首页 > 文献资料
-
对曲古抑菌素A敏感的人肺腺癌细胞株的初步筛选
目的 初步筛选不同p53表达型肺癌细胞株对曲古抑菌素A(TSA)敏感性不同的影响因素.方法 分别以体外药物敏感试验(MTT法)、流式细胞术观察TSA处理3种肺癌细胞株(H1299为p53缺失型,H322为p53变异型,A549为p53野生型)后, 其生长抑制情况以及细胞周期、细胞凋亡等指标的变化;用Western blot 法检测3种细胞的人类表皮生长因子受体2(HER2)表达水平.结果 TSA对3种细胞均有抑制作用,在96 h时对A549的IC50抑制作用明显低于对H1299和H322的IC50(P<0.05),A549细胞凋亡也明显多于H1299和H322的细胞凋亡(P<0.05).3种细胞株HER2蛋白表达水平由高到低依次为H322、A549和H1299,与TSA的IC50值之间无相关性.结论 TSA对p53不同表达型人肺腺癌细胞株均有生长抑制作用,肺腺癌细胞株p53的不同表达型可能对TSA的敏感性产生影响,而HER2的表达强度不影响TSA的敏感性.
-
曲古抑菌素A对肺癌细胞株H322抑制效应及机制的研究
目的 评价曲古抑菌素A(TSA)对肺癌细胞株H322的生长抑制效应及机制.方法 以四氮甲基唑蓝、流式细胞术观察TSA作用后,肺癌细胞株H322的生长抑制情况以及细胞周期、细胞凋亡等变化,Western blot分析细胞周期相关蛋白p21、抗凋亡蛋白survivin及细胞外信号调节激酶(ERK)的表达.结果 TSA对H322具有时间依赖性和浓度依赖性的生长抑制作用；TSA作用48h及96h后,H322细胞凋亡及G2/M期细胞明显增加(P＜0.05).p21蛋白表达水平显著提高,survivin蛋白及磷酸化ERK蛋白表达显著下降.结论 TSA对肺癌细胞株H322生长具有抑制作用,其机制可能是上调p21蛋白的表达,引起细胞周期的阻滞；同时抑制survivin的表达,阻断ERK信号通路,导致细胞凋亡.
-
曲古抑菌素A体内外杀伤卵巢癌细胞
目的 探讨组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂曲古抑菌素A(TSA)在卵巢癌靶向治疗中的作用及机制.方法 以2种正常卵巢上皮细胞系IOSE-29和IOSE-329及3种卵巢癌细胞系ES-2、SKOV-3和OVCAR-8为研究对象,应用XTT法和流式细胞术检测TSA对卵巢癌细胞的抗增殖及诱导凋亡作用,并观察其体内疗效.结果 对比正常卵巢上皮,卵巢癌及其细胞系中HDAC6蛋白呈强阳性表达,其抑制剂TSA对ES-2,SKOV-3和OVCAR-8卵巢癌细胞系有明显杀伤作用,但正常卵巢上皮细胞对TSA不敏感,TSA处理组的卵巢癌细胞凋亡率和死亡率较未处理组高.体内实验表明:TSA处理组的ES-2裸鼠体内移植瘤生长速度较未处理组慢.结论 TSA可在体内外有效杀伤卵巢癌细胞,其机制部分是通过抑制HDAC6而实现的.
