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羟基红花黄色素A调控Wnt/β-catenin通路保护脑缺血小鼠血脑屏障的机制研究
目的 观察羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A, HSYA)对脑缺血模型小鼠血脑屏障的影响,探讨其作用机制.方法 将72只C57/BL小鼠按随机数字表法分为假手术组、TLR4阻断组、缺血模型组、TLR4阻断+缺血模型组、HSYA干预+缺血模型组、HSYA干预+TLR4阻断+缺血模型组.其中缺血模型组采用大脑中动脉栓塞法制备脑缺血模型,TLR4阻断组采用右侧颈总动脉内注入10 μg/ml Toll样受体4(Toll-like receptor 4, TLR4)抗体0.1 ml进行干预,HSYA干预组于缺血前0.5 h尾静脉注射2 mg/kg HSYA溶液.采用RT-PCR、Western blot检测各组Wnt3a、β-catenin、Occludin和Claudin-5的mRNA和蛋白表达变化.结果 与缺血模型组比较,TLR4阻断+缺血模型组、HSYA干预+缺血模型组、HSYA干预+TLR4阻断+缺血模型组TLR4 mRNA[(1.63±0.05)、(1.53±0.04)、(1.84±0.03)比(1.97± 0.05)]表达降低(P<0.05或P<0.01),Wnt3a mRNA [(0.56±0.01)、(0.58±0.01)、(0.50±0.04)比(0.42± 0.03)]、β-catenin mRNA[(0.61±0.03)、(0.74±0.02)、(0.58±0.04)比(0.50±0.03)]、Claudin-5 mRNA [(0.54±0.02)、(0.58±0.01)、(0.47±0.01)比(0.46±0.02)]mRNA表达升高(P<0.05或P<0.01),TLR4蛋白[(1.73±0.05)、(1.57±0.03)、(1.79±0.08)比(1.89±0.02)]表达降低(P<0.05或 P<0.01),Wnt3a蛋白[(0.67±0.03)、(0.74±0.03)、(0.57±0.01)比(0.46±0.01)]、Occludin 蛋白[(0.66±0.02)、(0.73± 0.02)、(0.67±0.01)比(0.53±0.01)]、Claudin-5蛋白[(0.71±0.01)、(0.73±0.01)、(0.66±0.01)比(0.64± 0.03)]表达升高(P<0.05或P<0.01).结论 TLR4对缺血小鼠脑组织中Wnt3a和β-catenin的活化起重要调控作用,HSYA可通过调控Wnt3a和β-catenin的表达对缺血脑组织紧密连接蛋白Occludin和Claudin-5进行干预,从而对缺血脑组织起到保护作用.
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香烟烟雾暴露对大鼠肺组织Wnt3a和β-catenin蛋白表达的影响
目的 探讨香烟烟雾暴露对大鼠肺组织Wnt3a和β-catenin蛋白表达的影响.方法 20只雌性SD大鼠,按随机数字表分为对照组和模型组,每组10只.模型组大鼠被动吸入香烟烟雾,每天2次,每次45 min；对照组大鼠不接触香烟烟雾.100d后处死动物,光镜下观察肺组织的病理形态学改变,免疫组化法检测肺组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Wnt3a和β-catenin蛋白表达,并测定2组大鼠支气管平滑肌厚度.结果 模型组大鼠肺组织呈现慢性炎性反应和肺气肿样改变,小气道壁及平滑肌层增厚明显.α-SMA主要表达于气道和血管的平滑肌层.模型组支气管平滑肌厚度高于对照组[ (3.06±0.62) μm比(1.86±0.43) μm,P＜0.05].Wnt3a和β-catenin主要表达于支气管上皮细胞和肺泡上皮细胞.模型组与对照组支气管上皮细胞Wnt3a蛋白表达分别为74.54±4.14、89.24±3.02；肺泡上皮细胞Wnt3a蛋白表达分别为91.97±2.50、110.46±3.85,组间比较差异均有统计学意义(均P＜0.05).模型组与对照组支气管上皮细胞胞质β-catenin蛋白表达分别为86.97±4.87、103.18±3.77;支气管上皮细胞胞核β-catenin蛋白表达分别为95.75±3.91、116.12±5.76;肺泡上皮细胞胞质β-catenin蛋白表达分别为106.24±4.57、128.81±3.96；肺泡上皮细胞胞核β-catenin蛋白表达分别为125.44±4.89、152.90±4.10,组间比较差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 香烟烟雾可诱导大鼠肺组织Wnt3a和β-catenin蛋白表达上调.
