胞后,细胞内Btk、NFκB、Bcl-xl及c-.IAP1的表达水平较对照组降低,Caspase-3的表达水平升高,两药联用后,作用增强.结论:PCI-32765和bonezomib可以协同抑制Raji与Ramos细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与抑制Btk、NFκB的活性,下调Bcl-xl及c-IAP1等抗凋亡蛋白,同时上调Caspase-3等凋亡蛋白的表达而发挥作用.

蛋白酶体抑制剂诱导多发性骨髓瘤RPMI8226细胞凋亡及对Notch 1和NF-κB表达的影响

多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)的发生、发展与骨髓微环境关系密切,有多种信号通路参与.Notch信号是造血微环境调节造血细胞增殖分化的重要信号通路,其中Notch 1与血液肿瘤的发生、发展较为密切.骨髓瘤是高度依赖NF-κB的恶性肿瘤,后者与肿瘤细胞的发生和转移、增殖和凋亡、耐药相关.已证实NF-κB2家族是Notch信号通路-的一个靶基因.蛋白酶体抑制剂Bortezomib已获美国FDA批准用于治疗难治及复发多发性骨髓瘤,但其诱导骨髓瘤细胞凋亡的机制尚未完全明确.本研究探讨bortezomib诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡和对Notch 1、NF-κB表达水平的影响,采用透射电子显微镜检、流式细胞术及原位缺口末端标记技术观察药物对MM细胞凋亡的影响,用RT-PCR法和免疫荧光细胞化学染色分析分别检测细胞凋亡时Notch 1及NF-κB的表达情况.结果表明:RPMl8226细胞高表达Notch 1和NF-κB;随着bortezomib作用浓度的增高,RPMI8226细胞出现典型的凋亡改变,Notch 1的表达逐渐降低,NF-κB在胞核表达减少,胞浆表达增多.这种改变在浓度升高到一定数值时与对照相比具有显著性差异(P＜0.05).结论:bortezomib治疗多发性骨髓瘤机制中有Notch 1和NF-κB两条通路的参与,二者可能存在一定的联系,提示Notch 1信号可能作为MM治疗的潜在靶点,为相关新药的研发提供一定实验基础.

蛋白酶体抑制剂bortezomib对胆道梗阻大鼠肝脏的保护作用

目的探讨蛋白酶体抑制剂bortezomib对胆道梗阻大鼠肝脏的保护作用.方法将30只大鼠随机分为假手术组(SO组)、胆道梗阻对照组(Con组)和bortezomib实验组(Bor组).Con组通过胆总管结扎建立大鼠胆道梗阻模型,Bor组同法结扎胆总管并于术前1 d、术后第3天腹腔注射bortezomib,假手术组仅行剖腹和胆总管游离.所有大鼠均于术后7 d处死,处死前采集血清测定血清丙氨酸转氨酶(ALT),总胆红素(TB)和总胆汁酸(TBA)水平.免疫组化染色测定肝组织NF-κBp65含量.逆转录-聚合酶联反应测定肝脏组织中TNF-α mRNA水平.结果Con组与Bor组的TB和TBA水平并差异无统计学意义(P＞0.05),而Bor组的ALT水平[(92.4±21.4)μmo1/L]明显低于Con组[(145.7±33.5)μmol/L],P＜0.05.Bor组的NF-κB p65亚基阳性染色率(11.6%±2.7%)明显低于Con组(15.5%±4.3%),P＜0.05.而逆转录-聚合酶联反应发现,Bor组TNF-αmRNA相对表达量(1.0±0.2)明显低于Con组(1.3±0.4),P＜0.05.结论bortezomib可以通过抑制NF-κB的活化减少炎症反应的发生,从而减轻因胆道梗阻引起的肝脏损害.

Bortezomib对非小细胞肺癌细胞系增殖、细胞周期及核转录因子活性的影响

目的 探讨Bortezomib对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞周期、增殖、凋亡及核转录因子(NF-κB)的影响.方法 采用MTT法检测Bortezomib对细胞生长的抑制作用,流式细胞仪分析Bortezomib对细胞周期及凋亡的影响,Western blotting检测Bortezomib对NF-κB、IκB和Bcl-2表达的影响.结果 随着作用时间和药物浓度的增加,Bortezomib对NSCLC细胞的生长抑制作用越明显.25nmol/L的Bortezornib作用48h可以使细胞周期阻滞在G2/M期.6种NSCLC细胞中均有NF-κB出的基础性表达,且胞核中NF-κB的表达水平与胞质IκB的表达水平呈反比.Bortezomib对细胞中NF-KB的基础表达水平没有影响,但能明显抑制TNF-α诱导的NF-κB的核转位,并下调抗凋亡蛋白Bcl-2的水平,且这种抑制作用呈时间和剂量依赖趋势.结论 Bortezomib能够抑制NSCLC 细胞增殖,并诱导凋亡发生,可能是通过NF-κB通路发挥作用.