-
不同浓度曲古抑菌素A对鸡胚翅芽发育的影响
目的 观察组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对鸡胚翅芽发育中某些基因表达水平的作用,探讨不同浓度TSA(75μmol/L、750 μmol/L、1.5mmol/L)对鸡胚翅芽发育的影响,提高我们对染色质结构重组和表观遗传对基因表达的调控作用,以及对正在开发的抗癌药物的认识. 方法以鸡胚翅芽作为实验模型,用TSA处理翅芽,对鸡胚胎实施原位杂交,检测与肌肉发育相关基因的表达,并采用硫酸耐尔蓝(Nile bluesulfate)法检测细胞凋亡状况. 结果 75 μmol/L TSA能够抑制与肌肉发生相关的基因MyoD和Myf5在鸡胚翅芽的表达,经TSA(75μmol/L)处理的胚胎没有发生明显的细胞凋亡.但是随着TSA药物浓度的提高,TSA(≥750μmol/L)不仅强烈抑制相关基因的表达,而且出现翅芽外部畸形(外形改变、体积缩小)以及细胞凋亡. 结论75μmol/LTSA调控某些重要的转录因子及有力地控制肌肉细胞的分化;高浓度TSA(≥750μmol/L)导致细胞凋亡和胚胎翅芽畸形;发育的鸡胚能够作为一个便利的,供体内研究药物(如HDAC抑制剂类等)的模型.
-
5-氮杂-2'-脱氧胞苷联合古曲霉素A对人多发性骨髓瘤细胞系RPMI 8226细胞增殖、凋亡及DLC-1基因表达的影响
本研究旨在探讨DNA甲基化抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-cdR)联合组蛋白去乙酰化抑制剂古曲霉素A(TSA)对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226细胞的生物学活性及DLC-1基因表达调控的影响.5-Aza-CdR及TSA单独或联合作用于RPMI 8226细胞系,用CCK-8法检测细胞增殖活性,实时定量PCR(RT-PCR)检测药物作用后DLC-1基因表达情况,ELISA检测药物作用后RhoA及Rac1蛋白表达水平.结果表明,5-Aza-CdR及TSA对多发性骨髓瘤细胞具有明显生长抑制作用并呈剂量依赖性(P＜0.05);与5-Aza-CdR及TSA单药组比较,联合用药组对细胞的抑制作用更强,细胞凋亡率明显升高(P＜0.05);对照组RPMI 8226细胞DLC-1基因微弱表达,5-AzacdR组DLC-1基因表达增强,且呈剂量依赖性重新表达(P＜0.05),TSA虽不能诱导基因重新表达,但两药联合应用时可明显增强细胞DLC-1基因的表达;实验组与对照组多发性骨髓瘤细胞相比,rhoA及Rac1蛋白表达明显下降(P＜0.05).结论:5-Aza-CdR及TSA能有效的逆转RPMI 8226细胞DLC-1基因的表达,并明显增强对多发性骨髓瘤细胞的生长抑制及促凋亡作用.这种抑制作用可能与其抑制Rho/ROCK信号途径有关.
-
地西他滨联合曲古抑菌素A对MDS细胞株SKM-1作用的体外研究
本研究探讨去甲基化制剂地西他滨(decitabine)和(或)组蛋白去乙酰化酶抑制荆曲古抑菌素A(TSA)对MDS-RAEB细胞株SKM-1的影响及作用机制.用台盼蓝拒染法研究药物对SKM-1细胞生长曲线的影响;用四氮唑蓝还原试验和流式细胞术观察药物对SKM-1细胞分化作用;用Annexin V-FITC标记药物作用后的细胞,了解其早期凋亡的情况;用RT-PCR研究药物作用前后细胞Fas,survivin和P15INK4B基因表达的变化.结果表明:decitabine和(或)TSA对SKM-1细胞生长有抑制作用,能促进SKM-l细胞分化,细胞表面CD14、CD11b表达增加,HLA-DR表达减少;decitabine和(或)TSA处理SKM-1细胞后,SKM-1细胞凋亡增加,细胞Fas和P15INK4B mRNA表达增加,survivin mRNA表达减少.结论:decitabine和TSA均可以促进SKM-1细胞凋亡和分化,可能与Fas、P15INK4B和survivin基因表达有关,二者联用有协同作用.