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C D10在癌相关成纤维细胞中的表达及其对结直肠癌形成和演进的影响
目的：探讨癌相关成纤维细胞（ CAF） CD10的表达及其在结直肠癌形成和演进中的作用。方法收集浙江宁波市鄞州第二医院有详细随访资料的结直肠癌手术切除标本226例，应用免疫组织化学法检测肿瘤组织中心区、癌旁腺瘤组织及切缘正常黏膜组织间质成纤维细胞CD10表达和肿瘤细胞Ki－67、p53、cyclin D1及β－catenin的表达，观察CD10在间质CAF中表达情况，分析其与肿瘤细胞表达Ki－67、p53、cyclin D1及β－catenin和临床病理参数的相关性。结果正常肠黏膜间质成纤维细胞不表达CD10，结直肠癌组织中心区和癌旁腺瘤区CAF CD10的表达率分别为80．1％（181／226）和58．4％（132／226），CD10阳性的细胞同时表达平滑肌肌动蛋白（SMA），不表达结蛋白。Ki－67在结直肠癌组织中心区和癌旁腺瘤区的肿瘤细胞表达率分别为84．1％（190／226）和63．7％（144／226），正常肠黏膜上皮表达率为7．1％（16／226）。 p53在结直肠癌组织中心区和癌旁腺瘤区肿瘤细胞表达率分别为50．4％（114／226）和53．1％（120／226），在正常肠黏膜上皮的表达率为8．8％（20／226）。 cyclin D1在结直肠癌组织中心区和癌旁腺瘤区肿瘤细胞表达率分别83．6％（189／226）和48．7％（110／226），在正常肠黏膜上皮不表达。β－catenin在正常肠黏膜上皮全部定位于细胞膜，癌旁腺瘤区肿瘤细胞膜表达率为53．1％（120／226），细胞质表达率为95．6％（216／226），细胞核表达率为10．6％（24／226）；肿瘤中心区癌细胞膜表达率为17．7％（40／226），细胞质表达率为100．0％（226／226），细胞核表达率为49．1％（111／226）。随着CAF CD10在癌旁腺瘤区和癌组织中心区的表达逐渐增高，周围肿瘤细胞Ki－67、p53、cyclin D1和β－catenin 核表达也逐渐增高（ P＜0．05）。 CAF CD10在不同性别、不同年龄段和不同分化程度的癌组织中的表达率有差异（ P＜0．05）；而与浸润深度、有无淋巴结转移及脉管癌栓无关（ P＞0．05）。 CD10阴性组的总体生存率优于CD10阳性组。结论 CD10只在CAF中表达，高表达CD10的CAF与其邻近肿瘤细胞高表达p53、cyclin D1、Ki－67以及β－catenin的核表达呈正相关，CAF的标志物CD10与肿瘤细胞标志物p53、cyclin D1、Ki－67以及核β－catenin相结合，可以从肿瘤间质微环境的角度为结直肠癌病理诊断提供帮助；表达CD10的CAF通过激活Wnt信号促进肿瘤发生发展。
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糖原合酶激酶-3β抑制剂对糖尿病肾病大鼠Wnt和核因子-κB信号通路的影响
目的 通过检测各组大鼠肾组织中糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)与核因子(NF)-κB的表达,研究GSK-3β抑制剂对糖尿病肾病大鼠Wnt和NF-κB信号通路的影响及意义.方法 将大鼠分成正常对照(NC)组、糖尿病肾病模型(DM)组和GSK-3p抑制剂干预(DI)组.检测各组大鼠血糖、24 h尿蛋白,HE染色法观察肾组织病理改变,应用免疫组织化学法检测GSK-3β、NF-κB在肾组织中的表达,采用real-time荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测上述因子mRNA在肾组织中的表达.