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5-氮-2-脱氧胞苷联合曲古抑菌素A对人胃癌细胞系MGC-803生物学行为的影响
目的: 探讨5-氮-2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)和曲古抑菌素A(TSA)对人胃癌细胞系MGC-803生物学行为的影响.方法: 人胃癌细胞系MGC-803按常规培养于含100 g/L小牛血清的RPMI 1640培养液中.实验分为5组: (1)空白对照组: 不含细胞的培养液; (2)阴性对照组: 细胞只换液, 不加药物;(3) 5-Aza-CdR组: 细胞接种24 h后, 加入10.0μmol/L的5-Aza-CdR; (4)TSA组: 细胞接种24 h后, 加入300 μg/L TSA; (5) 5-Aza-CdR+TSA组:细胞接种24 h后, 加入10.0 μmol/L 5-Aza-CdR,24 h后再加入300 μg/L TSA. 应用RT-PCR检测各组细胞培养72 h后细胞Runx3 mRNA的表达, MTT比色法测定各组细胞分别培养24、48、72 h后细胞增殖.结果: 单独应用5-Az a-CdR和TSA作用于MGC-803细胞72 h后, Runx3 mRNA相对表达量增加, 联合用药组分别与5-Aza-CdR组及TSA组相比, 差异有统计学意义(0.883±0.025vs 0.760±0.286, 0.735±0.018, 均P<0.05). 细胞生长抑制率在同一组别随着药物作用时间的延长而增加, 并且呈正相关( r = 0.738,P<0.05); 而在同一时间不同组别比较联合用药组细胞生长抑制率较单用药物组明显增加(24 h: 57.3% vs 40.4%, 39.0%; 48 h: 70.0% vs56.0%, 51.3%; 72 h: 86.3% vs 68.0%, 65.8%,均P<0.05). 细胞Runx3 mRNA的相对表达量及生长抑制率在药物组与对照组间比较, 差异均有统计学意义( P<0.05).结论: 与单用5-Aza-CdR或TSA相比, 联合应用2种药物更显著的增强Runx3 mRNA的表达,抑制细胞的增殖.
关键词： 5-氮-2-脱氧胞苷 曲古抑菌素A 胃癌细胞 RUNX3 甲基化 -
5-氮-2-脱氧胞苷联合曲古抑菌素A在体内、体外对人胆管癌细胞QBC-939增殖的影响
目的 研究5-氮-2-脱氧胞苷(5-Aza-Cdr)和曲古抑菌素A(TSA)在体内、体外对人胆管癌细胞QBC-939生长的影响,探讨其应用于胆管癌生物学治疗的价值.方法 应用生长曲线、MTT、流式细胞仪、胆管癌裸鼠种植模型,检测不同浓度的5-Aza-Cdr和TSA,以及联合化疗药物对QBC-939体内、体外增殖的影响.结果 5-Aza-Cdr和TSA对QBC-939有明显的抑制作用,呈浓度、时间依赖性.流式细胞仪检测细胞周期主要阻滞于G1/S期,凋亡不明显.QBC-939经处理后裸鼠体内种植瘤生成率降低,荷瘤小鼠给予5-Aza-Cdr,TSA和氟尿嘧啶后肿瘤生长速度减慢、部分体积减小.结论 5-Aza-Cdr和TSA在体内、体外能抑制人胆管癌细胞QBC-939的生长,可能为胆管癌的生物学治疗提供一种新的思路.