-
5-Aza-dC及TSA对人胃癌细胞株SGC-7901Runx3基因甲基化及表达水平的影响
目的:探讨5-Aza-dC及TSA对人胃癌细胞系SGC-7901中抑癌基因Runx3启动子区甲基化、mRNA及蛋白表达水平的影响.方法:单独或联合应用5-Aza-dC及TSA处理体外培养的SGC-7901细胞,提取各组细胞的DNA、RNA及蛋白质,应用甲基化特异性定量PCR法(QMSP)检测Runx3基因启动子区甲基化状态,逆转录PCR法(RT-PCR)检测Runx3 mRNA的表达,免疫印迹法(Western blotting)法检测Runx3蛋白表达水平.结果:5-Aza-dC和TSA均能降低Runx3基因启动子区的甲基化水平(5-Aza-dC组及TSA组分别为对照组的0.70倍、0.63倍),提高mRNA表达水平(0.29±0.01、0.28±0.03 vs 0.14±0.03,P＜0.05)及蛋白表达水平(0.35±0.02、0.37±0.02 vs 0.09±0.01,P＜0.05)；与单独使用5-AzadC和TSA相比,两药联合组Runx3基因启动子区甲基化水平(对照组的0.37倍)及mRNA表达水平(0.45±0.02)和蛋白表达水平(0.50±0.01)均较单药组效果更明显(P＜0.05).结论:5-Aza-dC和TSA均能逆转胃癌细胞SGC-7901 Runx3基因的甲基化水平,恢复其mRNA和蛋白表达,且具有协同作用,为5-Aza-dC和TSA应用于胃癌的临床治疗提供了试验依据.
关键词： 胃癌 甲基化 5-氮杂-2′-脱氧胞苷 曲古抑菌素A RUNX3 -
5-氮-2-脱氧胞苷联合曲古抑菌素A对人胃癌细胞系MGC-803生物学行为的影响
目的: 探讨5-氮-2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)和曲古抑菌素A(TSA)对人胃癌细胞系MGC-803生物学行为的影响.方法: 人胃癌细胞系MGC-803按常规培养于含100 g/L小牛血清的RPMI 1640培养液中.实验分为5组: (1)空白对照组: 不含细胞的培养液; (2)阴性对照组: 细胞只换液, 不加药物;(3) 5-Aza-CdR组: 细胞接种24 h后, 加入10.0μmol/L的5-Aza-CdR; (4)TSA组: 细胞接种24 h后, 加入300 μg/L TSA; (5) 5-Aza-CdR+TSA组:细胞接种24 h后, 加入10.0 μmol/L 5-Aza-CdR,24 h后再加入300 μg/L TSA. 应用RT-PCR检测各组细胞培养72 h后细胞Runx3 mRNA的表达, MTT比色法测定各组细胞分别培养24、48、72 h后细胞增殖.结果: 单独应用5-Az a-CdR和TSA作用于MGC-803细胞72 h后, Runx3 mRNA相对表达量增加, 联合用药组分别与5-Aza-CdR组及TSA组相比, 差异有统计学意义(0.883±0.025vs 0.760±0.286, 0.735±0.018, 均P<0.05). 细胞生长抑制率在同一组别随着药物作用时间的延长而增加, 并且呈正相关( r = 0.738,P<0.05); 而在同一时间不同组别比较联合用药组细胞生长抑制率较单用药物组明显增加(24 h: 57.3% vs 40.4%, 39.0%; 48 h: 70.0% vs56.0%, 51.3%; 72 h: 86.3% vs 68.0%, 65.8%,均P<0.05). 细胞Runx3 mRNA的相对表达量及生长抑制率在药物组与对照组间比较, 差异均有统计学意义( P<0.05).结论: 与单用5-Aza-CdR或TSA相比, 联合应用2种药物更显著的增强Runx3 mRNA的表达,抑制细胞的增殖.