结果 DM成模10周后,DM组及DI组血糖值分别为(23.2±5.4) mmol/L与(25.0±4.0)mmoVL,并且两组的尿蛋白值分别为(185.2 ±35.6) g/24 h与(179.6 ±44.7)g/24 h,均显著高于NC组[(12.0 ±2.5)g/24 h与(18.6 ±3.1)g/24 h,均P＜0.01].后经LiCl治疗2周,DI组大鼠血糖值为(17.6±2.1)mmol/L,尿蛋白值为(106.9±30.0) g/24 h,均明显低于DM组[(24.6±2.4) g/24 h与(185.0 ±46.0) g/24 h,均P＜0.05].与NC组相比,DM组大鼠肾组织出现病理改变,且GSK-3p与NF-κB的活性增强,mRNA及蛋白表达显著升高(P＜0.05);与DM组相比,DI组大鼠肾组织病理改变减轻,上述因子的活性减弱,mRNA及蛋白表达明显下降(P＜0.05).结论 GSK-3p与NF-κB在糖尿病肾病中的活性表达正相关,Wnt与NF-κB信号通路在糖尿病肾病的发生发展中有重要作用.
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姜黄素对肝癌细胞Bel7402、QGY7703增殖凋亡及Wnt／β-catenin信号通路的影响
目的观察不同剂量的姜黄素在体外对肝癌细胞Bel7402、QGY7703生长的影响，探讨姜黄素抑制肝癌细胞增殖、促进其凋亡的可能分子学机制。方法 MTT 法检测不同浓度姜黄素对 Bel7402、QGY7703细胞增殖的抑制作用，流式细胞仪分析细胞的凋亡率，Western Blot 法检测姜黄素对Wnt通路中β-catenin蛋白表达的影响，PCR法检测下游靶基因c-myc、VEGF、cyclinD1 mRNA在不同浓度姜黄素作用后表达情况的变化。结果 MTT实验显示：经浓度为5、10、20、40、80μmol/L的姜黄素作用48 h后，肝癌细胞Bel7402、QGY7703的增殖明显受到抑制，抑制率与阴性对照组比较有统计学意义（ P＜0.05）。药物浓度越大，增殖抑制率越明显，呈剂量依赖性（ r＝0.9626，r＝0.9720）。 FCM分析显示：实验组肝癌细胞凋亡率均高于阴性对照组（P＜0.05），且随着药物浓度的增加，细胞凋亡率逐渐升高，呈剂量依赖性（r＝0.9646，r＝0.9949）。 Western Blot结果显示：经姜黄素作用48 h后的Bel7402和QGY7703细胞，其胞质β-catenin蛋白含量低于阴性对照组，除10μmol/L浓度组外，20、40、80μmol/L浓度组与阴性对照组比较均有统计学意义（ P＜0.05）。药物浓度越大，胞质β-catenin蛋白含量越少，呈剂量依赖性（ r＝-0.9594，r＝-0.9488）。 PCR结果显示：经姜黄素作用后的肝癌细胞，c-myc、VEGF、cyclinD1 mRNA表达量较阴性对照组均有所减少（ P＜0.05）。结论姜黄素能够有效地抑制肝癌细胞的增殖并促进其凋亡，其机制可能与姜黄素下调经典Wnt/β-catenin信号通路有关。
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Wnt/β-catenin信号通路与骨关节炎
骨关节炎是老年人常见的退行性骨关节疾病,以关节软骨破坏及骨赘形成为主要特点.目前其确切的发病机制尚不明确.近年来研究发现,Wnt/β-catenin信号通路在骨关节炎发病机制中起着重要作用.本文对Wnt/β-catenin信号通路与骨关节炎的新近研究进展做一综述.
