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美伐他汀对人多发性骨髓瘤细胞系U266体外增殖与凋亡的影响
为了探讨羟甲基戊二酸单酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂对多发性骨髓瘤(MM)细胞增殖与凋亡的调控作用及机制,应用MTT比色法、光镜形态学观察、流式细胞术、DNA凝胶电泳及RT-PCR研究了美伐他汀(mevastatin)对MM细胞系U266细胞体外增殖与凋亡的影响.结果显示,美伐他汀以剂量及时间依赖方式抑制U266细胞增殖;细胞周期分析显示美伐他汀诱导U266细胞G0-G1期阻滞,但对p27蛋白及mRNA的表达无影响:在美伐他汀作用下U266细胞出现核染色质凝聚、核固缩、核碎裂等凋亡形态改变,PI-AnnexinV+细胞增多,线粒体跨膜电位(△ψm)下降,DNA凝胶电泳出现梯形条带,bcl-2 mRNA表达下调.加入外源性甲羟戊酸(mevalonate,MVA)可完全逆转美伐他汀对U266细胞增殖与凋亡的效应.结论:美伐他汀可通过MVA途径,诱导G0-G1期阻滞抑制增殖、下调bcl-2表达及降低线粒体膜电位触发U266细胞凋亡.
关键词： 羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶 美伐他汀 多发性骨髓瘤 U266细胞 细胞凋亡 -
微量元素锶改善大鼠非酒精性脂肪肝的机制研究
目的 探讨微量元素锶改善大鼠非酒精性脂肪肝的机制.方法 50只SD大鼠随机分为对照组、模型组、18 mg/L锶组、36 mg/L锶组和辛伐他汀组.对照组进食普通饲料,其余4组进食高脂饲料,第6周起给予18 mg/L和36 mg/L锶组浓度分别为18 mg/L和36 mg/L含锶饮用水,第11周起进行灌胃,18 mg/L和36 mg/L锶组分别灌浓度为18 mg/L和36 mg/L含锶水3 mL/kg体重,辛伐他汀组灌辛伐他汀10 mg/kg体重,对照组与模型组灌生理盐水3 mL/kg体重.第14周末处死大鼠,检测血清TG、TC、LDL?C和肝组织TG、TC含量,并行肝组织油红O染色观察脂肪变性情况,免疫组化检测肝组织GRP78、SREBP2、HMGCR和LDLr蛋白表达水平.结果 与对照组比较,模型组的血清TC、LDL?C和肝TC、TG均升高(P<0.05),与模型组比较,36 mg/L锶组血清TC、LDL?C和肝TC、TG均降低(P<0.05).油红O染色显示模型组肝组织含大量的红染脂质颗粒,18 mg/L锶组、36 mg/L锶组及辛伐他汀组红染颗粒均较模型组不同程度减少(P<0.05).免疫组化结果显示:模型组大鼠肝组织GRP78、SREBP2、HMGCR和LDLr蛋白表达水平,18mg/L锶组大鼠肝组织GRP78、SREBP2和LDLr蛋白表达水平,36 mg/L锶组大鼠肝组织LDLr蛋白表达水平及辛伐他汀组大鼠肝组织SREBP2和LDLr蛋白表达水平均明显高于对照组(P<0.05).36 mg/L锶组大鼠肝组织GRP78、SREBP2和HMGCR蛋白表达水平明显低于模型组,而LDLr蛋白表达水平明显高于模型组;辛伐他汀组大鼠肝组织GRP78和HMGCR蛋白表达水平明显低于模型组(P<0.05);而18 mg/L锶组大鼠肝组织GRP78、SREBP2、HMGCR和LDLr蛋白表达水平较模型组无显著差异(P>0.05).结论长期较高浓度锶摄入可改善脂代谢紊乱,减轻NAFLD,其作用机制可能与调节内质网应激、HMGCR活性和LDLr的功能等有关.
关键词： 锶 非酒精性脂肪肝 内质网应激 羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶 低密度脂蛋白受体 -
肾病综合征脂质代谢紊乱发病机制的研究进展
肾病综合征产生高胆固醇血症,继而导致脂质代谢调节障碍,致使心血管疾病和血栓栓塞的危险性增加.明确其发病机制并进行早期干预十分必要,现对其发病机制研究进展综述如下.
关键词： 肾病综合征 高脂血症 羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶 -
脂肪变性肝细胞胆固醇代谢及合成相关基因的表达
目的 探讨脂肪变性肝细胞胆固醇代谢及合成相关基因mRNA表达的变化.方法 以软脂酸诱导正常成人肝细胞株L-02脂肪变性,建立肝细胞脂肪变性模型,分别于实验第3、6天收集细胞,同期设不含软脂酸培养的细胞作对照.试剂盒检测细胞内甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)含量,RT-PCR法检测固醇调节元件结合蛋白2(SREBP-2)及其靶基因羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶 (HMGCR)、低密度脂蛋白受体(LDLR)mRNA表达.结果 软脂酸诱导第3天即可产生肝细胞脂肪变性,第6天脂肪变性加重.随造模时间延长,模型组细胞内TG、TC含量逐渐增多,SREBP-2、HMGCR、LDLR mRNA表达逐渐增强;第3天和第6天细胞内TG含量均显著高于对照组(P＜0.05),第6天细胞内TC含量显著高于对照组(P＜0.05);第3天和第6天HMGCR、LDLR mRNA表达显著高于对照组(P＜0.05);第6天SREBP-2 mRNA表达显著高于对照组(P＜0.05).结论 脂肪变性肝细胞内存在胆固醇积聚,其机制可能是胆固醇合成相关基因表达上调.
