首页 > 文献资料
-
5-氮杂-2'-脱氧胞苷对HepG2细胞RUNX3基因表达及细胞增殖的影响
目的 探讨人肝癌细胞系HepG2经5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'deoxycytidine,5-Aza-CdR)处理后诱导高甲基化失活的RUNX3基因重新表达的可能性及对细胞生长的影响,寻找抗癌治疗的新靶点. 方法 RT-PCR检测抑癌基因RUNX3 mRNA的表达;MTT、集落形成实验观察细胞的生长活性;流式细胞术和透射电镜分析细胞周期及细胞凋亡的变化. 结果 肝癌细胞经不同浓度之5-Aza-CdR处理后,原无RUNX3 mRNA表达的细胞均检出基因重新表达,细胞生长速度出现不同程度减慢及细胞克隆形成率显著降低(P＜0.01).用药后肝癌细胞发生明显的S期阻滞,电镜显示肝癌细胞形态学改变. 结论 去甲基化制剂5-Aza-CdR能有效地激活肝癌细胞系HepG2因高甲基化所致RUNX3基因沉默的再转录,诱导该基因的表达,从而抑制肿瘤细胞生长.
关键词： 人肝癌细胞系HepG2 RUNX3基因 去甲基化制剂 -
锯齿状病变组织中Runx3基因的甲基化及蛋白表达
目的 探讨Runx3基因启动子区CpG岛甲基化状态和蛋白表达在锯齿状病变发生与癌变通路中的作用及意义.方法 用TaqMan探针为基础的实时定量PCR(Methylight)法检测77例锯齿状病变(29例HP、29例SSA/P和19例TSA)、16例正常结直肠组织和14例结直肠癌中 Runx3基因CpG岛甲基化状态,同时用免疫组化法检测相应组织中 Runx3蛋白的表达;并分析两者之间的关系.结果 Runx3启动子CpG岛甲基化率在正常和HP、SSA/P、TSA、CRC分别为12.5％ (2/16)和17.2％ (5/29)、51.7％ (15/29)、63.2％ (12/19)和78.6％ (11/14).Runx3蛋白阳性表达率在正常和HP、SSA/P、TSA、CRC分别为81.3％ (13/16)和72.2％ (21/29)、48.3％ (14/29)、31.6％(6/19)、21.4％ (3/14).SSA/P、TSA和CRC 3组中 Runx3甲基化与Runx3蛋白表达结果具有相关性(P＜0.05),且为负相关.结论 Runx3基因启动子区域甲甲基化是诱导Runx3蛋白表达下调或缺失的主要原因,在锯齿状病变尤其是锯齿状腺瘤的发生及癌变通路中起重要作用.
-
胃癌Runx3基因的甲基化
目的:探讨Runx3基因甲基化与胃癌的关系.方法:采用MSP法检测38例配对胃癌组织、癌旁正常组织和转移淋巴结中Runx3基因甲基化的情况.结果:73.7%的胃癌组织中存在Runx3基因异常甲基化,而相应的癌旁正常组织和转移淋巴结中该基因的甲基化率分别为21.1%和65.8%.癌组织和转移淋巴结中Runx3基因甲基化的发生率显著高于癌旁正常组织(P＜0.05).胃癌组织中,该基因甲基化与肿瘤大小显著相关(P=0.021),但与肿瘤大体类型、分化程度、浸润深度及生长方式等临床病理特征无关.结论:Runx3基因异常甲基化是胃癌发生、发展过程中的频繁事件,通过检测胃黏膜组织及淋巴结中该基因的甲基化情况,可能会对胃癌的早期诊断及判断淋巴结的微转移提供一定的参考价值.
