羟基红花黄色素A调控Wnt/β-catenin通路保护脑缺血小鼠血脑屏障的机制研究
摘要： 目的 观察羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A, HSYA)对脑缺血模型小鼠血脑屏障的影响,探讨其作用机制.方法 将72只C57/BL小鼠按随机数字表法分为假手术组、TLR4阻断组、缺血模型组、TLR4阻断+缺血模型组、HSYA干预+缺血模型组、HSYA干预+TLR4阻断+缺血模型组.其中缺血模型组采用大脑中动脉栓塞法制备脑缺血模型,TLR4阻断组采用右侧颈总动脉内注入10 μg/ml Toll样受体4(Toll-like receptor 4, TLR4)抗体0.1 ml进行干预,HSYA干预组于缺血前0.5 h尾静脉注射2 mg/kg HSYA溶液.采用RT-PCR、Western blot检测各组Wnt3a、β-catenin、Occludin和Claudin-5的mRNA和蛋白表达变化.结果 与缺血模型组比较,TLR4阻断+缺血模型组、HSYA干预+缺血模型组、HSYA干预+TLR4阻断+缺血模型组TLR4 mRNA[(1.63±0.05)、(1.53±0.04)、(1.84±0.03)比(1.97± 0.05)]表达降低(P<0.05或P<0.01),Wnt3a mRNA [(0.56±0.01)、(0.58±0.01)、(0.50±0.04)比(0.42± 0.03)]、β-catenin mRNA[(0.61±0.03)、(0.74±0.02)、(0.58±0.04)比(0.50±0.03)]、Claudin-5 mRNA [(0.54±0.02)、(0.58±0.01)、(0.47±0.01)比(0.46±0.02)]mRNA表达升高(P<0.05或P<0.01),TLR4蛋白[(1.73±0.05)、(1.57±0.03)、(1.79±0.08)比(1.89±0.02)]表达降低(P<0.05或 P<0.01),Wnt3a蛋白[(0.67±0.03)、(0.74±0.03)、(0.57±0.01)比(0.46±0.01)]、Occludin 蛋白[(0.66±0.02)、(0.73± 0.02)、(0.67±0.01)比(0.53±0.01)]、Claudin-5蛋白[(0.71±0.01)、(0.73±0.01)、(0.66±0.01)比(0.64± 0.03)]表达升高(P<0.05或P<0.01).结论 TLR4对缺血小鼠脑组织中Wnt3a和β-catenin的活化起重要调控作用,HSYA可通过调控Wnt3a和β-catenin的表达对缺血脑组织紧密连接蛋白Occludin和Claudin-5进行干预,从而对缺血脑组织起到保护作用.
