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  • 神经节苷脂GM3诱导U266细胞凋亡及作用机制研究

    作者:赵会迎;马艳萍

    目的:探讨神经节苷脂GM3对人多发性骨髓瘤U266细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用及其可能的作用机制.方法:MTT法和流式细胞术检测不同浓度GM3作用U266细胞48 h后细胞增殖抑制及凋亡水平;实时荧光定量PCR检测不同浓度GM3对BCL-2、BAX mRNA表达水平的影响.结果:神经节苷脂GM3可以诱导U266细胞凋亡并抑制其增殖,且随着GM3浓度增加作用增强(早期凋亡率相关系数r=0.765,P<0.05;细胞增殖抑制率相关系数r =0.899,P<0.05);与对照组比较,实验组随着GM3浓度增加,凋亡基因BAX mRNA相对表达量逐渐升高(r =0.968,P<0.05),而抗凋亡基因BCL-2 mRNA相对表达量逐渐降低(r=-0.727,P<0.05).结论:GM3可诱导U266细胞凋亡并抑制其增殖,且具有浓度依赖性,其作用机制可能与上调BAX的表达和下调BCL-2有关.

  • 吲哚美辛对白血病细胞增殖和细胞衰老的影响

    作者:张毅;焦向英

    目的:观察吲哚美辛对白血病细胞体外增殖与细胞衰老的影响,探讨非甾体类抗炎药物对白血病的辅助治疗作用.方法:吲哚美辛30 μmol/L处理U266、K562、U937细胞株,连续培养7d后,以台盼蓝拒染法检测细胞活率,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,用细胞衰老检测试剂盒检测各组细胞各时间点(0、4、7 d)的细胞衰老情况,RT-PCR检测增殖抑制基因P21、P27 mRNA的表达水平.结果:药物作用后U266、U937的细胞活率显著降低(P<0.01).K562细胞活率未发生显著变化.U266、U937细胞均于G2/M期发生不同程度阻滞,K562细胞周期变化不明显.U266、K562、U937的细胞凋亡率升高(P<0.01).药物处理后,除U937细胞的P27变化不明显外,U266和K562细胞系的P21和P27 mRNA表达水平均显著增高.K562、U937细胞衰老率明显增高(P<0.01).结论:吲哚美辛对白血病细胞具有抑制作用,但其机制可因白血病细胞的种类不同而异;提示非甾体类抗炎药物可对白血病起辅助治疗作用,但需根据白血病的类型适当选择.

  • 大萼香茶菜甲素A通过抑制蛋白酶体诱导多发性骨髓瘤细胞株U266凋亡

    作者:陆玲娜;冯丽倩;吕亚萍;夏骏;邱莲女;石浩;王卫忠;周永列

    本研究探讨大萼香茶菜甲素A(macrocalyxinA,MA)体外对多发性骨髓瘤细胞株蛋白酶体抑制作用及其诱导凋亡的分子机制.以不同浓度(2、4、8 μg/ml)的MA体外作用于U266细胞,用Hochest染色法和Annexin V/PI双染色观察MA诱导U266细胞凋亡作用;用Western blot检测泛素、蛋白酶体19S亚基S6’亚单位和蛋白酶体20S亚基中β1、β1i、β2、β2i、β5、β5i亚单位,以及BAD、BCL-2、FAS、FAS-L、MAPK、PARP、Pro-caspase 3、cleaved-caspase 3蛋白的表达.结果表明,随着MA作用时间的延长和剂量的增加,Hoechst 33258染色的细胞内出现致密颗粒或块状的荧光颗粒,Annexin V+/PI细胞和总凋亡细胞(AnnexinV+/PI和Annexin V +/PI+)增加;MA可使U266细胞内泛素化水平增高,抑制20S蛋白酶体亚单位β1i、β2、β5i、和19S蛋白酶体泛素识别亚基S6’表达.与此同时,BCL-2、MAPK、PARP、pro-caspase 3表达随着药物作用浓度的增高而下调,BAD、FAS、FAS-L、cleaved-caspase 3表达则增加.结论:大萼香茶菜甲素A具有抑制蛋白酶体的作用,线粒体凋亡和死亡受体途径有可能参与MA诱导细胞的凋亡.