-
结肠癌Lovo细胞RUNX3基因的表达与其增殖及凋亡的关系
目的:探讨5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人结肠癌Lovo细胞增殖凋亡及抑癌基因RUNX3表达的影响.方法:用特异性甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR0.4,4,40 μmol/L处理人结肠癌细胞株Lovo 3d,继续常规培养5d后,采用四唑盐法(MTT)比色法观察细胞经药物处理前后的生长活性.以半定量RT-PCR检测细胞处理前后抑癌基因RUNX3 mRNA的表达,以甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测细胞处理前后RUNX3的甲基化状态,应用流式细胞仪进行细胞凋亡率的检测.结果:与对照组相比,0.4,4,40 μmol/L的5.Aza-CdR处理细胞后.细胞RUNX3mRNA的相对表达量(0.46±0.06,0.71±0.06,0.84±0.07 vs 0,P＜0.01)和细胞凋亡率均增高(10.95%±2.09%,17.61%±1.51%,26.60%±1.89%vs 2.92%±0.93%,P＜0.01).呈剂量依赖性(F=168.4,F=145.7),结肠癌Lovo细胞生长速率下降,RUNX3 mRNA重新表达,其基因启动子区域部分甲基化.结论:5-Aza-CdR可逆转RUNX3启动子高甲基化状态,抑制细胞生长,诱导部分细胞凋亡.
-
5-Aza-CdR对人结肠癌Lovo细胞增殖凋亡及抑癌基因RUNX3表达的影响
目的:研究抑癌基因RUNX3在人结肠癌细胞中的表达情况,探讨5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人结肠癌Lovo细胞增殖凋亡及RUNX3表达的影响.方法:用特异性甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR0.4,4,40 μmol/L处理人结肠癌细胞株Lovo3 d,继续常规培养5 d后,采用四唑盐(MTT)比色观察细胞经药物处理前后的生长活性,以半定量RT-PCR检测细胞处理前后抑癌基因RUNX3 mRNA的表达,应用流式细胞仪进行细胞凋亡率的检测.结果:人结肠癌细胞Lovo经处理后,与对照组比较,5-Aza-CdR 0.4,4,40 μmol/L均能明显抑制肿瘤细胞生长,随5-Aza-CdR浓度增加,细胞生长速率下降;对照组Lovo细胞未见RUNX3 mRNA表达,经药物处理后的细胞均检出该种mRNA的重新表达,其mRNA的表达相对量分别为0.46±0.06,0.71±0.06,0.84±0.07,与药物存在剂量依赖性(F=168.4,P＜0.01);对照组细胞凋亡率为2.92%±0.93%,5-Aza-CdR 0.4,4,40 μmo1/L处理后Lovo细胞凋亡率分别为10.95%±2.09%,17.61%±1.51%,26.60%±1.89%,与对照组相比较均有统计学意义(P＜0.01),且凋亡率与5-Aza-CdR剂量呈正相关(F=145.7,P＜0.01).结论:在人结肠癌细胞株Lovo中,基因RUNX3可能因过甲基化而导致转录失活,RUNX3基因重新表达能抑制细胞生长,并能诱导部分细胞凋亡.
关键词： RUNX3基因 甲基化 5-氮-2'-脱氧胞苷 结肠癌 凋亡 -
RunX3抑制肿瘤作用的分子机制相关进展
RunX3在肿瘤发病机制中的作用是近年来肿瘤研究的热门领域,在多种类型的肿瘤组织中都发现了RunX3的功能性失活.RunX3能够与TGF-β信号传导通路的下游因子相互协同作用,增强后者抑制细胞生长的能力.RunX3还能与Wnt通路的TCF4-β-catenin复合体相结合,抑制该通路的致癌作用.通过上述两种信号传导通路,RunX3还能参与上皮-间质转化的调控过程,甚至对claudin-1蛋白的表达具有直接调控作用.虽然有研究发现RunX3对一部分肿瘤具有致癌作用,但Runx3这种功能性转变的具体机制仍未明确.现结合近年来国内外的文献,主要针对RunX3在抑制肿瘤作用的相关分子机制研究中的重大发现进行简要综述.
-
烟酰胺通过促进RUNX3基因表达抑制人膀胱肿瘤移植瘤及致癌原诱导的鼠膀胱肿瘤的生长
目的:染色质交互蛋白乙酰化对基因表达调控十分重要.异常的基因表观遗传修饰可引起多种肿瘤抑制基因失活.人们试图通过调节染色质结构使失活的抑癌基因重新激活来促进抗癌药物的发展.研究表明组蛋白去乙酰化酶抑制剂可以作为抗癌药物,并且已经有数种组蛋白去乙酰化酶抑制剂进入临床试验.我们发现人膀胱癌中RUNX3抑癌基因的失活是通过启动子甲基化实现的.本研究旨在调查动物模型中RUNX3抑癌基因的活化是否可以抑制膀胱癌的进展.