关键词： 5-氮-2-脱氧胞苷 曲古抑菌素A 胃癌细胞 RUNX3 甲基化 -
5-氮杂-2'-脱氧胞苷联合曲古抑菌素A对人胃癌细胞的存活率及E-cadherin甲基化的影响
目的 探讨5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-dC)联合曲古抑菌素A(TSA)对分化程度不同的人胃腺癌细胞株MKN-45、SGC-7901与MGC-803的细胞存活率和抑癌基因E-cadherin启动子区甲基化以及mRNA表达的影响. 方法 培养3个细胞株,实验分为空白对照组、5-Aza-dC组(10μmol/L 5-Aza-dC处理72 h)、TSA组(1μmol/L TSA处理48 h)和联合组(10μmol/L5-Aza-dC处理24 h后,再加入1μmol/L TSA处理48 h).观察三株细胞形态的改变,用台盼蓝染色法检测活细胞数.采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测3株细胞的E-cadherin基因启动子区甲基化水平与mRNA表达. 结果 MKN-45细胞中,5-Aza-dC组、TSA组与联合组的细胞存活率分别为(73.03±1.92)％、(64.48±1.28)％和(52.44±1.45)％;SGC-7901细胞分别是(63.33±1.92)％、(52.15±1.44)％和(44.44±1.45)％;MGC-803细胞分别是(57.33±1.61)％、(45.48±1.29)％和(33.11±1.12)％.3株细胞的单药组的细胞存活率均减少,联合组分别比5-Aza-dC和TSA处理组明显下降(均P＜0.05).E-cadherin基因启动子区甲基化水平,5-Aza-dC组、TSA组及联合组的甲基化产物与空白对照组相比较均降低,其中联合组比单药组降低明显.空白对照、5-Aza-dC、TSA及二者联合处理组的E-cadherin的mRNA相对表达量在MKN-45细胞株中分别为0.17±0.01、0.32±0.01、0.29±0.02和0.57±0.02;在SGC-7901细胞株中分别为0.22±0.01、0.46±0.01、0.43±0.01和0.61±0.01;在MGC-803细胞株中分别为0.24±0.02、0.49±0.01、0.44±0.01和0.73±0.01.在单药处理组中比空白对照组升高(P＜0.05),并且二药联合组比单药组升高(P＜0.01). 结论 5-Aza-dC和TSA单独处理均降低分化程度不同的胃癌细胞存活率,使E-cadherin基因的甲基化水平下降,并增加其mRNA表达.3株细胞的联合组的影响效果更明显,两药之间具有协同作用.其中MKN-45的存活率,甲基化水平和mRNA表达的改变均较SGC-7901与MGC-803明显.
-
5-氮-2-脱氧胞苷联合曲古抑菌素A在体内、体外对人胆管癌细胞QBC-939增殖的影响
目的 研究5-氮-2-脱氧胞苷(5-Aza-Cdr)和曲古抑菌素A(TSA)在体内、体外对人胆管癌细胞QBC-939生长的影响,探讨其应用于胆管癌生物学治疗的价值.方法 应用生长曲线、MTT、流式细胞仪、胆管癌裸鼠种植模型,检测不同浓度的5-Aza-Cdr和TSA,以及联合化疗药物对QBC-939体内、体外增殖的影响.结果 5-Aza-Cdr和TSA对QBC-939有明显的抑制作用,呈浓度、时间依赖性.流式细胞仪检测细胞周期主要阻滞于G1/S期,凋亡不明显.QBC-939经处理后裸鼠体内种植瘤生成率降低,荷瘤小鼠给予5-Aza-Cdr,TSA和氟尿嘧啶后肿瘤生长速度减慢、部分体积减小.结论 5-Aza-Cdr和TSA在体内、体外能抑制人胆管癌细胞QBC-939的生长,可能为胆管癌的生物学治疗提供一种新的思路.