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PRMT1结合并增强HMGCR活性对食管鳞癌细胞增殖能力的影响
目的 探讨蛋白质精氨酸甲基转移酶1(PRMT1)结合羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCR)后活性变化及其对食管鳞癌细胞增殖能力的影响.方法 以食管鳞癌ECA109细胞为模型,通过免疫共沉淀法观察PRMT1与HMGCR在细胞中的相互结合作用.将ECA109细胞随机分为感染组和对照组,分别以表达特异性针对PRMT1的RNA干扰分子的慢病毒质粒转染48 h,采用Western blot法分别检测PRMT1、HMGCR蛋白及甲基化HMGCR蛋白,分光光度法检测HMGCR酶活性,CCK-8法检测细胞增殖活性.结果 细胞裂解后的蛋白共沉淀复合物分别用抗PRMT1 、HMGCR抗体捕获后,可检测到HMGCR、PRMT1蛋白条带.感染组和对照组ECA109细胞中PRMT1蛋白相对表达量分别为0.057 ±0.011和0.239 ±0.041 (P ＜0.01),HMGCR蛋白相对表达量分别为0.175±0.031和0.184 ±0.037(P ＞0.05).感染组和对照组ECA109细胞甲基化HMGCR蛋白相对表达量分别为0.028±0.006、0.107±0.016,HMGCR相对活性分别为0.104 ±0.009、0.277 ±0.013,P均＜0.01.感染组ECA109细胞培养24 h后,细胞增殖的OD450值已低于对照组(P＜0.05);培养48 h及72 h后,两组OD450值差距进一步扩大(P均＜0.01).结论 PRMT1可通过结合HMGCR蛋白促进其甲基化途径增强HMGCR蛋白活性,进而促进食管鳞癌细胞的体外增殖能力.
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抑制HMGCR表达对人食管鳞癌细胞体外增殖及体内致瘤能力的影响
目的 探讨抑制羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCR)表达对食管鳞癌细胞体外增殖及体内致瘤能力的影响.方法 采用重组慢病毒LV.HMGCRshRNA(LV.HMGCRshRNA组)、对照空病毒LV.Null(LV.Null组)感染食管鳞癌细胞Eca109,定量PCR及Western blotting法检测HMGCR mRNA和蛋白表达.采用流式细胞仪、PI染色法检测两组细胞周期,Annexin V-FITC/PI双染检测两组细胞凋亡情况.取两组细胞种植于裸鼠皮下,种植4周末处死裸鼠,检测瘤体质量.结果 LV.HMGCRshRNA组HMGCR mRNA和蛋白表达明显低于LV.Null组(P均<0.01).LV.HMGCRshRNA组S/M、G2期细胞比例明显低于LV.Null组(P均<0.01),G0/G1期细胞比例明显高于LV.Null组(P均<0.01).LV.HMGCRshRNA组细胞凋亡率明显高于LV.Null组(P<0.01).种植4周,LV.HMGCRshRNA组移植瘤质量显著低于LV.Null组(P<0.01).结论 抑制HMGCR表达可显著下调食管鳞癌细胞的体外增殖和体内致瘤能力.
关键词： 食管鳞癌 甲羟戊酸途径 羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶 细胞增殖 种植瘤 -
α-亚麻酸植物甾醇酯对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的保护作用
目的 探讨α-亚麻酸植物甾醇酯(ALA-PS)对动脉粥样硬化(AS)的影响及其分子机制.方法 苏木素-伊红(HE)和油红O染色观察高脂喂养和ALA-PS干预组载脂蛋白E(ApoE)基因敲除(ApoE KO)小鼠AS形成.酶比色法检测血清胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量.Western blot法检测肝脏羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCR)和过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)的蛋白表达.结果 与模型组比较,ALA-PS干预组小鼠AS面积显著减少,血清TC、TG显著降低(P＜0.05),分别为10.33 mmol/L和1.39 mmol/L.同时肝脏HMGCR和PPARα蛋白表达分别降低46.8％和升高1.63倍.结论 ALA-PS能有效改善ApoE KO小鼠的AS,其分子机制可能与调节HMGCR和PPARα蛋白表达有关.