-
RUNX3基因在肝癌组织的mRNA表达水平及其临床意义
目的 探讨RUNX3基因在肝癌组织和癌旁组织的mRNA表达水平及其与临床病理因素的相关性.方法 采用RT-PCR检测RUNX3基因在51例肝癌组织及其癌旁组织的mRNA表达水平,分析RUNX3基因mRNA表达与临床病理因素的相关性.结果 RUNX3基因在51例肝癌组织的mRNA表达量相对值为0.4509±0.0963；在相应癌旁组织的mRNA表达量相对值为0.9147±0.0222；两者差异有显著统计学意义(t=33.6087,P＜0.001).RUNX3基因mRNA表达水平在分化程度、浸润周围组织、癌栓、肝内转移等病理因素方面的差异有统计学意义(P＜0.05).在性别、肿瘤直径、肿瘤部位、癌肿出血坏死、组织分型方面的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 RUNX3基因在肝癌组织的mRNA表达水平显著低于在癌旁组织.RUNX3基因mRNA低表达与分化程度、浸润周围组织、癌栓、肝内转移等病理因素相关.RUNX3基因可能是肝癌的一种抑癌基因.
-
RUNX3基因在膀胱移行细胞癌组织中转录水平的定量研究
我们应用实时荧光定量RT～PCR技术检测膀胱移行细胞癌(BTCC)组织标本中RUNX3基因的mRNA表达水平,探讨其临床意义.
-
RUNX3基因与食管癌相关性的研究进展
目的:总结RUNX3基因与食管癌前病变、食管癌细胞株及食管癌组织相关性的研究历史、现状及面临问题.方法:应用PubMed及CNKI期刊全文数据库检索系统,以“RUNX3基因、食管癌前病变和食管癌”等为关键词,检索1999-01-2012-01的相关文献.纳入标准:1)RUNX3基因在Barrett食管、食管癌细胞及组织的表达；2)RUNX3基因在食管癌发生、发展的机制；3)RUNX3基因检测对食管癌的早期诊断及预后分析的意义.根据纳入标准符合分析文献32篇.结果:在食管癌前病变、食管癌细胞株及食管癌组织中,RUNX3基因启动子存在异常甲基化,RUNX3基因表达显著低于正常食管黏膜.RUNX3基因表达缺失与食管癌的进展及临床分期有密切关系,并导致TGF-β-Smads信号传导通路的异常.结论:RUNX 3基因参与食管癌细胞生长、分化、调亡及细胞信号传导,与食管癌的发生、发展及预后密切相关.
-
Runx3基因启动子CpG岛甲基化对胃组织癌变影响的研究
目的:研究Runx3基因CpG岛甲基化对胃癌病变的影响；探讨甲基化特异性聚合酶链法(MSP)和焦磷酸测序法(PS)对Runx3基因甲基化检测的特异性.方法:选取150例胃癌患者胃切除标本及50例无癌变胃黏膜标本,以MSP法和PS法同时检测其Runx3启动子的甲基化程度.结果:与正常胃黏膜相比,胃癌组织Runx3的甲基化程度差异有统计学意义(MSP法:67.3％vs40.0％；PS法:76.0％ vs30.0％).MSP结果显示,Runx3甲基化只与肿瘤大小相关,P＜0.05.而PS法分析显示进展期胃癌的Runx3甲基化率高于早期胃癌；且其甲基化状态与肿瘤的大小(P=0.001)、Lauren分级(P=0.043)、浸润的深度(P＜0.001)、淋巴结转移(P=0.004)及肿瘤TNM临床分期(P=0.003)等临床病理特征之间存在相关性.结论:Runx3启动子甲基化与胃癌临床病理特征密切相关,对于胃癌的早期诊断和治疗有重要意义.
