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Chfr基因在急性白血病骨髓细胞中表达的研究
为了探讨急性白血病(AL)患者骨髓细胞中有丝分裂早期检查点Chfr基因的表达及其意义,对46例初诊未治疗的AL患者骨髓单个核细胞,用RT-PCR和免疫组织化学的方法检测Chfr基因mRNA及蛋白的表达,并与正常人骨髓单个核细胞进行对照.结果表明:免疫组织化学和RT-PCR分析显示,28例急性髓细胞白血病(AML)中的15例,18例急性淋巴细胞白血病(ALL)中的13例骨髓单个核细胞Chfr基因mRNA和蛋白的表达与正常对照相比显著下降,同时Chfr基因表达异常病例染色体检查存在核型异常.结论:急性白血病骨髓细胞有丝分裂检查点Chfr基因表达受损,可能在白血病发病中具有重要作用.
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CHFR基因与消化道肿瘤关系的研究进展
CHFR(checkpoint with FHA and ring finger),一种在人类癌症中灭活的新的细胞周期检查点基因,在有丝分裂应激时,延迟染色体的浓集、阻止细胞进入有丝分裂中前期.研究表明,CHFR在爪蟾中是Plk1的泛素连接酶,在哺乳动物细胞中主要通过抑制Cyclin B1进入细胞核、调节Aurora-A的水平及与P38应激激酶相互作用,阻止细胞进入有丝分裂前期.USP7介导的CHFR去泛素化致其累积可能对于CHFR激活是一个关键的调节步骤.在消化道肿瘤中,CHFR表达由于CPG岛甲基化而沉默.本文对CHFR基因的结构、编码蛋白的功能及其与消化道肿瘤关系的研究进展作一综述.
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CHFR和mp53基因编码蛋白在胃癌组织中的表达及临床病理学意义
目的:观察CHFR和P53蛋白的表达与胃癌临床病理学特征的关系,探讨其在胃癌发生发展过程中的作用及相关的分子机制.方法:利用组织芯片制作仪(美国),构建成5个包括151例胃癌及101例与其配对的正常胃黏膜、肠化生或不典型增生的组织芯片蜡块.采用Envision免疫组化二步法检测151例胃癌及101例配对癌旁胃黏膜组织中CHFR蛋白和P53蛋白的表达.结果:CHFR蛋白在非癌胃黏膜组织中阳性表达率为85.25%(52/61),在胃癌组织中阳性表达率显著降低(49.67%,75/151,P＜0.05);CHFR表达下调或缺失与胃癌患者的性别显著相关,女性患者胃癌组织中CHFR表达缺失率显著高于男性患者(64% vs 43.56%,P＜0.05).Borrman Ⅲ+Ⅳ型胃癌组织中CHFR表达缺失率显著高于Borrman Ⅰ+Ⅱ型胃癌(57.14% vs34.78%,P＜0.05).虽然不同组织学类型胃癌之间CHFR的表达无统计学差异,但本研究发现胃印戒细胞癌组CHFR表达缺失率高(71.43%).胃癌组织中CHFR蛋白的表达缺失与肿瘤浸润深度、淋巴结转移以及mP53蛋白表达未见显著相关性(P＞0.05).结论:有丝分裂前期检查点CHFR基因表达下调或缺失在胃癌中是频发事件.可能参与胃癌的发生,其与女性、弥漫浸润型胃癌发生发展的关系可能更为密切.
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子宫内膜癌抑癌基因研究进展
子宫内膜癌是妇女常见的恶性肿瘤之一,发病率有逐年上升的趋势.随着分子生物学和免疫学的发展,关于子宫内膜癌分子水平的致癌机制研究日益深入,如癌基因、抑癌基因、DNA错配修复基因、雌激素代谢酶相关基因、甾体激素受体基因和细胞周期调控蛋白等.综述目前研究热点——抑癌基因的进展,为进一步探讨子宫内膜癌的发生发展、临床治疗及预后的判断提供重要依据.
