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5-氮-2'-脱氧胞苷对食管癌细胞系OE33中CDH13基因甲基化的影响
目的:观察去甲基化制剂5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-dC)对人食管癌细胞系OE33中CDH13基因启动子区甲基化状态的影响,探讨OE33中CDH13基因失活的机制及5-Aza-dC对CDH13基因表达的调控作用.方法:5-Aza-dC处理体外培养的OE33细胞,用甲基化特异性PCR(MSP)法检测处理前后细胞中CDH13基因的甲基化状态,半定量RT-PCR法检测用药前后细胞中CDH13 mRNA表达的变化.结果:OE33中CDH13启动子区发现甲基化现象,应用5-Aza-dC能使CDH13基因启动子区CpG岛去甲基化,而且经药物处理癌细胞后其CDH13 mRNA的表达较前明显增强.结论:去甲基化制剂5-Aza-dC能逆转CDH13基因甲基化状态,从而调控CDH13基因表达.
关键词： 5-氮-2'-脱氧胞苷 CDH13基因 食管癌 DNA甲基化 -
5-氮-2'-脱氧胞苷对人卵巢癌细胞SKOV3凋亡及HMLH1和HMSH2表达的影响
目的 探讨5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'deoxycytidine,5-Aza-CdR)对人卵巢癌细胞系SKOV3增殖、凋亡及错配修复基因HMLH1和HMSH2表达的影响.方法 用0.5、5和50μmol/L特异性甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR处理SKOV3细胞3 d,继续常规培养7 d后,采用四唑盐(MTT)比色法检测生长活性,流式细胞术分析细胞的凋亡,半定量RT-PCR检测细胞HMLH1和HMSH2 mRNA的表达水平.结果 人卵巢癌细胞系SKOV3经0.5、5和50 μmol/L5-Aza-CdR处理后,均能明显抑制肿瘤细胞生长.各组细胞的凋亡率分别为10.59%±1.57%、17.52%±1.72%、34.10%±1.45%,显著高于对照组的5.35%±0.86%(P＜0.01);且凋亡率与5-Aza-CdR剂量成正相关(F=227.6,P＜0.01).在SKOV3中HMLH1和HMSH2呈弱表达,经5-Aza-CdR处理后mRNA表达量有不同程度的增加,且与药物存在剂量依赖性.结论 5-Aza-CdR可逆转卵巢癌细胞系中存在的HMLH1和HMSH2甲基化,DNA错配修复基因甲基化与卵巢癌的发生、发展有关.
关键词： 卵巢癌 错配修复基因 甲基化 5-氮-2'-脱氧胞苷 凋亡 -
5-Aza-CdR对人结肠癌Lovo细胞增殖凋亡及抑癌基因RUNX3表达的影响
目的:研究抑癌基因RUNX3在人结肠癌细胞中的表达情况,探讨5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人结肠癌Lovo细胞增殖凋亡及RUNX3表达的影响.方法:用特异性甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR0.4,4,40 μmol/L处理人结肠癌细胞株Lovo3 d,继续常规培养5 d后,采用四唑盐(MTT)比色观察细胞经药物处理前后的生长活性,以半定量RT-PCR检测细胞处理前后抑癌基因RUNX3 mRNA的表达,应用流式细胞仪进行细胞凋亡率的检测.结果:人结肠癌细胞Lovo经处理后,与对照组比较,5-Aza-CdR 0.4,4,40 μmol/L均能明显抑制肿瘤细胞生长,随5-Aza-CdR浓度增加,细胞生长速率下降;对照组Lovo细胞未见RUNX3 mRNA表达,经药物处理后的细胞均检出该种mRNA的重新表达,其mRNA的表达相对量分别为0.46±0.06,0.71±0.06,0.84±0.07,与药物存在剂量依赖性(F=168.4,P＜0.01);对照组细胞凋亡率为2.92%±0.93%,5-Aza-CdR 0.4,4,40 μmo1/L处理后Lovo细胞凋亡率分别为10.95%±2.09%,17.61%±1.51%,26.60%±1.89%,与对照组相比较均有统计学意义(P＜0.01),且凋亡率与5-Aza-CdR剂量呈正相关(F=145.7,P＜0.01).结论:在人结肠癌细胞株Lovo中,基因RUNX3可能因过甲基化而导致转录失活,RUNX3基因重新表达能抑制细胞生长,并能诱导部分细胞凋亡.