-
5-Aza-CdR对人结肠癌裸鼠移植瘤抑制作用及其机制的研究
目的 观察DNA甲基化转移酶抑制剂5氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza CdR)对人结肠癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用,探讨其与移植瘤细胞RUNX3基因表达和甲基化的相关性.方法 皮下接种SW480细胞建立人结肠癌裸鼠移植瘤模型.应用随机数字表法分为3组,A组为对照组,腹腔注射磷酸盐缓冲液(2 μg/g);B组为低剂量实验组,腹腔注射5-Aza-CdR(1 μg/g);C组为高剂量实验组,腹腔注射5-Aza-CdR(2 μg/g).各组每周给药3次,连续给药4周,末次给药后处死裸鼠.观察各组移植瘤生长情况及病理形态学改变,并采用TUNEL法检测移植瘤细胞凋亡情况,MSP法检测RUNX3基因的甲基化状态,Real time RT-PCR及免疫组化检测RUNX3的表达水平,分析组间统计学差异.结果 给药4周后,A组移植瘤体积为(3.63±1.00) cm3,B组(3.02±1.43) cm3,C组(1.80±0.80) cm3,C组与A、B组比较,差异有统计学意义,F=7.061,P=0.003.TUNEL法检测结果显示,C组移植瘤凋亡指数较高,为(5.66±0.70)％,与A组(1.14±0.45)％、B组(2.83±0.69)％比较,差异有统计学意义,F=53.631,P＜0.001.基因甲基化检测发现,A组有较高的RUNX3基因甲基化水平,而B组及C组的RUNX3基因的非甲基化务带明显扩增;而且在RUNX3基因表达上,A组mRNA相对表达量为14.84±0.53,明显低于B组的21.66±0.45、C组的46.72±2.64,差异有统计学意义,F=910.128,P＜0.001;A组RUNX3蛋白阳性表达率为(6.84±2.21)％,亦明显低于B组(14.54±3.98)％及C组(16.25±2.71)％,差异有统计学意义,F=10.745,P=0.004.结论 5-Aza-CdR可有效抑制人结肠癌裸鼠移植瘤的生长,诱导移植瘤细胞凋亡,其机制与逆转RUNX3基因的过甲基化状态,诱导移植瘤细胞RUNX3基因的重新表达相关.
关键词： 结肠肿瘤 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 RUNX3基因 DNA甲基化 免疫组织化学 -
5-氮杂-2'-脱氧胞苷对人胰腺癌细胞系MiaPaca2生长和RUNX3基因甲基化的影响
目的 探讨去甲基化制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对胰腺癌细胞系MiaPaca2生长的影响,以及对RUNX3抑癌基因表达和甲基化的影响.方法 光镜观察5-Aza-CdR处理前后MiaPaca2细胞形态学变化,四甲基偶氮唑蓝法检测5-Aza-CdR对MiaPaca2细胞增殖活性的影响,半定量逆转录聚合酶链反应检测RUNX3 mRNA表达的变化,甲基化特异性聚合酶链反应检测RUNX3基因甲基化的变化.结果 经2.5、5、10和20 μmol/L 5-Aza-CdR处理24h后,MiaPaca2细胞的抑制率分别为(9.17 ±2.15)％、(10.75 ±2.04)％、(12.57±1.64)％和(18.70±1.51)％;48 h后分别为(14.94±1.68)％、(18.60±1.57)％、(22.84±1.58)％和(33.24±1.53)％；72 h后分别为(21.46±1.60)％、(28.62±1.72)％、(35.14±1.64)％和(45.06±1.47)％；96 h后分别为(26.35±1.71)％、(34.48±1.69)％、(40.05 ±1.60)％和(49.99±1.61)％.各实验组与对照组抑制率比较,差异均有统计学意义(均P ＜0.05).在同一时点,各浓度组间MiaPaca2细胞的抑制率差异均有统计学意义(均P＜0.05).在48、72、96h时,各浓度组抑制率两两比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).在药物处理24h以后,5-Aza-CdR对MiaPaca2细胞的生长抑制作用随着5-Aza-CdR浓度的增加而增强.5-Aza-CdR能够逆转RUNX3基因的甲基化状态,恢复RUNX3 mRNA的表达.结论 RUNX3基因甲基化状态与胰腺癌的发生发展密切相关,异常甲基化可能是引起RUNX3基因表达缺失的重要机制.5-Aza-CdR可以逆转MiaPaca2细胞RUNX3基因的甲基化状态,重新激活其表达,从而抑制肿瘤细胞的生长,为胰腺癌的诊断和治疗提供了一条新途径.