关键词： 胆管肿瘤 5-氮-2-脱氧胞苷 曲古抑菌素A -
P27基因甲基化在鼻咽癌发生发展中的作用
目的 探讨P27基因甲基化在鼻咽癌发生发展中的作用.方法 运用甲基化特异性PCR技术对5个鼻咽癌细胞株(CNE1、CNE2、TWO3、HNE1、HONE1)和1个正常鼻咽上皮细胞株(NP69),54例鼻咽癌组织和20例正常鼻咽上皮组织的P27基因启动子区甲基化状态进行检测.半定量反转录PCR法检测加入甲基转移酶抑制剂5-氮-2-脱氧胞苷(5-aza-2-deoxycytidine)后CNE1和CNE2中P27基因转录表达的变化,分析鼻咽癌组织中P27基因甲基化与临床因素的关系以及去甲基化对P27基因转录表达的影响.结果 正常鼻咽上皮细胞株NP69及20例正常鼻咽上皮组织中均未检测到P27基因甲基化;5个鼻咽癌细胞株中P27基因甲基化频率为80%(4/5),54例鼻咽癌组织中P27基因甲基化频率为63%(34/54),二者与正常鼻咽上皮细胞株及正常鼻咽上皮组织比较差异均有统计学意义(P<0.01),进一步分析发现P27基因甲基化状态与患者年龄、性别、T分期、N分期、TNM分期、病理类型等临床因素均无相关性(P>0.05),经5-氮-2-脱氧胞苷处理后CNE1和CNE2中P27基因的转录表达增加.结论 P27基因甲基化与其转录表达密切相关,是基因表达调节的一种重要方式.P27基因甲基化具有肿瘤特异性,为鼻咽癌早期事件,有望成为早期分子生物学辅助诊断的标志物,并有可能作为去甲基化基因治疗的靶点.
关键词： 基因 p27 鼻咽肿瘤 甲基化 5-氮-2-脱氧胞苷 -
5-氮-2-脱氧胞苷联合曲古抑菌素A对人胃癌细胞系MGC-803细胞增殖和凋亡的影响
目的 研究人胃癌细胞系MGC-803经DNA甲基转移酶抑制剂5-氮-2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)作用后细胞增殖和凋亡变化.方法 MTT比色法测定各组细胞的增殖情况,Annexin V染色法检测各组细胞凋亡率.结果 单独应用5-Aza-CdR或TSA作用于胃癌细胞系MGC-803后,细胞增殖均受到抑制,生长抑制率分别为68.0%、65.8%;凋亡率分别为(42.31±4.53)%、(39.30±5.37)%,而联合用药组细胞生长抑制率明显增加,达到86.3%,细胞凋亡率为(68.20±7.14)%.结论 与单用5-Aza-CdR或TSA相比,联合应用两种药物更能显著的诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖,这可能为胃癌的生物治疗提供一种新的思路.
关键词： 5-氮-2-脱氧胞苷 曲古抑菌素A 胃癌 细胞增殖 细胞凋亡 -
5-aza-dC和丁酸钠对人胃癌细胞株MKN28细胞周期、凋亡以及抑癌基因表达的影响
背景:表遗传修饰的主要方式DNA甲基化和组蛋白乙酰化是胃癌发生机制研究中的热点内容.目的:探讨表遗传学调控对人胃癌细胞株MKN28细胞周期、凋亡以及抑癌基因Runx3、p21WAFI表达的影响.方法:培养人胃癌细胞株MKN28,并分为5.氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-dC)组、丁酸钠组、5-aza-dC+丁酸钠组和对照组.以Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞周期和凋亡,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Runx3、p21WAFImRNA表达,以甲基化特异性PCR(MSP)检测Runx3基因启动子区甲基化状态.结果:与对照组相比,5-aza-dC对细胞周期无明显影响,丁酸钠可使细胞周期阻滞于G0/G1期(P＜0.05);5-aza-dC组和丁酸钠组细胞凋亡率均显著增高(8.3%±1.3%、20.8%±2.4%对2.0%±0.5%,P＜0.05).5-aza-dC可诱导Runx3 mRNA重新表达(P＜0.05),但对p21WAFI mRNA表达无影响.丁酸钠可增强p21WAFI mRNA表达(P＞0.05),但不能诱导Runx3 mRNA表达.联合5-aza-dC和丁酸钠可显著诱导细胞凋亡和增强抑癌基因Runx3、p21WAFI mRNA表达(P＜0.05).5-aza-dC干预后,Runx3基因启动子区呈去甲基化状态.结论:去甲基化制剂5-aza-dC或组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠通过重新表达Runx3或增强p21WAFI表达而诱导胃癌MKN28细胞凋亡,从而发挥抗肿瘤的作用.