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RunX3抑制肿瘤作用的分子机制相关进展
RunX3在肿瘤发病机制中的作用是近年来肿瘤研究的热门领域,在多种类型的肿瘤组织中都发现了RunX3的功能性失活.RunX3能够与TGF-β信号传导通路的下游因子相互协同作用,增强后者抑制细胞生长的能力.RunX3还能与Wnt通路的TCF4-β-catenin复合体相结合,抑制该通路的致癌作用.通过上述两种信号传导通路,RunX3还能参与上皮-间质转化的调控过程,甚至对claudin-1蛋白的表达具有直接调控作用.虽然有研究发现RunX3对一部分肿瘤具有致癌作用,但Runx3这种功能性转变的具体机制仍未明确.现结合近年来国内外的文献,主要针对RunX3在抑制肿瘤作用的相关分子机制研究中的重大发现进行简要综述.
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Wnt信号通路调节因子在肝门部胆管癌组织中的表达
目的研究肝门部胆管癌组织中Wnt经典通路调节因子Frizzled、LRP5/6、APC、Axin的表达，结合既往的研究明确Wnt经典通路的整体调节。方法以1998年4月至2007年5月病理确诊为肝门部胆管癌的129例肿瘤标本作为胆管癌组，使用同期的45例先天性胆总管囊肿标本作为对照（囊肿组），通过组织芯片技术检测所有标本的Wnt经典通路中主要调节因子Frizzled、LRP5/6、APC、Axin的表达。结果囊肿组中Frizzled阳性率高于胆管癌组（91.1% vs 78.3%，H=9.29，P<0.05）；胆管癌组的LRP5/6及APC阳性率分别为91.5%、84.5%，囊肿组的LRP5/6及APC阳性率分别为95.6%、77.8%，两组差异均无统计学意义（H=0.622、1.800，P=0.733、0.400）；而Axin在胆管癌组的表达阳性率显著高于囊肿组（91.4%vs 88.9%，H=6.23，P<0.05）。结论以组织芯片技术为手段，本研究反映出肝门部胆管癌Wnt通路中Frizzled及Axin两种蛋白较囊肿组织体现显著差异，有望成为诊断及治疗的靶点。
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Wnt/β-catenin信号转导通路对骨形成和骨肿瘤的调控作用
Wnt/β-catenin信号转导通路是影响骨发育的关键信号转导通路之一.正常情况下Wnt/β-catenin信号维持骨微环境处于稳态平衡,对骨髓间充质干细胞分化、破骨细胞的形成及骨量调节有重要调控作用.而该通路异常可能导致骨肿瘤、代谢性骨病、退行性骨病等各种相关疾病的发生,与骨肉瘤,尤因肉瘤等肿瘤的发生和转移密切相关.对Wnt/β-catenin信号转导通路的研究,为相关的分子靶向药物治疗骨病提供了理论基础.