关键词： 5-氮杂-2’-脱氧胞苷 胰腺肿瘤 RUNX3基因 甲基化 -
鼻咽刷洗物MSH2和RUNX3基因甲基化在鼻咽癌早期诊断及预后判断中的作用
目的 探讨鼻咽刷洗物检测MSH2和RUNX3基因甲基化在鼻咽癌早期诊断及预后判断中的作用.方法 选择经病理确诊的鼻咽癌患者54例、慢性鼻咽炎患者18例和健康志愿者20例作为研究对象,运用甲基化特异性PCR检测鼻咽刷洗物中MSH2和RUNX3基因启动子区甲基化情况,评估将其用于诊断鼻咽癌的特异度和敏感度,分析基因甲基化与鼻咽癌患者临床病理特征的关系.结果 鼻咽癌患者鼻咽刷洗物MSH2和RUNX3基因甲基化频率分别为70.37％(38/54)和51.85％(28/54),在慢性鼻咽炎患者和健康志愿者中均未检测到MSH2和RUNX3基因启动子甲基化(P＜0.001).鼻咽癌患者鼻咽刷洗物中运用甲基化特异性PCR检测MSH2基因甲基化诊断鼻咽癌的特异度为100％、敏感度70.37％; RUNX3基因甲基化诊断鼻咽癌的特异度为100％、敏感度51.85％；平行联合检测MSH2和RUNX3基因甲基化诊断鼻咽癌的特异度为100％、敏感度90.74％.鼻咽刷洗物中MSH2和RUNX3基因甲基化与患者临床病理特征无显著相关性(P＞0.05).结论 运用甲基化特异性PCR平行联合检测鼻咽刷洗物MSH2和RUNX3基因甲基化对早期诊断鼻咽癌有高度特异性和敏感度,具有潜在的临床应用价值,但目前尚不能作为判断鼻咽癌临床预后预测指标.
-
RUNX3基因与恶性肿瘤的研究新进展
RUNX3作为RUNX3基因家族转录因子的一员,在细胞生长、发育、凋亡和信号转导及其生物学效应有着举足轻重的作用.抑癌基因RUNX3的失活戏丢失在肿瘤及表达下降的程度与肿瘤患者的生存及预后存在密切关系.目前巳证实,在胃癌等相关恶性肿瘤中都相继出现了RUNX3基因转录和翻译水平的下调,随着RUNX3基因在肿瘤中作用机制更深一步的揭示,必将为各类恶性肿瘤的临床治疗奠定良好的基础.
-
Runx3基因甲基化与大肠癌发生和转移的关系
目的 探讨Runx3基因启动子甲基化与大肠癌发生发展过程的关系.方法 采用蛋白印迹技术(Westem-Blot)检测30例大肠癌组织及肿瘤周围正常黏膜组织中Runx3 mRNA的表达,同时用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测Runx3基因启动子甲基化情况.结果 30例大肠癌组织标本中Runx3基因的表达(6409.1042±298.2028)较肿瘤周围正常组织中表达明显下调(34565.3921±1108.2163),差异有统计学意义(P＜0.01).正常黏膜组织中未发现有Runx3基因启动子的甲基化,30例大肠癌组织中有16例检测到Runx3基因启动子的甲基化,大肠癌组织Runx3基因启动子甲基化率显著增高(P＜0.05).大肠癌标本中Runx3蛋白的表达与其病理临床特征密切相关,在低分化和有淋巴结转移大肠癌组织标本中Runx3蛋白的表达显著下调(P＜0.05).结论 Runx3基因启动子甲基化是导致Runx3基因失活的主要原因之一,并且与大肠癌的发生发展密切相关.