关键词： 胆管肿瘤 5-氮-2-脱氧胞苷 曲古抑菌素A -
曲古抑菌素A通过雌激素受体α依赖和非依赖方式抑制乳腺癌细胞中细胞周期素D1的表达
目的 探讨曲古抑菌素A(TSA)对ER-α阳性和ER-α阴性乳腺癌细胞系的作用机制.方法 以含不同浓度TSA的培养液培养MCF-7(ER-α阳性)和MDA-MB-231细胞(ER-α阴性);采用四甲基亚噻唑蓝(MTT)法检测TSA作用后肿瘤细胞的增殖状态;用流式细胞仪定量分析肿瘤细胞增殖周期的改变;用半定量RT-PCR法测定ER-α和cyclin D1mRNA的表达.Western blot检测ER-α、p21和细胞周期素cyclin D1的蛋白表达水平.结果 ER-α阳性的MCF-7细胞对TSA的敏感性明显高于ER-α阴性的MDA-MB-231细胞,TSA作用48 h时前者的IC50约为40.6 nmol/L,后者的IC50约为272.4 nmol/L.在MCF-7 细胞系中,TSA能有效抑制ER-α和cyclin D1mRNA的表达,并增强cyclin D1蛋白通过泛素-蛋白酶体通路降解,使肿瘤细胞主要阻滞在G0/G1和G2/M期.在MDA-MB-231细胞系中,TSA对cyclin D1蛋白通过泛素-蛋白酶体通路降解作用增强,但对其mRNA转录本表达无明显影响.结论 TSA不仅可以通过依赖ER-α途径抑制cyclin D1 mRNA的表达,也可通过增强泛素-蛋白酶体通路降解cyclin D1蛋白而不依赖于雌激素途径.
-
TSA对人肝癌细胞株E-cadherin启动子区甲基化及表达的影响
目的 探讨去乙酰化转移酶抑制剂TSA对人肝癌SMMC-7721细胞株E-cadherin基因(E-cad)启动子区甲基化及其表达的影响.方法 TSA(300 nm/L)处理人肝癌SMMC-7721细胞,MTT法、TUNEL染色法分别检测细胞生长抑制及凋亡情况,甲基化特异性的PCR(methylation-specificPCR,MSP)检测处理前后E-cad启动子区CpG岛甲基化状态;Western blot检测处理前后E-cad及DNMT3b表达水平的变化.结果 TSA能抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长并诱导其发生凋亡,与对照组相比,实验组细胞生长抑制率为21.85%,对照组细胞凋亡率为(4.69±0.56)%,实验组凋亡率为(14.94±0.91)%,与对照组相比,凋亡细胞明显增多(P=0.000).用药前E-cad启动子区CpG岛为甲基化状态,E-cad蛋白表达阴性.TSA处理后E-cad启动子区CpG岛发牛脱甲基化,E-cad蛋白恢复表达.TSA亦导致DNMT3b的表达水平降低. 结论去乙酰化转移酶抑制剂TSA能抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长,并可诱导其发生凋亡,逆转E-cad基因启动子区的甲基化状态,并恢复该基因表达.TSA有可能通过DNMT3b发挥脱甲基化作用.
-
曲古抑菌素A诱导胰腺癌细胞株凋亡和Notch信号通路改变的研究
目的 研究曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)干预对胰腺癌细胞株PANC-1凋亡及相关基因表达的影响,探讨其作用机制.方法 采用0.1 ～0.4 μmol/L不同浓度TSA处理胰腺癌细胞.四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞的存活率,通过Hoechst 33258染色直接观察细胞凋亡.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测包括Notch信号通路相关的基因、肿瘤增殖相关基因eaf2和肿瘤转移相关基因cytohesin 1、2、3、4的表达.蛋白质印迹法检测细胞caspase-3、bcl-2、bax以及Notch-1的胞内活性形式NICD蛋白表达.结果 TSA对PANC-1的增殖抑制作用呈明显浓度和时间依赖性,0.1、0.2、0.4 μmol/L TSA作用PANC-1 24 h后存活率分别为72％、58％和39％.显微镜观察发现随着TSA浓度增加和作用时间延长,PANC-1细胞死亡逐渐增加,Hoechst 33258染色可见凋亡典型特征的PANC-1细胞比例增加.TSA作用PANC-1后,蛋白质印迹法结果显示caspase-3、bax以及NICD蛋白表达增加,而bcl-2蛋白表达下降.qRT-PCR结果显示Notch通路中相关基因numb、hes6mRNA表达升高,gcn512、dll3 mRNA表达下降(P＜0.05),而Notch1 mRNA表达没有变化.肿瘤增殖相关基因eaf2以及肿瘤转移相关基因cytohesin mRNA表达未发现有变化(P＞0.05). 结论 TSA可诱导胰腺癌PANC-1细胞凋亡,且呈剂量依赖性.Notch通路相关基因可能参与了TSA诱导细胞凋亡的过程.