关键词： RUNX3基因 甲基化 5-氮-2'-脱氧胞苷 结肠癌 凋亡 -
5-Aza-CdR对乳腺癌细胞增殖及Maspin 基因表达的影响
目的 研究5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对乳腺癌MDA-MB-435S细胞增殖及抑癌基因Maspin表达的影响.方法 用特异性甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR处理乳腺癌细胞株MDA-MB-435S 8 d 后,采用四唑盐(MTT)比色法观察细胞在药物处理前后的生长活性,应用流式细胞仪进行细胞周期的检测,RT-PCR检测细胞处理前后Maspin mRNA的表达.结果 5 μmol/L 5-Aza-CdR处理乳腺癌细胞株MDA-MB-435S 8 d后,与对照组比较能明显抑制肿瘤细胞的生长.流式细胞仪检测发现5 μmol/L 5-Aza-CdR作用72 h 后可导致MDA-MB-435S细胞G2/M期阻滞,减少进入有丝分裂期的细胞百分比.RT-PCR显示Maspin mRNA 在5μmol/L 5-Aza-CdR作用72 h后重新表达.结论 在人乳腺癌MDA-MB-435S细胞中,Maspin基因可能因高甲基化而导致转录失活,经特异性甲基转移酶抑制剂5-Aza.CdR处理可使Maspin基因重新表达,后者能导致该肿瘤细胞G2/M期阻滞,并抑制细胞生长.
关键词： maspin基因 甲基化 5-氮-2'-脱氧胞苷 乳腺癌 -
5-氮-2'-脱氧胞苷联合应用顺铂对食管癌细胞株Eca109 bax和bcl-2基因mRNA表达的影响
目的 检测5-氮-2’-脱氧胞苷(5Aza-dC)联合应用顺铂(CDDP)对食管癌细胞株Eca109中bax和bcl-2基因mRNA表达的影响.方法 培养食管癌细胞株Eca109,通过加入不同浓度的5Aza-dC联合应用CDDP后,提取细胞总RNA,通过RT-PCR检测细胞中bax和bcl-2基因mRNA表达变化.结果 低浓度5Aza-dC+高浓度CDDP联合用药组的bcl-2表达量与空白对照组、中浓度5Aza-dC用药组和低浓度CDDP用药组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05);低浓度CDDP用药组与高浓度CDDP用药组,中浓度5Aza-dC+高浓度CDDP联合用药组,bcl-2表达量差异有统计学意义(P＜0.05).而bax的表达量各组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 在食管癌细胞株Eca109中,bax和bcl-2的表达量均较高.低浓度5Aza-dC+高浓度CDDP联合用药组,使bcl-2 mRNA表达明显低于空白对照组及单一用药组.高浓度的CDDP及高浓度CDDP联合不同浓度5Aza-dC用药组,与低浓度CDDP用药组相比,可使bcl-2 mRNA表达降低.而药物对bax mRNA的表达无影响.提示食管癌细胞株中联合用药使bcl-2 mRNA表达降低,可能是癌基因bcl-2的高表达与食管癌的发生有关,但细胞株对不同药物及浓度反应有差异.不同用药组bax的表达量无明显差异,提示bax的表达可能与食管癌的发生无直接关系.