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Maspin基因甲基化对口腔黏膜鳞癌细胞的调控作用
目的:分析口腔黏膜鳞癌细胞增殖过程中Maspin基因甲基化的调控作用机制,为相关研究及临床治疗提供借鉴.方法:鳞状细胞癌HIOEC-B(a)P细胞系随机分为4组:5-氮-2-脱氧胞苷+曲古抑菌素A(ADC+TSA)阴性组、低(0.1 μmol/L+0.05μmol/L)、中(1μ,mol/L+0.5 μmol/L)和高剂量组(10 μmol/L+5 μ,mol/L).以正常口腔黏膜上皮细胞作为对照组.实时定量PCR检测各组细胞Maspin基因的甲基化程度,MTT法检测各组细胞的增殖情况,4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色检测细胞凋亡.采用SPSS20.0软件包对数据进行单因素方差分析.结果:与对照组相比,癌细胞的Maspin基因甲基化程度显著增强(P＜0.01),与阴性组相比,中剂量和高剂量组Maspin基因甲基化程度显著减弱(P＜0.05,P＜0.01),低、中、高剂量组的细胞增殖抑制率显著高于阴性组(P＜0.05,P＜0.01).随着药物剂量的提高,细胞凋亡程度逐渐增加(P＜0.05).结论:Maspin基因甲基化可能参与口腔黏膜鳞癌细胞的增殖过程.
关键词： maspin基因 甲基化 5-氮-2-脱氧胞苷 曲古抑菌素A -
CHFR基因在人肝癌HepG2细胞中的表达与作用
目的:研究CHFR基因在人肝癌细胞株HepG2中的表达.以及CHFR基因甲基化对HepG2细胞生长与集落形成的影响.方法:采用去甲基化剂5-氮-2-脱氧胞苷处理人肝癌细胞株HepG2,半定量RT-PCR检测CHFR在HepG2细胞中的表达变化,CCK法和平板集落形成试验分析HepG2细胞生长增殖情况的改变.结果:CHFR在HepG2细胞中表达缺失;经Aza去甲基化处理后,CHFR在HepG2细胞中逐渐恢复表达,肿瘤细胞抑制率和集落形成抑制率都逐渐增高,均存在剂量-反应关系;且CHFR表达水平与HepG2细胞抑制率、集落形成抑制率均呈正相关.结论:CHFR对于肝癌细胞的生长增殖能力发挥负向调控作用.
关键词： Chfr基因 HepG2细胞 5-氮-2-脱氧胞苷 DNA甲基化 -
Parkin基因甲基化在鼻咽癌发生发展中的作用
目的 探讨Parkin基因甲基化在鼻咽癌发生发展中的作用.方法 应用甲基化特异性PCR技术对5个鼻咽癌细胞株(CNE1、CNE2、TW03、HONE1、C666)和1个正常鼻咽上皮细胞株(NP69)、54例鼻咽癌组织和16例正常鼻咽上皮组织的Parkin基因启动子区甲基化状态进行检测,并分析鼻咽癌组织中Parkin基因甲基化与临床特征的关系;应用RT-PCR检测加入甲基转移酶抑制剂(5-氮-2-脱氧胞苷)后CNE1、CNE2中Parkin基因转录表达,分析去甲基化对Parkin基因转录表达的影响.结果 1个正常鼻咽上皮细胞株和16例正常鼻咽上皮组织中均未检测到Parkin基因甲基化;5个鼻咽癌细胞株和54例鼻咽癌组织中Parkin基因甲基化频率分别为60.00％和62.96％;54例鼻咽癌患者中Parkin基因甲基化状态与临床因素均无关(均P＞0.05).经过5-氮-2-脱氧胞苷处理后,Parkin基因在CNE1、CNE2中转录表达增加,分别从0提高至3.65和2.15.结论 鼻咽癌中Parkin基因甲基化与转录表达密切相关,是基因表达调节的一种重要方式;可能成为鼻咽癌早期分子生物学辅助诊断的标志物和去甲基化基因治疗的靶点.