-
胃癌组织RUNX3和CHFR基因启动子高甲基化的研究
目的:检测胃癌患者肿瘤组织及其相应的癌旁组织中RUNX3和CHFR基因启动子区域甲基化状态,并探讨其甲基化状态的改变与临床病理特征的关系.方法:将2007年3月至2007年9月间42例胃癌患者(男:女=34:8)的手术切除标本分为两组:一组是肿瘤组织,另一组是相应癌旁组织.胃癌患者术前均未行放疗和化疗,癌旁组织取自肿瘤组织5cm以外.采用酚-氯仿抽提法提取组织DNA,甲基化特异性PCR法(MSP)检测肿瘤组织及相应癌旁正常组织(各42例)中RUNX3和CHFR启动子区域甲基化状态,并用1.5%的琼脂糖凝胶对PCR产物进行电泳分析.结果:54.7%和40.4%的胃癌组织中分别存在RUNX3和CHFR基因异常甲基化,而相应的癌旁正常组织中这两个基因的甲基化率均是7.1%,癌组织中RUNX3和CHFR基因的异常甲基化率显著高于相应的癌旁正常组织(PRUNX3<0.05,PCHFR<0.05).胃癌组织中该两基因的甲基化与肿瘤大小显著相关(PRUNX3<0.05,PCHFR<0.05),但与患者年龄(PRUNX3=0.711,PCHFR=0.845)、性别(PRUNX3=0.764,pCHFR=0.849)、肿瘤浸润深度(PRUNX3=0.276,PCHFR=0.542)、组织分化程度(PRUNX3=0.491,PCHFR=0.695)、病理分期(PRUNX3=0.555,PCHFR=0.237)以及淋巴结受累(PRUNX3=0.155,PCHFR=0.124)等临床病理特征无关.结论:RUNX3和CHFR基因启动子区的异常甲基化是胃癌发生发展中的频繁事件,在胃癌的发生中具有肿瘤特异性.通过检测胃黏膜中RUNX3和CHFR的甲基化状态,对于胃癌的早期诊断具有一定的参考价值.
-
Runx3基因在肝细胞癌中甲基化状态分析及临床意义
目的 通过检测肝细胞癌组织中Runx3基因启动子区域甲基化状态,探讨Runx3基因启动子区域异常甲基化在肝细胞癌发生、发展过程中的临床意义.方法 采用DNA甲基化特异性聚合酶链反应(PCR)(MSP)技术对81例肝细胞癌患者肿瘤组织及其癌旁正常组织Runx3基因启动子区域甲基化状态进行检测.结果 在肝细胞癌组织中,Runx3基因启动子区域甲基化率占43.2%(35/81),而在相对应的癌旁正常组织中,Runx3基因启动子区域仅发现1例异常甲基化现象,其甲基化率占1.2%(1/81)(P<0.01),Runx3基因启动子区域甲基化状态与临床病理参数的关系差异均无统计学意义.结论 Runx3基因启动子区域甲基化是导致Runx3基因失活的主要原因之一,与肝细胞癌发生早期密切相关,可作为肝细胞癌早期诊断的分子标记物及分子治疗的靶点.
-
RUNX3基因在肺癌中的表达及与肺癌血管生成的关系
目前在世界范围内,肺癌已占据所有癌症病死率的首位.随着放疗、靶向治疗、免疫治疗等各种新型治疗方法的出现,寻找某种生物标记物对肺癌指导治疗及评估预后显得十分迫切.人类RUNT相关转录因子3(RUNX3)基因是新近发现的一种抑癌基因,目前认为RUNX3在肺癌细胞中表达下降甚至沉默,并与肿瘤的血管生成关系密切.本文就RUNX3基因表达与肺癌血管生成的关系作一综述.
-
RUNX3表达调控机制的研究进展
RUNX3基因为一种新近发现的肿瘤抑制基因,能调控细胞的生长发育和凋亡,对细胞的信号转导和其他生物学效应有着重要而复杂的转录调控作用.本文就RUNX3基因的结构特点、调控机制的研究进展作简要综述.1 RUNX3基因及其蛋白的结构特点RUNX3基因位于人染色体1p36.1,全长约67 kb,含有P1、P2两个启动子,6个外显子和1290bp的开放阅读框,2个启动子区域均含数个分离的转录起始点[1].RUNX3基因的转录主要由启动子P2操纵,P2位于外显子2之前,GC含量较高(64％),其周围有一个明显的CpG岛,故理论上比启动子P1更易发生甲基化[2].