关键词： 食管癌细胞株 5-氮-2'-脱氧胞苷 顺铂 bax基因 Bcl-2基因 -
白血病细胞系中抑癌基因PTEN启动子区甲基化状态检测及其去甲基化研究
目的 探讨抑癌基因PTEN表达沉默的机制及诱导PTEN表达对白血病细胞的作用.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应(Methylation specific PCR,MSP)检测白血病细胞系HL-60、Nalm-6、Raji、KG-1a、U937、NB4、K562中PTEN基因启动子区域甲基化状态;用甲基化转移酶抑制剂5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理白血病细胞,MSP检测甲基化状态的改变、RT-PCR检测PTEN mRNA水平的改变、瑞特染色观察细胞形态学改变、膜联蛋白V/碘化丙锭(Annexin V/PI)标记染色检测细胞凋亡.结果 检测的白血病细胞系中HL-60、Nalm-6、Raji、KG-1a、U937细胞PTEN基因显示超甲基化状态,而NB4和K562细胞显示低甲基化状态;5-Aza-CdR处理HL-60和Nalm-6细胞后,PTEN基因甲基化降低、mRNA表达水平则逐渐增高,并呈剂量依赖性,细胞出现凋亡现象.结论PTEN基因启动子区异常甲基化可能导致该基因转录表达失活或沉默,甲基化抑制剂可以诱导PTEN表达,并引起白血病细胞凋亡.
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5-氮-2'-脱氧胞苷和曲古抑菌素A对子宫内膜腺癌细胞的抑制作用
目的:研究去甲基化制剂5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-CdR)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)在体内外对子宫内膜腺癌Ishikawa细胞的抑制作用.方法:以5-Aza-CdR和TSA单独或联合作用Ishikawa细胞,锥虫蓝拒染法观察药物对肿瘤细胞生长的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡和分析细胞周期,Western blotting检测肿瘤细胞凋亡信号通路中caspase- 8活化及多聚ADP核糖聚合酶(PARP)裂解情况.建立裸鼠Ishikawa细胞移植瘤模型,观察两抑制剂作用下的移植成瘤率、肿瘤的体积和重量.结果:5-Aza-CdR和 TSA对Ishikawa细胞增殖有明显的抑制作用,呈剂量、时间依赖性;两制剂联合作用时抑制作用更强(P<0.05).5-Aza-CdR或TSA均可诱导细胞凋亡,联合作用后细胞的凋亡率更高(P<0.05); 5-Aza-CdR和TSA联合应用使细胞发生明显的G1期阻滞;5-Aza-CdR和 TSA诱导了caspase-8活化及PARP裂解.荷瘤小鼠予5-Aza-CdR和 TSA治疗后移植瘤生长速度减慢,移植瘤体积和重量明显减少.结论:5-Aza-CdR与TSA能抑制Ishikawa肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡,两者联合作用时强度明显增加;其机制与两制剂诱导caspase-8活化及PARP裂解有关.
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5-氮-2'-脱氧胞苷对人卵巢癌细胞凋亡及DNA错配修复基因表达的影响
目的:观察5-氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine ,又称5-aza-CdR)对卵巢癌细胞SKOV3和3AO增殖凋亡及DNA错配基因hMLH1 和hMLH2 表达的影响.方法: 以特异性甲基转移酶抑制剂5-aza-CdR 0.5、5、50μmol/L处理人卵巢癌细胞SKOV3和3AO 3d,继续常规培养7 d后,采用MTT比色法观察细胞经药物处理前后的增殖活性,用流式细胞术分析5-aza-CdR对细胞凋亡影响,以半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞经5-aza-CdR处理前后DNA错配修复基因hMLH1和hMSH2 mRNA表达水平的改变.结果: 人卵巢癌细胞SKOV3和3AO经5-aza-CdR处理后,与对照组比较,0.5、5、50 μmol/L均能明显抑制肿瘤细胞生长,随着5-aza-CdR浓度增加,细胞增殖速度下降.SKOV3经5-aza-CdR 0.5、5、50μmol/L处理后细胞的凋亡率分别为(10.59±1.57)%、(17.52±1.72)%、(34.10±1.45)%,3A0经0.5、5、50μmol/L 5-aza-CdR处理后细胞的凋亡率分别为(11.11±2.21)%、(17.24±1.11)%、(26.53±2.00)%,与对照组相比均有统计学意义(P＜0.01);且凋亡率与剂量成正相关(FSKOV3=227.6,P SKOV3＜0.01;F3AO=108.4,P 3AO＜0.01).经5-aza-CdR处理后的两株卵巢癌细胞中hMLH1 和hMLH2 的mRNA表达量有不同程度的增加(P＜0.01),且与药物存在剂量依赖性.结论: 在人卵巢癌细胞株SKOV3和3AO中,5-aza-CdR可部分逆转hMLH1 和hMLH2 的失活,恢复其生长调控功能,抑制肿瘤细胞生长,并诱导细胞凋亡.