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胃癌组织RUNX3和CHFR基因启动子高甲基化的研究
目的:检测胃癌患者肿瘤组织及其相应的癌旁组织中RUNX3和CHFR基因启动子区域甲基化状态,并探讨其甲基化状态的改变与临床病理特征的关系.方法:将2007年3月至2007年9月间42例胃癌患者(男:女=34:8)的手术切除标本分为两组:一组是肿瘤组织,另一组是相应癌旁组织.胃癌患者术前均未行放疗和化疗,癌旁组织取自肿瘤组织5cm以外.采用酚-氯仿抽提法提取组织DNA,甲基化特异性PCR法(MSP)检测肿瘤组织及相应癌旁正常组织(各42例)中RUNX3和CHFR启动子区域甲基化状态,并用1.5%的琼脂糖凝胶对PCR产物进行电泳分析.结果:54.7%和40.4%的胃癌组织中分别存在RUNX3和CHFR基因异常甲基化,而相应的癌旁正常组织中这两个基因的甲基化率均是7.1%,癌组织中RUNX3和CHFR基因的异常甲基化率显著高于相应的癌旁正常组织(PRUNX3<0.05,PCHFR<0.05).胃癌组织中该两基因的甲基化与肿瘤大小显著相关(PRUNX3<0.05,PCHFR<0.05),但与患者年龄(PRUNX3=0.711,PCHFR=0.845)、性别(PRUNX3=0.764,pCHFR=0.849)、肿瘤浸润深度(PRUNX3=0.276,PCHFR=0.542)、组织分化程度(PRUNX3=0.491,PCHFR=0.695)、病理分期(PRUNX3=0.555,PCHFR=0.237)以及淋巴结受累(PRUNX3=0.155,PCHFR=0.124)等临床病理特征无关.结论:RUNX3和CHFR基因启动子区的异常甲基化是胃癌发生发展中的频繁事件,在胃癌的发生中具有肿瘤特异性.通过检测胃黏膜中RUNX3和CHFR的甲基化状态,对于胃癌的早期诊断具有一定的参考价值.
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儿童B细胞性非霍奇金淋巴瘤中CHFR的表达及其作用机制
目的 探究儿童B细胞性非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)中CHFR(check point with FHA and ring finger)基因表达及其作用机制及临床病理特征.方法 选择B-NHL组织90例(B-NHL组)和淋巴结反应性增生组织50例(对照组)作为研究对象,选择荧光定量PCR方法对样本进行检测,对其CHFR基因mRNA表达水平进行评估.结果 ①B-NHL组CHFR基因mRNA表达量明显低于对照组,数据差异有统计学意义(t=-3.346,P＜0.05);②B-NHL组CHFR基因mRNA表达量在性别、有无全身症状、乳酸脱氢酶水平以及ECOG评分项目中进行比较,各组间数据差异均无统计学意义(P＞0.05);③将B-NHL患儿进行Ann/Arbor分期,Ⅰ+Ⅱ期患儿CHFR基因mRNA表达量明显高于Ⅲ+Ⅳ期患儿,差异有统计学意义(P＜0.05).对B-NHL患儿进行IPI评分,0-1分组患儿CHFR基因mRNA表达量明显高于2-5分组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 在儿童B-NHL发病过程中,CHFR表达水平发挥一定作用,CHFR作用机制与B-NHL恶性程度及进展具有相关性.
关键词： B细胞型非霍奇金淋巴瘤 Chfr基因 实时荧光定量PCR -
CHFR,PARP-1基因对B细胞淋巴瘤Raji细胞增殖和凋亡的影响
目的:探讨CHFR与聚(ADP-核糖)聚合酶1(PARP-1)基因对B细胞淋巴瘤Raji细胞增殖和凋亡的影响.方法:用5-Aza-dC处理Raji细胞,后通过qRT-PCR检测CHFR的mRNA表达水平,western blot评估CHFR、PARP-1的蛋白表达.经CHFR慢病毒转染Raji细胞后,用qRT-PCR和western blot评估RAJI细胞中的CHFR、PARP-1变化.通过CCK-8法测定细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期的变化.结果:与对照组相比,经5-Aza-dC处理Raji组的CHFR mRNA表达显著上调(P＜0.01),PARP-1mRNA水平和蛋白表达水平明显降低(P＜0.05).与对照组相比,ShRNA组CHFR的mRNA表达显着下调(均P＜0.01),PARP-1mRNA和蛋白表达水平升高(P＜0.05).CCK结果显示CHFR ShRNA组细胞活力明显低于对照组(P＜0.05).流式细胞术结果显示CHFR沉默后细胞凋亡率降低(P＜0.05).结论:CHFR可能通过PARP-1调控B淋巴细胞的增殖和凋亡.
