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Velcade诱导多发性骨髓瘤细胞株U266细胞凋亡研究
为了研究velcade诱导多发性骨髓瘤细胞株U266细胞凋亡效应及机制,采用台盼蓝拒染法检测2、10、50和100 nmol/L velcade处理U266细胞活率,用流式细胞术分析Annexin-V、线粒体跨膜电位(Δψm)和氧自由基(ROS),用半定量RT-PCR法检测bcl-2 mRNA的表达. 结果表明:velcade抑制U266细胞增殖;诱导U266细胞凋亡,24小时Annexin-V阳性细胞比例增高,△ψM降低;12小时时活性氧明显增高,荧光强度增强;抗凋亡基因bcl-2表达降低. 结论:velcade对U266细胞具有增殖抑制和杀伤作用,其可通过内源性细胞凋亡信号通路诱导U266细胞凋亡.
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蛋白酶体抑制剂Velcade诱导肝癌细胞HepG2凋亡
目的 探讨蛋白酶体抑制剂Velcade诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的作用和机制.方法 以不同浓度Velcade处理HepG2细胞24 h和48 h.四甲基偶氮唑蓝比色法评价细胞生长情况;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot测定caspase 3改变;RT-PCR检测Bcl-2家族、Cyclin A和Cyclin D mRNA的表达.结果 不同Velcade浓度(32、64、128、256、512 nmol/L)处理HepG2细胞48 h后,细胞活性较对照组明显减少(分别是91.4%±2.1%、75.0%±3.7%、57.3%±1.6%、52.7%±1.6%和31.4%±2.6%),与对照组(100.0%±1.7%)比较具有显著性差异(P＜0.05).128 nmol/L的Velcade处理HepG2细胞,48 h流式细胞仪检测结果显示SubG1细胞百分数明显升高,SubG1细胞百分数(27.3%±5.3%),与对照组(4.3%±0.5%)差别显著(P＜0.05),同时,Pro-caspase 3明显下降;但Velcade对Bcl-2家族表达无明显影响;Velcade诱导HepG2细胞G2/M阻滞,抑制Cyclin A和Cyclin D表达.结论 Velcade诱导肝癌细胞凋亡不通过改变Bcl-2家族表达,可能存在其它途径;Velcade诱导肝癌细胞G2/M周期阻滞与调节通过下调Cyclin A和Cyclin D表达相关.
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抗肿瘤治疗新药蛋白酶体抑制剂Bortezomib的临床应用
蛋白酶体抑制剂(proteasome inhibitor)通过抑制26S蛋白酶体活性,激活胱冬肽酶(caspase)-3诱导凋亡,抑制核因子(NF)-κB依赖性基因转录,影响细胞内多种信号级联,破坏维持机体正常内稳态的机制导致肿瘤细胞生长延迟或死亡.Velcade(化学名Bortezomib,前用名PS-341)是美国FDA批准的第一个已供临床应用的蛋白酶体抑制剂.临床用于治疗初治或复发性、难治性多发性骨髓瘤,其次为造血组织恶性肿瘤及进展性实体瘤等显示具有良好的抗瘤活性,安全性好,不良反应少.其临床应用研究正在迅速扩展中.
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Velcade影响K562细胞基因表达谱的分子机制
目的 应用生物信息学方法探索Velcade影响K562细胞基因表达谱的分子机制.方法 提取并扩增Velcade处理组和溶剂对照组的K562细胞RNA,与22KAgilent Human 1A基因芯片杂交,用Agilent Feature Extraction软件采集扫描数据,再以GeneSifter,GATHER等基因芯片数据分析工具,对差异表达基因进行基因本体分类、KEGG通路分析、蛋白互作网络分析和文献挖掘.结果 获得228个差异表达基因,其中上调84个,下调144个.下调糜酶1基因幅度大.对数比值达10.80倍,干扰素α-21基因也下调2.31倍.本体分类显示,衰老过程、白细胞活动等过程显著增强:KEGG通路分析显示,JAK-STAT信号通路,自然杀伤细胞介导的细胞毒作用和抗原处理与提呈等通路受显著影响;蛋白互作网络揭示泛素依赖的蛋白质降解通路、抗原提呈和免疫反应、JAK-STAT信号通路等处于网络中重要位置;文献挖掘显示差异表达基因与白血病、细胞凋亡、细胞周期、蛋白酶体、抑制剂、衰老和IκB等关键词高度关联.结论 Velcade可能通过抑制NF-κB和JAK-STAT等促进细胞存活的信号通路,增强细胞毒作用,诱导肿瘤细胞凋亡;Velcade还可能参与抗原加工与提呈、免疫反应、炎症反应等过程;糜酶1基因可能是Velcade发挥抗肿瘤作用的关键靶标.
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STI571、三氧化二砷和Velcade对bcr/abl+-CD34+细胞增殖、凋亡的影响
目的 研究STI571、三氧化二砷(As2O3)和Velcade在单独及联合应用时对bcr/abl+-CD34+细胞增殖、凋亡的影响.方法 提取慢性粒细胞白血病患者骨髓的bcr/abl+-CD34+细胞,用STI571、As2O3、Velcade单独及联合处理96 h,通过CCK-8分析及流式细胞术分别检测细胞增殖、凋亡的变化,并用Hoechst33342染色及荧光显微镜技术观察凋亡细胞形态学改变.同时检测上述方案对正常骨髓CD34+细胞的抑制作用.结果 STI571、As2O3及Velcade对bcr/abl+-CD34+细胞的作用呈剂量依赖性,其中在低浓度时以抑制增殖作用为主,促凋亡作用不明显.当0.25～2 μmol/L STI571分别与2.5 μmol/LAs2O3及15nmol/L Velcade联合后,抑制率和凋亡率均显著提高,呈相加或协同作用,且对正常CD34+细胞的抑制作用无进一步增强.结论 As2O3及Velcade与STI571联合能够增强对BCR/ABL+-CD34+细胞的作用,具有一定临床意义.