-
5-氮杂脱氧胞苷与曲古抑菌素A对膀胱癌细胞株ALDH1a2基因表达及凋亡的影响
目的 探讨5-氮杂脱氧胞苷(5-Aza-dC)与曲古抑菌素A(TSA)对膀胱癌细胞中抑癌基因ALDH1a2启动子甲基化状态和基因表达及细胞凋亡的影响.方法 使用5-Aza-dC、TSA处理RT-4、253J、5637、BIU-87和T24后,应用甲基化特异性PCR(MSP)法、逆转录PCR(RT-PCR)法、Western blot法分别检测这5株膀胱癌细胞经药物干预前后ALDH1a2甲基化状态及基因表达情况,应用流式细胞学检测干预前后5株膀胱癌细胞株的凋亡情况.结果 在5株膀胱癌细胞中,ALDH1a2基因表现为高甲基化表达受到抑制,TSA不影响甲基化状态,5-Aza-dC可逆转高甲基化状态并恢复基因表达,联合给予5-Aza-dC和TSA的作用和单独给予5-Aza-dC相似;TSA和5-Aza-dC均可诱导膀胱癌细胞株凋亡,早期凋亡是膀胱癌细胞株死亡的主要方式,5-Aza-dC和TSA有协同作用,3个实验组与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 在5株膀胱癌细胞株中,ALDH1a2基因启动子甲基化可能是导致其基因失活的主要原因;5-Aza-dC单独作用和5-Aza-dC及TSA联合应用效果相似,均能恢复基因重新表达进而诱导膀胱癌细胞株的早期凋亡.
-
曲古抑菌素A促进As2O3诱导HL-60细胞分化与分子机制的研究
目的:研究曲古抑菌素A能否促进小剂量三氧化二砷(As2O3)诱导HL-60细胞分化并对其机制进行初步探讨.方法:用MTT实验测定药物对细胞增殖的变化;流式细胞仪检测细胞表面CD11b表达率观察药物对细胞的分化作用; RT-PCR方法检测p21和cyclin D3在mRNA水平的表达变化.结果:HL-60细胞经曲古抑菌素A和(或)小剂量As2O3作用24 h后,联合用药组较单用As2O3组能明显抑制细胞增殖,促进细胞分化,p21在mRNA水平表达增加,cyclin D3在mRNA水平表达降低.结论:曲古抑菌素A能促进小剂量As2O3诱导HL-60细胞的分化,其机制可能与细胞周期蛋白cyclin D3和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p21的表达变化有关.
-
去甲基化和组蛋白去乙酰化转移酶抑制剂对Ishikawa和AN3细胞增殖和凋亡的影响
目的:探讨去甲基化制剂5-氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR or DAC)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对人子宫内膜腺癌Ishikawa和AN3细胞增殖和凋亡的影响.方法:台盼蓝拒染法观察药物对细胞生长曲线的影响;Annexin Ⅴ染色法检测细胞凋亡;流式细胞仪分析细胞周期; Western blot检测凋亡信号通路中Caspase-8 、Caspase-9活化及多聚ADP核糖聚合酶(PARP)裂解情况.结果:DAC和 TSA对Ishikawa和AN3细胞均有时间依赖性的抑制作用,联用后抑制作用更强.单用DAC或TSA均可诱导细胞凋亡.单用DAC或TSA对细胞G1期无影响,单用TSA使G2/M期细胞比例增高,联合用药发生明显的G1期阻滞.Western blot检测表明,DAC和 TSA诱导了Caspase-8、Caspase-9裂解活化及PARP裂解.结论:DAC与TSA协同可抑制细胞生长,并使细胞阻滞在G1期,且细胞凋亡发生的时相不同于单独用药组.