  • 多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞在体外对骨髓瘤细胞趋化迁移的影响

    作者:张旭霞;张玲芳;刘乐;李红玲

    目的:探讨体外培养情况下多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞(MSC)对骨髓瘤细胞趋化迁移的影响.方法:采用体外培养方法,将骨髓瘤细胞株U266分成两组:A组与正常人骨髓间充质干细胞(N-MSC)共培养,B组与多发性骨髓瘤患者的骨髓间充质干细胞共培养,在有或无硼替佐米作用条件下比较2组U266细胞株的CCR1表达水平、Transwell迁移率以及N-MSC或MM-MSC培养液上清中U266细胞在Transwell中的迁移情况.结果:U266细胞与N-MSC组和MM-MSC共培养后,B组U266细胞在Transwell中的迁移率较高(P<0.05);硼替佐米处理U266细胞后不能消除2组的区别;B组U266细胞的CCR1表达水平高于A组(P<0.05).骨髓MSC培养上清液实验显示,在无硼替佐米作用条件下,MM-MSC和N-MSC培养上清液与SDF-1相比,具有较强的趋化刺激能力,使细胞在Transwell中的迁移率增高,而在有硼替佐米作用下,3组培养上清液使细胞在Transwell 中迁移率降低(P<0.05),但不管是否在硼替佐米作用下,MM-MSC和N-MSC培养上清液对U266细胞在Transwell中的迁移作用无显著性影响(P>0.05).结论:骨髓瘤患者的骨髓间充质干细胞本身有部分内在缺陷,通过与骨髓瘤细胞直接相互作用而影响其体外趋化功能.

  • U266细胞对硼替佐米耐药后自噬活性的变化及机制

    作者:张诚;万鼎铭;曹伟杰;张阳;党惠兵;魏玉静

    目的:探讨U266细胞对硼替佐米耐药后自噬活性的变化及机制.方法:MTT法检测并计算硼替佐米对U266及U266/Bor细胞的增殖抑制率、半数抑制浓度(IC50)、药物抗性系数、3-甲基腺嘌呤逆转U266/Bor细胞对硼替佐米耐药倍数,并绘制增殖抑制率曲线;Western blot法测定LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、磷酸化mTor、Beclin-1、ATG5、ATG7蛋白的表达.结果:硼替佐米对U266及U266/Bor细胞具有增殖抑制作用,24h的IC50分别为35.7 nmol/L和526.5 nmol/L,药物抗性系数为14.7,3-甲基腺嘌呤逆转耐药倍数为2.7倍.U266/Bor细胞的LC3-Ⅱ、Bec1in-1、ATG5、ATG7表达量高于U266细胞;经硼替佐米作用24 h后U266的LC3-Ⅱ、Beclin-1、ATG5、ATG7的表达较前降低,U266/Bor细胞的LC3-Ⅱ、Beclin-1、ATG5、ATG7表达均高于作用前;各组磷酸化mTor表达无统计学差异.结论:自噬的增强与U266细胞对硼替佐米耐药密切相关,自噬增强与Beclin-1、ATG5,ATG7表达的上调密切相关.