关键词： 5-氮-2'-脱氧胞苷 卵巢癌 错配修复基因 甲基化 凋亡 -
5-氮-2'-脱氧胞苷对人肺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响
目的:通过体外实验观察DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮-2'脱氧胞苷(5-aza-2'deoxycytidine, 5-aza-dC)对人肺腺癌细胞增殖、凋亡及相关基因表达的影响,初步探讨其在治疗肺部肿瘤的作用及可能机制.方法:分别以0.5、2.0、10.0 μmol/L的5-aza-dC处理人肺腺癌A549细胞,用MTT法测定药物干预72 h后的光密度值,计算抑制率,流式细胞仪检测5-aza-dC对肺癌细胞株细胞周期及凋亡的影响,实时定量PCR检测相关基因p21、Cyclin D1、Bax和Bcl-2 mRNA的表达.结果:5-aza-dC能抑制人肺癌细胞株A549的增殖,且呈浓度依赖性; G0/G1期细胞比例下降,S期及G2/M期细胞比例明显高于对照组,出现G2/M细胞周期阻滞;同时,5-aza-dC能诱导A549细胞凋亡;与对照组比较,各药物干预组p21 mRNA表达升高(均P＜0.01),而Cyclin D1 mRNA表达无明显变化(P＞0.05);与对照组比较,各药物干预组Bax、Bcl-2 mRNA表达均明显降低(均P＜0.01),且Bax/Bcl-2增高.结论:5-aza-dC能抑制肺癌细胞株的增殖、引起G2/M细胞周期阻滞,并促进凋亡,其机制可能与p21基因的上调及Bax/Bcl-2比值改变有关.
关键词： DNA甲基化 5-氮-2'-脱氧胞苷 肺肿瘤 -
5-氮-2'-脱氧胞苷抗肿瘤作用的研究进展
5-氮-2'-脱氧胞苷可通过DNA去甲基化影响组蛋白修饰包括组蛋白甲基化和乙酰化及直接引起DNA损伤等作用使调控细胞生长、分化和DNA修复有关的基因表达发生变化,引起肿瘤细胞周期阻滞、凋亡和分化从而抑制多种肿瘤细胞的生长,从而达到抗肿瘤作用.
关键词： 5-氮-2'-脱氧胞苷 DNA甲基化 组蛋白修饰 DNA损伤 肿瘤抑制 -
5-氮-2'-脱氧胞苷对黑素瘤细胞IGFBP7表达及细胞增殖的影响
目的 探讨去甲基化药物5-氮-2'-脱氧胞苷对体外培养黑素瘤细胞系A375和M14细胞胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP7)的表达及细胞增殖的影响.方法 体外培养黑素瘤A375和M14细胞,采用RT-PCR和免疫细胞化学法分别检测10μmol/L 5-氮-2'-脱氧胞苷处理前后A375和M14细胞中IGFBP7mRNA和蛋白的表达,噻唑蓝法检测不同浓度5-氮-2'-脱氧胞苷对A375和M14细胞的生长抑制作用.结果 10μmol/L 5-氮-2'-脱氧胞苷处理A375和M14细胞48h后,IGFBP7 mRNA和蛋白水平的表达均得到恢复.不同浓度的5-氮-2'-脱氧胞苷分别作用24、48、72、96和120h后,呈时间(F=141.35,P<0.01;F=549.33,P<0.01)和剂量(F=561.12,P<0.01;F=271.43,P<0.01)依赖性抑制A375和M14细胞增殖.结论 DNA甲基化参与调控IGFBP7基因的表达,5-氮-2'-脱氧胞苷具有抑制黑素瘤细胞增殖的作用.