关键词： 去甲基化 组蛋白去乙酰化酶 5-氮-2′-脱氧胞苷 曲古抑菌素A 脱噬作用 -
曲古抑菌素A和紫杉醇对肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响
目的 研究曲古抑菌素A(TSA)联合紫杉醇对肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 以TSA和紫杉醇单独或联合处理A549细胞后,采用锥虫蓝拒染法规察药物对肿瘤细胞增殖的影响,采用Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡,采用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期的变化,采用Western blot法检测肿瘤细胞凋亡信号通路中多聚二磷酸腺苷核糖多聚酶(PARP)、casapase-3、乙酰化微管蛋白和survivin蛋白的表达变化.结果 TSA和紫杉醇对A549细胞均有抑制作用,TSA联合紫杉醇抑制作用更强.250 nmol/L TSA联合10μg/ml紫杉醇处理细胞72 h,细胞增殖抑制率为82.8％.单用TSA或紫杉醇均可诱导A549细胞凋亡,细胞凋亡率分别为(17.6±1.8)％和(39.2±3.7)％,TSA和紫杉醇联合应用可使A549细胞的凋亡率增至(64.2±4.2)％,与对照组[(1.2±0.5)％]相比,差异有统计学意义(P＜0.01).TSA组、紫杉醇组、TSA+紫杉醇组G2/M期细胞百分比分别为(23.5±2.2)％、(10.5±1.5)％和(32.4±3.1)％,与对照组[(4.8±1.1)％]比较,TSA组和TSA+紫杉醇组差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).紫杉醇和TSA可诱导A549细胞微管蛋白乙酰化,使survivin蛋白的表达减少,PARP和casapase-3表达增加.结论 TSA和紫杉醇能抑制A549肿瘤细胞生长,诱导细胞凋亡,二者联合具有协同作用.
关键词： 曲古抑菌素A 紫杉醇 肺肿瘤 casapase-3 survivin -
端粒酶逆转录酶在脐静脉内皮细胞耐受曲古抑菌素A诱导凋亡中的作用
目的 观察曲古抑菌素A(TSA)对脐静脉内皮细胞及宫颈癌细胞凋亡、端粒酶逆转录酶(hTERT)表达的影响,并探讨hTERT在脐静脉内皮细胞耐受TSA中的作用.方法 磺酰罗丹明B(RSB)法检测药物动力学特征;流式细胞仪检测周期改变和凋亡;RT-PCR检测hTERT和p21Waf1基因表达变化;免疫荧光结合流式细胞术检测hTERT蛋白表达变化;转染hTERT质粒后,PCR-TRAPELISA法检测转染细胞端粒酶活性;AnnexinV/PI检测转染细胞在TSA作用下的早期凋亡.结果 在大剂量TSA作用脐静脉内皮细胞后,增殖抑制、周期阻滞,但凋亡并不显著;HeLa细胞在相同剂量的TSA作用下凋亡明显.脐静脉内皮细胞经TSA诱导后,hTERT表达上调,p21Waf1则无明显变化;而HeLa细胞p21Waf1表达上升,hTERT表达下降.转染显性负突变hTERT的脐静脉内皮细胞,其端粒酶活性显著低于对照组.TSA作用转染不同质粒的脐静脉内皮细胞的凋亡率与对照组差异有统计学意义.结论 脐静脉内皮细胞可以耐受大剂量TSA诱导的凋亡,hTERT表达上调可能是脐静脉内皮细胞耐受TSA诱导凋亡的重要机制之一.
