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新生鼠缺氧缺血性脑损伤后水通道蛋白4表达与bFGF治疗效果的研究
目的 探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)后脑组织水通道蛋白(AQP4)基因与蛋白表达及碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对HIBD治疗效果的影响.方法 生后7 d新生大鼠80只,随机分为正常对照组10只,HIBD组30只,bFGF治疗组(4μ/kg,腹腔注射,连续15 d)30只,生理盐水治疗组10只.采用RT-PCR和蛋白印迹技术检测脑缺氧缺血后及经bFGF治疗不同时间段AQP4 mRNA基因与蛋白的表达.结果 HIBD后5 h,脑组织AQP4 mRNA表达增加;HIBD后7 d达到高峰(1.93±0.11),15 d后仍高于正常组织;HIBD后5 h、3 d、7 d、15 d、17 d有不同程度的AQP4蛋白表达,3d、7 d为明显,而正常对照组未见蛋白表达.HIBD后腹腔注射bFGF,3 d后脑组织AQP4mRNA有明显变化(0.79±0.15),15 d明显降低到(0.47±0.06);第7 d蛋白表达逐渐减弱,15 d、17 d蛋白不表达.结论 AQP4与HIBD的形成密切相关;bFGF对HIBD有明显的改善作用,可能与其保护作用有关.
关键词： 缺氧缺血性脑损伤 水通道蛋白 碱性成纤维细胞生长因子 蛋白印迹技术 -
银杏叶提取物对胰岛素抵抗大鼠骨骼肌GLUT4表达的影响
目的 观察银杏叶提取物对高脂饮食所诱导的胰岛素抵抗大鼠骨骼肌葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)表达的影响,探讨银杏叶提取物改善胰岛素敏感性的分子机制.方法 采用高脂喂养的方法建立胰岛素抵抗大鼠模型,并给予为期4周的不同剂量银杏叶提取物腹腔注射干预,以罗格列酮作为阳性对照.干预后测定大鼠血清总胆固醇、甘油三酯、空腹血糖、空腹胰岛素等指标,高胰岛素-正常葡萄糖钳夹实验评价银杏叶提取物的胰岛素增敏作用.Western Blot测定大鼠骨骼肌GLUT4蛋白水平,实时荧光定量RT-PCR测定大鼠骨骼肌GLUT4mRNA表达.结果 高脂饮食成功建立胰岛素抵抗大鼠模型,与正常对照组相比,葡萄糖输注率显著下降,空腹血糖、空腹胰岛素、总胆固醇、甘油三酯升高(P<0.01),骨骼肌GLUT4蛋白水平下降(P<0.05),骨骼肌GLUT4 mRNA下降(P<0.01).银杏叶提取物干预使葡萄糖输注率增加,并不同程度地降低总胆固醇、甘油三酯、空腹血糖、空腹胰岛素,同时骨骼肌GLUT4表达上调,中、高剂量银杏叶提取物对上述指标的改善更加明显,优于低剂量组.结论 银杏叶提取物能够改善高脂饮食诱导的胰岛素抵抗状态,其胰岛素增敏机制与增加骨骼肌GLUT4的表达有关.
关键词： 银杏叶提取物 胰岛素抵抗 葡萄糖转运蛋白4 蛋白印迹技术 逆转录.聚合酶链反应 -
先天性梅毒实验室检测方法学评价
目的 研究梅毒螺旋体母婴传播的实验室检测的特异性方法,应用于新生儿梅毒的早期诊断.方法 应用酶联免疫吸附试验(ELISA)或金标法(GICA)作为初筛实验,采用梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)与甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)作为确诊实验及疗效观察,根据不同检验目的选用荧光密螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS)、蛋白印迹技术(WB)、实时荧光定量PCR(FQ-PCR)技术作为辅助检测手段,优化组合实验项目.结果 检测产科住院孕产妇24 636例,检测孕产妇分娩的新生儿530例,其中孕产妇TPPA确诊试验阳性患者325例,占孕产妇分娩患者的1.32％,新生儿科TPPA确诊试验阳性患者89例,占孕产妇分娩患者的0.36％.检测出新生儿梅毒患儿7例,占孕产妇分娩患者的0.03％.结论 联合检测可提高孕产妇及新生儿梅毒检测的特异性,应用于新生儿胎传梅毒的早期诊断,具有特异、快速、准确的特点.