关键词： 黑色素瘤 5-氮-2'-脱氧胞苷 胰岛素样生长因子结合蛋白7 -
5-氮-2'-脱氧胞苷诱导膀胱癌EJ细胞凋亡研究
[目的]探讨5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)诱导膀胱癌EJ细胞凋亡机制.[方法]以不同浓度的5-Aza-CdR作用于膀胱癌FJ细胞,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖程度,原位凋亡细胞检测技术(TUNEL)和流式细胞术(FCM)检测5-Aza-CdR对膀胱癌EJ细胞凋亡和细胞周期的影响.[结果]EJ细胞加入不同浓度的5-Aza-CdR(0.625,1.25,2.50,5.00 mg/ml),与对照组相比各组FJ细胞增长速度减慢.与对照组相比,不同浓度的各组5-Aza-CdR(0.625,1.25,2.50,5.00 mg/ml)可以显著降低EJ细胞的增殖比和增高EJ细胞的凋亡指数(P＜0.05),且与5-Aza-CdR呈浓度依赖关系(P＜0.05);不同浓度的5-Aza-CdR作用FJ细胞后G0/G1期细胞明显增加(P＜0.05).[结论]5-氮-2'-脱氧胞苷诱导膀胱癌FJ细胞凋亡并使EJ细胞阻滞于G0/G1期,从而抑制膀胱癌FJ细胞的增殖.
关键词： 5-氮-2'-脱氧胞苷 膀胱肿瘤 凋亡 -
FHIT基因5'CpG岛甲基化及其与结直肠癌的关系
[目的]探讨结直肠癌FHIT基因甲基化及去甲基化试剂5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对HCT1116细胞生长的影响.[方法]用甲基化特异性PCR(MSP)检测4个结肠癌细胞株、30例结直肠癌患者的原发肿瘤组织及其对应的正常组织的FHIT基因甲基化状态,用流式细胞术、HE染色及免疫细胞化学检测5-Aza-CdR对HCT1116细胞生长的影响.[结果]4个结肠癌细胞株中有3个细胞株(75%)存在FHIT基因5'CpG岛的甲基化,30例原发肿瘤组织有14例(46.7%)检出FHIT基因5'CpG岛的甲基化;用5-Aza-CdR处理HCT1116细胞后,其凋亡率由用药前的1.49%增加到32.6%.[结论]FHIT基因的5'CpG岛甲基化与结直肠癌的发生发展可能密切相关,5-Aza-CdR可能通过诱导细胞凋亡而抑制HCT1116细胞生长.
关键词： FHIT基因 甲基化 结直肠肿瘤 5-氮-2'-脱氧胞苷 -
5-氮-2'-脱氧胞苷对结肠癌细胞生物学行为的影响
目的 检测去甲基化药物5-氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'deoxycytidine,5-aza-dC)对结肠癌细胞株SW620、COL0205和HT29生物学行为的影响,并研究该药物对多个基因表达的影响.方法 5-aza-dC处理对各结肠癌细胞生长周期、凋亡、细胞迁移和侵袭能力的影响分别采用流式细胞术、Annexin V/Propidium Iodide法、细胞划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测.采用RT-PCR法检测抑癌基因THBS1、TIMP3、RASSF1A和癌基因c-myc、c-fos、bax在5-aza-dC处理前后各结肠癌细胞株中的表达改变情况.结果 5-aza-dC处理后,3株结肠癌细胞的生长周期均明显阻滞于G2/M期,细胞凋亡率显著增加(P<0.05).划痕实验后72 h,对照组结肠癌细胞明显向划痕的中央迁移,而药物处理组结肠癌细胞迁移不明显.5-aza-dC处理后,结肠癌细胞的侵袭能力较未处理组降低(P<0.05).5-aza-dC可恢复结肠癌细胞中多个抑癌基冈的表达,但是对癌基因的表达没有影响.结论 5-aza-dC对结肠癌细胞有阻滞细胞生长周期、促进凋亡及抑制细胞迁移和侵袭能力等作用,该作用可能足通过恢复多个抑癌基因的表达来实现的.