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CHFR基因在B细胞淋巴瘤细胞中的表达及意义
目的:探讨CHFR基因在B细胞淋巴瘤Raji细胞中的表达,以及CHFR基因甲基化对Raji细胞增殖和凋亡中所产生的影响.方法:体外培养人B细胞淋巴瘤细胞株Raji细胞,用不同浓度的去甲基化试剂5-氮杂-2脱氧胞苷处理Raji细胞株,通过RT-PCR检测CHFR基因表达水平的变化,通过MS-PCR检测CHFR基因甲基化变化,CCK法及流式细胞术检测Raji细胞增殖及凋亡变化.结果:CHFR基因在Raji细胞中出现弱表达,经去甲基化试剂处理后CHFR基因表达水平增高,随药物浓度增加Raji细胞的抑制率及凋亡率增高.结论:5-氮杂-2脱氧胞苷可以恢复CHFR基因表达水平,抑制Raji细胞的增殖,促进凋亡.CHFR基因在细胞增殖起负向调控的作用.
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CHFR基因CpG岛甲基化对食管癌Eca109细胞增殖和凋亡的影响
目的:研究CHFR基因启动子甲基化状态与食管癌Ecai09细胞增殖和凋亡的关系.方法:分别用不同浓度(2、5、10 μmol/L)5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-CdR)处理Eca109细胞,未经药物处理的细胞为对照组.甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测CHRF基因CpG岛的甲基化状态,RT-PCR检测CHFR mRNA的表达情况,MTT法及流式细胞术检测不同浓度5-Aza-CdR处理对Eca109细胞增殖及凋亡的影响.结果:对照组Eca109细胞CHFR CpG岛处于高甲基化状态,5-Aza-CdR处理后CHFR CpG岛可发生不同程度的剂量依赖性的去甲基化.对照组Eca109细胞无CHFR mRNA表达,5-Aza-CdR处理组(2、5、10μmol/L)CHFR mRNA相对表达量显著增加(0.174±0.010、0.221±0.013、0.356±0.014).不同浓度5-Aza-CdR处理后,Eca109细胞增殖受到抑制[作用72 h时的抑制率分别为(30.87±0.74)、(44.60±0.79)% 、(56.67±0.35)%],细胞凋亡显著增加[(7.46±1.46)%、(16.27±1.60% 、(25.29±2.25)%vs(1.83±0.41)%,P<0.01].结论:食管癌Eca109细胞经5-Aza-CdR处理后,CHFR基因CpG岛发生部分去甲基化,出现CHFRmRNA表达,并抑制Ecal09细胞增殖和促进细胞凋亡.
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CHFR基因在人肝癌HepG2细胞中的表达与作用
目的:研究CHFR基因在人肝癌细胞株HepG2中的表达.以及CHFR基因甲基化对HepG2细胞生长与集落形成的影响.方法:采用去甲基化剂5-氮-2-脱氧胞苷处理人肝癌细胞株HepG2,半定量RT-PCR检测CHFR在HepG2细胞中的表达变化,CCK法和平板集落形成试验分析HepG2细胞生长增殖情况的改变.结果:CHFR在HepG2细胞中表达缺失;经Aza去甲基化处理后,CHFR在HepG2细胞中逐渐恢复表达,肿瘤细胞抑制率和集落形成抑制率都逐渐增高,均存在剂量-反应关系;且CHFR表达水平与HepG2细胞抑制率、集落形成抑制率均呈正相关.结论:CHFR对于肝癌细胞的生长增殖能力发挥负向调控作用.
关键词： Chfr基因 HepG2细胞 5-氮-2-脱氧胞苷 DNA甲基化 -
CHFR基因启动子区超甲基化在食管癌临床意义中的研究进展
CHFR是一个新的有丝分裂早前期检查点基因,在有丝分裂应激时,延迟染色体凝集和中心体分离,阻止细胞进入有丝分裂期,其表达增强细胞对应激的生存能力.研究显示,CHFR在人正常组织中广泛表达,而在肿瘤组织中表达缺失,如胃癌、子宫内膜癌、宫颈癌等.CHFR基因启动子区超甲基化是其表达沉寂的主要原因,并与肿瘤的发生发展有关,在食管癌中已有相关报道.现对CHFR基因启动子区超甲基化在食管癌的发生、诊断、治疗及判断预后上的意义做一综述.