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Runx3基因甲基化与大肠癌发生和转移的关系
目的 探讨Runx3基因启动子甲基化与大肠癌发生发展过程的关系.方法 采用蛋白印迹技术(Westem-Blot)检测30例大肠癌组织及肿瘤周围正常黏膜组织中Runx3 mRNA的表达,同时用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测Runx3基因启动子甲基化情况.结果 30例大肠癌组织标本中Runx3基因的表达(6409.1042±298.2028)较肿瘤周围正常组织中表达明显下调(34565.3921±1108.2163),差异有统计学意义(P＜0.01).正常黏膜组织中未发现有Runx3基因启动子的甲基化,30例大肠癌组织中有16例检测到Runx3基因启动子的甲基化,大肠癌组织Runx3基因启动子甲基化率显著增高(P＜0.05).大肠癌标本中Runx3蛋白的表达与其病理临床特征密切相关,在低分化和有淋巴结转移大肠癌组织标本中Runx3蛋白的表达显著下调(P＜0.05).结论 Runx3基因启动子甲基化是导致Runx3基因失活的主要原因之一,并且与大肠癌的发生发展密切相关.
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溴氰菊酯对大鼠脑中EROD酶活性及蛋白表达的影响
采用荧光分光光度法,在体内、体外研究了溴氰菊酯对大鼠脑组织中EROD(7-ethoxyresorufin O-deethylase)酶活性的影响.结果表明:大鼠经溴氰菊酯12.5mg·kg-1·d-1通过腹腔注射连续5天后,溴氰菊酯明显抑制全脑和大脑皮层EROD酶活性,抑制率分别是32.0%,37.0%;在体外,溴氰菊酯浓度在2×10-8～2×10-4mol/L范围内对EROD活性无明显影响;进一步用蛋白印迹技术检测CYP1A1/1A2蛋白表达的变化,结果表明:溴氰菊酯在体内明显抑制上述各脑区中CYP1A1/1A2蛋白表达.综合上述两方面结果,提示溴氰菊酯在体内能明显抑制脑内EROD活性,其机理与抑制该酶蛋白合成有关.
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PPARα、PPARγ的上调参与淫羊藿苷对自发性高血压大鼠心室重构的调节
目的：观察淫羊藿苷( icariin,Ica)对自发性高血压大鼠( SHR)心室重构的作用,并探讨其机制。方法14周龄♂ SHR大鼠21只随机分为模型组,Ica低、高剂量组(20、40 mg·kg-1,ig, bid),14周龄♂ WKY大鼠为空白对照组,空白对照组和模型组给予等体积的双蒸水灌胃。适应性喂养1周,连续灌胃12周后处死全部动物,采用双抗体夹心法测定左心羟脯氨酸的含量；Masson染色观察左心室组织病理学变化；real-time RT-PCR、Western blot 分别检测 PPARα、PPARγ mRNA和蛋白的表达。结果与空白对照组相比,模型组出现心室重构,心肌纤维化,心肌组织羟脯氨酸含量明显上升( P<0．01), PPARα、PPARγ mRNA和蛋白表达明显降低(P<0．05或P<0．01)。与模型组相比,Ica低、高剂量组心肌细胞排列较整齐,心肌纤维化减少,且心肌羟脯氨酸含量降低, PPARα、PPARγ mRNA 和蛋白表达升高( P <0．05或P<0．01)。结论淫羊藿苷具有减轻自发性高血压大鼠心室重构的作用,其机制可能与上调PPARα、PPARγ有关。
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星形胶质细胞上调基因-1蛋白在鼻咽癌中的表达及临床意义
目的 探讨星形胶质细胞上调基因-1(astrocyte elevated gene-1,AEG-1)蛋白在鼻咽癌中的表达及其临床意义.方法 采用Western blotting技术检测AEG-1蛋白在4株鼻咽癌细胞株、47例鼻咽癌组织及21例鼻咽部黏膜中的表达.结果 AEG-1蛋白在鼻咽癌细胞和组织中的表达较鼻咽部黏膜均显著上调,其表达水平与患者血清EB病毒滴度的高低(P=0.046)、T分级(P=0.001)、临床分期(P =0.001)、颈部淋巴结转移(P=0.010)呈显著正相关.结论 AEG-1蛋白可能在鼻咽癌的发生发展中起重要作用.