  • FTY720诱导多发性骨髓瘤细胞株U266凋亡的机制研究

    作者:廖爱军;李淑晨;吴斌;胡荣;李迎春;姚鲲;杨威;刘卓刚

    目的:探讨FTY720对多发性骨髓瘤U266细胞凋亡的影响及相关作用机制.方法:FTY720 2.5、5、10及20 μmol/L处理U266细胞24h后,流式细胞术Annexin-V-FITC/PI染色检测细胞凋亡.应用FTY720 20μmol/L分别处理U266细胞0、6、16及24h,检测细胞凋亡率.二甲基亚砜(DMSO)及FTY720 20 μmol/L分别处理U266细胞24h,DAPI染色5min,将细胞滴于载玻片上,在荧光显微镜下观察细胞核形态.FTY720 5 μmol/L单用或/和泛Caspase抑制剂Z-VAD-fmk 12.5、25、50 μmol/L合用处理U266细胞,CCK-8方法检测细胞生存率.FTY720 0、2.5、5、10及20 μmol/L处理U266细胞24h后,使用Western bolt方法检测Cleaved Caspase-3的表达.FTY720 0、5、10及20 μmol/L处理U266细胞24 h后,应用Western blot检测MCL-1、survivin、BCL-2、BJD、BAX、BAK和P-ERK的表达.结果:FTY720明显增加U266细胞凋亡,呈浓度及时间依赖性(r=0.98,r=0.97,P<0.05),在荧光显微镜下可观察到,FTY720处理的细胞的细胞核出现核固缩及碎裂,发生凋亡的改变,而在DMSO组未观察到此现象.Z-VAD-fmk可逆转FTY720引起的细胞凋亡,呈浓度依赖性(r =0.97,P<0.05).FTY720可引起U266细胞MCL-1、Survivin、BCL-2表达下降,同时引起BID裂解,而对BAX,BAK,P-ERK的表达没有影响.结论:FTY720可引起U266细胞凋亡,该凋亡为Caspase-3依赖性死亡.FTY720诱导产生的凋亡是通过下调抗凋亡蛋白MCL-1、survivin、BCL-2及激活促凋亡蛋白BID实现的.

  • LY294002对多发性骨髓瘤细胞增殖的抑制作用及机制研究

    作者:王永清;林艳;赵俊夺;杨蕴涛

    目的:探讨2-(4-吗啉基)-8-苯基4氢-1-苯并吡喃4酮(LY294002)对多发性骨髓瘤细胞株U266的增殖抑制作用及其机制.方法:用不同浓度(0、5、10和20 μmol/L) LY294002处理U266细胞24、48和72 h后,MTT法检测细胞活力,吖啶橙染色法检测细胞形态,流式细胞术检测细胞周期,Western blot检测细胞中B淋巴细胞瘤-2(BCL-2)、BCL-2相关X蛋白(BAX),细胞周期蛋白D1(Cyclin D1),Cyclin E表达及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路的激活状况.结果:0、5、10和20 μmol/L的LY294002处理U266细胞24、48和72 h后,能显著提高细胞增殖抑制率,并具有时间及剂量依赖性(r =0.408,r =0.485).5,10,20 μmol/L的LY294002处理细胞48 h,能使细胞核呈现致密浓染,细胞周期明显阻滞在G1期(P≤0.01),显著下调BCL-2,Cyclin D1,Cyclin E,PI3K及p-AKT表达(P≤0.01),明显上调BAX表达(P≤0.01).结论:LY294002能显著抑制多发性骨髓瘤细胞U266增殖,其作用机制可能与抑制PI3 K/AKT信号通路的激活有关.

  • 大黄素衍生物E11的筛选及对多发性骨髓瘤细胞增殖抑制和诱导凋亡作用的研究

    作者:刘庭波;李秀琴;王文峰;胡建达

    目的:筛选抑制多发性骨髓瘤细胞增殖作用强的衍生物,研究大黄素衍生物对两种多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226及U266细胞抑制增殖和诱导凋亡的作用.方法:以大黄素为母体合成16种大黄素衍生物,从中筛选出大黄素衍生物E-11进行实验.应用MTT比色法及细胞集落形成实验观察大黄素衍生物E11对RPMI8226、U266细胞增殖的影响;应用DAPI染色法在荧光显微镜下观察大黄素衍生物作用后的细胞形态变化;应用DNA片段化检测大黄素衍生物E11诱导细胞凋亡的作用.结果:MTT结果显示,16种大黄素衍生物作用于RPMI8226细胞48 h后,除了E10、E15无法计算外,其余14种半数抑制浓度(IC50)在0.83-34.68 μmol/L之间.MTT结果显示,大黄素衍生物E11作用于RPMI8226、U266细胞48 h的IC5o分别为0.831±0.045 μmol/L和1.039±0.093μmol/L.细胞集落形成实验均显示,大黄素衍生物E11能抑制2种细胞集落的形成,在一定范围内呈浓度及时间依赖性(r=0.72).DAPI染色后在荧光显微镜下能看到大黄素衍生物E11作用后的RPMI8226、U266细胞出现典型的凋亡形态学改变;应用DNA片段化可观察到典型的DNA凋亡梯带.结论:在合成的16种大黄素衍生物中,E11对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞的抑制增殖作用强.大黄素衍生物E11对RPMI8226、U266细胞有明显的抑制增殖、诱导凋亡的作用.

