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茶多酚EGCG通过SREBP2/LDLR通路调节HepG2细胞中的LDL摄取
目的 探索茶多酚EGCG对人肝癌细胞HepG2中LDL的摄取情况的影响及其可能的分子机制.方法 培养人肝癌细胞HepG2细胞,茶多酚EGCG刺激HepG2细胞,用Real-time PCR和western blot的方法分别检测LDLR的mRNA和蛋白水平表达以及核内蛋白SREBP2的表达情况.用DiI-LDL染色的方法检测LDL的摄取情况.另外,利用RNAi技术进一步检测SREBP2对LDLR的表达和LDL的摄取情况.结果 EGCG可增加LDLR的mRNA (P＜0.05)和蛋白水平(P＜0.01)的表达以及核内SREBP2(P＜0.01)的表达,可明显促进LDL的摄取.转染SREBP2的小干扰RNA后,可明显抑制EGCG引起的LDLR的表达(P＜0.0l)及LDL的摄取.结论 从细胞水平证明茶多酚EGCG可通过激活SREBP2/LDLR通路促进LDL的摄取.
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固醇调节元件结合蛋白2在软骨细胞退变过程中的表达
背景：近期研究证实了固醇调节元件结合
蛋白2基因在骨关节炎发生过程中起重要作用，但其具体发病机制尚未完全清楚。目的：通过白细胞介素1β体外诱导关节软骨细胞退变，观察固醇调节元件结合蛋白2在软骨细胞退变过程中的表达变化。方法：体外分离培养C57BL/6J小鼠关节软骨细胞，将第2代软骨细胞随机分为4组：对照组、白细胞介素1β24，48，72 h组。后3组细胞分别以10μg/L白细胞介素1β干预细胞。结果与结论：软骨细胞经白细胞介素1β刺激后呈肥大化表现，软骨细胞活性随白细胞介素1β刺激时间的延长而逐渐降低。与对照组相比，白细胞介素1β24，48，72 h组软骨细胞中固醇调节元件结合蛋白2与固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白 mRNA表达水平增加，而蛋白聚糖和Ⅱ型胶原 mRNA 表达水平降低。提示白细胞介素1β能抑制软骨细胞增殖和细胞重要基质成分表达，诱导其出现肥大化退行性改变，且在退变的过程中，固醇调节元件结合蛋白2表达逐渐上调，与软骨关键基因的表达呈负向变化关系。 -
白藜芦醇干预小鼠软骨细胞固醇调节元件结合蛋白2及基质金属蛋白酶13的表达
背景:新近研究表明,固醇调节元件结合蛋白2及基质金属蛋白酶13在骨关节炎软骨细胞中表达上调.白藜芦醇对于骨关节炎的防治作用被认为与其可以减少软骨细胞凋亡及滑膜炎症有关.目的:进一步分析白藜芦醇对软骨细胞固醇调节元件结合蛋白2及基质金属蛋白酶13表达的影响.方法:体外分离培养小鼠膝关节软骨细胞,采用Ⅱ型胶原免疫荧光染色鉴定软骨细胞.根据加入物的不同分为3组:空白对照组、脂多糖干预组(1 mg/L)和白藜芦醇干预组(100μmol/L白藜芦醇+1 mg/L脂多糖).采用Westernblot检测软骨细胞中基质金属蛋白酶13的蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组软骨细胞固醇调节元件结合蛋白2的表达量.结果与结论:①荧光显微镜下显示Ⅱ型胶原染色阳性细胞数占95％以上,证实所培养细胞为软骨细胞;②脂多糖组固醇调节元件结合蛋白2、基质金属蛋白酶13表达量较空白组明显升高,白藜芦醇组固醇调节元件结合蛋白2、基质金属蛋白酶13表达量较脂多糖组下降,但仍高于空白组;③结果表明,表明白藜芦醇可抑制小鼠软骨细胞固醇调节元件结合蛋白2和基质金属蛋白酶13的表达.