关键词： 星形胶质细胞上调基因1 鼻咽癌 转移 蛋白印迹技术 -
一种测定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌PBP2a的蛋白印迹技术
目的 蛋白印迹技术(Western blot)检测临床MRSA分离株所产的PBP2a蛋白.方法 用超声破碎法提取细菌总蛋白,利用PBP2'胶乳凝集试剂盒内的PBP2'抗体胶乳试剂,以Western blot技术检测3株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)分离株所产的特异性青霉素结合蛋白PBP2a(PBP2')的表达情况.结果 3株MRSA的总蛋白样品在分子量约80 kd的位置可见PBP2a的特异性条带.MRSA-2菌株的PBP2a表达量大,而MRSA-4的PBP2a表达量小.质控菌ATCC 25923的菌蛋白未见PBP2a条带.结论 本实验采用的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌PBP2a的蛋白印迹测定方法,不但可对MRSA表达的PBP2a蛋白进行定性检测,还可进行半定量检测,因此该方法不但能用于PBP2a蛋白克隆表达的检测,还可测定不同情况下MRSA的PBP2a的表达情况,是一种值得推荐的PBP2a蛋白定性及半定量方法.
关键词： 蛋白印迹技术 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 青霉素结合蛋白 -
Olig-2在人脑胶质细胞瘤中的表达及临床意义
目的 研究少突胶质细胞转录因子-2(Olig-2)在人脑胶质细胞瘤组织中的表达,并探讨其临床意义.方法 采用免疫组化SP法和蛋白印迹技术(Western blot),检测96例脑胶质细胞瘤患者的手术标本,WHO分类:I级26例,Ⅱ级28例,Ⅲ级20例,Ⅳ级22例;组织学分类:巨细胞星形胶质细胞瘤26例,少突胶质细胞瘤28例,间变性星形胶质细胞瘤20例,多形胶质母细胞瘤10例,髓母细胞瘤12例和10例颅脑损伤内减压脑组织标本中Olig-2蛋白的表达水平.结果 免疫组化结果表明:巨细胞星形胶质细胞瘤阳性表达率为23.08%(6/26),少突胶质细胞瘤阳性表达率为82.14%(23/28),间变性星形胶质细胞瘤阳性表达率为40.00%(8/20),多形胶质母细胞瘤阳性表达率为30.00%(3/10),髓母细胞瘤阳性表达率为75.00%(9/12)和正常脑组织阳性表达率为60.00%(6/10);Olig-2阳性率在良性(Ⅰ+Ⅱ)和恶性(Ⅲ+Ⅳ)中分别为53.70%(29/54)和47.62%(20/42),统计学处理无明显差异(P>0.05);少突胶质细胞瘤Olig-2阳性率82.14%(23/28)和其它病理类型肿瘤阳性率38.24%(26/68)比较有明显差异(P<0.05);Western blot结果显示少突胶质细胞瘤中Olig-2蛋白的表达明显高于其它类型胶质细胞瘤及正常脑组织(P<0.05).结论 Olig-2在少突胶质细胞瘤中明显高表达,但表达水平与脑胶质细胞瘤恶性程度无明显相关,Olig-2可以作为人脑少突胶质细胞瘤与其它类型胶质细胞瘤鉴别诊断的重要标记物.
关键词： 少突胶质细胞转录因子-2 胶质细胞瘤 免疫组化 蛋白印迹技术