  • Bmi-1 shRNA慢病毒表达载体的构建及稳转U266细胞株的建立

    作者:徐珍珍;吴顺泉;战榕

    本研究构建Bmi-1基因的shRNA慢病毒表达载体,建立U266-1i稳定细胞株,为下一步Bmi-1的功能研究及应用RNAi技术治疗打下基础.设计、合成1对针对Bmi-l mRNA的shRNA序列,退火后连接到pLVTHM干扰载体上,与psPAX2、PMD2G共转染HEK 293T细胞,包装产生慢病毒颗粒并测定病毒滴度,感染U266细胞,建立稳定细胞株;应用实时PCR和Western blot技术分别检测U266稳定细胞中Bmi-1及P14 mRNA和蛋白水平的表达,并与对照组进行比较.结果表明,成功构建了针对Bmi-l基因的shRNA慢病毒表达载体,病毒滴度为5 ×107 TU/ml;建立稳定转染的U266细胞株.有效干扰验证显示,shBmi-1能明显降低Bmi-l的mRNA及蛋白水平,而P14的mRNA及蛋白水平则都上调,其差异有统计学意义(P<0.05).结论:成功构建Bmi-1基因的shRNA慢病毒表达载体,建立稳定干扰Bmi-1表达的U266细胞株.

  • 美伐他汀对人多发性骨髓瘤细胞系U266体外增殖与凋亡的影响

    作者:刘泽林;罗建民;董作仁;王福旭;张学军;杨敬慈;杜行严;姚丽

    为了探讨羟甲基戊二酸单酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂对多发性骨髓瘤(MM)细胞增殖与凋亡的调控作用及机制,应用MTT比色法、光镜形态学观察、流式细胞术、DNA凝胶电泳及RT-PCR研究了美伐他汀(mevastatin)对MM细胞系U266细胞体外增殖与凋亡的影响.结果显示,美伐他汀以剂量及时间依赖方式抑制U266细胞增殖;细胞周期分析显示美伐他汀诱导U266细胞G0-G1期阻滞,但对p27蛋白及mRNA的表达无影响:在美伐他汀作用下U266细胞出现核染色质凝聚、核固缩、核碎裂等凋亡形态改变,PI-AnnexinV+细胞增多,线粒体跨膜电位(△ψm)下降,DNA凝胶电泳出现梯形条带,bcl-2 mRNA表达下调.加入外源性甲羟戊酸(mevalonate,MVA)可完全逆转美伐他汀对U266细胞增殖与凋亡的效应.结论:美伐他汀可通过MVA途径,诱导G0-G1期阻滞抑制增殖、下调bcl-2表达及降低线粒体膜电位触发U266细胞凋亡.

  • DNA甲基转移酶在骨髓瘤细胞株中的表达异常及意义

    作者:鹿全意;张泽川;洪秀理

    本研究旨在探索多发性骨髓瘤细胞株U266 DNA甲基转移酶(DNMT)活性、基因表达情况并分析其生物学意义.用ELISA方法检测U266细胞DNMT活性,用半定量RT-PCR技术分析DNMT1、3a、3b mRNA在U266细胞中的表达,体外用不同浓度去甲基化化合物异硫氰酸苯己酯(phenyl hexyleisothiocyanate,PHI)处理U266细胞,分析DNMT活性变化及DNMT1、3a、3b在瘤细胞中的表达改变.结果表明,骨髓瘤细胞U266中DNMT总活性升高,DNMT1、3a、3b mRNA均高表达,不同浓度PHI处理U266细胞后,细胞增殖抑制,DNMT活性亦被显著抑制,DNMT1、DNMT3a以及DNMT3b mRNA表达下降并呈浓度依赖性.结论:DNMT活性及其表达增高是骨髓瘤细胞特征之一,当DNMT活性或mRNA表达抑制时瘤细胞发生凋亡,因此DNMT可作为骨髓瘤治疗的新靶点.