关键词： Wnt蛋白质类 骨肿瘤 微环境 Wnt/β-catenin信号转导通路 -
SATB1及wnt/β-catenin信号通路相关分子在子痫前期胎盘组织中的表达及意义
目的：探讨富含AT序列的特异性结合蛋白1（SATB1）及蛋白（wnt）/β连环蛋白（β-catenin）信号通路相关分子在调控滋养细胞侵袭以及在子痫前期发病中的作用。方法收集2013年3月—2014年3月在重庆医科大学附属第一医院行人工流产术的20例孕8~10周孕妇的绒毛组织（早孕组）；同期在妇产科住院行水囊引产的18例中孕期（孕18~20周）孕妇的胎盘组织（中孕组）；同期行择期剖宫产术的20例健康足月妊娠孕妇的胎盘组织（正常足月组）；同期住院行选择性剖宫产术分娩的20例子痫前期孕妇（孕33~38周）的胎盘组织（子痫前期组）。采用免疫组化SP法检测各组绒毛或胎盘组织中SATB1及β-catenin的蛋白表达定位；采用蛋白印迹法检测各组绒毛或胎盘组织中SATB1及β-catenin的蛋白表达水平；采用细胞免疫荧光法检测SATB1及β-catenin在滋养细胞株HTR8/SVneo细胞中的定位表达，并对细胞中SATB1及β-catenin蛋白表达水平进行检测；采用免疫共沉淀法检测子痫前期组胎盘组织和缺氧/复氧组HTR8/SVneo细胞中的SATB1与β-catenin的相互关系；采用明胶酶谱法检测子痫前期组和缺氧/复氧组细胞中基质金属蛋白酶（MMP）2、9的活性水平。结果（1）正常足月组胎盘组织合体滋养细胞结节和纤维素样坏死很少见，毛细血管数目丰富；子痫前期组胎盘组织可见合体滋养细胞胞核空泡化明显，有较多纤维素样坏死，绒毛内微血管数目减少。（2）各组绒毛或胎盘组织中均可见SATB1棕黄色染色颗粒，子痫前期组胎盘组织中SATB1阳性染色强度较正常足月组明显减弱。（3）各组绒毛或胎盘组织中均可见β-catenin蛋白的表达，子痫前期组胎盘组织中β-catenin阳性染色强度较正常足月组减弱。（4）早孕组、中孕组、正常足月组及子痫前期组中SATB1蛋白表达水平分别为0.300±0.009、0.271±0.015、0.238±0.018及0.153±0.007；β-catenin蛋白表达水平分别为0.743±0.041、0.648±0.021、0.549±0.069及0.269±0.047。子痫前期组SATB1及β-catenin蛋白表达水平均较早孕组、中孕组、正常足月组明显下降，分别比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。（5）常氧组及缺氧/复氧组SATB1蛋白定位于细胞滋养细胞的胞核中，缺氧/复氧组细胞的荧光强度较常氧组细胞明显减弱；常氧组及缺氧/复氧组β-catenin蛋白定位于细胞滋养细胞的胞核及胞质中，缺氧/复氧组细胞的荧光强度较常氧组细胞明显减弱。（6）常氧组细胞SATB1及β-catenin蛋白表达水平分别为0.213±0.005和0.797±0.081，而缺氧/复氧组分别为0.083±0.021和0.543±0.131。两组分别比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。（7）子痫前期组胎盘组织中和缺氧/复氧组细胞中经SATB1抗体免疫共沉淀后的蛋白复合物中，均可检测到β-catenin蛋白的表达；同样，经β-catenin抗体免疫共沉淀后的蛋白复合物中，也均可检测到SATB1蛋白的表达。（8）子痫前期组胎盘组织中MMP-2、9活性水平分别为2.251±0.310、1.447±0.102，正常足月组分别为7.098±0.451、5.502±0.197，两组分别比较，差异有统计学意义（P<0.05）。缺氧/复氧组细胞中MMP-2、9活性水平分别为0.471±0.104、0.297±0.103，常氧组分别为0.842±0.209、0.595±0.100，缺氧/复氧组细胞明显低于常氧组，分别比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论子痫前期胎盘组织中SATB1表达水平下降，可能是通过调控wnt/β-catenin信号通路而影响MMP-2、9的活性水平改变，使滋养细胞的侵袭力减弱，终导致子痫前期的发生。
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Wnt信号通路调控血管平滑肌细胞在脑血管病变中的研究进展
在现代社会,脑血管疾病的高发病率和高病死率严重威胁人类的健康.作为脑血管壁的主要成分,血管平滑肌细胞广泛地参与到血管粥样硬化、脑血管狭窄、颅内动脉瘤等疾病中.Wnt蛋白是一种保守的分泌蛋白,Wnt信号通路在调节平滑肌细胞的增生、迁移、凋亡和分化的过程中发挥着重要作用,成为促进脑血管疾病发生的重要一环.该综述聚焦于Wnt信号通路与血管平滑肌细胞的关系,探讨Wnt信号通路在脑血管病变中的关键作用.