新一类蛋白酶体抑制剂bortezomib

综述了bortezomib的药理作用、药动学及临床评价.本品是一种新型的蛋白酶体抑制剂,临床上用于复发性和难治性多发性骨髓瘤的治疗.

硼替佐米的少见毒副作用

硼替佐米(bortezomib)是第1种成功应用于临床的蛋白酶体抑制剂.在硼替佐米治疗复发/难治的多发性骨髓瘤(MM)的Ⅱ期临床试验中,总有效率达到30%～37%,硼替佐米的出现是近年来MM治疗上的重要进展之一[1,2],硼替佐米常见的不良反应包括虚弱(65%)、恶心(64%)、腹泻(51%)、食欲下降(43%)、便秘(43%)、血小板减少(43%)、周围神经炎(37%)、发热(36%)、呕吐(36%)和贫血(32%)等,这些毒副反应多较轻微且易耐受[1-3].

硼替佐米为主方案治疗多发性骨髓瘤患者的临床研究

目前多发性骨髓瘤(MM)常用的化疗方案有MP(马法兰+泼尼松)、VAD(长春新碱、阿霉素及地塞米松)等,但上述方案治疗起效慢,完全缓解率低,反应持续时间短[1],临床疗效不尽人意.2009年美国国家综合癌症网(National Comprehensive Cancer Network,NCCN)MM诊治指南中将硼替佐米推荐为MM的一线用药[2].近年来多项研究发现其在MM的治疗中取得了较好的疗效[3-4].为了进一步观察硼替佐米治疗MM患者的疗效,我们将39例MM患者治疗的结果报道如下.

Eat more‘green’ or eat‘ifve a day’ is one of the most important healthy lifestyle behaviours in the 21 century. Aiming to ifght cancer effectively, more than half patients use vitamins or herbs concurrently with conventional anticancer treatment. Flavonoids or polyphenols existing in vegetables, fruits and green tea are common plant pigments with antioxidant properties and considered acting as cancer preventing or anti-cancer agents. Recently it was found that some lfavonoids and vitamin C in diet or supplements have antagonistic effect with the anti-cancer drug bortezomib. Bortezomib is a speciifc inhibitor for proteasome and is currently used for treatment of relapsed and refractory multiple myeloma. Despite its successful rates in treating multiple myeloma and other solid tumors, it is unable to kill leukemic cells in the blood. It was recently revealed that some lfavonoids and vitamin C present in green leaves and green teas in the blood can neutralize bortezomib by directly interaction between two chemicals. Here we summarize why dietary lfavonoids should be avoided in patients who take bortezomib as chemotherapeutic drug.

蛋白酶体抑制剂Bortezomib对宫颈癌Hela细胞的体外作用

目的 探讨蛋白酶体抑制剂Bortezomib对宫颈癌Hela细胞存活率的影响.方法 MTT检测Bortezomib对宫颈癌Hela细胞体外生长及增殖的影响；并用Western印迹、RT-PCR检测NF-kB(P65)蛋白和mRNA表达水平的变化.结果 (1)MTT检测结果显示:与对照组相比,Bortezomib 1.25 μmol/L组[(84.9±0.08)％]、Bortezomib 2.50 μmol/L组[(67.1±0.12)％]、Bortezomib 5.00 μmol/L组[(51.6±0.11)％]、Bortezomib 10.00 μmol/L组[(41.3±0.13)％]及Bortezomib 20.00 μmol/L组[(20.8±0.12)％]Hela细胞增殖率明显降低(P＜0.05).(2)Westem印迹检测结果表明:随着Bortezomib浓度的增高,NF-kB(P65)蛋白表达量有剂量依赖性的降低趋势(P＜0.05).(3)RT-PCR结果显示,与对照组相比,随着Bortezomib浓度的增加,NF-kB(P65) mRNA的表达水平明显降低(P＜0.05).结论 蛋白酶体抑制剂Bortezomib能够体外抑制宫颈癌Hela细胞的短期增殖,其机制与下调NF-kB(P65)的表达密切相关.