关键词： parkin基因 鼻咽癌 甲基化 5-氮-2-脱氧胞苷 -
5-氮-2-脱氧胞苷调控 Wif-1基因甲基化对胆管癌细胞侵袭力的影响
目的：探讨甲基转移酶抑制剂5-氮-2-脱氧胞苷（DAC）对胆管癌细胞 TFK-1侵袭力的影响及其机制。方法采用 Transwell 法检测胆管癌细胞在不同浓度 DAC（0、10、20、40、80、160μmol·L－1）作用下侵袭力的变化；Western-blot 法检测 DAC 作用后 Wif-1蛋白的表达。结果DAC 对胆管癌细胞侵袭力有显著性抑制（P ＜0．05），且呈浓度依赖性；Wif-1蛋白在 TFK-1细胞中未见表达，DAC 处理后 Wif-1蛋白再现表达。结论DAC 对胆管癌TFK-1细胞的侵袭有抑制作用，此作用可能是由 Wif-1基因去甲基化来实现。
关键词： 5-氮-2-脱氧胞苷 WIF-1 胆管癌 侵袭力 -
5-氮-2-脱氧胞苷调控p53-baX凋亡通路DNA甲基化对胆管癌细胞生长的影响
目的 探讨甲基转移酶抑制剂5-氮-2-脱氧胞苷(DAC或5-aza-dc)对胆管癌细胞QBC939生长的影响及其机制.方法 应用噻唑蓝(MTT)比色法检测DAC在不同浓度(0.1、0.5、1.0、5.0、25.0、100.0μmol/L)及不同时间(24、48、72 h)下对胆管癌细胞QBC939存活率的影响,透射电镜观察细胞形态学改变,流式细胞仪观察细胞生长周期及凋亡率的变化;甲基化聚合酶链反应检测DAC作用前后p53-bax凋亡通路DNA甲基化变化.结果 DAC对QBC939细胞生长的抑制有浓度和时间依赖性,其半数抑制率(IC50)为72h 5μmol/L;经DAC作用后电镜下胆管癌细胞凋亡增加;胆管癌细胞凋亡发生率由DAC处理前的4.31%上升至处理后的43.04%;DAC作用前p53-bax凋亡通路中p14、DAPK抑癌基因甲基化,DAC作用后p14、DAPK抑癌基因脱甲基化.结论 DAC对胆管癌QBC939细胞的生长具有抑制作用,这一抑制作用是由于DAC脱甲基化造成的,DAC对胆管癌QBC939细胞p53-bax线粒体凋亡通路DNA甲基化的影响使细胞凋亡功能得以恢复.
关键词： 胆管癌 5-氮-2-脱氧胞苷 甲基化 脱噬作用 -
骨肉瘤细胞株阿霉素耐药与错配修复基因1基因甲基化的关系
目的 探讨错配修复基因1(hMLH1)基因的启动子甲基化与骨肉瘤耐阿霉素(ADR)细胞株MG63/ADR的ADR耐药是否相关.方法 噻唑蓝(MTT)法及流式细胞术检测浓度分别为0、2、4、8、16、32 μmol/L的ADR干预48 h后对MG63及MG63/ADR细胞增殖的影响,以及MG63/ADR细胞对ADR的耐药指数,5-氮-2'-脱氧胞苷对MG63/ADR细胞的毒性作用以及MG63/ADR细胞经0、50、100 μmol/L的5-氮-2'-脱氧胞苷干预48 h后其对ADR的半数抑制浓度及耐药逆转指数.结果 MG63和MG63/ADR细胞对ADR的半数抑制浓度分别为(2.28±0.12) μmol/L和(11.18 ±0.11) μmol/L,MG63/ADR的耐药指数为4.90;MTT和流式细胞术检测5-氮-2'-脱氧胞苷作用48 h,50 μmol/L 5-氮-2'-脱氧胞苷为MG63/ADR细胞的无毒剂量,100μmol/L 5-氮-2'-脱氧胞苷为其低毒剂量;MG63/ADR细胞被无毒剂量及低毒剂量5-氮-2'-脱氧胞苷处理后,ADR对MG63/ADR细胞的半数抑制浓度分别降至(6.18 ±0.13) μmol/L和(4.42±0.12) μmol./L;耐药逆转指数分别为1.81、2.53.结论 hMLH1基因启动子的甲基化可能参与了骨肉瘤MG63/ADR细胞的ADR耐药.
关键词： 错配修复基因1 甲基化 5-氮-2-脱氧胞苷 阿霉素 耐药 -
去甲基化修饰诱导人胆管癌细胞中RASSF1A基因表达
目的 探讨DNA甲基转移酶抑制剂5-氮-2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人胆管癌细胞株QBC-939中RASSF1A基因启动子区域甲基化状态及其表达的影响.方法 用5 μmol/L的5-Aza-CdR对QBC-939细胞进行化学干预24 h,用甲基化特异性PCR(MS-PCR)检测 RASSF1A基因启动子区域甲基化状态的改变,RT-PCR观察RASSF1A基因mRNA水平变化,Western blot检测RASSF1A蛋白的表达.结果 经5-Aza-CdR化学干预后,RASSF1A基因启动子区域由甲基化状态转变为非甲基化状态;RT-PCR和Western blot结果显示在干预组细胞中分别出现RASSF1A基因的DNA条带(280 bp)和蛋白质条带(40 kD),而对照组中没有相应条带出现.结论 DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR能够诱导RASSF1A基因启动子区域去甲基化,并通过该机制诱导RASSF1A基因在人胆管癌细胞系QBC-939中的表达.