  • 巢式MSP检测砷剂诱导人多发性骨髓瘤U266细胞系p16基因去甲基化及转录

    作者:傅海英;沈建箴;沈松菲;周华蓉

    本研究探讨用高灵敏度的DNA甲基化检测方法及DNA克隆测序分析法检测三氧化二砷(As2O3)的去甲基化作用,并对其可能的去甲基化作用机制进行分析.采用巢式甲基特异性PCR法(nested-methylation specific PCR,n-MSP)、DNA克隆测序分析法检测As2O3作用前后U266细胞株p16基因甲基化状态,应用RT-PCR检测p16、DNA甲基转移酶1(DNMT1)、DNMT3A、DNMT3B基因mRNA的表达,以生长曲线、MTT法、集落形成实验检测As2O3对骨髓瘤细胞生长和增殖的抑制作用.利用流式细胞仪DNA含量分析法探讨As2O3对多发性骨髓瘤细胞系U266周期的影响.结果表明:①未处理组U266细胞基因组DNA的胞嘧啶保持不变,而经As2O3作用的U266细胞基因组DNA的胞嘧啶均已变为胸腺嘧啶,这说明U266细胞存在p16基因甲基化,As2O3作用后p16基因异常甲基化的现象被逆转;②未处理组细胞p16基因不表达,As2O3作用72小时后p16基因表达增强,0.5 μmol/L组、1.0 μmol/组和2.0 μmol/组p16基因表达阳性条带灰度值与β-肌动蛋白比值分别为(0.22±0.10)、(0.59±0.11)、(0.68±0.09),阳性对照灰度比值为(0.77±0.13),差异有非常显著的统计学意义(P<0.01);③与未处理组相比,As2O3作用72小时后甲基转移酶(DNMT)1、DNMT3A、DNMT3B的表达下降并呈浓度依赖性;④与对照组相比,3组不同浓度As2O3均能明显抑制骨髓瘤细胞生长,G0-G1期细胞增加.结论:As2O3可能通过抑制甲基转移酶(DNMT1)、DNMT3A、DNMT3B和(或)直接对p16基因去甲基化,使p16基因表达上调,恢复其活性,从而实现其对细胞周期的调控功能,将细胞阻滞于G0-G1期,抑制骨髓瘤细胞的增长.

  • 三氧化二砷对骨髓瘤细胞系U266抑制增殖及诱导凋亡的机制研究

    作者:俞庆宏;战榕;黄豪博

    本研究探讨三氧化二砷(As2O3)在体外对骨髓瘤细胞系U266的生物学效应及其机制.用MTT法观察As2O3对U266细胞增殖的影响,用流式细胞术、DNA凝胶电泳法分析As2O3对U266细胞凋亡的影响,以RT-PCR法检测2 μmol/L As2O3不同处理时间对U266细胞人端粒酶逆转录酶蛋白催化亚单位(hTERT)mRNA的表达变化,用Western blot法检测As2O3不同处理时间对U266细胞pmcaspase-3、bcl-2及hTERT蛋白水平的表达变化.结果表明:As2O3能明显抑制U266细胞增殖,半数抑制浓度(Ic50)为2μmol/L;As2O3能诱导U266细胞凋亡,呈现剂量和时间依赖性;2 μmol/L As2O3不同时间处理U266细胞后procaspase-3蛋白及hTERT mRNA、蛋白表达呈时间依赖性降低,而bcl-2蛋白表达未发生变化.结论:As2O3通过改变线粒体跨膜电位,触发了U266细胞的线粒体凋亡途径,导致了caspase-3的活化,终诱导U266细胞凋亡;hTERT表达下调也是As2O3诱导U266细胞凋亡的重要作用机制.