蛋白酶体抑制剂Bortezomib对人脑胶质瘤增殖抑制及诱导凋亡作用

目的 探讨Bortezomib对体外SHG-44胶质瘤细胞株形态的影响及诱导凋亡作用.方法 Bortezomib体外处理培养的SHG-44胶质瘤细胞后,采用MTT法检测细胞增殖、HE染色光镜观察、Hochest33342染色荧光显微镜观察以及锇铀铅染色透射电镜观察胶质瘤细胞的形态变化,流式细胞术分析细胞凋亡率及细胞周期.结果 MTT显示Bortezomib抑制SHG-44胶质瘤的增殖与浓度和时间呈相关性;6.0 μmol/L Bortezomib处理SHG-44胶质瘤细胞24 h后,光镜、荧光显微镜、透射电镜下均可见凋亡形态学改变.流式细胞术分析细胞凋亡率为(20.31±2.84)% ( P＜0.01);细胞周期变化显示S期细胞减少到(17.65±6.38)% (P＜0.01),细胞周期被阻滞于G_0/G_1期和G_2/M期,分别为(68.51±5.62) % (P＜0.01)和(14.75±2.48)% (P＜0.01).结论 Bortezomib抑制C6胶质瘤细胞的增殖并诱导其凋亡.

多发性骨髓瘤治疗药物研究进展

目前多发性骨髓瘤的治疗仍是一个世界性的难题,特别是对于晚期、复发和耐药患者尚无令人满意的治疗药物.近年来以骨髓瘤发病机制中的特定环节为靶点,开发出一系列药物,如沙利度胺、Revimid、bortezomib和三氧化二砷等,在临床研究中显示出一定的疗效.

抗肿瘤治疗新药蛋白酶体抑制剂Bortezomib的临床应用

蛋白酶体抑制剂(proteasome inhibitor)通过抑制26S蛋白酶体活性,激活胱冬肽酶(caspase)-3诱导凋亡,抑制核因子(NF)-κB依赖性基因转录,影响细胞内多种信号级联,破坏维持机体正常内稳态的机制导致肿瘤细胞生长延迟或死亡.Velcade(化学名Bortezomib,前用名PS-341)是美国FDA批准的第一个已供临床应用的蛋白酶体抑制剂.临床用于治疗初治或复发性、难治性多发性骨髓瘤,其次为造血组织恶性肿瘤及进展性实体瘤等显示具有良好的抗瘤活性,安全性好,不良反应少.其临床应用研究正在迅速扩展中.

硼替佐米治疗白血病的研究进展

硼替佐米(bortezomib)是第一个用于临床的蛋白酶体抑制剂,通过抑制"泛素-蛋白酶体通路"抑制细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡,单用治疗多发性骨髓瘤有效率约40%,联合地塞米松治疗难治性或复发性多发性骨髓瘤有效率60%~80%[1,2].Kelley等[3]的研究,发现硼替佐米在体外可诱导部分白血病细胞株发生凋亡,提示有抗白血病效应.随着研究的深入,硼替佐米单药或联合其他化疗药物已逐渐应用于白血病的治疗.现就硼替佐米的抗肿瘤机制及其治疗白血病的现状做一综述.

蛋白酶体及其抑制剂的研究进展

蛋白酶体抑制剂通过阻断泛素蛋白酶体通路,影响细胞内多个周期蛋白的降解,诱导细胞凋亡.体内外试验已显示蛋白酶体抑制剂具有广泛抗肿瘤作用.蛋白酶体抑制剂Bortezomib已通过美国FDA批准应用于临床治疗多发性骨髓瘤.该文就蛋白酶体结构、蛋白酶体抑制剂作用途径、促凋亡作用机制的研究成果和现阶段临床应用作一综述.

硼替佐米和3-甲基腺嘌呤对人乳腺癌细胞株MCF-7的抑瘤效应

蛋白质的降解对维持细胞正常功能至关重要,泛素-蛋白酶体和溶酶体自噬是细胞内蛋白质降解的两条主要通路[1,2].近年来,抑制肿瘤细胞蛋白酶体活性已成为一种新的化学治疗方法,一些化合物已被证实可以通过抑制蛋白酶体活性而诱导肿瘤细胞死亡[3,4].肿瘤自噬存在双重效应,一方面由于肿瘤组织的微环境乏氧且缺乏营养而有利于诱导肿瘤细胞自噬[5],另一方面,肿瘤细胞中又常常出现促自噬基因的失活性突变及抗自噬基因的活化[5,6],而不利于肿瘤细胞自噬.本研究观察蛋白酶体抑制剂硼替佐米(Bortezomib)对乳腺癌MCF-7细胞增殖和自噬的影响和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA)抑制Bortezomib诱导自噬、增强Bortezomib抑制MCF-7细胞增殖的作用.