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VPA、SAHA和DAC对子宫内膜癌细胞系抑制作用的研究
目的:观察丙戊酸(VPA)、软木酰苯胺氧肟酸(SAHA)和5-氮-2-脱氧胞苷(DAC)对子宫内膜癌细胞RL-952和HEC-1-B的增殖抑制作用,及对细胞周期、凋亡情况和上皮型钙黏素(E-cad)基因表达的影响.方法:以VPA、SAHA和DAC作用于子宫内膜癌细胞,应用噻唑蓝(MTr)比色法、流式细胞仪和透射电镜对细胞增殖、周期和凋亡情况进行观察.应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法观察药物作用后细胞内E-cad mRNA表达的情况.结果:VPA、SAHA和DAC作用HEC-1-B和RL-952细胞,随着药物浓度的增加,增殖抑制率明显增加(6.77％～93.25％和3.24％～89.25％,5.61％ ～97.36％和2.56％～87.85％,8.25％～92.54％和5.56％～93.47％)(P＜0.01)；同一浓度药物随着作用时间的延长(24～96小时)对HEC-1-B和RL-952细胞增殖抑制率明显增加(42.41％～82.74％和36.17％ ～71.05％,43.15％～82.09％和40.38％～85.93％,43.26％～91.44％和37.75％ ～ 85.37％)(P＜0.01).HEC-1-B和RL-952细胞G0/G1期所占比例,经VPA、SAHA、DAC作用24小时后均较对照组增高,差异有高度统计学意义(P＜0.01).应用VPA、SAHA和DAC后细胞凋亡发生率均较对照组增高,差异有高度统计学意义(P＜0.01),出现特征性凋亡形态特征.VPA、SAHA和DAC作用后,RL-952和HEC-1-B细胞E-cad mRNA表达上调,较对照组均增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:VPA、SAHA和DAC可有效抑制子宫内膜癌RL-952和HEC-1-B细胞增殖,有明显的细胞周期阻滞和诱导凋亡作用,对E-cad基因具有明显上调作用.
关键词： 子宫内膜癌 丙戊酸 软木酰苯胺氧肟酸 5-氮-2-脱氧胞苷 上皮型钙黏素 -
去甲基化作用对胃癌细胞生物学行为及xaf1基因表达的影响
目的:探讨去甲基化药物5-脱氧杂氮胞苷(5-Aza.CdR)对体外培养的胃癌BGC823细胞增殖活性、细胞周期和凋亡以及对此细胞株xafl基因表达的影响.方法:用MTT法检测不同浓度5-Aza-CdR对细胞增殖活性的影响;PI染色和流式细胞仪检测不同浓度5-Aza-CdR处理72 h后细胞周期分布和细胞凋亡率;RT-PCR法检测用药前后xafl基因表达的变化.结果:用1×103,5×103.10×103nmol/L的5-Aza-CdR处理BGC823细胞6 d后,试验组细胞增殖抑制率较对照组明显升高(P<0.05),并呈剂量依赖关系;流式细胞仪分析表明,各药物浓度处理72 h后凋亡率明显增加:试验组凋亡率分别为(4.53±0.21)%,(8.11±1.01)%和(11.56±0.86)%,与对照组(0.51±0.01)%相比较差异显著(P<0.05).在5-Aza-CdR处理前,未检测到BGC823细胞株xafl基因mRNA表达,经过5-Aza-CdR处理后,xafl mRNA重新表达.结论:5-Aza-CdR可抑制BGC823细胞增殖;促进细胞凋亡;使xafl基因甲基化状态得到逆转,而重新表达.
关键词： 5-氮-2-脱氧胞苷 xafl基因 BGC823肿瘤细胞株 甲基化 细胞增殖 细胞凋亡