  • VEGF反义RNA促骨髓瘤细胞凋亡及抑制内皮细胞形成血管作用的体外研究

    作者:黄豪博;战榕

    本研究探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)反义RNA对人多发性骨髓瘤细胞系U266增殖、凋亡及内皮细胞ECV304体外血管形成的影响和以VEGF反义RNA进行多发性骨髓瘤(MM)基因治疗的可行性.将VEGF121反向克隆入真核表达质粒pIPES2-EGFP构建重组质粒AS-VEGF,酶切、测序鉴定.用此真核表达重组质粒转染人骨髓瘤细胞系U266,G418筛选获得阳性克隆.RT-PCR、Western blot法分别检测阳性克隆中VEGF mRNA和蛋白的表达;利用MTT法、流式细胞术检测转染细胞增殖、凋亡的变化;利用基质胶中内皮细胞ECV304的网络形成检测血管形成.结果表明:获得了携带反义VEGF基因的真核表达重组质粒AS-VEGF;VEGF121反义RNA部分阻断了U266细胞中VEGF的表达,转染重组质粒的U266细胞VEGF mRNA和蛋白表达都较对照组细胞有明显减少,细胞的增殖受到抑制,凋亡增加.转染重组质粒的细胞培养上清在基质胶中作用ECV304细胞后的血管形成较对照组亦有明显减少.结论:VEGF反义RNA可以下调VEGF表达,从而抑制骨髓瘤细胞系U266增殖,增加其凋亡并抑制血管形成.

  • 2-甲氧基雌二醇增强骨髓瘤细胞U266对硼替佐米敏感性的相关机制研究

    作者:吴顺泉;徐珍珍;黄豪博;林君;战榕

    本研究旨在探索2-甲氧基雌二醇(2-ME2)联合硼替佐米对人骨髓瘤细胞株U266的协同抑制增殖和诱导凋亡作用及其可能机制.2-ME2、硼替佐米单用以及二者联合分别处理U266细胞,用CCK8方法检测细胞增殖活力,caspase3/7活性法检测细胞凋亡,流式细胞术分析细胞周期的变化,荧光实时定量PCR检测P21、BAX、BCL-2等mRNA水平变化.结果表明:相比于2-ME2和硼替佐米单用,2-ME2联合硼替佐米处理U266细胞后,细胞增殖明显抑制(p<0.05),细胞凋亡增加(p<0.05),细胞周期阻滞于G1-S期;在mRNA水平,P21及BAX表达上调,BCL-2表达下调.结论:2-ME2联合硼替佐米能更有效地抑制U266细胞增殖和诱导凋亡,具有协同作用,其机制可能与其诱导P21及BAX表达上调有关.

  • 冬凌草甲素对多发性骨髓瘤抗肿瘤的机制研究

    作者:段浩清;李绵洋;高丽;张俊峰;王蔚;李燕;马一盖;王成彬

    本研究探讨冬凌草甲素(Oridonin)对人多发性骨髓瘤(MM)细胞株U266抗肿瘤作用及其分子机制.CCK-8法检测冬凌草甲素对细胞增殖的影响;瑞氏染色法观察细胞的形态学改变;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR方法检测U266细胞FGFR3、BCL2、CCND1、MYC基因表达水平的变化;Western blot方法分析BCL2、MYC、CCND1、FGFR3和P53蛋白表达水平的变化.结果表明,①冬凌草甲素能够抑制U266细胞增殖,且呈浓度和时间依赖性;②10μmol/L冬凌草甲素处理U266细胞24 h后,光学显微镜下可观察到典型的细胞凋亡形态学改变;③U266细胞凋亡比例随冬凌草甲素药物浓度及作用时间的延长而增加;④经冬凌草甲素处理后的U266细胞中,FGFR3、BCL2、CCND1、MYC基因表达下调,同时其相应的蛋白质表达下调,P53蛋白表达上调,上述变化均呈浓度和时间依赖性.结论:冬凌草甲素可以抑制人多发性骨髓瘤U266细胞增殖并诱导其凋亡,发挥其抗肿瘤作用.本研究为MM新的靶向治疗方案选择提供理论依据.