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5-氮杂-2'-脱氧胞苷对胃癌AGS细胞CHFR基因去甲基化作用及意义
目的 观察5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对胃癌AGS细胞CHFR基因去甲基化的作用,并探讨其临床意义.方法 分别采用BSP和RT-PCR技术检测5-Aza-CdR处理前后胃癌AGS细胞CHFR基因启动子甲基化状态及其mRNA.结果 AGS细胞CHFR基因启动子在5-Aza-CdR处理前呈现高甲基化状态(甲基化率≥60%),其mRNA表达完全缺失;5-Aza-CdR处理后则表现为低或无甲基化状态(甲基化率≤20%),其mRNA表达恢复正常.结论 CHFR基因启动子在AGS细胞中呈高甲基化状态,5-Aza-CdR能显著逆转其CHFR基因异常甲基化,诱导CHFR基因表达,为胃癌的治疗提供新思路.
关键词： 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 Chfr基因 去甲基化 胃癌 胃癌细胞 -
大肠癌 FHIT 和 CHFR基因甲基化状态分析
目的：分析大肠癌组织中FHIT和CHFR基因启动子区甲基化水平及其临床意义。方法：采用甲基化特异性聚合酶链反应（methylation specific PCR，MSP）技术检测46例大肠癌及癌旁正常组织的FHIT和CHFR基因启动子区甲基化状态。结果：大肠癌组织的FHIT和 CHFR 基因甲基化率分别为54．35％、49．15％，高于癌旁组织13．04％、8．69％，组间差异均有统计学意义（P＜0．05），FHIT和CHFR基因甲基化状态与分化程度、淋巴结转移有显著相关性（P＜0．05），与年龄、性别、肿瘤部位、Dukes分期无相关性（P＞0．05）。结论：FHIT和CHFR基因启动子区的甲基化可能与大肠癌的发生、发展及预后相关。
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CHFR基因在鼻咽癌中异常甲基化的研究*
目的:检测鼻咽癌中CHFR基因的转录表达及其启动子区甲基化状态,探讨其在鼻咽癌中的转录失活机制及其意义;评价鼻咽拭子检测CHFR基因甲基化状态在鼻咽癌诊断和治疗中的意义.方法:RT-PCR检测鼻咽癌细胞株中CHFR基因的转录表达水平.甲基化特异性PCR检测鼻咽癌细胞株、鼻咽癌活检组织、正常鼻咽组织及配套的鼻咽拭子样本中CHFR基因的甲基化状态.亚硫酸氢盐测序分析鼻咽癌细胞株和鼻咽癌组织、正常鼻咽组织中CHFR基因启动子区的具体甲基化状态.5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-aza-dC)处理鼻咽癌细胞株后观察CHFR基因转录表达水平的改变情况.结果:CHFR基因在鼻咽癌细胞株中转录表达下调或沉默;CHFR基因在鼻咽癌细胞株和鼻咽癌组织中均呈高频率、肿瘤特异性的甲基化.鼻咽癌患者鼻咽癌组织和配套鼻咽拭子样本中CHFR基因的甲基化频率分别为65.5%和63.8%,两者符合率达86.2%.鼻咽癌组织和细胞株中CHFR基因启动子区大部分的CpG位点为甲基化,而正常组织全为非甲基化;5-aza-dC可显著恢复鼻咽癌细胞株中CHFR基因的转录表达.结论:鼻咽癌中CHFR基因由于启动子区CpG岛的DNA甲基化而转录表达下调.鼻咽癌中CHFR基因的甲基化与患者T分期相关.检测鼻咽拭子中甲基化的CHFR基因可望作为鼻咽癌无创诊断的手段之一.
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5-Aza-dC和TSA对人喉癌细胞系中CHFR基因启动子甲基化及mRNA表达水平的影响
目的:探讨5-杂氮-2'脱氧胞苷(5-Aza-dC)和制霉菌素A(TSA)对人喉癌细胞系中CHFR基因启动子区甲基化与mRNA表达水平的影响.方法:采用荧光定量PCR技术和甲基化特异性PCR技术检测5-Aza-dC和TSA处理前后的Hep-2人喉癌细胞系基因CHFR启动子区甲基化与mRNA表达水平的变化.结果:在对照组Hep-2人喉癌细胞系中CHFR基因启动子区显示DNA甲基化,用5-Aza-dC作用后DNA甲基化程度明显减弱,mRNA表达量上调(1.75±0.21)；用TSA作用后DNA甲基化程度和mRNA表达量(1.05±0.13)无明显变化.联合使用5-Aza-dC和TSA后DNA甲基化程度明显减弱,mRNA表达量明显上调(2.15±0.18).结论:CHFR基因启动子区DNA甲基化在喉癌的发生、发展中是一个频发事件,是导致其mRNA表达下调的主要原因,5-Aza-dC单独应用和联合TSA能够逆转DNA甲基化状态,从而调控其基因表达,为临床使用药物治疗喉癌提供了新思路.