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瑞舒伐他汀对冠心病患者单核巨噬细胞ABCA1及SREBP-2表达的影响
目的 探讨瑞舒伐他汀对冠心病(CHD)患者单核巨噬细胞ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)mRNA和固醇调节元件结合蛋白2(SREBP-2)mRNA表达的影响.方法 体外分离并培养CHD患者单核细胞,经佛波酯(PMA)诱导48 h成为巨噬细胞后,分别给予0、0.1、1、5、10 μmol/L瑞舒伐他汀干预;提取细胞总RNA,用实时荧光相对定量PCR(实时RT-PCR)检测ABCA1和SREBP-2 mRNA的表达.结果 不同浓度瑞舒伐他汀干预组单核巨噬细胞ABCA1 mRNA表达水平存在差异(P＜0.05),给予0.1、1、5、10 μmol/L瑞舒伐他汀干预组的ABCA1 mRNA表达水平与空白对照组比较均有降低(P＜0.05).不同浓度瑞舒伐他汀干预组SREBP-2 mRNA表达量也存在差异(P＜0.05),并且与对照组比较均有明显升高(P＜0.05).结论 在CHD外周血来源单核巨噬细胞干预模型中,瑞舒伐他汀能下调胆固醇逆转运相关基因ABCA1 mRNA的表达,并且上调细胞内胆固醇合成相关基因SREBP-2 mRNA 的表达.
关键词： 瑞舒伐他汀 ATP结合盒转运蛋白A1 固醇调节元件结合蛋白2 -
烟酸通过下调 PCSK9的表达促进 HepG2细胞摄取 LDL-C
目的：探讨烟酸对 HepG2细胞摄取及代谢 LDL-C 的影响，寻找烟酸改善血脂异常，减缓动脉粥样硬化进程的相关分子机制，为其临床用药提供指导。方法采用油红 O染色观察细胞内脂质蓄积；酶法检测细胞内胆固醇含量；荧光流式检测细胞表面 LDLR 丰度分布；qPCR 及 Western blot检测 LDLR、SREBP2以及 PCSK9的 mRNA 及蛋白含量变化。结果经烟酸处理的 HepG2细胞，油红 O 阳性细胞数及细胞内红染脂滴增多，细胞内 TC、FC 水平明显增高（P ＜0.05）；LDLR mRNA 含量无差异（P ＞0.05），而细胞膜表面LDLR 分布丰度及细胞内 LDLR 的含量明显增加（P ＜0.05）；烟酸对 SREBP2的表达无影响，却能明显下调 PCSK9的表达。结论烟酸可能通过下调 PCSK9的表达，减少 PC-SK9成熟体蛋白含量，使得 LDLR 降解减少，进而增加 LDLR含量，促进 HepG2细胞摄取 LDL-C。
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PCSK9及 IDOL 在姜黄素促进 HepG2细胞摄取 LDL-C 中的作用
目的：从分子水平探讨姜黄素的降脂机制，为姜黄素作为降脂药物的临床开发提供科学依据。方法本研究运用油红 O 染色、酶法测定细胞内胆固醇含量，荧光染色检测细胞胆固醇摄取，RT-Q-PCR 及 Western blot 检测姜黄素对HepG2细胞内胆固醇代谢相关因子在 RNA 和蛋白水平的表达。结果姜黄素组的 HepG2细胞内红色脂滴明显增多，且TC 及 FC 含量增高。DiI 标记 LDL，姜黄素组 HepG2细胞橙红色荧光高于对照组。姜黄素能升高 SREBP2和 LDLR 的mRNA 和蛋白水平的表达；降低 PCSK9蛋白成熟体及 IDOL蛋白表达。结论姜黄素可能通过下调 PCSK9及 IDOL 的表达，进而减少 LDLR 降解，促进 HepG2细胞摄取 LDL-C。
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二甲双胍对人肝癌HepG2细胞SREBP-2与总胆固醇表达的影响
目的 探讨二甲双胍对人肝癌HepG2细胞调节胆固醇代谢关键转录因子固醇调节元件结合蛋白2(SREBP-2)与总胆固醇表达的影响.方法 培养HepG2细胞并以不同浓度二甲双胍分别处理HepG2细胞后培养24 h.采用MTT法测量0、5、10、15 mmol/L二甲双胍处理HepG2细胞0、8、24 h后的存活率,定量PCR法检测15 mmol/L二甲双胍处理0、8、24 h 后HepG2细胞SREBP-2 mRNA的表达,胆固醇氧化酶法测量15 mmol/L二甲双胍处理0、8、24 h后 HepG2细胞的总胆固醇水平.结果 随二甲双胍浓度增加、时间延长HepG2细胞存活率降低(P均<0.05).二甲双胍作用于HepG2细胞的佳浓度为15 mmol/L、佳时间点为24 h.15 mmol/L二甲双胍干预24 h,HepG2细胞内总胆固醇水平及SREBP-2 mRNA 表达与干预8 h比较,P均<0.05.结论 二甲双胍可抑制人肝癌HepG2细胞SREBP-2的合成,降低细胞内总胆固醇水平.
