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RSUME促进小鼠垂体腺瘤细胞AtT-20凋亡
目的 探讨小泛素化修饰增强子(RSUME)、核转录因子-κB抑制因子-α(IκB-α)及核转录因子-κB 1(NF-κB1)在小鼠垂体腺瘤中表达及其细胞凋亡的影响.方法 用RSUME小干扰RNA(siRNA)转染AtT-20细胞后,用蛋白印迹及实时荧光定量PCR检测RSUME、NF-κB1和IκB-α蛋白的表达及mRNA的表达,流式细胞计量术检测细胞凋亡.结果 在蛋白水平,RSUME-siRNA转染后RSUME及IκB-α表达下调(P<0.05),NF-κB1则上调(P<0.05);在mRNA水平,转染后RSUME mRNA表达水平明显低于转染前(P<0.05),而IκB-α及NF-κB1 mRNA水平无明显变化;转染后细胞凋亡率明显升高.结论 RSUME可以通过NF-κB1促进小鼠AtT-20垂体腺瘤细胞的凋亡.
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伊马替尼联合依维莫司对小鼠垂体瘤细胞AtT-20的作用研究
目的：垂体瘤药物治疗目前主要针对泌乳素腺瘤和生长激素腺瘤，对于其他类型垂体瘤疗效差，因此新的治疗药物亟待发现。文中探讨伊马替尼联合依维莫司对小鼠垂体瘤细胞AtT-20的作用效果及分子作用机制。方法单独使用伊马替尼、依维莫司以及联合作用于AtT-20细胞。采用细胞增殖-毒性检测试剂盒（ CCK-8）检测细胞的增殖抑制，实时荧光定量PCR检测细胞丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（AKT）和细胞外调节蛋白激酶（ERK）的mRNA表达水平，Western blot 检测AKT和ERK蛋白的磷酸化情况。结果伊马替尼与依维莫司均呈浓度和时间依赖性抑制AtT-20细胞增殖，但两者联合作用效果为相互拮抗[联合指数CI分别为（1．13±0．06）、（1．12±0．03）和（1．07±0．03）]；单独和联合用药对AKT、ERK的mRNA及蛋白表达水平无明显抑制作用（ P＞0．05）；伊马替尼和依维莫司均可上调AKT、ERK的磷酸化水平，联合用药对p-AKT、p-ERK水平的促进作用明显强于单药（P＜0．05）。结论伊马替尼和依维莫司对AtT-20细胞均有抑制作用，但联合用药表现出了拮抗效应。推测其机制为伊马替尼与依维莫司通过阻断信号通路抑制细胞增殖时均负反馈活化AKT、ERK，从而在联合用药时相互拮抗。
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RWD结构小泛素化增强子与缺氧诱导因子-1α在AtT-20细胞的表达
目的：研究RWD结构小泛素化增强子（RWD containing sumoylation enhancer，RSUME）调控缺氧诱导因子（hypoxia-inducible factor 1-alpha, HIF-1α）对AtT-20细胞侵袭的影响。方法通过氯化钴模拟小鼠垂体腺瘤AtT-20细胞的缺氧环境，并应用实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测RSUME、HIF-1α的mRNA和蛋白水平的改变；然后运用HIF-1α小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）及阴性对照序列转染小鼠垂体腺瘤AtT-20细胞，实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测RSUME的mRNA和蛋白水平的改变；运用RSUME siRNA及阴性对照序列转染小鼠垂体腺瘤AtT-20细胞后，实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测HIF-1α的mRNA和蛋白水平的改变；并用Transwell及MTT法检测AtT-20细胞侵袭的改变。结果氯化钴作用AtT-20细胞后，细胞中RSUME的蛋白（P=0.003）和HIF-1α的蛋白（P=0.002）水平明显升高；HIF-1αsiRNA转染的AtT-20细胞中RSUME mRNA（P=0.162）及蛋白（P=0.668）水平表达无明显变化；RSUME siRNA转染的AtT-20细胞中HIF-1α蛋白水平表达明显降低（P＜0.001），而mRNA水平未见明显改变（P=0.136）；RSUME siRNA转染组AtT-20细胞侵袭率较RSUME阴性对照组及空白对照组低(侵袭抑制率=26.2%±8.4%)。结论缺氧可诱导RSUME的表达， RSUME可调控HIF-1α的蛋白水平的作用影响AtT-20细胞的侵袭。
关键词： RWD结构小泛素化增强子 缺氧诱导因子1α AtT-20 肿瘤侵袭