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β-catenin拮抗因子Chibby在鼻咽癌中的表达及意义
目的 研究β-catenin拮抗因子Chibby在鼻咽癌组织中的表达情况,并探讨其与鼻咽癌临床病理因素的相关性.方法 分别采用Real time PCR及免疫组织化学(SABC法)检测45例鼻咽癌及癌旁正常鼻咽黏膜组织中Chibby mRNA及蛋白的表达情况,统计Chibby的表达与鼻咽癌患者临床病理因素的关系.结果 Chibby mRNA在癌旁正常鼻咽黏膜及鼻咽癌组织中平均相对表达量分别为0.0835±0.0056和0.0776±0.0059,Chibby蛋白在癌旁正常鼻咽黏膜及鼻咽癌组织中的阳性表达率分别为91.1％(41/45)和42.2％ (19/45).鼻咽癌组织中Chibby的表达与T分期及临床分期有相关性,与性别、年龄、颈淋巴结转移及病理分型无明显相关性.结论 与癌旁正常鼻咽黏膜组织相比,鼻咽癌组织中Chibby mRNA及蛋白的表达均降低,Chibby的表达与肿瘤T分期及临床分期相关,与性别、年龄、颈淋巴结转移及病理分型无明显相关性,Chibby可能参与了鼻咽癌的发生过程,有望成为鼻咽癌基因治疗新的作用靶点.
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Wnt3a蛋白对牙髓干细胞成骨向分化的影响
目的 探讨Wnt3a蛋白对牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSC)成骨向分化的影响,进一步说明Wnt信号通路在DPSC分化中的作用.方法 将不同质量浓度[0(培养液组)、5、20、50及100 μg/L]的Wnt3a蛋白作用于DPSC,于诱导培养的第7天检测其碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,对检测结果进行单因素方差分析;茜素红染色检测矿化结节形成情况;通过实时荧光定量PCR (quantitative real-time PCR,qPCR)检测骨涎蛋白、Ⅰ型胶原、Runt相关转录因子2(Runt-relatedtranscription factor-2,RUNX2)及骨钙蛋白4种骨源性基因的表达,对结果数据采用独立样本t检验进行统计学分析.结果 DPSC诱导7d后检测结果显示,Wnt3a蛋白可抑制ALP的活性,0、5、20、50及100 μg/L组ALP的活性分别为1.076±0.203、0.828±0.118、0.505±0.044、0.499±0.038及0.483±0.060,Wnt3a蛋白质量浓度越高对ALP活性的抑制作用越强;qPCR检测显示,5μg/L Wnt3a蛋白组骨钙蛋白基因阳性表达水平(0.092±0.005)显著低于培养液组(0.858±0.190)(P＜0.05);28 d后茜素红染色结果显示,5 μg/L Wnt3a蛋白对DPSC无明显的诱导矿化现象.结论 Wnt3a蛋白可抑制DPSC成骨向分化.
