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MS-PCR法评估家族性原发性高血压病人血管紧张素原基因M235T多态性
本文采用新型高敏感、特异的MS-PCR法对中国苏皖地区94例具高血压家族史和36例无家族史者检测血管紧张素原M235T基因型.具有高血压家族史的原发性高血压病人(FH组)、具家族史的非高血压者(FNH组)、无家族史的正常对照(N组)和无家族史的高血压病人(NFH组)血管紧张素原(Angiotensinogen, AGT) 基因TT型/ T等位基因频率分别为0.581/0.77、0.563/0.77、0.346/0.58和0.4/0.55.有家族史者T等位基因频率远高于无家族史者.小样本研究认为中国苏皖地区人群原发性高血压的发病与AGTM235T基因多态性密切相关,T等位基因具更高的发病风险.各组间年龄分析结果显示AGTM235T遗传多态性对高血压发病风险的估计不受年龄的限制.
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基化PCR作为白血病微量残留病检测方法的探索
本实验研究探讨以甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)作为白血病微量残留病(MRD)检测方法的可行性.将Id4基因呈完全甲基化的HL-60细胞和Id4基因呈完全非甲基化的Hek937细胞按不同比例混合,实验分为3组:A组为10%HL-60+9%Hek937,B组为1%HL-60+99%Hek937,C组为0.1% HL-60+99.9%Hek937.用MS-PCR方法检测不同白血病细胞比例下Id4基因甲基化情况.结果表明,HL-60细胞仅有155 bp的Id4基因甲基化特异性扩增,呈Id4基因完全甲基化;Hek937细胞仅有156 bp的Id4基因非甲基化特异性扩增,呈Id4基因完全非甲基化.A、B、C组同时有155 bp的Id4基因甲基化和156 bp的Id4基因非甲基化特异性扩增,显示Id4基因甲基化表达.结论:MS-PCR方法可从0.1%比例含量的白血病细胞样本中检测到Id4基因甲基化,加之Id4基因甲基化在不同类型白血病中差异不明显,因此用MS-PCR检测Id4基因甲基化状态可以作为一种检测各种类型白血病微量残留病的方法.
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MS-PCR法检测血管紧张素原基因M235T多态性
目的 建立新型突变基因分离聚合酶链反应（MS-PCR）法检测血管紧张素原（AgT）基因M235T多态性，以正确评估其与家族性原发性高血压的关系。方法 建立PCR-RFLP和MS-PCR法佳实验体系，验证敏感性及特异性。结果 （1）PCR-RFLP体系中，随内切酶量和消化时间的增加，消化反应越彻底，以0.075μg基因组DNA扩增产物、30Unit Tth111-Ⅰ酶消化3小时为佳反应体系。（2）MS-PCR法一次扩增即可确定AgT基因型。（3）10个标本以PCR-RFLP法检测者基因型均为MT，而MS-PCR法仅1例为MT型，余9例均为TT型（90％）。结论 传统的PCR-RFLP可能因消化不彻底而造成结果判断的误差；MS-PCR以其高敏感性和特异性成为检测基因多态性的快速、简便、可靠的方法。
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肺癌组织细胞FHIT基因启动子甲基化和转录表达
目的 探讨FHIT(fragile histidine triad,脆性组氨酸三联体)基因表达水平及其启动子CpG岛甲基化状态与肺癌发生发展的关系.方法 用实时定量PCR检测FHIT mRNA在肺癌组织、肺癌旁组织与去甲基化剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine、5-Aza-CdR)处理前后A549细胞株中的表达,用甲基化特异性PCR(MS-PCR)检测FHIT启动子CpG岛甲基化状态.结果 FHIT mRNA在肺癌旁组织中全部表达,在肺癌组织中表达缺失率为48.89%(22/45),且表达量低于正常肺组织(t=-15.851,P＜0.001),但在不同年龄和性别、肿瘤大小、恶性程度、肿瘤分类的差异无显著性;FHIT基因启动子在肺癌组织中发生甲基化的频率为40%(18/45)、在癌旁组织中频率8.7%(2/23)(x2=7.184,P＜0.01),18份启动子区甲基化的肺癌标本中,10份同时伴有mRNA表达缺失.结论 在肺癌组织中,FHIT基因启动子甲基化频率明显升高,其表达缺失或下调,提示FHIT启动子甲基化可在肺癌发生和发展中起一定作用.
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宫颈癌患者CHFR基因异常甲基化的检测
目的:探讨CHFR(checkpoint with FHA and ring finger)基因启动子异常甲基化在宫颈癌发生发展过程中的作用及其在宫颈癌早期诊断中的价值.方珐:用甲基化特异性PCR方法检测42例宫颈癌组织、30例宫颈上皮内瘤样病变组织(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)及20例正常宫颈组织中CHFR基因启动子区CpG岛甲基化状态.结果:宫颈癌组织及CIN中CHFR基因异常甲基化检出率分别为33.3％(14/42)和6.7％(2/30),正常宫颈组织中未检出CHFR基因甲基化;三组间CHFR基因异常甲基化发生率之间比较差异具有统计学意义(x2=10.69,P=0.005);CHFR基因甲基化发生率与年龄、病理分级、临床分期之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论:CHFR基因的异常甲基化参与了宫颈癌的发生和发展过程,其甲基化的检测对宫颈癌的早期诊断有一定的价值.
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同型半胱氨酸致巨噬细胞TNFSF4基因启动子去甲基化并增加其mRNA表达
目的 探讨同型半胱氨酸对THP-1巨噬细胞TNFSF4基因甲基化及mRNA表达的影响.方法 在由0.1μmol/L佛波脂(phorbot 12-myristate 13-acetate,PMA)诱导分化的THP-1巨噬细胞中加入不同浓度的高同型半胱氨酸(homocysteine, HCY),并孵育不同时间.另设空白对照组.应用MS-PCR技术检测TNFSF4基因甲基化状态, 应用RT-PCR检测TNFsF4基因表达水平差异.结果 与对照组比较,随时间和浓度的不断增加,各药物浓度组非甲基化条带越来越浓(P＜0.01),甲基化条带越来越淡(P＜0.01),72 h处理组全部只出现非甲基化条带,同时各药物浓度组24 h TNFSF4基因mRNA表达增加,且呈剂量依赖关系(P＜0.01).结论 同型半胱氨酸可致THP-1巨噬细胞TNFSF4基因启动子区去甲基化,同时其mRNA表达水平增加.