-
曲古抑菌素A对肿瘤坏死因子α诱导的炎症微环境下牙周膜干细胞成骨分化能力的影响
目的 观察肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导的炎症微环境下牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSC)中组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases,HDAC)家族的表达变化,探究HDAC抑制剂曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)干扰HDAC功能后对PDLSC成骨分化能力的影响.方法 收集新鲜健康的离体牙牙周膜组织,分离培养PDLSC.采用实时定量PCR技术检测对照组及TNF-α(10 μg/L)刺激下HDAC1～11的表达变化;甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测TSA(50 nmol/L)对PDLSC增殖能力的影响,对照组加正常细胞培养液,TNF-α组加含TNF-α的细胞培养液,TSA组加含TNF-α及TSA的细胞培养液;分别采用茜素红染色、实时定量PCR技术和蛋白质印迹法检测TSA对炎症微环境下PDLSC成骨分化能力的影响,对照组加正常成骨诱导液,TNF-α组加含TNF-α的成骨诱导液,TSA组加含TNF-α及TSA的成骨诱导液.结果 除HDAC7外,TNF-α组HDAC的表达均显著高于对照组(P＜0.05);50 nmol/L TSA对PDLSC的增殖能力无显著影响(P=0.232);茜素红染色显示TNF-α组PDLSC较对照组基质矿化显著减少,而TSA组细胞矿化能力明显提高;与对照组(设为1.0)相比,TNF-α组PDLSC成骨相关基因核心结合蛋白因子2(runt-related transcription factor-2,RUNX2)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP) mRNA的相对表达量分别为0.17±0.02、0.32±0.03,TSA组RUNX2、ALP mRNA的表达量(分别为0.67±0.03、0.89±0.02)均显著高于TNF-α组(P＜0.01);蛋白质印迹法结果显示,TNF-α组PDLSC成骨相关蛋白的表达较对照组明显减少,与TNF-α.组相比,TSA可以明显促进炎症微环境下细胞成骨相关蛋白的表达.结论 炎症微环境下PDLSC高表达HDAC,应用TSA抑制HDAC后可显著提高炎症环境下PDLSC的成骨分化能力.
-
组蛋白去乙酰化酶抑制剂与紫杉醇联合应用对肺癌细胞的毒性作用
目的 评价组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂曲古抑菌素A(TSA)联合紫杉醇(TAX)对肺癌细胞株H1299的抑制作用.方法以不同浓度TSA和(或)TAX处理H1299细胞,MTT法检测细胞存活率,计算TAX的半数抑制浓度(IC_(50))并绘制细胞生长曲线.随后将H1299细胞分成4组:对照组,常规培养细胞36h;TAX 组,TAX (10nmol/L)处理细胞24h;TSA 组,TSA (300nmol/L)处理细胞12h;TF组,TSA(300nmol/L)处理细胞12h后,加入TAX(10nmol/L)处理24h.采用流式细胞术观察细胞周期分布和细胞凋亡率;对细胞进行Hochest 33342染色后,在荧光显微镜下观察细胞核形态的改变;Western blotting 检测人多聚ADP核糖聚合酶(PARP)剪切蛋白和p21蛋白表达.结果 TSA预先作用12h可以使TAX对H1299细胞的IG_(50)由110.6±38.7nmol/L下降至63.7±11.8nmol/L(P<0.05).与对照组比较,TAX和TF组细胞存在明显的G_0/G_1期阻滞,但4组的细胞凋亡率均很低(P>0.05).TSA、TAX 及TF组可见以死亡为主的细胞核改变现象,凋亡小体很少.4组均未检测到PARP剪切蛋白.与对照组比较,TSA、TAX及TF组的p21蛋白表达均有明显增加(P<0.05);与TAX组比较,TSA组和TF组的p21蛋白明显增加(P<0.05),且后两组间无显著差异(P>0.05).结论 联合HDAC抑制剂TSA可提高TAX对肺癌细胞H1299的毒性,促进细胞死亡,但其机制与细胞凋亡无关.