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无翅型MMTV整合位点家族成员10A在人牙髓组织和细胞中的表达
目的 观察无翅型MMTV整合位点家族成员10A(wingless-type MMTV integration site family,member 10A,Wnt10A)及Wnt通路相关分子在人牙髓组织和牙髓细胞中的表达特征,为进一步研究Wnt10A在人牙髓细胞增殖分化中的作用提供分子生物学依据.方法 选取因正畸或治疗原因拔除的完整离体双尖牙和第三磨牙,免疫组化法观察Wnt10A在牙髓组织中的定位表达,PCR法观察Wnt10A、Wnt通路下游分子及成牙本质细胞分化标志物(轴心抑制蛋白2、Dickkopf相关蛋白1、低密度脂蛋白受体相关蛋白4、淋巴增强因子1、骨钙蛋白、碱性磷酸酶、牙本质涎磷蛋白)在牙髓组织中的表达.采用酶组织块消化法体外培养人牙髓细胞并传代培养；PCR法分析第1～9代人牙髓细胞中Wnt10A、Wnt通路下游分子及成牙本质细胞分化标志物的表达水平.结果 免疫组化法和半定量PCR法结果显示Wnt10A和Wnt通路相关分子在牙髓组织中均有表达.体外培养的人牙髓细胞培养至第15天汇合并传代,传至第4代,细胞活跃增殖,细胞胞质清亮,伸展均一；至第9代,细胞增殖减缓,部分细胞死亡.Wnt10A和Wnt信号通路下游分子在整个牙髓细胞的体外传代培养中均有表达,牙本质涎磷蛋白在第4代牙髓细胞中表达水平高(0.4178 ±0.0076),Wnt10A在第5、9代牙髓细胞中的表达水平[分别为(4.97 ±2.83)、(4.70±4.06)]均显著高于第2、4代[分别为(0.84 ±0.66)(0.70±0.45)](P＜0.05).结论 Wnt10A介导的Wnt信号通路在人牙髓组织和细胞中有表达激活,可能参与了成牙本质细胞的分化和牙本质的形成.
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无翅型MMTV整合位点家族成员3在大鼠牙囊及牙囊细胞成骨分化中的表达
目的 研究无翅型MMTV整合位点家族成员3(wingless-type MMTV integration site family,member 3,Wnt3)在大鼠体内外牙囊中的表达,检测成骨诱导后Wnt3在大鼠牙囊细胞中的表达变化,探讨Wnt3在牙囊成骨分化中的作用.方法 取出生后1、3、5、7、9、11、13 d的SD仔鼠各1只,引颈处死,切取下颌骨,取出生后各时间点的组织切片各3张作为实验组,阴性对照组以磷酸盐缓冲液代替一抗,滴加在出生后11d的组织切片上,其余处理同实验组.免疫组化检测Wnt3在大鼠体内牙囊中的表达.间接免疫荧光检测Wnt3在牙囊细胞内的表达和分布.茜素红染色检测成骨诱导后矿化结节的形成.蛋白质印迹法检测成骨诱导1、2、3周后牙囊细胞中Wnt3和β-联蛋白(β-catenin)表达的变化.结果 Wnt3在出生后第1、3天的大鼠牙囊组织内无明显表达,第5天开始出现阳性表达,并持续表达至第13天.免疫荧光检测显示Wnt3在牙囊细胞胞质中表达.成骨诱导后牙囊细胞分化为成骨细胞,形成矿化结节,茜素红染色阳性.成骨诱导第1周Wnt3蛋白表达(2.60±0.04)较阴性对照组(1.00±0.00)显著增加(P＜0.05),并随着诱导时间的延长Wnt3表达逐渐减少,至第3周Wnt3在成骨诱导组表达水平(1.00±0.05)与阴性对照组基本相等,差异无统计学意义(P＞0.05).β-联蛋白在成骨诱导1、2、3周后表达增加(分别为1.95±0.05、9.77 ±0.65、1.75±0.21),与阴性对照组(1.00 ±0.00)相比差异均有统计学意义(P＜0.05),并在第2周达峰值(9.77±0.65),后逐渐降低.结论 Wnt3在体内外大鼠牙囊中表达,成骨诱导早期牙囊细胞中Wnt3表达明显增加,提示Wnt3可能参与牙囊细胞的早期成骨向分化；Wnt3和β-联蛋白在成骨诱导过程中表达水平的差异提示Wnt3可能与其他因子或信号通路成分相互作用,调控β-联蛋白的表达,参与牙囊细胞的成骨向分化.