关键词： 结肠肿瘤 5-氮-2'-脱氧胞苷 凋亡 细胞周期 侵袭 -
5-aza-dC、TSA联合MeCP2的RNA干扰质粒对人肺腺癌细胞株A549生物学行为的影响
目的 探讨DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮-2'-脱氧胞(5-aza-dC)、组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)和甲基化结合蛋白MeCP2的RNA干扰载体Psilencer-2.1-U6-MeCP2对人肺腺癌细胞株A549生物学行为的影响.方法 人肺腺癌细胞株A549细胞用含10%胎牛血清的DMEM培养液培养.利用阳离子脂质体将Psilencer-2.1-U6-MeCP2重组质粒转染到A549细胞中.用5μmol/L的5-aza-dC和(或)300nmol/L的TSA处理A549细胞和稳定转染的A549细胞.Annexin V/PI双染法测定各组细胞培养72h后的凋亡情况:应用RT-PCR检测各组细胞培养72h后C/EBPα mRNA的表达.结果 (1)Psilencer 2.1-U6-MeCP2重组质粒能够稳定转染到A549细胞中:(2)5-aza-dC、TSA和Psilencer-2.1-U6-MeCP2重组质粒均能够上调A549细胞C/EBPa基因mRNA的表达、诱导细胞凋亡.且两两联合处理组A549细胞中C/EBPa mRNA的表达水平及凋亡率均明显高于单处理组(均P<0.01)、细胞C/EBPαa mRNA的相对表达量及凋亡率在三者联合处理组与两两联合处理组组间比较,差别均有统计学意义(P<0.05);(3)5-aza-dC组、TSA组和Psilencer-2.1-U6-MeCP2重组质粒组在诱导细胞凋亡、增强C/EBPαmRNA的表达方面比较,差别均无统计学意义.结论 与单用5-aza-dC、TSA、Psilence-2.1-U6-MeCP2重组质粒相比,联合运用能够更好的诱导人肺腺癌A549细胞凋亡,增强C/EBPα基因mRNA的表达,且三者联合运用的效果显著,这将为去甲基化多药联合治疗肺癌提供理论依据.
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5-Aza-CdR 对人卵巢癌3AO、SKOV3细胞增殖凋亡及抑癌基因RUNX3表达的影响
目的 探讨5-氮-2'脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人卵巢癌3AO及SKOV3细胞增殖凋亡及抑癌基因RUNX3表达的影响.方法 以浓度为0.5、5、50 μmol/L的5-Aza-CdR处理人卵巢癌细胞株3AO及SKOV3 3 d,常规培养5 d后采用四唑盐(MTT)比色法观察细胞的生长活性,以半定量RT-PCR法检测抑癌基因RUNX3 mRNA 的表达,并用流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 5-Aza-CdR能明显抑制肿瘤细胞生长,随5-Aza-CdR浓度增加,细胞生长速率下降;药物处理后RUNX3 mRNA的表达明显高于处理前(P＜0.05),且存在明显剂量依赖性.5-Aza-CdR处理后3AO及SKOV3细胞凋亡率均高于处理前(P均＜0.05),细胞凋亡率与5-Aza-CdR剂量均呈正相关.结论 5-Aza-CdR能使RUNX3基因去甲基化,增强其抑癌功能.
关键词： RUNX3基因 甲基化 5-氮-2'-脱氧胞苷 卵巢癌 凋亡 -
ADC处理前后子宫内膜癌细胞中ER亚型甲基化状态及其蛋白表达变化
目的 观察DNA甲基化抑制剂5-氮-2'-脱氧胞苷(ADC)处理前后子宫内膜癌细胞中雌激素受体亚型( ERα、ERβ)甲基化状态及其蛋白表达变化,并探讨其临床意义.方法 取对数生长期的子宫内膜癌细胞Ishikawa 和Hec-1B,用ADC处理24h；甲基化特异性PCR(MSP)法检测处理前后细胞中ERα(-A、-B、-C)、ERβ启动子区甲基化状态,用Western blot法检测处理前后细胞中的ERα蛋白.结果 Ishikawa和Hec-1 B细胞中,AIDC处理前仅ERα-C出现甲基化条带,处理后ERα-C甲基化条带消失；与处理前相比,处理后Ishikawa和Hec-1B细胞中ERα蛋白相对表达量显著增加(P均＜0.01).结论 ADC处理后,子宫内膜癌细胞中ERα-C基因高甲基化状态消失、ERα蛋白表达增加；ERα-C基因启动子区域DNA高甲基化可能是子宫内膜癌的发病机制之一.