关键词： 2型糖尿病 二甲双胍 胆固醇 固醇调节元件结合蛋白2 -
SREBP－2沉默抑制衣霉素诱导的软骨细胞内质网应激
目的：探究固醇调节元件结合蛋白2（SREBP－2）对衣霉素诱导的软骨细胞内质网应激（ERS）的影响。方法：分离人正常软骨细胞和骨关节炎（ OA）软骨细胞培养，衣霉素和SREBP－2 siRNA分别处理正常软骨细胞。24 h后，实时荧光定量PCR检测对微小RNA－185（miR－185）表达的影响，流式细胞术检测对细胞凋亡的影响， Western blot法检测对SREBP－2、CHOP、p－eIF2α和ATF4等ERS相关蛋白，Bcl－2、Bax和caspase－3等凋亡相关蛋白水平的影响；caspase－3活性试剂盒检测对细胞caspase－3活性的影响。结果：与对照组相比， OA组和衣霉素组SREBP－2表达增加，miR－185表达降低（ P＜0．05）。 SREBP－2 siRNA转染可明显阻断衣霉素引起的miR－185降低（P＜0．05）。miR－185过表达能够下调SREBP－2蛋白水平（P＜0．05）。与对照组相比，OA组和衣霉素组CHOP、p－eIF2α和ATF4的蛋白水平明显上调，Bcl－2表达下调，Bax和caspase－3表达增加（P＜0．05）；SREBP－2沉默处理则显著逆转上述蛋白表达（P＜0．05）。细胞凋亡率与上述细胞凋亡相关蛋白的变化趋势一致（P＜0．05）。与衣霉素组相比，SREBP－2 siRNA转染明显下调 caspase－3活性， miR－185抑制则明显逆转上述作用（ P ＜0．05）。结论：SREBP－2沉默可通过上调miR－185抑制衣霉素诱导的软骨细胞ERS和细胞凋亡。
关键词： 固醇调节元件结合蛋白2 衣霉素 内质网应激 软骨细胞 微小RNA-185 -
甲醛对HepG2细胞游离胆固醇代谢的影响
目的:研究甲醛(FA)对人肝癌细胞株HepG2细胞游离胆固醇(FC)含量的影响及其作用机制.方法:分别采用0.004、0.02、0.1 mmoYL FA处理人肝癌细胞株HepG2细胞24和48 h,以完全培养基为阴性对照,过氧化物酶法测定HepG2细胞内FC含量;采用Western blot法检测HepG2细胞固醇调节元件结合蛋白-2(SREBP-2)、羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCR)、胆固醇酰基转移酶(ACAT)和低密度脂蛋白受体(LDLR)的蛋白表达水平.结果:与阴性对照组相比,各浓度的FA染毒24h或0.02和0.1 mmol/L FA染毒48 h后,HepG2细胞内FC含量均明显增加(P均＜0.05);FA染毒24和48 h后细胞内HMGCR蛋白表达水平均明显增加(P＜0.05);FA染毒24h后,ACAT和LDLR表达水平均明显降低(P均＜0.05);FA染毒48 h,LDLR蛋白表达水平明显降低(P＜0.05),ACAT蛋白表达水平在0.02和0.1 mmol/L FA组明显降低(P＜0.05).结论:甲醛染毒可使HepG2细胞内FC含量增加,可能与胆固醇的从头合成增加和胆固醇酯化水平降低有关.