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利用RNA干扰技术抑制小鼠羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶基因的表达
目的 为了探寻一种更有效的家族性高胆固醇血症(FH)基因治疗新途径,通过慢病毒介导RNA干扰的方法在H22细胞系及C57BL/6J纯系小鼠中抑制内源性羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMG-CoAR)基因表达进行研究.方法 从HMG-CoAR基因序列中选择三段作为靶序列(T1、T2和T3),并构建重组慢病毒RNAi载体；经体外包装后,分别感染H22细胞系及注射小鼠.通过qRT-PCR检测HMG-CoAR mRNA丰度；利用Western Blot、ELISA方法分析HMG-CoAR的表达水平.结果 与空载体对照相比,三个实验组中稳定转染细胞的HMG-CoAR表达水平显著降低(P＜0.05),同时感染5天后小鼠的肝脏HMG-CoAR mRNA水平、蛋白含量以及血浆中HMG-CoAR表达均显著降低(P＜0.05),其中T3位点的抑制效率高,是空质粒对照的1/3.另外,对三个载体的持续性抑制能力分析显示,在处理后的至少50天内,三个实验组小鼠中HMG-CoAR表达量均有效地被抑制,其中T1靶点的抑制效果为稳定,而T3靶点的波动大,但抑制效率一直高.结论 三个重组慢病毒RNAi载体均可显著抑制内源性HMG-CoAR表达,可为下一步试图通过下调HMG-CoAR表达的方式,降低FH患者体内胆固醇水平的FH基因治疗奠定基础.
关键词： 羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶 RNA干扰 胆固醇 家族性高胆固醇血症 基因治疗 -
槲皮素对脂肪变性L-02细胞胆固醇合成及羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶表达的影响
槲皮素[3,3'4',5,7-五羟基黄酮]是天然黄酮类化合物.许多研究已证实槲皮素有抗增殖、抗氧化、抗肿瘤、抗炎、抗病毒等药理作用,且不良反应小[1].本实验旨在检测槲皮素对胆固醇合成的作用及其相关机制,为治疗胆固醇代谢性疾病开辟新途径.
关键词： 脂肪肝 槲皮素 胆固醇酯类 羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶 -
白细胞介素-1β激活HMGCoA还原酶促进HepG2细胞脂质积聚
目的:探讨白细胞介素-1β(interleukin-1 β,IL-1β)对HepG2细胞羟甲基戊二酸单酰辅酶A(3-hydroxy-3-methyl-glutaryl-coenzyme A,HMGCoA)还原酶及脂质积聚的影响.方法:200 μg/mL低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)负荷下的HepG2细胞分别给予0 ng/mL(对照组)、20 ng/mL(炎症组)IL-1β处理24 h.荧光定量PCR(RT-PCR)、Western blot分别测定HMGCoA还原酶mRNA及蛋白表达水平;薄层层析法检测HMGCoA还原酶活性;同位素标记法评估胆同醇合成情况;油红O染色及酶法定量检测细胞内脂质.结果:IL-1β处理下,HepG2细胞HMGCoA还原酶mRNA表达水平为对照组的(1.54±0.04)倍(t=5.619,P=0.001)、蛋白表达水平为对照组的(1.92±0.12)倍(t=7.745,P=0.002),且HMGCoA还原酶的酶活性为对照组的(1.73±0.25)倍(t=2.476,P=-0.048).IL-1β处理使HepG2细胞的胆固醇合成增多为对照组的(1.32±0.11)倍(t=2.316,P=-0.036).IL-1β处理的HepG2细胞内红染的脂滴显著多于对照组,且IL-1β处理组细胞内总胆固醇含量(22.43±1.62)为对照组(14.90±1.11)的1.51倍(t=3.845,P=0.018),胆固醇酯的含量(3.84±0.20)为对照组(1.41±0.05)的2.72倍(t=11.730,P=0.000).结论:IL-1β可以上调HepG2细胞HMGCoA还原酶的mRNA和蛋白表达水平,并增强其酶活性,促进HepG2细胞内胆同醇合成和脂质积聚.
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甲醛对HepG2细胞游离胆固醇代谢的影响
目的:研究甲醛(FA)对人肝癌细胞株HepG2细胞游离胆固醇(FC)含量的影响及其作用机制.方法:分别采用0.004、0.02、0.1 mmoYL FA处理人肝癌细胞株HepG2细胞24和48 h,以完全培养基为阴性对照,过氧化物酶法测定HepG2细胞内FC含量;采用Western blot法检测HepG2细胞固醇调节元件结合蛋白-2(SREBP-2)、羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCR)、胆固醇酰基转移酶(ACAT)和低密度脂蛋白受体(LDLR)的蛋白表达水平.结果:与阴性对照组相比,各浓度的FA染毒24h或0.02和0.1 mmol/L FA染毒48 h后,HepG2细胞内FC含量均明显增加(P均＜0.05);FA染毒24和48 h后细胞内HMGCR蛋白表达水平均明显增加(P＜0.05);FA染毒24h后,ACAT和LDLR表达水平均明显降低(P均＜0.05);FA染毒48 h,LDLR蛋白表达水平明显降低(P＜0.05),ACAT蛋白表达水平在0.02和0.1 mmol/L FA组明显降低(P＜0.05).结论:甲醛染毒可使HepG2细胞内FC含量增加,可能与胆固醇的从头合成增加和胆固醇酯化水平降低有关.