关键词： 喉肿瘤 5-杂氮-2'-脱氧胞苷 制霉菌素A Chfr基因 DNA甲基化 -
宫颈癌患者CHFR基因异常甲基化的检测
目的:探讨CHFR(checkpoint with FHA and ring finger)基因启动子异常甲基化在宫颈癌发生发展过程中的作用及其在宫颈癌早期诊断中的价值.方珐:用甲基化特异性PCR方法检测42例宫颈癌组织、30例宫颈上皮内瘤样病变组织(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)及20例正常宫颈组织中CHFR基因启动子区CpG岛甲基化状态.结果:宫颈癌组织及CIN中CHFR基因异常甲基化检出率分别为33.3％(14/42)和6.7％(2/30),正常宫颈组织中未检出CHFR基因甲基化;三组间CHFR基因异常甲基化发生率之间比较差异具有统计学意义(x2=10.69,P=0.005);CHFR基因甲基化发生率与年龄、病理分级、临床分期之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论:CHFR基因的异常甲基化参与了宫颈癌的发生和发展过程,其甲基化的检测对宫颈癌的早期诊断有一定的价值.
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两种方法检测胃癌患者CHFR基因启动子区甲基化的状态
背景与目的:目前认为CpG岛甲基化导致转录抑制是恶性肿瘤发生的重要机制之一.微管抑制剂诱发有丝分裂应激时,CHFR基因能够控制细胞分裂的进行.本研究检测胃癌中CHFR基因启动子区甲基化状态,探讨该基因甲基化状态与胃癌临床病理特征的关系;并比较甲基化特异性PCR方法(methylationsoecific polymerase chain reaction, MSP)和结合重亚硫酸盐的限制性内切酶法(combined bisulfite restriction analysis, COBRA)在检测胃癌组织CHFR基因甲基化状态的差异性.方法:首先采用MSP方法检测64例胃癌患者胃癌组织和相对应的癌旁正常组织中CHFR基因肩动子区的甲基化状态,然后采用COBRA方法检测64例胃癌患者胃癌组织中CHFR基因启动子区的甲基化状态,并将检测结果结合各病例的临床特征进行分析.结果:MSP方法检测结果显示,51.6%的胃癌组织和18.8%的癌旁正常组织中存在CHFR基因异常甲基化,两者之间的差异有统计学意义(P<0.001);CHFR基因启动子区异常甲基化状态在不同临床病理学特征(包括年龄、性别、肿瘤大小、病理分期、Borrman分型、肿瘤浸润深度、组织分化程度和淋巴转移程度)的胃癌组织和癌旁组织中的差异无统计学意义(P值均>0.05).COBRA方法检测结果显示.肿瘤组织CHFR甲基化阳性率为42.2%(27/64.),与MSP方法检测结果的差异无统计学意义(P>0.05).结论:CHFR基因异常甲基化是胃癌发生过程中的频发事件,检测胃黏膜组织中CHFR基因异常甲基化状态可能有助于胃癌的诊断.对于胃癌组织CHFR基因启动子区甲基化的检测,MSP与COBRA两种方法没有明显差异.
关键词： Chfr基因 甲基化 胃肿瘤 甲基化特异性PCR 结合重亚硫酸盐的限制性内切酶法 -
CHFR基因在肿瘤中的研究现状及意义
肿瘤的发生是一个复杂的生物学过程,主要是由于细胞内癌基因、抑癌基因及其他相关调节基因突变,从而使细胞基因组失去稳定性,终导致肿瘤的发生.正常细胞的生长和分裂是一个高度复杂和精细的过程,为了确保细胞分裂的正常进行,每个细胞内均有一套严格的精确调控细胞增殖过程的监控系统--检查点,以维持基因组的稳定性.人类肿瘤的相关研究发现基因完整性的改变与有丝分裂检查点的功能缺失有关.