Bortezomib对胃癌细胞增殖、细胞周期及核转录因子活性的影响

目的 观察Bortezomib对胃癌细胞周期、增殖、凋亡及核因子-κB (NF-κB)的影响.方法 采用噻唑蓝(MTT)法检测Bortezomib对细胞生长的抑制作用,流式细胞仪分析Bortezomib对细胞周期及凋亡的影响,Western blot检测Bortezomib对NF-κB、NF-κB抑制蛋白(IκB)和B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)表达的影响.结果 (1)Bortezomib对胃癌细胞的抑制作用具有剂量依赖性,随浓度的增加抑制作用增强(t=7.418、5.131和6.438,P=0.001、0.001和0.005).(2)95D细胞出现明显的凋亡峰,与对照组G2/M期细胞所占的比例分别为(36.97±11.46)％和(19.17±5.37)％,两者比较差异有统计学意义(P =0.031);973细胞没有凋亡峰,与对照组比较,G2/M期细胞所占比例分别为(40.34±13.83)％和(13.10±4.72)％明显增加,两者比较差异有统计学意义(P=0.037);GLC82细胞既没有出现凋亡峰,也没有出现细胞周期明显改变,G2/M期细胞比例与对照组分别为(20.37±6.14)％和(12.15±2.63)％,两组比较差异无统计学意义(P=0.173).(3)胃癌细胞中均有NF-κB的基础性表达,且胞核中NF-κB的表达水平与胞质IκB的表达水平呈反比.(4)Bortezomib能明显下调抗凋亡蛋白bcl-2的水平,且这种抑制作用呈时间和剂量依赖趋势.不同浓度的Bortezomib作用后,细胞核中NF-κB的表达水平发生不同程度下降,差异有统计学意义(t=6.373、4.273、3.841和4.414,P=0.006、0.018、0.026和0.015).结论 Bortezomib能够抑制胃癌细胞增殖,并诱导凋亡发生,可能是通过NF-κB通路发挥作用.

硼替佐米在血液病中的应用进展

硼替佐米(bortezomib)是一种合成的二肽硼酸衍生物,已经证实硼替佐米是NF-к B强有力的抑制剂.2005年12月硼替佐米被FDA批准用于治疗接受过至少一种先前治疗的多发性骨髓瘤.

Bortezomib或联合三尖杉酯碱、三氧化二砷对急性髓系白血病原代细胞增殖作用的影响

目的:探讨bortezomib单独或联合三尖杉酯碱(HT)、三氧化二砷(As2O3)对初发及难治/复发急性白血病原代细胞的增殖作用.方法:以初发及难治/复发急性髓系白血病原代细胞为研究对象,分别应用bortezomib、HT、As2O3单独或联合处理细胞后,使用MTT法观察细胞增殖活力.结果:10～500 nmol/L bortezomib对初发及难治/复发性白血病患者原代细胞均有抑制作用,且呈明显剂量依赖关系,随浓度增大抑制效果逐渐增强.作用于初发白血病原代细胞时,Bortezomib与HT联合与各单药处理组相比,抑制率无明显提高,而联合As2O3时其抑制率优于单药处理组;作用于难治/复发白血病原代细胞时,bortezomib与HT或As2O3联合效果均呈现相加作用,其中与As2O3联合效果优于与HT联合者.结论:Bortezomib能够抑制初发及难治/复发急性白血病原代细胞增殖,与As2O3联合作用后抑制效果明显增强.

蛋白酶体抑制剂bortezomib治疗多发性骨髓瘤的作用机制和临床试验

蛋白酶体是细胞调节信号的中心通道,可以降解和活化多种调节蛋白;蛋白酶体抑制剂可通过抑制催化中心活性,阻断大量调节蛋白的降解,引起细胞内信号系统的紊乱和超负荷,导致细胞生长的抑制,终使肿瘤进展过程延缓甚至停滞.Bortezomib作为第一个选择性的蛋白酶体抑制剂在多发性骨髓瘤(MM)中有良好的治疗反应率和较少的毒副作用,近年来得到广泛研究.