关键词： 雌激素受体 甲基化 5-氮-2'-脱氧胞苷 子宫内膜癌细胞 子宫肿瘤 -
5-氮-2'-脱氧胞苷对膀胱癌T24细胞株RUNX3表达及生物学行为的影响
够通过逆转T24细胞RUNX3基因的异常甲基化,诱导该基因的重新表达而恢复其抑癌功能.
关键词： 膀胱肿瘤 RUNX3基因 5-氮-2'-脱氧胞苷 细胞凋亡 -
脾源性酪氨酸激酶基因的再表达对乳腺癌细胞生长、转移的影响
目的探讨脾源性酪氨酸激酶(Syk)基因的再表达对裸鼠乳腺癌肿瘤生长和转移的影响.方法 5-氮-2'-脱氧胞苷处理人乳腺癌细胞株MDA-MB-435s,甲基化特异性PCR(MSP)检测Syk基因的甲基化,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Syk基因的再表达,并用此处理过的细胞株和未经处理的细胞株分别接种于10裸鼠皮下,观察裸鼠成瘤率及肿瘤转移情况.结果 MSP检测用5-氮-2'-脱氧胞苷处理过的人乳腺癌MDA-MB-435s细胞株,Syk基因启动子没有甲基化,RT-PCR可检测到Syk基因,用有Syk基因再表达的MDA-MB-435s细胞株接种于10只裸鼠皮下,8周后有2只形成肿瘤,无1例肺部转移,而无Syk基因表达细胞株10只都形成肿瘤,并在肺部形成转移灶.对照组的成瘤率及肺转移率显著高于治疗组.结论 5-氮-2'-脱氧胞苷通过去甲基化使MDA-MB-435细胞株中Syk基因再表达,Syk基因的再表达可抑制荷瘤裸鼠乳腺癌的生长和转移.
关键词： 5-氮-2'-脱氧胞苷 Syk 乳腺癌 甲基化特异性PCR -
5-氮-2'-脱氧胞苷和曲古抑菌素诱导脾酪氨酸激酶基因去甲基化及转录和表达
目的 观察去甲基化药物(5-氮-2-脱氧胞苷)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂(曲古抑菌素)对结直肠癌细胞HCT-15中脾酪氨酸激酶基因表达、细胞增殖和侵袭能力的影响.方法 应用2.5 μmol/L的5-氮-2-脱氧胞苷和1 μmol/L的曲古抑菌素分别或联合处理HCT-15细胞,通过甲基化特异性聚合酶联反应、逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹检测处理前后脾酪氨酸激酶的甲基化状态和表达;氚胸腺嘧啶掺入法和体外细胞侵袭试验研究去甲基化前后细胞增殖力和侵袭力的变化.结果 (1)5-氮-2-脱氧胞苷和曲古抑菌素可使脾酪氨酸激酶基因去甲基化而恢复表达,曲古抑菌素增强5-氮-2-脱氧胞苷的去甲基化作用;(2)与脾酪氨酸激酶失表达阴性对照组比较,5-氮-2-脱氧胞苷、曲古抑菌素和联合用药组及脾酪氨酸激酶稳定表达阳性对照组中细胞增殖力分别下降30%、25%、45%和54%;细胞侵袭力分别下降22%、27%、43%和64%.结论 5-氮-2-脱氧胞苷和曲古抑菌素可恢复甲基化脾酪氨酸激酶基因的重新表达,抑制细胞增殖,降低细胞侵袭和转移力.
关键词： 5-氮-2'-脱氧胞苷 曲古抑菌素 脾 酪氨酸激酶 甲基化