  • 三氧化二砷、地塞米松和沙利度胺对骨髓瘤细胞U266凋亡及胞浆内Ca2+浓度的影响

    作者:林如峰;陆化;刘澎;王永韧;沈文怡;吴雨洁;张建富;费小明;葛峥;李建勇

    为了探讨三氧化二砷(As2O3)、地塞米松(dexamethasone,Dex)和沙利度胺(thalidomide,Thal)诱导骨髓瘤细胞株U266细胞凋亡时对胞浆内Ca2+浓度([Ca2+]i)的影响,用含15%FBS的RPMI 1640培养液培养U266细胞并按5×105/(ml·well)接种于24孔板中,分别用不同浓度的As2O3、Dex和Thal干预8小时后收集U266细胞,用荧光显微镜观察细胞凋亡,以Annexin V-FITC/PI双参数流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡,负载Fluo-3/AM荧光素FCM检测[Ca2+]i.结果显示:①随As2O3、Dex和Thal浓度增加,荧光显微镜下带有荧光信号的凋亡细胞逐渐增多;②As2O3、Dex和Thal作用U266细胞后FCM测得凋亡细胞比例从对照组的0.56%分别升至31.54%、28.35%、21.97%;③As2O3、Dex诱导U266细胞凋亡时[Ca2+]i升高,升高的程度与药物浓度成正比关系;④Thal诱导细胞凋亡时未观察到[Ca2+]i有明显改变.结论:[Ca2+]i的升高是As2O3、Dex诱导U266细胞凋亡的机制之一,Thal诱导U266细胞凋亡与[Ca2+]i的变化无明显关系.

  • 丙戊酸钠抑制人多发性骨髓瘤U266细胞增殖及组蛋白乙酰化调控的研究

    作者:朱艺芳;叶宝国;沈建箴;林聪猛;林福安;沈松菲;徐成波

    本研究探讨丙戊酸钠(valproic acid sodium,VPA)对U266细胞增殖的抑制作用及对组蛋白乙酰化修饰调控的影响.采用CCK-8法检测VPA时U266细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测VPA作用前后U266细胞周期的变化,半定量RT-PCR检测VPA作用后U266细胞中组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)mRNA的表达变化,Westernblot方法检测VPA作用后HDAC1及组蛋白H3、H4乙酰化蛋白水平的变化.结果表明,VPA对U266细胞增殖的抑制作用呈时间-浓度依赖性;2.5 mmol/L的VPA处理细胞48小时后,细胞周期检测显示G0/G1期细胞比例增高,S期细胞比例下降,细胞被阻滞在G0/G1期(p<0.05);RT-PCR证实VPA能够抑制HDAC1 mRNA的表达水平;Western blot方法证实不同浓度VPA作用细胞48小时后HDAC1蛋白水平降低,组蛋白H3、H4乙酰化表达水平提高.结论:VPA能够抑制U266细胞增殖,使细胞阻滞于G0/G1期,这可能与VPA抑制HDAC1表达,上调组蛋白H3、H4乙酰化水平有关.

  • HSP90表达与人多发性骨髓瘤细胞迁移力的相关性研究

    作者:黄灵娟;马艳萍;杨薏蓉;杨林花

    本研究探讨热休克蛋白90(HSP90)与人多发性骨髓瘤细胞迁移力的相关性.采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测经终浓度为50、100、150和200 nmol/L的蛋白酶体抑制剂硼替佐米作用于人多发性骨髓瘤细胞株U266 4小时后细胞中HSP90的mRNA的表达情况.应用Transwell小室迁移实验检测经上述相同浓度硼替佐米作用4小时后U266细胞迁移力的变化.结果表明:随着硼替佐米药物浓度的增加,U266细胞中HSP90α的mRNA表达量逐渐增加(p<0.05),而HSP90β的mRNA表达量虽然总体上有差别(p<0.05),但增加趋势不很明显.随着药物浓度的增加U266细胞迁移力逐渐减弱(p<0.05).结论:HSP90表达与人多发性骨髓瘤细胞迁移力存在相关性.

  • C反应蛋白对多发性骨髓瘤细胞系U266增殖机制的研究

    作者:杨薏蓉;黄灵娟;马艳萍;鹿育晋;杨林花;周永安

    为了观察C反应蛋白(CRP)对人骨髓瘤细胞系U266细胞增殖活性的作用机制,将液氮冻存的U266细胞复苏后,悬浮培养,第3天收集细胞备用,分别以不同浓度CRP(0、5、10、20 mg/L)培养24小时,采用血液分析仪检测细胞增殖情况,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测凋亡相关蛋白survivin和HSP90α的表达.结果发现:CRP处理的细胞组增殖率及survivin、HSP90α的表达量均高于对照组(P<0.05),20 mg/L CRP组作用显著;survivin、HSP90α之间表达具有显著相关性(r=0.737,P<0.0001).结论:CRP是通过调节凋亡抑制蛋白Survivin及HSP90α的表达发挥促进U266细胞增殖的作用.

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