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Wnt信号通路在心脏发育中的功能
在分子水平探究心脏发育是研究先天性心脏病的先决条件，将对心脏疾病的诊疗以及心脏再生策略的研究具有重要意义。研究表明，Wnt信号通路分子在心脏的发育过程中有着多种作用。 Wnt蛋白是胞外生长因子，可以激活不同的胞内信号通路。该文就Wnt相关蛋白从心脏前体细胞早期分化到其后形态发生过程中对心脏发育的影响进行了综述。
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经典Wnt/β-catenin信号通路中的双向调控
Wnt信号通路在细胞的分化、增殖和凋亡等生理过程中,以及在细胞癌变、肿瘤侵袭等病理过程中均发挥了重要的调控作用,已经成为细胞生物学和分子生物学研究的一大热点.
关键词： Wnt蛋白质类 信号传导 胞间信号肽类和蛋白质类 -
背腹轴线形成的机制及其临床意义
胚胎背腹轴线的建立是早期胚胎发育形成过程中的关键步骤,其分子机制代表着细胞分裂与分化的核心问题.自文艺复兴以来,人们对背腹轴线形成机制的探索,使我们对疾病的致病机制有了更加深入的了解,本文就其进展及其在肿瘤等方面的潜在意义进行讨论.
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Wnt/β-catenin信号通路激活与宫颈病变研究新进展
Wnt/β-catenin通路是经典的Wnt通路，作为细胞间信号转导通路之一，调控细胞增殖、分化、黏附及凋亡等，在胚胎发育过程中发挥重要作用。Wnt信号通路的异常激活可引起细胞异常增殖、分化而导致肿瘤的发生。此外，Wnt信号通路也是诱导肿瘤细胞发生上皮间质转化（EMT）过程的关键通路之一，从而影响肿瘤的进展和转移。该通路中包含许多信号成员蛋白，其中E钙黏蛋白（E-cadherin）和β-连环素（β-catenin）是该通路的核心因子，并且是构成上皮细胞间连接复合体的关键分子。E-cadherin表达下调和β-catenin表达异位可激活Wnt通路的靶基因，通过降低上皮细胞间的黏附力、增加细胞的增殖及迁移能力，促使上皮细胞发生间质转化。综述Wnt/β-catenin通路激活上皮间质转化的过程及二者与宫颈癌的发生、进展及转归的相关性。
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雌激素对去势MCAO雌性大鼠Wnt信号通路的影响
目的：研究外源性雌激素对去势雌性大鼠大脑中动脉阻塞（MCAO）模型经典Wnt信号通路的影响，探讨雌激素在局灶性脑缺血中发挥神经保护作用的机制。方法：选取SPF级3个月龄Wistar雌性大鼠60只，采用去势雌性大鼠脑缺血模型，随机分为3组，假手术组、模型组、雌激素组[（17β-雌二醇，皮下注射，300μg/（kg·d）]，每组20只。2,3,5-三苯基四唑氮红（TTC）染色法评估脑梗死体积，免疫组织化学、蛋白质印迹法测定左侧大脑皮质结肠腺瘤样息肉病（APC）蛋白和β-连环蛋白的表达。结果：雌激素组梗死体积[（255.43±51.43）mm3]比模型组[（490.75±93.38）mm3]小，2组差异有统计学意义（t=5.565，P=0.001）。免疫组织化学结果提示模型组APC蛋白表达水平高于其他2组，差异有统计学意义（均P＜0.05），雌激素组β-连环蛋白水平高于模型组（P＜0.05），与假手术组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。蛋白质印迹法结果显示雌激素组APC蛋白表达低于模型组，β-连环蛋白的表达高于模型组，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论：补充外源性雌激素可以通过下调皮质区APC蛋白表达，激活经典Wnt信号通路，进而发挥在去势雌性大鼠局灶性脑缺血损伤中的神经保护作用，为绝经激素治疗降低围绝经期妇女缺血性脑损伤的临床应用提供参考依据。
